聚合物整體柱的制備方法及其研究進(jìn)展

趙麗華，施介華

（浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州 310012）

聚合物整體柱的制備方法及其研究進(jìn)展

趙麗華，施介華

（浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州 310012）

整體柱作為第4代色譜填料，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生和化學(xué)化工等學(xué)科領(lǐng)域，具有一定的應(yīng)用價值和發(fā)展前景。該文對聚合物整體柱的制備方法及其研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，主要介紹了有機(jī)聚合物整體柱、無機(jī)硅膠整體柱、有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱，并對有機(jī)聚合物整體柱進(jìn)行了詳細(xì)分類。

整體柱；有機(jī)聚合物；無機(jī)硅膠；有機(jī)-無機(jī)雜化

色譜（chromatography）這一概念，由 Tswett于1906年提出，經(jīng)過一個多世紀(jì)的發(fā)展，已成長為一門相當(dāng)成熟的學(xué)科——色譜學(xué)。隨著化學(xué)、醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)以及環(huán)境科學(xué)等學(xué)科領(lǐng)域的迅猛發(fā)展，色譜學(xué)同時面臨著新的機(jī)遇和嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，如何提供一種高效、快速、靈敏、高通量的分離分析方法是科研工作者正迫切解決的問題，整體柱技術(shù)便在這一時代和技術(shù)背景下應(yīng)運(yùn)而生且迅猛發(fā)展起來的。整體柱（monolithic column），同時又稱無柱塞柱、連續(xù)床層、棒狀柱等，主要由功能單體、致孔劑、交聯(lián)劑和引發(fā)劑等混合物通過原位聚合的方法制備而成。

目前，整體材料在毛細(xì)管電色譜（CEC）中的應(yīng)用最為普遍，在微流控芯片技術(shù)、微液相色譜和氣相色譜中也有所涉及。在常規(guī)高效液相色譜中，整體材料的應(yīng)用雖也取得了不錯的進(jìn)展，但是距離技術(shù)完善還相差甚遠(yuǎn)。本文主要對聚合物整體柱的制備方法及其研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，闡明了整體柱潛在的應(yīng)用價值，為拓展整體柱的應(yīng)用范圍提供了廣泛的前景。

1 整體柱

整體柱，主要通過有機(jī)或無機(jī)聚合的方法在色譜柱內(nèi)部原位聚合而成，是一種新型的色譜分離固定相[1]。此類色譜柱制備方法簡單，可以針對不同的樣品引入不同功能基團(tuán)，保留性質(zhì)靈活多變[2]。此外，在制備過程和色譜柱的重現(xiàn)性方面，細(xì)內(nèi)徑的整體柱均優(yōu)于相同尺寸的填充柱[3]；在高效液相色譜柱應(yīng)用方面，整體柱理論塔板高度隨流速增長的速率要遠(yuǎn)低于填充柱[4]；在復(fù)雜樣品的分析方面，整體柱的抗污染能力要明顯強(qiáng)于填充柱，且整體柱具有制備成本低、分辨率高、使用壽命長、穩(wěn)定性好、傳質(zhì)性能好等特點(diǎn)，適用于色譜領(lǐng)域的快速分離分析，故被譽(yù)為繼多聚糖、交聯(lián)與涂漬、單分散之后的第4代色譜填料。目前使用的整體柱有：有機(jī)聚合物整體柱、無機(jī)硅膠整體柱、有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱3類。

1.1 有機(jī)聚合物整體柱

有機(jī)聚合物整體柱，主要通過熱引發(fā)、紫外光引發(fā)或自由基引發(fā)等方法，將空管柱內(nèi)的單體混合物聚合，經(jīng)過一段時間反應(yīng)之后，選取合適的溶劑將整體柱體內(nèi)殘留的單體和致孔劑去除制備而成[5]10[6]。此類整體柱具有選材廣、柱效高、易制備、易改性、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。但也存在著固有的缺點(diǎn)，如：機(jī)械強(qiáng)度相對較低；在有機(jī)溶劑作用下，固定相發(fā)生溶脹或收縮，從而導(dǎo)致柱體和柱性能發(fā)生變化，柱壽命縮短；另外，柱容量也較低[7-8]。根據(jù)整體柱材料，有機(jī)聚合物整體柱可分為聚甲基丙烯酸酯類整體柱、聚甲基丙烯酰胺類整體柱、聚苯乙烯類整體柱和分子印跡整體柱。

