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    波動性高糖對血管平滑肌細(xì)胞增殖及凋亡蛋白表達(dá)的影響

    2017-03-11 10:32:20張?zhí)鹛?/span>丁穎超任建民
    關(guān)鍵詞:波動性高糖平滑肌

    張?zhí)鹛穑》f超,蘇 寧,任建民

    (1.山東壽光市人民醫(yī)院, 山東 濰坊 262700; 2.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院, 山東 泰安 271041)

    波動性高糖對血管平滑肌細(xì)胞增殖及凋亡蛋白表達(dá)的影響

    張?zhí)鹛?,丁穎超1,蘇 寧1,任建民2

    (1.山東壽光市人民醫(yī)院, 山東 濰坊 262700; 2.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院, 山東 泰安 271041)

    目的分析血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡蛋白表達(dá)受到波動性高糖影響的過程。方法利用持續(xù)高糖及波動性高糖的方式促使大鼠胸主動脈平滑肌持續(xù)孵育二十四小時,重點(diǎn)采用MTT方法檢測血管平滑肌細(xì)胞的增殖活性,同時還需要關(guān)注流式細(xì)胞術(shù)對檢測細(xì)胞周期過程中發(fā)生的具體改變,利用Western bloting手段檢測胞漿中Bcl-2與Bax蛋白的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)波動性高濃度葡萄糖培養(yǎng)相比于持續(xù)高濃度葡萄糖的培養(yǎng)方式更有助于提升血管平滑肌細(xì)胞的增殖活性,并且有效的實現(xiàn)周期轉(zhuǎn)變,促使G0/G1期及時向S期進(jìn)行轉(zhuǎn)變,在上調(diào)Bcl-2/Bax比值的過程中,更好的呈現(xiàn)出提高活性效果。結(jié)論 波動性高葡萄糖能夠通過干預(yù)細(xì)胞周期的方式,對凋亡蛋白加以調(diào)控,從而更好的促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)不斷增殖的現(xiàn)象,并且逐漸誘導(dǎo)其進(jìn)入凋亡狀態(tài),相較于持續(xù)性高葡萄糖,可以更加明顯的促進(jìn)糖尿病動脈粥樣硬化的發(fā)展延伸。

    波動性高糖;細(xì)胞增殖;凋亡蛋白表達(dá);血管平滑肌細(xì)胞

    糖尿病患者會發(fā)生慢性血管并發(fā)癥主要是跟持續(xù)高糖有關(guān),同時也和血糖波動聯(lián)系密切[1]。動脈粥樣硬化屬于DM患者發(fā)生大血管病變中的重要病理基礎(chǔ),內(nèi)皮細(xì)胞與血管平滑肌細(xì)胞等成分都是在As發(fā)生過程中體現(xiàn)出重要價值。此次研究主要是以大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞株A7r5為對象,目的是探索波動性高糖對VSMC的增殖及凋亡,以及可能產(chǎn)生的作用與相關(guān)機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 試劑與儀器

    大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞株A7r5細(xì)胞;Epics-XLⅡ型流式細(xì)胞儀(BeckmanCoulter公司);高糖DMEM培養(yǎng)基、低糖DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(GIBCO公司);鼠單抗Bclxl抗體(eBioscience公司);兔抗人 β-actin多克隆抗體(Santa Cruz公司);鼠單抗Bcl-2抗體、鼠單抗Bax抗體(杭州四季青生物工程公司產(chǎn)品)。

    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和實驗分組

    把細(xì)胞培養(yǎng)在四十八小時之內(nèi)更換含無血清的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)二十四小時,讓細(xì)胞可以同步于G0/G1期,然后分3組:①正常對照組:5.5 mmol/L葡萄糖組;②持續(xù)高糖組:25 mmol/L葡萄糖組;③波動性高糖組:白天5.5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L葡萄糖每3 h高糖2 h低糖交替3次,高糖過夜。培養(yǎng)24 h。

