水產(chǎn)動(dòng)物病原拮抗微生物及其應(yīng)用研究進(jìn)展

杜明洋，葉仕根，劉娟，王訥言，楊靜，白璐

水產(chǎn)動(dòng)物病原拮抗微生物及其應(yīng)用研究進(jìn)展

杜明洋，葉仕根，劉娟，王訥言，楊靜，白璐

(大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，大連市海珍品疾病防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧大連116023)

為探尋水產(chǎn)養(yǎng)殖中可代替抗生素和化學(xué)藥物拮抗菌生物防控以及更安全、有效、無(wú)公害的生物生態(tài)環(huán)境防控措施，本研究中綜述了水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物病原及其拮抗微生物的種類(lèi)、作用機(jī)制、應(yīng)用現(xiàn)狀等，并對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物病原拮抗微生物研究及其應(yīng)用中存在的問(wèn)題和發(fā)展趨勢(shì)等進(jìn)行了展望。本研究結(jié)果可為水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生態(tài)制劑的研發(fā)以及水產(chǎn)動(dòng)物的疾病防控提供參考依據(jù)。

拮抗微生物；作用機(jī)制；應(yīng)用現(xiàn)狀

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)模隨之?dāng)U大，養(yǎng)殖區(qū)水質(zhì)的不斷惡化導(dǎo)致養(yǎng)殖動(dòng)物病害日益增多，感染性疾病特別是由致病微生物引起的疾病已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)面臨的最主要問(wèn)題，嚴(yán)重制約了其產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展[1]。近年來(lái)，各種化學(xué)添加劑及抗菌藥物被大量用于疾病的預(yù)防和控制，以減輕病原菌對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的影響[2]。但長(zhǎng)期大量使用抗生素，會(huì)使致病菌株產(chǎn)生耐藥性。同時(shí)，廣譜抗生素會(huì)殺滅水產(chǎn)動(dòng)物腸道內(nèi)部分有益菌，并造成體內(nèi)大量抗生素殘留和積累，因此，水產(chǎn)食品的安全性受到嚴(yán)重的影響。鑒于以上因素，探尋新型生態(tài)環(huán)境友好型的生物防控、防治方法越來(lái)越受到關(guān)注。

生物拮抗是微生物群落內(nèi)普遍存在的自然現(xiàn)象，是指同一生態(tài)位中不同微生物間出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制的現(xiàn)象。拮抗菌就是利用這一規(guī)律與病原菌相互抵制、相互排斥、相互制約的微生物種群[3]。目前，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中已有的微生物制劑許多產(chǎn)品就是利用拮抗微生物對(duì)病原菌具有拮抗的特性制成的。本研究中，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖中病原菌及其拮抗微生物的種類(lèi)及作用機(jī)制進(jìn)行了闡述，并對(duì)其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用前景和發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行了展望，旨在為微生態(tài)制劑的研發(fā)以及水產(chǎn)動(dòng)物的疾病防控提供參考依據(jù)。

1 水產(chǎn)動(dòng)物病原及其拮抗微生物種類(lèi)

1.1 水產(chǎn)動(dòng)物病原

水產(chǎn)動(dòng)物病原包括病毒、細(xì)菌、真菌、立克次體、衣原體等致病微生物和寄生蟲(chóng)。由病原微生物引發(fā)的疾病使水生生物具有較高的致死率并造成巨大損失，導(dǎo)致水產(chǎn)品質(zhì)量下降、經(jīng)濟(jì)價(jià)值下降[4]。

