復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬生長指標(biāo)、血液免疫指標(biāo)及糞便微生物的影響

摘 要 以益生菌復(fù)配藥食同源植物制備的復(fù)合植物菌劑為無抗飼料添加劑，研究基礎(chǔ)飼糧中添加復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬生長性能、腹瀉率、血液免疫指標(biāo)及糞便微生物的影響，旨在評估復(fù)合植物菌劑作為飼料添加劑的效果。選取24日齡的斷奶仔豬54頭，隨機分為3組：分別飼喂基礎(chǔ)飼糧（空白組）、基礎(chǔ)飼糧+50 g/t金霉素（對照組）、基礎(chǔ)飼糧+0.2%復(fù)合植物菌劑（試驗組），其中每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)6頭仔豬，預(yù)試期3 d，正式試驗期30 d。結(jié)果顯示，與對照組相比，試驗組斷奶仔豬的末質(zhì)量、平均日增量和頭均耗料量顯著升高（P<0.05），發(fā)病率和腹瀉率降低約50%（P<0.05）；血液生化指標(biāo)中，總蛋白、白蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶和葡萄糖含量顯著升高（P<0.05），尿素氮和甘油三酯含量顯著降低（P<0.05）；IgG、IgM和IgA含量顯著增加 （P<0.05）；糞便中大腸桿菌數(shù)量顯著降低（P<0.05），乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量顯著升高（P<0.05）。綜上所述，在基礎(chǔ)飼糧中添加0.2%復(fù)合植物菌劑可以顯著改善斷奶仔豬的生長性能，降低腹瀉率，提高血液免疫指標(biāo)，促進腸道有益菌的增殖。

關(guān)鍵詞 復(fù)合植物菌劑；斷奶仔豬；生長性能；腹瀉率；血液免疫指標(biāo)；糞便微生物

中國在生豬規(guī)?；a(chǎn)中施行的早期斷奶技術(shù)促進了仔豬飼養(yǎng)水平的提高，但也對其生長發(fā)育產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致仔豬斷奶后出現(xiàn)消化不良、飼料利用率低、抗病能力差、腹瀉和生長緩慢等問題[1-2]。因此，在養(yǎng)豬業(yè)實際生產(chǎn)中，通常利用高劑量的抗生素作為飼料添加劑以控制仔豬斷奶后的不良反應(yīng)[3]。然而，長期過量使用抗生素已經(jīng)導(dǎo)致畜產(chǎn)品抗生素殘留超標(biāo)、病原微生物耐藥性增強、環(huán)境污染不斷嚴(yán)重等諸多問題，中國已在2020-01-01起禁止在動物飼料中使用抗生素[3-4]。目前，尋求綠色安全的飼料添加劑替代抗生素已成為畜牧生產(chǎn)行業(yè)亟待解決的重大問題。

在斷奶仔豬飼糧中單方面使用益生菌或藥食同源植物提取物作為飼料添加劑，可以改善仔豬斷奶后出現(xiàn)的一系列應(yīng)激反應(yīng)[5]。飼料中添加益生菌能夠加快仔豬的生長速度，提高飼料利用率和生產(chǎn)性能，并降低仔豬感染腸道疾病的風(fēng)險等[1]；飼料中添加藥食同源植物提取物能夠促進仔豬的生長發(fā)育，改善仔豬健康狀況和增加仔豬抗病能力等[6]。益生菌和藥食同源植物提取物作為飼料添加劑都具備安全高效、無藥殘、無毒副作用和不易產(chǎn)生耐藥性的優(yōu)點，是替代抗生素和化學(xué)藥物的絕佳選擇[6-7]。然而，目前關(guān)于益生菌復(fù)配藥食同源植物制備的復(fù)合植物菌劑作為飼料添加劑在斷奶仔豬的養(yǎng)殖營養(yǎng)中研究較少。因此，本研究以斷奶仔豬為試驗對象，探討復(fù)合植物菌劑作為飼料添加劑對斷奶仔豬生長性能、腹瀉率、血液免疫指標(biāo)及腸道微生物的影響，旨在評估復(fù)合植物菌劑替代抗生素作為飼料添加劑的效果，為復(fù)合植物菌劑在斷奶仔豬健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

