半夏厚樸湯對抑郁癥型大鼠的治療作用研究

秦中朋

（河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院第一臨床醫(yī)學(xué)院，鄭州450046）

半夏厚樸湯對抑郁癥型大鼠的治療作用研究

秦中朋

（河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院第一臨床醫(yī)學(xué)院，鄭州450046）

目的建立抑郁癥大鼠模型，并研究半夏厚樸湯對大鼠抑郁癥的治療作用及作用機(jī)制，為臨床防治抑郁癥提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。方法將SD大鼠12只隨機(jī)分為四組：正常組(3只)，模型組(3只)，半夏厚樸湯組(3只)，西藥氟西汀組(3只)。后三組進(jìn)行電擊足底、通宵照明、禁水或禁食、換籠飼養(yǎng)、晝夜顛倒等，各種刺激隨機(jī)選用，制造抑郁癥大鼠模型。分別用半夏厚樸湯、氟西汀和生理鹽水給對應(yīng)抑郁癥大鼠模型灌胃。用水迷宮、敞箱實(shí)驗(yàn)、糖水試驗(yàn)等分別測試正常組、模型組與藥物組大鼠的反應(yīng)。最后斷頭取血，取海馬，測試海馬中乙酰膽堿變化，并根據(jù)西醫(yī)發(fā)病機(jī)制篩選特異性較高的指標(biāo)，進(jìn)行多重比較研究。對比分析得出半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠的影響。結(jié)果半夏厚樸湯組一般狀況（皮色、精神、飲食等）優(yōu)于對照組大鼠；半夏厚樸湯組大鼠在糖水試驗(yàn)中變現(xiàn)的認(rèn)知狀況優(yōu)于對照組；半夏厚樸湯組海馬重量大于其他組大鼠。且血清乙酰膽堿和海馬乙酰膽堿含量分析高于模型組和氟西汀組。結(jié)論半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠具有治療作用，且效果優(yōu)于西藥氟西汀。

抑郁癥；半夏厚樸湯；疏肝解郁；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；痰氣郁結(jié)

據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)預(yù)計(jì)，到2020年，抑郁癥將位于各類疾病發(fā)病率的榜首[1]。同時(shí)在我國，抑郁癥的患病人數(shù)已經(jīng)超過1億，因此對于抑郁癥的預(yù)防與治療已成為亟待解決的問題。近年來中藥經(jīng)方治療抑郁癥以其獨(dú)特的優(yōu)勢得到了廣泛的研究，中藥經(jīng)方具有成分簡單、作用環(huán)節(jié)多、靶點(diǎn)多且副作用小的特點(diǎn)，基于個(gè)體化的綜合治療和整體調(diào)節(jié)模式，在治療抑郁癥方面得到了眾多患者——特別是許多不愿意接受西藥治療的輕中度抑郁癥患者的喜愛。半夏厚樸湯出自中醫(yī)四大經(jīng)典的《金匱要略》[3]，原方由清半夏130 g，厚樸45 g，茯苓60 g，生姜75 g，蘇葉30 g等中藥加減組成，是治療中醫(yī)辨證癥型——痰氣郁結(jié)型郁證（俗稱“梅核氣”）的經(jīng)典方劑。方中半夏厚樸生姜以辛苦之性苦以降逆，辛以散結(jié)；以紫蘇之性行其郁結(jié)，以茯苓之性滲濕化痰，合奏起效使氣順痰消，解郁降逆，并達(dá)到對抑郁癥癥病人整體調(diào)理的目的。本實(shí)驗(yàn)采用西醫(yī)理論，使用中藥方法，以抑郁癥大鼠為模型探究半夏厚樸湯對抑郁癥的治療作用機(jī)制，目的為臨床醫(yī)務(wù)工作者提供更科學(xué)的數(shù)據(jù)分析和參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料12只雄性6月齡大鼠，重量（230～270）g，省動(dòng)物中心出售，許可證號(hào)：SCXK（豫）2010—0002，河南省動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)督監(jiān)測站（質(zhì)量合格證：NO. 41003100001905），實(shí)驗(yàn)單位許可證號(hào)：SYXK（豫）2010—0001。

