荊州地區(qū)女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染情況分析

劉 斌，胡慧瓊

(1、荊州市中心醫(yī)院檢驗科，湖北荊州434020；2、湖北中醫(yī)藥高等?？茖W校生免教研室，湖北荊州434020)

荊州地區(qū)女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染情況分析

劉 斌1，胡慧瓊2

(1、荊州市中心醫(yī)院檢驗科，湖北荊州434020；2、湖北中醫(yī)藥高等?？茖W校生免教研室，湖北荊州434020)

目的探討荊州地區(qū)女性生殖道分泌物沙眼衣原體（CT）、解脲脲原體（UU）感染與不孕不育及婦科炎癥之間的相關性情況分析。方法采用實時熒光定量PCR（FQ－PCR）對1962例不孕不育癥患者、1553例婦科炎癥患者、858例健康體檢者的生殖道分泌物進行檢測。結果不孕不育組的生殖道分泌物感染UU陽性率為26.7%，CT陽性率為5.5%，CT+UU陽性率3.1%，明顯高于同期健康體檢組的UU陽性率11%，與CT陽性率0.9%，CT+UU陽性率0.2%，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。婦科炎癥組的生殖道分泌物感染UU陽性率為58.1%，CT陽性率為12%，CT+UU陽性率11.1%遠高于不孕不育組和健康體檢組，與健康體檢組相對比差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。結論生殖道CT、UU感染是導致女性不孕不育和婦科炎癥的重要因素，把CT、UU列入女性常規(guī)檢測中非常必要。

沙眼衣原體；解脲支原體；不孕不育；婦科炎癥；FQ－PCR

生殖道CT、UU通過性傳播所致的的感染日益增多，且有逐年上升趨勢[1]。它們是影響人類生殖健康的重要病原體，其感染者是不孕不育和婦科炎癥的高發(fā)人群[2]。隨著分子生物學診斷技術的迅猛發(fā)展，檢測生殖道病原體已發(fā)展到實時FQ－PCR法。FQ－PCR具有高靈敏度、高特異性、高精確性、高效率、污染小等特點，為臨床及科研提供了及時、準確、可靠的依據(jù)[3]。本文旨在探討不孕不育癥患者及婦科炎癥患者生殖道CT、UU的感染現(xiàn)狀，為荊州地區(qū)不孕不育癥診斷與治療提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標本來源選擇2015年6月至2016年5月在我院生殖醫(yī)學門診就診的不孕不育癥女患者1962例作為不孕不育組，年齡25～43歲，平均年齡（30.4± 2.8）歲，分別以同期在我院婦科門診有婦科炎癥癥狀初次就診患者1553例為婦科炎癥組，年齡20～48歲，平均年齡（31.2±1.6）歲，及同期在我院婦科體檢無陰道炎陽性體征且正常育有子女的婦女人群858例健康體檢組，年齡22～43歲，平均年齡（31.3±5.6）歲。用窺陰器顯露女性宮頸，使用無菌生理鹽水棉球洗去宮頸外口分泌物，將無菌棉拭子伸入宮頸管內，達到鱗柱狀上皮交界處，停15－20s鐘后旋動棉試子采集宮頸分泌物，將取樣后的棉拭子放入無菌試管中，密閉送檢。

1.2 儀器與試劑儀器為ABI 7300型全自動熒光定量PCR儀，CT－DNA及UU－DNA檢測試劑均由中山大學達安基因股份有限公司生產提供。

1.3 檢測方法

1.3.1 檢測步驟在無菌標本試管中加入1ml無菌生理鹽水，充分震蕩搖勻，吸取液體轉至1.5ml離心管中，12000r/min離心5min，棄去上清。沉淀直接加50ul DNA提取液充分混勻，金屬浴100℃恒溫處理10min。12000r/min離心5min。FQ－PCR可對同1例標本同時檢測CT、UU兩種病原體。樣本處理及DNA提取嚴格按照試劑說明書操作。