細(xì)菌性疾病是嚴(yán)重危害水產(chǎn)動(dòng)物的疾病。水產(chǎn)動(dòng)物的病原菌種類(lèi)較為廣泛，包括弧菌屬Vibrio、氣單胞菌屬Aeromonas、愛(ài)德華氏菌屬Edwardsiella、假單胞菌屬Pseudomonas、耶爾森氏菌屬Yersinia、屈撓桿菌屬Flexibacter、黃桿菌屬Flavobacterium、鄰單胞菌屬Plesiomonas等革蘭氏陰性致病菌，以及鏈球菌屬Streptococcus、腎桿菌屬Renibacterium、分枝桿菌屬M(fèi)ycobacterium、諾卡氏菌屬Nocardia等革蘭氏陽(yáng)性致病菌。其中，由弧菌感染造成的弧菌病是一種傳播廣泛的流行性疾病，同時(shí)也是集約化養(yǎng)殖的主要限制因素。鏈球菌是革蘭氏陽(yáng)性致病菌，可造成水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的嚴(yán)重?fù)p失。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2008年全球僅由鏈球菌造成的經(jīng)濟(jì)損失就已超過(guò)2.5億美元，鏈球菌病主要由無(wú)乳鏈球菌Streptococcus agalactiae和海豚鏈球菌Strepstococcus iniae感染造成[5]。

1.2 拮抗微生物種類(lèi)

目前，應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的具有病原拮抗作用的有益微生物，包括一些革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌等有益細(xì)菌，以及部分非細(xì)菌類(lèi)微生物。

1.2.1 細(xì)菌 革蘭氏陽(yáng)性菌被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，其中應(yīng)用較為普遍的主要是乳酸菌和一些芽孢桿菌等。Zokaeifar等[6]報(bào)道，兩株芽孢桿菌Bacillus以108cfu/mL的濃度添加到飼料中，投喂8周齡白對(duì)蝦時(shí)，能夠促進(jìn)其生長(zhǎng)及提高消化酶活力，并對(duì)哈維弧菌V.harveyi有抑菌活性。Acurcio等[7]報(bào)道，3株腸球菌Enterococcus存在益生特性，對(duì)胃液、膽汁有一定耐受能力，并對(duì)大腸桿菌Escherichia coli、李斯特氏菌Listeria、金黃色葡萄球菌Staphyloccocus aureus等致病菌有一定的抑菌活性。Li等[8]研究發(fā)現(xiàn)，節(jié)桿菌ArthrobacterXE－7能調(diào)節(jié)腸道微生物菌群，并顯著提高凡納濱對(duì)蝦Litopenaeus vannamei的免疫參數(shù)。同時(shí)，副溶血弧菌V.parahaemolyticus攻毒試驗(yàn)表明，投喂益生菌的凡納濱對(duì)蝦腸道副溶血弧菌數(shù)量顯著低于對(duì)照組。研究表明，該菌可顯著降低對(duì)蝦死亡率，提高對(duì)蝦免疫參數(shù)，同時(shí)對(duì)副溶血弧菌有抑菌作用。

趙淑江等[9]報(bào)道了分離自海洋沉積物的86株放線(xiàn)菌，并從中篩選出5株放線(xiàn)菌，對(duì)副溶血弧菌、哈維弧菌兩種大黃魚(yú)常見(jiàn)病原性弧菌以及鰻弧菌V.anguillarum、溶藻弧菌V.alginolyticus共4種病原菌的拮抗作用效果較好。其中一株放線(xiàn)菌在牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中不僅能夠增殖，而且能夠有效地抑制病原菌的生長(zhǎng)。

革蘭氏陰性菌，雖然應(yīng)用相對(duì)不太廣泛，但有些如假交替單胞菌Pseudoalteromonas等革蘭氏陰性菌也是公認(rèn)的益生菌。Fjellheim等[10]報(bào)道，假交替單胞菌對(duì)大西洋鱈Atlantic cod生長(zhǎng)環(huán)境中的鰻弧菌具有拮抗作用。Kesarcodi－Watson等[11]報(bào)道了假交替單胞菌可保護(hù)扇貝幼苗免受燦爛弧菌V.splendidus的侵染。Austin等[12]報(bào)道了弗氏檸檬酸桿菌Citrobacterfreundii對(duì)嗜水氣單胞菌A.hydrophila有抑菌活性。Burbank等[13]研究發(fā)現(xiàn)，以106～108cfu/mL濃度的棲水腸桿菌Enterobacter amnigenus加入飼料中投喂虹鱒Oncorhynchus mykiss時(shí)，可以抑制嗜冷黃桿菌F.psychrophilum的侵染。