植物乳桿菌和酵母菌由安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院薛挺教授實驗室饋贈，嗜熱鏈球菌購自西安某生物科技有限公司。對3種益生菌進行冷凍干燥制備益生菌劑，復(fù)水后存活率均達(dá)到7×108 CFU/g。藥食同源植物黃芪片和山楂片，由合肥某生物科技有限公司提供。試劑盒包括人白蛋白酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM1128Hu）、人尿素氮酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0754Hu）、豬甘油三酯酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0029Po）、豬膽固醇酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0004Po）、豬丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0367Po）、豬天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0363Po）、豬免疫球蛋白A酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0165Po）、豬免疫球蛋白G酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0124Po）、豬免疫球蛋白M酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0123Po）、豬補體成分3酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0099Po）、豬補體成分4酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0133Po）、豬白細(xì)胞介素2酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0024Po）、豬白細(xì)胞介素4酶聯(lián)免疫分析（貨號：JYM0025Po），由武漢基因美科技有限公司提供。試劑盒雙縮脲法蛋白含量檢測（貨號：AKPR001C）和葡萄糖含量檢測（貨號：AKSU001C）由Boxbio提供。

1.2 試驗設(shè)計

黃芪片和山楂片水提后噴霧干燥，制成黃芪粉和山楂粉，與益生菌冷凍干燥后得到的益生菌劑按1∶1的比例混合，制成復(fù)合植物菌劑，作為飼料添加劑，將復(fù)合植物菌劑與基礎(chǔ)飼糧混合后飼喂斷奶仔豬。本試驗在四川渠縣某養(yǎng)殖公司進行。選取54頭體況良好，體質(zhì)量（7.5+0.4） kg、斷奶日齡（24±2） d的斷奶仔豬，公母各半，隨機分成3組：空白組（K1-18）、對照組（D1-18）、試驗組（S1-18），每組3個重復(fù)，每個重復(fù)6頭仔豬，并做好標(biāo)記。仔豬斷奶后先進入保育舍3 d，期間觀察仔豬健康狀況、合群性，逐漸飼喂基礎(chǔ)飼糧，然后進入試驗期[8]?？瞻捉M飼喂常規(guī)基礎(chǔ)飼糧，對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧中添加50 g/t金霉素的飼糧，試驗組飼喂基礎(chǔ)飼糧中添加0.2%復(fù)合植物菌劑的飼糧。試驗共持續(xù)30 d?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗前對圈舍進行徹底清掃、消毒。試驗仔豬自由飲水，分別在每天8：00、11：00、14：00、 17：00和20：00投喂1次，每次飼料投喂量在仔豬停止采食后飼料稍留于喂養(yǎng)槽內(nèi)為佳[9]。試驗開始后每天早晚清掃圈舍1次，其他日常管理與衛(wèi)生防疫按試驗所在養(yǎng)豬場常規(guī)程序進行。定期觀察試驗豬的采食、生長發(fā)育和腹瀉等情況。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能 在試驗期第1天和第31天8：00前空腹稱體質(zhì)量，計算斷奶仔豬試驗期間的平均日增質(zhì)量（ADG）和平均凈增質(zhì)量（ANG）；記錄每天投料量、余料量和損耗量，計算頭均耗料量和料質(zhì)量比（F/G）。

平均凈增質(zhì)量=末質(zhì)量-始質(zhì)量；

平均日增質(zhì)量=平均凈增質(zhì)量÷試驗時間；

頭均耗料量=總采食量÷試驗時間÷仔豬 頭數(shù)；

料質(zhì)量比=頭均耗料量÷平均凈增質(zhì)量。

1.4.2 腹瀉率 詳細(xì)觀察并記錄各組斷奶仔豬的腹瀉情況，腹瀉狀況的判斷參照刁慧等[10]的腹瀉評分法，計算仔豬腹瀉率。發(fā)病率是指一定期間，一定范圍內(nèi)某病發(fā)生的頻率。

腹瀉率=總腹瀉頭數(shù)÷（仔豬頭數(shù)×試驗時間）×100%；

發(fā)病率=新發(fā)生病例數(shù)÷同期總仔豬頭數(shù)×100%

1.4.3 血液生化指標(biāo) 在試驗正試期第31天晨飼前，從每個重復(fù)內(nèi)隨機抽取3頭仔豬（每組9頭），采用一次性肝素抗凝真空采血管從空腹仔豬前肢靜脈采血10 mL，3 000 r/min離心15 min，取上清于離心管中，并做好標(biāo)記，于-20 ℃冰箱保存[8]。使用試劑盒檢測總蛋白（TP）、白蛋白 （ALB）、尿素氮（BUN）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）和葡萄糖（GLU）的含量，以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的活性。具體檢測方法參照試劑盒說明書。