1.2 藥物及試劑紫蘇葉30 g（批號(hào)1504087），清半夏48 g（批號(hào)1403713），姜厚樸36 g（批號(hào)1505034），茯苓50 g（1507026），生姜60 g（批號(hào)1506044）等均為中藥配方顆粒[4]；鹽酸氟西汀分散片20mg，小包裝注冊證號(hào)：H20110443，進(jìn)口藥品大包裝注冊證號(hào)：H20110515，分包裝藥品批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字J20120001，生產(chǎn)廠：PAYHEON FRANCE（法國）。分包裝廠：禮來蘇州制藥有限公司。

1.3 動(dòng)物分組與給藥方法在實(shí)驗(yàn)開始前，隨機(jī)將12只大鼠分成4組：正常對照組(3只)：實(shí)驗(yàn)過程中不給予任何刺激，給藥過程中按10ml/kg給予0.9%生理鹽水，1次/日。模型組(3只)：對大鼠施以群養(yǎng)加慢性不可預(yù)見的中等強(qiáng)度刺激，然后在給藥過程中按10 m l/kg給以0.9%生理鹽水，1日給予1次。半夏厚樸湯組(3只)：先對大鼠用群養(yǎng)加慢性不可預(yù)見的中等強(qiáng)度刺激，然后給以0.4mg/ml半夏厚樸湯液灌胃(相當(dāng)于生藥30 g/Kg)，1日給予1次。西藥氟西汀組(3只)：先對大鼠用群養(yǎng)加緩慢不可預(yù)見的中等強(qiáng)度刺激，然后給以濃度為4 g/ml的劑量灌胃(相當(dāng)于1.8mg/Kg體重)，1日給予1次。

1.4 模型制備方法根據(jù)文獻(xiàn)（簡單易操作的大鼠CUMS抑郁癥模型的構(gòu)建方法）[5]的方法進(jìn)行改進(jìn)。正常組共一籠飼養(yǎng)大鼠3只，不給以任何強(qiáng)度刺激。剩下的三組在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的1周內(nèi)，分別接受各種不同程度的應(yīng)激性感應(yīng)和慢性刺激，包括：禁食(24 h斷料)，禁水(24 h斷水)，通宵照明，冰水游泳(4℃，5 min)，電擊足底(36 v，每隔1 min刺激1次，每次持續(xù)10 s，共20次)，夾尾(距尾根1 cm處，1 min)。每天不確定性的安排四種刺激，分別給予不重復(fù)的一種，目的是使大鼠沒有預(yù)感反應(yīng)。

1.5 行為學(xué)測試方法及檢測指標(biāo)

1.5.1 認(rèn)知記憶功能評估Morris水迷宮，敞箱實(shí)驗(yàn)，糖水實(shí)驗(yàn)等。認(rèn)知功能檢測——Morris水宮檢測學(xué)習(xí)、記憶功能：采用最新型的Morris測試儀進(jìn)行檢測。敞箱實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)裝置為容積為60×80×80 cm的無蓋方箱、箱子內(nèi)部除底板外全部涂黑、底板設(shè)計(jì)為純白色，并將底板均勻地用記號(hào)筆劃成25個(gè)方格，大小等為16 cm×16 cm。刺激操作開始前將大鼠輕放于方箱底板中心，注意周圍條件應(yīng)在安靜下進(jìn)行，單獨(dú)的對大鼠進(jìn)行統(tǒng)一為3 min的測試，觀察者在行為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采用攝像系統(tǒng)觀察記錄大鼠在曠場內(nèi)前的動(dòng)作表現(xiàn)。同時(shí)注意大鼠與另一只大鼠測量之間應(yīng)使用用11%的酒精清洗方箱周壁表面及箱子底板，以免實(shí)驗(yàn)的其他誤差干擾接下來的數(shù)據(jù)記錄。上面計(jì)數(shù)完畢后，取兩項(xiàng)數(shù)目之和記為敞箱實(shí)驗(yàn)總得分。