1.2.2 非細(xì)菌類(lèi)微生物 噬菌體、酵母菌、微藻類(lèi)等其他非細(xì)菌對(duì)致病菌也有抑制作用，可應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。副溶血弧菌是導(dǎo)致蝦急性肝胰腺壞死病的主要病原，可造成海洋蝦類(lèi)大量死亡。Jun等[14]研究發(fā)現(xiàn)，噬菌體pVp－1對(duì)所測(cè)試的副溶血弧菌抑制率達(dá)90.9%，對(duì)致病菌有較強(qiáng)的溶菌活性，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中有潛在的應(yīng)用價(jià)值。林治宇等[15]從健康凡納濱對(duì)蝦的消化道中分離出6株酵母菌，通過(guò)拌料的方式，將其中一株優(yōu)勢(shì)菌Candida nivariensis以不同的劑量添加在飼料中投喂凡納濱對(duì)蝦，可以提高對(duì)蝦成活率，并能促進(jìn)其生長(zhǎng)。李明等[16]從刺參Apostichopus japonicus體內(nèi)分離得到23株酵母，其中一株屬于紅酵母屬，對(duì)7種刺參常見(jiàn)致病菌均有抑制作用。Abdo等[17]研究發(fā)現(xiàn)，從埃及一個(gè)水站中分離得到念珠藻、膨脹色球藻、顫藻、螺旋藻和鼓藻5種淡水藻類(lèi)，測(cè)定這5種藻類(lèi)的提取物對(duì)大腸桿菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌Salmonella typhimurium、糞腸球菌S.faecalis3種病原菌的抑菌活性，結(jié)果表明，螺旋藻提取物對(duì)上述3種病原菌均有較強(qiáng)的抑菌活性，其他藻類(lèi)由于不同的提取方式產(chǎn)生不同的色素含量，使其抑菌活性產(chǎn)生差異。

2 拮抗機(jī)制

微生物間的拮抗作用在自然界普遍存在，其在有益微生物和潛在致病微生物之間的競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系中起著重要的作用。拮抗微生物主要通過(guò)以下幾種方式作用于致病菌。

2.1 產(chǎn)生抑菌物質(zhì)

拮抗菌主要存在于水產(chǎn)動(dòng)物腸道、表皮或養(yǎng)殖環(huán)境中，可抑制致病菌的增殖或殺滅病原菌。拮抗菌產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)主要有細(xì)菌素或細(xì)菌素類(lèi)似物、有機(jī)酸及非特異揮發(fā)性抑菌物質(zhì)等。