1.1.1 聚甲基丙烯酸酯類整體柱

該類整體柱主要以甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸縮水甘油酯（GMA）等為功能單體，亞甲基雙甲基丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）等為交聯(lián)劑，甲醇、1-丙醇、1，4-丁二醇、環(huán)乙醇、十二醇等為致孔劑，同時加入一定量的引發(fā)劑混合制備而成[5]10。

譚瑩采用甲基丙烯酸縮水甘油酯為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑原位聚合了GMA-EDMA有機(jī)聚合物整體柱，通過吸附的方法固載牛血清白蛋白，制備得到牛血清白蛋白生物大分子親和整體柱，并考察流動相組成、緩沖溶液濃度、pH、流速等因素對當(dāng)歸在親和整體柱上分離的影響，成功將當(dāng)歸中的2種組分分離[9]。Lin等人通過孔徑結(jié)構(gòu)、滲透性、柱效能等參數(shù)，考察了一系列以烷基-甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸為二元功能單體的有機(jī)聚合物整體柱柱效能，最終制備得到以甲基丙烯酸月桂酯-甲基丙烯酸為單體的具有優(yōu)良傳質(zhì)性能的整體柱。該整體柱可在5 min內(nèi)采用梯度洗脫的方式將6種苯酚衍生物成功分離，同時，還分離了5種黃曲霉素和3種利固醇抗生素，在食品安全檢測中具有潛在的應(yīng)用價值[10]。

1.1.2 聚甲基丙烯酰胺類整體柱

聚甲基丙烯酰胺類整體柱主要采用丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、甲基丙烯酸丁酯（BMA）、N-異丙烯酰胺等為功能單體，采用乙二醇二甲基丙烯酸酯、哌嗪雙丙烯酰胺等為交聯(lián)劑制備而成[11-13]。此類整體柱被應(yīng)用于多種色譜分離模式，如親水、疏水、離子交換色譜等[14]，具有較好的生物兼容性，適用于分離生物大分子。

Xu等人在自制的微流體芯片上采用紫外照射法原位聚合了BMA-EDMA整體柱，該整體柱具有較大的比表面積，并成功在人造血漿中富集了異丙嗪，對于生物樣品在整體柱上的應(yīng)用及發(fā)展有一定的參考價值[15]。Liu等人制備了新型的固相萃取吸附劑poly（BMA-co-EDMA），可簡便、快速地從紅辣椒中檢測蘇丹紅，且該整體柱線性范圍較寬，靈敏度高，檢測限低[16]。 一種將2-甲基咪唑鋅鹽（ZIF-8）與poly（BMA-co-EDMA）相結(jié)合的 ZIF-8-poly（BMA-co-EDMA）毛細(xì)管整體柱由Yusuf K等人制備而得。該整體柱與poly（BMA-co-EDMA）相比，表面積大了3.4倍，且柱效高，采用程序升溫可在36 s內(nèi)將5種烷烴混合物分離，同時還可分離辛烷與異丁烷異構(gòu)體及一些氣體混合物，在氣相色譜中具有廣泛的應(yīng)用范圍[17]。

1.1.3 聚苯乙烯類整體柱

制備聚苯乙烯類整體柱常用的單體有苯乙烯、對氯甲基苯乙烯等，交聯(lián)劑以二乙烯苯基為主，致孔劑有甲苯、甲醇、乙醇、丙醇等[5]11[18-19]。該類整體柱因具有較強(qiáng)的疏水性，適用于反相色譜體系中生物大分子及小分子肽的分離分析。同時，也可通過引入特定的官能團(tuán)對整體柱進(jìn)行改性，拓寬聚苯乙烯整體柱的應(yīng)用范圍。

Chuang等人通過硅烷化、功能化、聚合、水解、金屬絡(luò)合等步驟合成了一種新型聚苯乙烯毛細(xì)管整體柱，在電色譜模式下考察了流動相組成、pH、濃度、有機(jī)改性劑等對氨基酸和寡肽混合物分離的影響，成功將二者混合物分離。同時通過分析得知，配位體交換、電泳遷移率、疏水作用和氫鍵作用等主要影響氨基酸和寡肽在整體柱上的保留[20]。Huang等人制備了以苯乙烯、二乙烯基苯、乙烯基苯磺酸為三元單體的毛細(xì)管整體柱，通過實(shí)驗(yàn)證明反應(yīng)時間和流動相中乙腈的含量是影響柱性能的重要因素，增加反應(yīng)時間或減少乙腈含量可以增強(qiáng)酸性化合物在整體柱上的保留。最終在2.2 min內(nèi)成功將6種化合物（山梨酸、對羥基苯磺酸甲酯、羥苯乙酯、無水乙酸、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯）分離，分離度均大于1.5[21]。