1.3.2 DNA的擴增與結果判讀分別吸取2ul樣品DNA、質控品DNA和陽性定量參考品于擴增管中，8000r/min離心數(shù)秒后上機擴增，每次檢測均設陽性、陰性對照和空白對照。擴增參數(shù)為：93℃預變性120s；93℃45s→55℃60s 10個循環(huán)，作為熒光本底信號；93℃30s→55℃45s 30個循環(huán)，55℃時采集熒光。擴增結果以Ct值表示，根據(jù)陽性定量參考品擴增結果分析并調節(jié)基線和閾值，使標準曲線圖達到最佳，線性相關系數(shù)0.97≤r≤1。若增長曲線不呈S型或Ct≥30，則判樣品的DNA含量小于檢測下限，結果為陰性；如果增長曲線呈S型且Ct≤27，結果為陽性。如果27≤Ct＜30為實驗灰區(qū)，需重復實驗一次，若需重復實驗結果增長曲線呈S型且Ct＜30，則結果為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計學分析軟件進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料以率表示，感染率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 不孕不育組、婦科炎癥組與健康體檢組CT、UU檢測結果比較，不孕不育組CT陽性率為5.5%，UU陽性率為26.7%，同時感染CT+UU陽性率為3.1%，婦科炎癥組CT陽性率為12%，UU陽性率為58.1%，同時感染CT+UU陽性率為11.1%，健康體檢組CT陽性率為0.9%，UU陽性率11%，同時感染CT+UU陽性率為0.2%。不孕不育組和婦科炎癥組CT陽性率、UU陽性率、CT+UU陽性率均明顯高于健康體檢組，特別是婦科炎癥組UU感染率遠遠高于健康體檢組。詳細見表1。

表1 不孕不育組、婦科炎癥組與健康體檢組的CT、UU檢測結果[n（%）]

2.2 把不孕不育組和婦科炎癥組CT陽性率、UU陽性率、CT+UU陽性率分別與健康體檢組進行χ2檢驗，其均P＜0.01，表示差異具有顯著統(tǒng)計學意義。

3 討論

隨著社會交往日益頻繁，人們的性意識在逐漸發(fā)生變化，不潔性行為導致的各種泌尿生殖道疾病也快速蔓延。近年來，我國女性的不孕不育患者日益增多。不孕不育病因復雜，其中與生殖道有關的不孕大約占20%～60%。CT和UU是泌尿生殖道的常見致病菌，主要通過親密接觸、性交來傳播[4]，其中UU感染普遍比CT感染率高[5]，其感染引起的尿道炎、宮頸炎、陰道炎、流產和不孕越來越引起人們的關注[6]。

本文發(fā)現(xiàn)CT、UU在荊州地區(qū)不孕不育與婦科炎癥人群里均有較高感染率。婦科炎癥組UU、CT、CT+UU的陽性率最高；不孕不育組各項陽性率略低于婦科炎癥組，但明顯高于健康體檢組。不孕不育組和婦科炎癥組CT、UU、CT+UU感染率與健康體檢組對比有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01），提示CT、UU與不孕不育關系和婦科炎癥密切相關。解脲支原體、沙眼衣原體感染可能是不孕不育癥和婦科炎癥的發(fā)生率增高的重要原因[7]。其發(fā)生機制可能為：CT感染生殖腔道后產生內毒素物質引發(fā)劇烈的炎癥反應，從而導致黏膜細胞壞死、輸卵管纖毛運動停滯，生殖道黏膜受損使免疫細胞有可能直接接觸精子而產生抗精子抗體，引起不孕[8]。另外，本研究三個組別均顯示，UU感染率遠高于CT感染率，提示女性非淋菌性炎癥里主要以UU感染為主。這與一些研究結果相一致[9]。UU感染女性后，可黏附于輸卵管黏膜上皮細胞，通過細胞免疫誘導機體巨噬細胞和單核細胞產生腫瘤壞死因子，因支原體分解尿素產生銨根離子破壞作為天然屏障的陰道黏膜，對性器官造成炎性損傷，進而影響陰道環(huán)境，而UU還可干擾精子獲能、頂體反應，減少精子存活率，進而導致患者產生免疫性不孕[10]。CT和UU甚至還可以經(jīng)過宮頸管進入子宮再逆行感染輸卵管盆腔，從而引起輸卵管炎及盆腔炎，引起輸卵管不通，造成宮外孕及不孕[11]。

綜上所述，荊州地區(qū)CT和UU感染與不孕不育和婦科炎癥密切相關。對于不孕不育和婦科炎癥人群，CT、UU感染已經(jīng)是一個不能忽視的因素。因此，CT、UU可以列為孕前體檢及早孕婦女的常規(guī)檢查項目，早發(fā)現(xiàn)、并盡早治愈會對優(yōu)生優(yōu)育具有非常重要的作用。

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