細(xì)菌素是細(xì)菌產(chǎn)生的由核糖體合成的抗菌肽，對(duì)相似或近緣菌株的生長(zhǎng)有一定抑制作用[18]。Lin等[19]研究發(fā)現(xiàn)，一株分離自灰鯔Grey mullet腸道的乳酸菌，其產(chǎn)生的細(xì)菌素類(lèi)似物質(zhì)可有效抑制致病菌格氏乳球菌Lactococcus garvieae生長(zhǎng)。An等[20]從寶石石斑魚(yú)Epinephelus areolatus中分離得到的一株解淀粉芽孢桿菌B.amyloliquefaciens產(chǎn)生的新型細(xì)菌素CAMT2，對(duì)食源性致病菌單核增生李斯特氏菌L.monocytogenes、金黃葡萄球菌、大腸桿菌、副溶血弧菌均有一定抑制作用。許多菌株產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)對(duì)病原菌的細(xì)胞壁有一定的溶解作用，并使其喪失活力。一些菌株通過(guò)破壞細(xì)胞膜的完整性，使靶細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度快速大量泄露，或以降解靶細(xì)胞DNA等方式對(duì)病原菌產(chǎn)生抑制作用。Lü等[21]從駱駝乳中分離得到一株干酪乳桿菌Lactobacillus casei，其產(chǎn)生的細(xì)菌素對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用。其作用機(jī)制是產(chǎn)生的細(xì)菌素使靶細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)膜形成孔隙，從而改變其通透性，進(jìn)而使細(xì)胞死亡。He等[22]從舌鰨的組織因子途徑抑制物中獲得的一種新型抗菌肽TC24，對(duì)藤黃微球菌Micrococcus luteus、金黃色葡萄球菌和創(chuàng)傷弧菌V.vulnificus有抑菌作用，其作用機(jī)制是抗菌肽TC24在與目標(biāo)細(xì)菌細(xì)胞的相互作用過(guò)程中，能夠破壞細(xì)胞膜的完整性，可滲透到細(xì)胞質(zhì)中，并誘導(dǎo)降解基因組DNA和總RNA，體內(nèi)試驗(yàn)表明，其對(duì)細(xì)菌和病毒性病原體有抑制作用。李紅娟[23]報(bào)道了從東北泡菜及傳統(tǒng)乳制品中分離出的60株乳酸菌進(jìn)行抗真菌活性初篩，并得到一株具有良好抗真菌效果的干酪乳桿菌，其發(fā)酵上清液在低pH范圍內(nèi)抑菌活性高，耐熱性較差，對(duì)胰蛋白酶、胃蛋白酶不敏感。推測(cè)其抑菌作用主要是由于產(chǎn)生的高濃度有機(jī)酸 (主要是乳酸)，降低pH值起到了抑菌效果。Yuan等[24]研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌NJN－6能產(chǎn)生揮發(fā)性物質(zhì)抑制尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum的生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)。

2.2 營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)

營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)或其周?chē)h(huán)境的微生物組成起著重要的作用。水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中的微生物生態(tài)系統(tǒng)通常受控于異養(yǎng)生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如碳源、氮源等的競(jìng)爭(zhēng)。有些微生物的生長(zhǎng)需要特定的微量元素，鐵就是其中一種。許多條件致病菌對(duì)鐵離子的需求非常高。鐵載體是一種低分子量的鐵離子配體，它可以將鐵離子從其他絡(luò)合物中奪取，將不溶的鐵離子轉(zhuǎn)化為可溶態(tài)供微生物生長(zhǎng)。Zhang等[25]研究發(fā)現(xiàn)，由銅綠假單胞菌P.aeruginosaPA1產(chǎn)生的銅綠假單胞菌鐵載體，對(duì)一些海洋弧菌有不同程度的抑制作用。芽孢桿菌在腸道內(nèi)可消耗分子氧，制造厭氧環(huán)境，抑制好氧的致病菌，利于厭氧的有益菌乳酸菌和雙歧桿菌Bifidobacterium的生存與增殖[26]。Neeser等[27]研究表明，約氏乳桿菌L.johnsonii能夠在宿主體內(nèi)與腸道致病菌爭(zhēng)奪碳水化合物。

2.3 生態(tài)位或附著位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)

病原菌的黏附能力是其毒力因子之一，拮抗菌通過(guò)與病原菌競(jìng)爭(zhēng)水產(chǎn)動(dòng)物黏液層的黏附位點(diǎn)，進(jìn)而對(duì)病原菌產(chǎn)生抑制作用。已有報(bào)道表明，微生物黏附于黏附位點(diǎn)是通過(guò)被動(dòng)的力量、靜電相互作用、疏水性、脂膜酸 (脂胞壁酸質(zhì))、黏著物和黏附物的具體結(jié)構(gòu)等完成。Pan等[28]報(bào)道，酪酸梭狀芽胞桿菌Clostridium butyricum具有較強(qiáng)的黏附能力，能夠抑制兩種水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見(jiàn)致病菌嗜水氣單胞菌和鰻弧菌。從金頭鯛Sparusaurata、鱸Dicentrarchus labrax等水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)分離得到一株河流漫游球菌Vagococcus fluvialis，其對(duì)鱸腸道黏液有較強(qiáng)的黏附作用，能夠抑制鰻弧菌的侵染，可顯著提高鱸的存活率[29]。Lazado等[30]研究發(fā)現(xiàn)，分離自大西洋鱈魚(yú)腸道的假單胞菌和嗜冷桿菌Psychrobacter能夠干擾鰻弧菌和殺鮭氣單胞菌A.salmonicida黏附腸上皮細(xì)胞。