糖水消耗量實(shí)驗(yàn)：造模前，先對大鼠進(jìn)行1%蔗糖水?dāng)z水訓(xùn)練運(yùn)動(dòng)，具體方法即在每籠同時(shí)放置2個(gè)水瓶，以24 h為周期，設(shè)置為第1個(gè)周期內(nèi)2瓶同時(shí)裝有1%等量的蔗糖水；接下來的第2個(gè)周期，1個(gè)瓶裝有1%蔗糖水，另1個(gè)瓶則裝等量的純凈水。在周期結(jié)束后，測量并計(jì)算：大鼠在24 h的禁食禁水后，1 h飲用1%蔗糖水和純水的量。

1.5.2 細(xì)胞因子及神經(jīng)遞質(zhì)含量測定ELISA法檢測血漿內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)：Ach含量。

1.6 研究的統(tǒng)計(jì)方法1）計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。2）多組間均數(shù)比較采用方差分析。3）計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示。4）采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。5）P＜0.05為數(shù)據(jù)可用，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 大鼠一般狀況的變化對大鼠進(jìn)行刺激后，抑郁癥模型大鼠模擬出了類似抑郁癥患者的軀體運(yùn)動(dòng)障礙以及精神萎靡壓抑兩種癥狀，如食欲下降，體重減輕(增長減慢)等。因此記錄大鼠的一般狀況可以在一定程度上反映半夏厚樸湯的作用效果（見表1）。

表1 對抑郁癥大鼠施以半夏厚樸湯后的一般情況的變化結(jié)果

通過對大鼠一般情況的對比比較，可以看出各組大鼠在灌胃后精神條件、體態(tài)皮毛、飲食情況的顯著變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示半夏厚樸湯組一般情況優(yōu)于對照組大鼠，從而可得出半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠有一定的改善。

2.2 大鼠體重記錄及變化分析抑郁癥模型大鼠出現(xiàn)類似抑郁癥患者的運(yùn)動(dòng)能力明顯遲鈍，沉默寡歡以及體重減輕(增長減慢)的情況等。因此記錄大鼠的一般狀況可以在一定程度上反映半夏厚樸湯的作用效果（見表2，圖1）。

表2 半夏厚樸湯對大鼠體重影響結(jié)果（±s）

表2 半夏厚樸湯對大鼠體重影響結(jié)果（±s）

組別動(dòng)物（只）造模刺激前體重（g）造模刺激后體重（g）正常組模型組氟西汀組半夏厚樸湯組210.33±4.51 211.00±21.66 188.00±24.64 200.67±12.34總數(shù)12 204.08±18.61 202.50±17.94 3 3 3 3 210.33±4.51 212.33±22.19 188.33±26.41 205.33±12.67

圖1 體重折線圖

2.3 敞箱實(shí)驗(yàn)敞箱實(shí)驗(yàn)現(xiàn)已成為抑郁癥模型實(shí)驗(yàn)最有代表性的實(shí)驗(yàn)檢測之一，對抑郁癥大鼠進(jìn)行敞箱實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察分析如下。（見表3，圖2，圖3，圖4，圖5）

表3 大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)行為學(xué)評分（±s）

表3 大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)行為學(xué)評分（±s）

組別動(dòng)物（只）中心格停留時(shí)間（s）正常組模型組氟西汀組半夏厚樸湯組3.00±1.41 7.50±0.71 6.50±2.12 4.50±2.12總數(shù)8 5.36±2.26 2 2 2 2水平得分44.00±8.49 26.50±7.78 20.50±7.78 25.00±8.49 29.00±11.36垂直得分修飾次數(shù)13.00±1.41 8.50±0.71 10.00±1.41 5.00±2.83 19.00±0.00 37.50±4.95 37.50±12.02 27.50±30.41 9.12±3.36 30.38±14.99

圖2 中心格停留時(shí)間均值折線圖

圖3 水平得分均值折線圖

圖4 垂直得分均值折線圖

圖5 修飾次數(shù)得分均值折線圖

2.4 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果本次Morris實(shí)驗(yàn)通過人為刺激讓大鼠置于水迷宮中，誘使其進(jìn)行游泳，觀察結(jié)果分析如下（實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4）。