1.4.4 免疫指標(biāo)

使用試劑盒檢測免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、白細(xì)胞介素2（IL-2）、白細(xì)胞介素4（IL-4）、補體3（C3）和補體4（C4）的含量。具體檢測方法參照試劑盒說明書。

1.4.5 糞便微生物含量的測定

在試驗正式期第31天晨飼前，收集仔豬新鮮糞便20 g，放入無菌的離心管中，并做好標(biāo)記，于-80 ℃冰箱保存，用于檢測微生物菌落。

在4.5 mL無菌水中加入0.5 g仔豬新鮮糞便，制成10-1稀釋液，再吸取0.5 mL 10-1倍稀釋液加入4.5 mL無菌水，制成10-2稀釋液，用同樣的方法進行10-3～10-6倍稀釋。對糞便稀釋液進行平板涂布，大腸桿菌在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，乳酸菌和雙歧桿菌在37 ℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束后進行菌落計數(shù)，統(tǒng)計糞便中大腸桿菌、乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有試驗數(shù)據(jù)均采用Microsoft Excel 2020軟件進行初步處理，然后使用Minitab 20進行單因素方差分析，采用 Duncan’s法進行平均值的多重比較。數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示，差異顯著性的判斷標(biāo)準(zhǔn)定為 P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬生長性能的影響

由表2 可知，與空白組相比，試驗組斷奶仔豬的平均日增質(zhì)量和頭均耗料量顯著增加（P< 0.05），增加量分別為12.23%和9.52%；與對照組相比，試驗組仔豬的平均日增質(zhì)量和頭均耗料量分別增加10.52%和8.34%（P<0.05）；對照組與空白組相比，仔豬的平均日增質(zhì)量和頭均耗料量差異不顯著，表明添加0.2%的復(fù)合植物菌劑有助于提高斷奶仔豬的采食量，增進斷奶仔豬的食欲，且優(yōu)于添加50 g/t金霉素。

2.2 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬發(fā)病率和腹瀉率的影響

由表3可知，在整個試驗期間，相比空白組，對照組斷奶仔豬發(fā)病率和腹瀉率顯著降低（P<0.05）；試驗組斷奶仔豬的發(fā)病率和腹瀉率與對照組相比分別降低49.41%和48.54%（P<0.05），說明添加0.2%復(fù)合植物菌劑能夠顯著提高斷奶仔豬的健康水平和疾病抵抗能力，且效果優(yōu)于添加50 g/t金霉素組。

2.3 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響

由表4可知，試驗組斷奶仔豬血液生化指標(biāo)中的BUN、TC和TG含量顯著低于空白組（P<0.05），GLU含量顯著高于空白組（P<0.05）。而TP、ALB、ALT和AST含量在三組之間并無差異顯著。由此可見，添加0.2%復(fù)合植物菌劑有利于增強斷奶仔豬體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝和脂代謝，從而促進仔豬的生長發(fā)育。

2.4 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬免疫指標(biāo)的影響

由表5可知，通過測定斷奶仔豬血漿中的IgG，IgM和IgA， IL-4，IL-2以及C3和C4的水平，試驗組中 IgG、IgM、IgA和IL-4的含量相比空白組和對照組都顯著升高（P<0.05）。由此可見，復(fù)合植物菌劑組可以顯著提高斷奶仔豬特異性體液免疫功能。

2.5 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬腸道微生物的 影響

由表6可知，試驗組斷奶仔豬腸道微生物中大腸桿菌數(shù)量相比空白組和對照組顯著降低 （P<0.05）；而乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量均顯著增加（P<0.05）。由此可見，添加0.2%復(fù)合植物菌劑可抑制斷奶仔豬腸道微生物中有害菌大腸桿菌的生長，促進益生菌乳酸菌和雙歧桿菌的增殖，調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡，減少腹瀉等疾病的發(fā)生。