2.4 協(xié)同作用

有些微生物菌劑是良好的天然免疫刺激劑，能夠提高機(jī)體非特異性免疫力，可有效提高機(jī)體紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和免疫球蛋白等免疫細(xì)胞和免疫因子數(shù)量，提升溶菌酶活力及白細(xì)胞活力，進(jìn)而增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)致病菌的抵抗力。Zokaeifar等[31]研究表明，向凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌B.subtilis，能使對(duì)蝦免疫相關(guān)基因表達(dá)量顯著上調(diào)，且對(duì)哈維弧菌侵染的抗病力顯著提高，與對(duì)照組相比能夠提高對(duì)蝦存活率。

有些微生物如硝化細(xì)菌、硫化細(xì)菌、光合細(xì)菌等，應(yīng)用于養(yǎng)殖池塘能促進(jìn)有機(jī)物的降解，降低氨氮，提高溶解氧，控制亞硝酸鹽和硫化氫濃度，通過(guò)提高水質(zhì)進(jìn)而降低疾病發(fā)生率，提高存活率和生產(chǎn)效率[32]。芽孢桿菌能夠改善斑節(jié)對(duì)蝦Penaeus monodon的養(yǎng)殖水質(zhì)，降低養(yǎng)殖環(huán)境中病原弧菌的數(shù)量，并可提高對(duì)蝦生長(zhǎng)率和幼苗成活率[33]。Lalloo等[34]研究發(fā)現(xiàn)，從底泥沉積物和錦鯉Cyprinus carpio中分離得到3株芽孢桿菌 (枯草芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌B.cereus、地衣芽孢桿菌B.licheniformis)并應(yīng)用于觀(guān)賞魚(yú)養(yǎng)殖中，可降低水體氨氮、亞硝酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽濃度，并且對(duì)嗜水氣單胞菌有抑制作用。

3 拮抗菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用

隨著微生物學(xué)和微生態(tài)學(xué)的不斷發(fā)展，拮抗菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用效果越來(lái)越好，已在降低發(fā)病率、減少疾病的蔓延和交叉感染、提高水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物成活率等疾病防控方面被廣泛應(yīng)用[35]。

3.1 應(yīng)用方式

拮抗菌可通過(guò)口服、潑灑、注射等方式應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中。注射法操作不當(dāng)會(huì)使水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，故較少使用?？诜ㄍǔＶ笇⑥卓咕砑拥金B(yǎng)殖動(dòng)物餌料中，這種方法的目的是通過(guò)引入活的微生物使宿主動(dòng)物建立腸道菌群平衡，提高消化功能以及免疫系統(tǒng)應(yīng)答。有研究表明，直接口服或水體潑灑是使用拮抗菌最為有效的方法[36]。其優(yōu)勢(shì)在于無(wú)論水產(chǎn)動(dòng)物的個(gè)體大小均可施用，這樣在其任何生長(zhǎng)階段均可用拮抗菌處理。拮抗菌通過(guò)直接潑灑或作為飼料添加劑等方式在魚(yú)類(lèi)、甲殼類(lèi)、棘皮類(lèi)、貝類(lèi)等水產(chǎn)動(dòng)物中應(yīng)用，均取得了較好效果。