表4 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 對抑郁癥大鼠海馬乙酰膽堿含量的影響人的腦組織中有大量的乙酰膽堿，乙酰膽堿的含量與年齡的增長呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。身體健康的老人乙酰膽堿的含量比年輕時(shí)會(huì)下降超過30%，而患有老年癡呆癥的病人乙酰膽堿減少更為嚴(yán)重，甚至?xí)哂?0%。因此研究檢測大腦海馬勻質(zhì)中乙酰膽堿的含量也是研究抑郁癥很重要的方法，使用半夏厚樸湯后對比結(jié)果如下。（見表5，圖6）

表5 Ach含量值數(shù)據(jù)表

圖6 大鼠大腦Ach濃度與OD值的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過查找大量論文材料，對抑郁癥的現(xiàn)代研究治療情況進(jìn)行了分析總結(jié)，同時(shí)探究了抑郁癥的中西醫(yī)機(jī)理，使實(shí)驗(yàn)進(jìn)行有了科學(xué)理論的基礎(chǔ)支撐和指導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)按照科學(xué)方法建立抑郁癥大鼠動(dòng)物模型，設(shè)立空白、模型、西藥、中藥等四組對其體重及海馬勻漿乙酰膽堿等指標(biāo)進(jìn)行比較，來驗(yàn)證其治療療效，同時(shí)實(shí)驗(yàn)引用國際公認(rèn)和通用的方法驗(yàn)證了中藥經(jīng)方半夏厚樸湯對于抑郁癥的治療作用機(jī)制及作用效果。

我們從國內(nèi)外的文獻(xiàn)中篩選出應(yīng)激抑郁癥模型（CUMS）為實(shí)驗(yàn)的造模模型[6-8]。模型以大鼠在接受不同的應(yīng)激后表現(xiàn)出一系列的情緒和動(dòng)作異常改變，如軀體運(yùn)動(dòng)障礙、食欲下降、體重減輕(增長減慢)等，同時(shí)成功地模擬了人類抑郁癥患者出現(xiàn)的精神情感異常，如焦慮、冷默、壓抑等。造模前期大鼠表現(xiàn)狂躁不安，亂動(dòng)多動(dòng)、躁亂撕咬，造模成功不久，即出現(xiàn)了中醫(yī)所謂的郁證表現(xiàn)，大鼠不欲飲食或食量降低，趨于安靜，蜷縮不再好動(dòng)，毛發(fā)逐漸失去光澤，自我清潔次數(shù)減少，灌藥的抵觸性降低。隨著喂藥的時(shí)間延長，西藥組、加味小柴胡湯中、大劑量組飲食、體重及活動(dòng)度增進(jìn)，逐步回升到造模初期水準(zhǔn)，均比模型組有顯著差別。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示半夏厚樸湯組一般情況優(yōu)于對照組大鼠，從而可得出半夏厚樸湯對抑郁癥大鼠的癥狀有一定的改善。敞箱實(shí)驗(yàn)行為和水平運(yùn)動(dòng)測定進(jìn)一步驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)的結(jié)論，9月8日的數(shù)據(jù)顯示大鼠造模成功，抑郁癥大鼠給藥后，9月10日的數(shù)據(jù)顯示給藥組抑郁癥有所減輕，尤其半夏厚樸湯組效果較明顯。水迷宮實(shí)驗(yàn)由于實(shí)驗(yàn)器材限制，沒有足夠的實(shí)驗(yàn)給大鼠引導(dǎo)，故所得數(shù)據(jù)存誤差。差異顯示無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)實(shí)驗(yàn)也存在問題在于抑郁大鼠模型的建立的成功與否，這些針對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生了一定的影響?，F(xiàn)在醫(yī)學(xué)對于人類抑郁癥的診斷只是從常見癥狀、精神表現(xiàn)等方面做出的推測診斷，并不能絕對的診斷抑郁癥，更難得對其辨證論治。而對于不會(huì)言語的大鼠，我們對其一般表現(xiàn)、精神狀態(tài)都不能作絕對的評估。因此，造模成功的檢測方法仍需改進(jìn)和探討。同時(shí)暴露出了一個(gè)迫切的問題，現(xiàn)今臨床工作者們對抑郁癥的辨證分型標(biāo)準(zhǔn)至今仍然是眾說紛紜，因此盡快統(tǒng)一一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)一致的抑郁癥癥狀分型非常重要。