    1.3 MTT法檢測細(xì)胞增殖活性

    流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布;Western bloting法檢測細(xì)胞Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 血管平滑肌細(xì)胞的具體增殖情況

    波動性高糖組VSMC A490值相比于正常的對照組,會發(fā)現(xiàn)持續(xù)高糖組都顯著升高(均P<0.01);持續(xù)高糖組A490值相比于正常對照組也呈現(xiàn)出明顯增加的趨勢(P<0.01) (表1略)。

    2.2 細(xì)胞生長周期比較

    不同濃度的葡萄糖在經(jīng)過二十四小時作用VSMC之后,波動性高糖組及持續(xù)高糖組S期細(xì)胞百分比相比于正常對照組要呈現(xiàn)出明顯的增高趨勢(P分別<0.01,0.05),波動性高糖組相比于持續(xù)高糖組呈現(xiàn)出增高(P<0.05)趨勢;波動性高糖組G0/G1期細(xì)胞百分比相比于持續(xù)高糖組和正常對照組呈現(xiàn)出降低的趨勢(P分別<0.01,0.005),而持續(xù)高糖組G0/G1期細(xì)胞百分比和正常的對照組進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各個組間G2期細(xì)胞百分比相比體現(xiàn)不出統(tǒng)計學(xué)意義(表2略)。

    2.3 不同葡萄糖濃度的影響

    和正常對照組進(jìn)行對比,發(fā)現(xiàn)波動性高糖組和持續(xù)高糖組Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)都呈現(xiàn)出增強(qiáng)(均P<0.01)的趨勢,波動性高糖組Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)也明顯高于持續(xù)高糖組(P分別<0.05,0.01);波動性高糖組和持續(xù)高糖組Bcl-2/Bax之間的比值明顯高于正常對照組(均P<0.01),波動性高糖組Bcl-2/Bax比值相比于持續(xù)高糖組呈現(xiàn)出顯著增高(均P<0.01;表3和圖1)的趨勢。

    3 討論

    糖尿病就是慢性高血糖為特征的代謝紊亂綜合征,如果大血管發(fā)生病變會引起心腦血管疾病的發(fā)生,甚至是致死致殘。高血糖與心腦血管疾病聯(lián)系密切,糖化血紅蛋白在逐漸升高1%的時候,1型和2型糖尿病患者的心腦血管疾病呈現(xiàn)出的危險性也會逐漸增加15%和18%,顯示出的高血糖狀態(tài)就是糖尿病患者發(fā)生心腦血管疾病的成因。

    此次研究證實,持續(xù)體外高糖培養(yǎng)能夠刺激VSMC細(xì)胞的增殖,從而改變細(xì)胞在不CN 43-1262/R中國動脈硬化雜志2011年第19卷第11期899同周期的百分比,和以往研究的結(jié)果相符。

    此研究在VSMC上證實,波動性高葡萄糖會通過細(xì)胞周期轉(zhuǎn)化、調(diào)控凋亡蛋白的表達(dá)增加細(xì)胞增殖,避免出現(xiàn)凋亡情況,這對細(xì)胞功能損傷較之持續(xù)性高糖更加嚴(yán)重。為此,控制好具體的血糖水平,能夠減少血糖波動對控制糖尿病大血管并發(fā)癥的延續(xù),以此對提升患者的生存質(zhì)量具有重要意義。

    [1] 鄧珊珊,劉 紅,榮 曦,等.波動性高糖對INS-1細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].山東醫(yī)藥,2012,(15):12-14.

    [2] 馮朝彩,趙占勝,李 丹,等.波動性高糖對血管平滑肌細(xì)胞增殖及凋亡蛋白表達(dá)的影響[J].中國動脈硬化雜志,2011,(11):897-900.

    [3] 湯智敏,雷閩湘.波動性高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[J].中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2010,(06):616-621.

    本文編輯:賀 攀

    R-332

    B

    ISSN.2095-8242.2017.12.2196.01

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