3.2 拮抗菌在魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖中的應(yīng)用

拮抗菌在虹鱒、鰻鱺Anguilla japonical、野鯪Labeo、大菱鲆Scophthalmus maximus、卡特拉鲃Catla catla等魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖應(yīng)用中均有研究報(bào)道。Gao等[37]研究表明，在虹鱒養(yǎng)殖中應(yīng)用貝萊斯芽孢桿菌B.velezensis能夠抑制殺鮭氣單胞菌的侵染。Cao等[38]研究發(fā)現(xiàn)，將解淀粉芽孢桿菌應(yīng)用于鰻鱺養(yǎng)殖中能降低嗜水氣單胞菌的侵染。Kumar等[39]報(bào)道了從南亞野鯪腸道中分離出的一株芽孢桿菌作為飼料添加劑連續(xù)兩周投喂南亞野鯪，能夠降低嗜水氣單胞菌的感染，與對(duì)照組相比其存活率提高了69%。Chen等[40]從大菱鲆腸道內(nèi)分離出一株枯草芽孢桿菌并作為飼料添加劑投喂大菱鲆，能有效抑制鰻弧菌感染，表明此菌可作為大菱鲆防控弧菌的飼料添加劑。Das等[41]研究表明，解淀粉芽孢桿菌FPTB16可作為潛在益生菌，以109cfu/mL的濃度將其添加到飼料中，投喂卡特拉鲃，可抑制遲緩愛(ài)德華菌E.tarda的侵染。Selim等[42]報(bào)道，解淀粉芽孢桿菌作為飼料添加劑投喂尼羅羅非魚(yú)Oreochromis niloticus，之后用魯氏耶爾森菌Y.ruckeri和D型產(chǎn)氣莢膜梭菌C.perfringens對(duì)其進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，與不投喂解淀粉芽孢桿菌的對(duì)照組相比，提高了尼羅羅非魚(yú)抗病力，進(jìn)而提高其存活率。

3.3 拮抗菌在對(duì)蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用

據(jù)報(bào)道，將美人魚(yú)發(fā)光桿菌Photobacterium damselae添加在飼料中投喂對(duì)蝦時(shí)，能夠降低對(duì)蝦腸道內(nèi)弧菌含量，與對(duì)照組相比可顯著提高對(duì)蝦的抗病力[43]。Dong等[44]報(bào)道了枯草芽孢桿菌對(duì)在高水溫下飼養(yǎng)日本對(duì)蝦60 d后的影響，結(jié)果表明，添加枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌的對(duì)蝦組腸道弧菌占腸道異養(yǎng)細(xì)菌總數(shù)的1%，顯著低于對(duì)照組29%。王文君[45]報(bào)道了從對(duì)蝦養(yǎng)殖環(huán)境中分離出的一株枯草芽孢桿菌，對(duì)溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌及副溶血弧菌具有明顯拮抗作用，不同濃度的3個(gè)投喂處理組均能有效降低弧菌數(shù)量，潑灑處理組在試驗(yàn)期間水體的弧菌數(shù)量均低于對(duì)照組，水體弧菌數(shù)量隨潑灑濃度的提高而降低。王春迪等[46]向養(yǎng)殖水體中添加蠟樣芽孢桿菌PC465，可降低對(duì)凡納濱蝦腸道內(nèi)細(xì)菌的數(shù)量和水體中的弧菌數(shù)量，且能夠提高對(duì)蝦抗WSSV感染能力，顯著降低對(duì)蝦死亡率。

3.4 拮抗菌在其他水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中的應(yīng)用

周慧慧[47]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)餌料中添加芽孢桿菌GSC－1和腸球菌GSC－3兩株弧菌拮抗菌投喂稚參時(shí)，能有效降低由燦爛弧菌感染引起的死亡率。湯菊芬等[48]研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌B.natto、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌和嗜酸乳桿菌L.acidophilus與中草藥等比例混合制成中草藥復(fù)合微生態(tài)制劑，添加到飼料中投喂刺參，對(duì)哈維弧菌有抑制作用，顯著提高了刺參存活率。