同時(shí)因?yàn)閷?shí)驗(yàn)過程中由于條件限制并未進(jìn)一步檢測大鼠的大腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)、神經(jīng)小分子遞質(zhì)、神經(jīng)營養(yǎng)因子等多種物質(zhì)的含量變化，并未從分子水平探究解釋抑郁癥的機(jī)制，不能從西醫(yī)理論充分驗(yàn)證抑郁假說中某些指標(biāo)的變化，所以接下來我們會(huì)進(jìn)一步通過分子水平研究半夏厚樸湯對抑郁癥的作用機(jī)理。

綜上所述，通過半夏厚樸湯對抑郁癥型大鼠的治療作用研究結(jié)果顯示：中藥經(jīng)方半夏厚樸湯確實(shí)存在減輕和改善抑郁癥的功效，同時(shí)本次實(shí)驗(yàn)也在一定程度上證明了半夏厚樸湯對抑郁癥的治療作用比西藥復(fù)方氟西汀分散片的作用更好。同時(shí)實(shí)驗(yàn)也啟示我們應(yīng)該不斷深入和加強(qiáng)對于抗抑郁中藥經(jīng)方及其中藥有效成分提取的實(shí)驗(yàn)研究，以便可以盡快發(fā)現(xiàn)抗抑郁中藥的有效成分而研發(fā)成成分簡單的、可廣泛應(yīng)用的、讓患者更易接受的藥物，也有利于中醫(yī)藥走向世界，以便造福更多的抑郁癥患者。

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Study on the Therapeutic Effect o f Banxia Houpu Decoction on Dep ression ModelRats

QINZhongpeng

(The FirstClinicalM edicalCollege,the Affiliated Hospitalof Henan University of TraditionalChineseMedicine,Zhengzhou 450046,China)

Ob jectiveTo establish the depression ratmodel,and to study the therapeutic effect and themechanism of Banxia Houpu decoction on rats of depression,to provide experimental and theoretical basis for clinical prevention and treatment of depression.Methods12 SD ratswere random ly divided into four groups：normal group(3 rats),model group(3 rats),banxia Houpu decoction group(3 rats)and fluoxetine group(3 rats).The three groups were electric shock foot,night lighting,water deprivation or fasting,for cage rearing,day and night,and so on,a variety of stimuli random ly selected,manufacturing depression ratmodel.Respectively with fluoxetine and saline banxiahoupu decoction,correspondingmodel rats with depression.The watermaze,open field test and sucrose consumption testwere tested in the normal group,model group and drug group rat reaction.Finally,the blood was taken,the hippocampus was taken to test the changes of acetylcholine in the hippocampus,and the specificity of the higher index was selected according to the pathogenesis ofWestern medicine.Comparative analysis of the effect of Banxia Houpu decoction on depression in rats was carried out.ResultsThe general condition of Banxia Houpu decoction group(skin color,spirit,diet,etc.)was better than that of the control group.Banxia Houpu decoction group rats were realized in sucrose test in cognitive status was better than the control group.Banxia Houpu decoction group was greater than the weight of other groups of rats'hippocampus.The levels of acetylcholine and acetylcholine in serum were higher than that in themodel group and the fluoxetine group.ConclusionBanxia Houpu decoction has a therapeutic effecton depression in rats,and the effect isbetter than Westernmedicine fluoxetine

depression;Banxia Houpu decoction;dispersing stagnated liver qi for relieving qi stagnation;animal experiment;stagnation of phlegm and qi

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.05.055

1672-2779（2017）-05-0130-04

：李海燕本文校對：劉增芳

2016-11-08）