3.1 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬生長性能的影響

仔豬斷奶會產(chǎn)生斷奶應(yīng)激綜合征，影響仔豬的生長發(fā)育，平均日增質(zhì)量和料質(zhì)量比可以直接反映動物對飼料的利用率，是評價生長性能的有效指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，益生菌能夠加快仔豬的生長發(fā)育速度，提高生長性能，能夠有效替代抗生素[11]。在斷奶仔豬的飼糧中添加適量的黃芪多糖和山楂提取物，可以有效提高仔豬的末質(zhì)量和平均日增質(zhì)量，并顯著降低仔豬的料重比[12-13]。本試驗結(jié)果表明，0.2%復(fù)合植物菌劑添加于斷奶仔豬基礎(chǔ)飼糧中可促進仔豬生長，仔豬的平均日增質(zhì)量和頭均耗料量顯著增加（P<0.05），其中平均日增質(zhì)量提高12.2%，由此可見，由益生菌和藥食同源植物組成的復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬的生長具有顯著的促進作用。

3.2 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬發(fā)病率和腹瀉率的影響

仔豬斷奶后腹瀉是全球養(yǎng)豬業(yè)面臨的一個廣泛性問題，斷奶后3～9 d內(nèi)易發(fā)生，其腹瀉的程度還受飼養(yǎng)條件等的影響[5]。研究發(fā)現(xiàn)，仔豬斷奶后易發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，消化酶活性降低導(dǎo)致消化功能紊亂，容易引發(fā)疾病[14]。黃芪和山楂具有強健脾胃，促進食欲的作用，將其添加到斷奶仔豬的飼料中，可以降低仔豬腹瀉率[15]。本試驗結(jié)果表明，斷奶仔豬基礎(chǔ)飼糧中添加0.2%復(fù)合植物菌劑，斷奶仔豬的腹瀉率和發(fā)病率相比抗生素組均降低約50%（P<0.05），說明復(fù)合植物菌劑能夠顯著改善斷奶仔豬的腹瀉問題，并減少疾病的 發(fā)生。

3.3 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響

血清中的生理生化指標(biāo)能夠反映斷奶仔豬對蛋白質(zhì)的吸收與代謝情況。研究表明，黃芪多糖可以顯著提高斷奶仔豬血清中ALB的含量，復(fù)合益生菌可以顯著提高AST活性[16]。崔艷紅等[17]研究發(fā)現(xiàn)，10%益生菌復(fù)合發(fā)酵料能替代飼料中的抗生素，且對動物機體無不良影響，并優(yōu)于抗生素對動物機體的作用。本試驗結(jié)果表明，添加0.2%復(fù)合植物菌劑，不僅能夠顯著降低斷奶仔豬體內(nèi)的BUN、TG和TC含量（P<0.05），而且能夠顯著提高斷奶仔豬體內(nèi)的GLU含量（P<0.05），說明斷奶仔豬體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝和脂代謝增強。

3.4 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬免疫指標(biāo)的影響

免疫球蛋白水平的高低可以反映機體對疾病的抵抗能力，血清中主要的免疫球蛋白包括IgA、IgG和IgM，其含量能夠反映機體的免疫狀況。研究表明，在斷奶仔豬的飼糧中加入黃芪，仔豬血清中IgA、IgG、IgM以及補體C3和C4含量明顯增加，且在65日齡時抗體依然維持在較高水平[18]。益生菌與中草藥混合后作為添加劑，仔豬血清中IgA、IgG和IgM含量極顯著增加（P< 0.01）[19]。本試驗結(jié)果表明，與基礎(chǔ)飼糧組和金霉素組相比，在斷奶仔豬基礎(chǔ)飼糧中添加0.2%復(fù)合植物菌劑，可以顯著提高血清中免疫球蛋白IgG、IgM和IgA的含量（P<0.05），同時，IL-4的含量也顯著提高（P<0.05），說明斷奶仔豬的免疫能力得到改善，機體的抗病能力提高。