Sohn[49]研究發(fā)現(xiàn)，益生菌Phaeobacter inhibensS4和短小芽孢桿菌B.pumillusRI06－95能夠提高東方牡蠣的存活率，抑制塔式弧菌V.tubiashii的侵染。Abasolo－Pacheco等[50]在培育扇貝幼蟲(chóng)過(guò)程中，用草乳桿菌L.graminis和蠟樣芽孢桿菌的混合菌種處理，可顯著提高扇貝的存活率和生長(zhǎng)速率，并抑制溶藻弧菌的侵染。

4 展望

在過(guò)去的幾十年中，拮抗菌作為生物防控劑代替化學(xué)藥物和抗生素，對(duì)提高水產(chǎn)動(dòng)物抗病力具有積極作用，但水產(chǎn)動(dòng)物拮抗菌的研究及應(yīng)用依舊存在諸多不足。

首先，在廣泛應(yīng)用拮抗菌之前應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)具有更廣譜抑制作用和不同來(lái)源的拮抗菌的分離，不斷豐富水生動(dòng)物拮抗菌資源。同時(shí)，也需加強(qiáng)針對(duì)特異性病原菌侵染時(shí)拮抗菌應(yīng)用的研究，還需明確拮抗菌針對(duì)不同水產(chǎn)動(dòng)物以及同一水產(chǎn)動(dòng)物不同生長(zhǎng)階段的專(zhuān)用微生物制劑，使其產(chǎn)生更顯著的作用效果。其次，對(duì)拮抗菌最佳培養(yǎng)條件、安全性以及復(fù)配菌種間相互協(xié)同作用的和諧性等問(wèn)題需要進(jìn)一步研究，確保拮抗微生物無(wú)毒無(wú)害以及對(duì)生物和環(huán)境的安全性。拮抗菌作為活菌制劑，對(duì)其長(zhǎng)期保存工藝同樣需要加以考慮。此外，應(yīng)利用分子生物學(xué)等手段對(duì)拮抗作用機(jī)制進(jìn)行更深入地了解。

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物疾病問(wèn)題日益突出，微生態(tài)制劑的應(yīng)用已成為預(yù)防和控制水產(chǎn)動(dòng)物疾病的最佳方法。因此，必須加強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物拮抗菌的篩選和應(yīng)用研究，不斷改善的拮抗菌產(chǎn)品將會(huì)滿(mǎn)足水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展的需求。盡管拮抗菌在應(yīng)用中還存在一些問(wèn)題，但其對(duì)保護(hù)環(huán)境生態(tài)平衡、促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展具有重要的意義。

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Research advances on antagoistic microbes and application in aquatic animal pathogens:a review

DU Ming－yang， YE Shi－gen， LIU Juan， WANG Ne－yan， YANG Jing， BAI Lu
(Key Laboratory of Mariculture＆ Stock Enhancement in North China's Sea，Ministry of Agriculture，Dalian Key Laboratory of Marine Animal Disease Prevention and Control， Dalian Ocean University， Dalian 116023， China)

The species，functional mechanism and application of antagonistic bacteria in animal pathogens in aquature are reviewed to research for preventive and controll measures to replace antibiotics in aquaculture.Moreover，the new trends and prospects of probiotics application in aquaculture are also discussed.The findings will provide references with research and development of probiotics and control of the disease in aquaculture.

antagonistic microbe；functional mechanism；application

S942.3

A

10.16535/j.cnki.dlhyxb.2017.06.018

2095－1388(2017)06－0753－06

2017－05－22

遼寧省海洋漁業(yè)廳科研項(xiàng)目 (201510)；遼寧省教育廳科研項(xiàng)目 (L201602)；大連市青年科技之星項(xiàng)目 (2015R080)

杜明洋 (1993—)，女，碩士研究生。E－mail:1007595993＠qq.com

劉娟 (1983—)，女，博士，助理研究員。E－mail:liujuan＠dlou.edu.cn