3.5 復(fù)合植物菌劑對斷奶仔豬糞便微生物的 影響

斷奶仔豬的胃腸道尚未發(fā)育成熟，環(huán)境改變或飼料更換都會導(dǎo)致仔豬出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，從而破壞腸道內(nèi)的菌群穩(wěn)態(tài)，例如乳酸菌和雙歧桿菌等益生菌數(shù)量減少，而大腸桿菌等有害菌不斷增殖[20]。研究表明，在斷奶仔豬的飼糧中加入復(fù)合益生菌，其大腸桿菌的數(shù)量顯著減少，能夠維護腸道生態(tài)平衡，抑制致病菌的生長增殖[21]。本試驗結(jié)果表明，添加0.2%復(fù)合植物菌劑能夠促進斷奶仔豬糞便中乳酸菌和雙歧桿菌的增殖，抑制大腸桿菌的生長，從而預(yù)防仔豬腸道疾病。

4 結(jié) 論

在斷奶仔豬飼糧中添加0.2%復(fù)合植物菌劑，能夠明顯提高仔豬的生長性能，顯著降低仔豬的腹瀉率和發(fā)病率，增強機體免疫力，促進蛋白質(zhì)合成和血糖水平的提高，改善腸道菌群環(huán)境。因此，0.2%復(fù)合植物菌劑可替代金霉素在仔豬飼料中的使用，發(fā)揮抗病促生長和替抗的功效。

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Effect of a Compound of Probiotics Mixed with Medicine Food Homology Plant on Growth and Blood Immune Indexesand Fecal Microorganism of Weaned Piglets

WANG Yaling1，YANG Endong1，CHENG Xianfang2，WANG Weiyun1 and LIU Jing1

（1.College of Life Science，Anhui Agricultural University， Hefei 230036，China;

2.Anhui Tian’an Biotechnology limited Company， Lu’an Anhui 237200，China）

Abstract In this study， the compound prepared by mixing probiotics-with medicine food homology plants was used as an antibiotic-free feed additive to investigate the effects on growth performance， diarrhea rate， blood immune indexes and fecal microbiota of weaned piglets. The study aimed to evaluate the availability of the compound as substitute for antibiotics in animal feed.. A total of 54 weaned piglets at 24-day-old were randomly divided into 3 groups：basal diet （blank group）， basal diet + 50 g/t aureomycin （control group）， and basal diet +0.2% the compound （experimental group）， with 3 replicates per group and 6 piglets per replication. The 3 groups of piglets were tested for 3 days in pre-period， and then 30 days in formal experiment period. The results showed that， compared with control group， the final mass， average daily gain and average head consumption of weaned piglets in experimental group significantly increased （P<0.05）， and the incidence rate and diarrhea rate of weaned piglets in experimental group were reduced by about 50% （P<0.05）; in the blood biochemical indexes， the contents of total protein， albumin， aspartate aminotransferase and glucose significantly increased （P<0.05）， while the contents of urea nitrogen and triglyceride significantly decreased （P<0.05）; the contents of immunoprotein IgG， IgM and IgA significantly increased （P< 0.05）; the number of Escherichia coli in fecal microorganisms significantly decreased （P<0.05）， while the number of Lactobacillus and Bifidobacteria significantly increased （P<0.05） respectively. In conclusion， adding 0.2% the compound of probiotics mixed with medicine food homology plant to the basal diet of weaned piglets significantly enhances the growth performance， reduces the diarrhea rate， improves the blood immune indexes， and promotes the proliferation of intestinal beneficial bacteria.

Key words Compound of probiotics mixed with medicine food homology plant; Weaned piglets; Growth performance; Diarrhea rate; Blood immune indexes; Fecal microorganisms

Received 2023-01-25 Returned 2023-03-11

Foundation item Key Special Project of Industry，Teaching and Research in Lu’an（No.2020-5）.

First author WANG Yalin， female， master student. Research area：microbiology.E-mail：wyl201748@163.com

Corresponding author WANG Weiyun，male，professor. Research area：Chinese medicine.E-mail：weiywswzy@163.com

LIU Jing，female，associate professor.Research area：molecular biology and microbiology.E-mail：liujing9261@ahau.edu.cn

（責(zé)任編輯：顧玉蘭 Responsible editor：GU Yulan）

基金項目：六安市產(chǎn)學(xué)研合作重大專項（2020-5）。

第一作者：王雅玲，女，碩士研究生，研究方向為微生物學(xué)。E-mail：wyl201748@163.com

通信作者：汪維云，男，教授，研究方向為中藥學(xué)。E-mail：weiywswzy@163.com

劉 靜，女，副教授，研究方向為分子生物學(xué)和微生物學(xué)。E-mail：liujing9261@ahau.edu.cn