1.1.4 分子印跡整體柱

分子印跡整體柱，是自1993年Marusi首次通過原位聚合的方法制得，并證明其對手性化合物具有拆分能力后迅猛發(fā)展而來[22]。該類整體柱模擬自然界存在的抗體與抗原、酶與底物等，采用目標(biāo)分子作為模板合成聚合物實(shí)現(xiàn)分子識別作用。分子印跡整體柱對模板分子具有生物實(shí)體的專一識別性，且柱體穩(wěn)定性好、使用壽命長，已廣泛應(yīng)用于固相萃取[23-24]、手性拆分[25-27]、抗體模擬[28-29]等領(lǐng)域。制備分子印跡整體柱常用的功能單體有甲基丙烯酸（MAA）、丙烯酰胺（AM）和三氟甲基丙烯酸（TFMAA）等。

Wu等人結(jié)合電滲泵制備了4-乙烯吡啶分子印跡毛細(xì)管整體柱，這一技術(shù)體現(xiàn)了電滲泵與毛細(xì)管電色譜具有很好的兼容性，解決了毛細(xì)管電色譜弱電滲流的問題，并成功分離2-硝基酚、3-硝基酚和4-硝基酚同分異構(gòu)體[30]。Shao等人以橙皮素為模板分子，丙烯酰胺為功能單體，制備了具有較強(qiáng)吸附性能和選擇性的分子印跡整體柱，采用固相萃取技術(shù)從柑橘中提取出傳統(tǒng)的中藥成分橙皮素。結(jié)果表明，將分子印跡整體柱和分子印跡固相萃取技術(shù)相結(jié)合可成功應(yīng)用于傳統(tǒng)中藥的純化[31]。

1.2 無機(jī)硅膠整體柱

無機(jī)硅膠整體柱是一種以硅膠為基質(zhì)，采用溶膠-凝膠法在空管柱內(nèi)進(jìn)行原位聚合的連續(xù)床固定相。一般情況下，烷氧基硅烷（四甲氧基或四乙氧基硅烷）在酸催化下發(fā)生水解、縮聚，形成相互交聯(lián)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。無機(jī)硅膠整體柱具有制備簡單、機(jī)械強(qiáng)度好、孔結(jié)構(gòu)豐富、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)小分子等混合物的高效、快速分離；但又有抗溶劑性能差，適用pH范圍較小等缺點(diǎn)。目前，無機(jī)硅膠整體柱已廣泛應(yīng)用于藥學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域[32-34]。

謝傳輝制備了毛細(xì)管硅膠整體柱，對中孔構(gòu)建過程進(jìn)行了條件優(yōu)化，使得孔結(jié)構(gòu)更加均勻。采用未修飾的硅膠整體柱基質(zhì)，實(shí)現(xiàn)了堿性化合物和中藥生物堿的分離分析。同時，又制備了十八烷基改性的反相硅膠整體柱和強(qiáng)陽離子交換硅膠整體柱，在電色譜模式下成功將苯的同系物、苯的衍生物、鹵代苯混合物、-阻滯劑混合物和黃連生物堿提取物等分離[35]。任呼博采用改進(jìn)的溶膠-凝膠技術(shù)，制備了以四甲氧基硅烷和聚乙二醇為原料的硅膠整體柱，在此基礎(chǔ)上，加入一定量的多壁碳納米管，得到具有更高滲透比和更大比表面積的多壁碳納米管硅膠整體柱，在正相色譜條件下分離了苯及其衍生物[36]。

劉嬋將3-巰基丙基三甲氧基硅烷修飾在硅膠整體柱表面上，制備了一種新型的表面增強(qiáng)拉曼光譜（SERS）基底，通過Au-S鍵和Ag-S鍵將納米粒子鍵合在硅膠表面上，采用對硝基苯胺為探針分子進(jìn)行SERS研究。結(jié)果表明，新型SERS基底的對硝基苯胺拉曼信號要比金、銀溶膠基底上的強(qiáng)，為實(shí)際生活中微量物質(zhì)在拉曼光譜中檢測奠定了一定的技術(shù)基礎(chǔ)[37]。

龔彩榮等人公開了一種新型液相色譜硅膠整體柱的制備方法，采用乳液聚合法制備聚苯乙烯模板，再將模板溶于線性含氫聚硅氧烷和環(huán)狀四乙烯基四甲基環(huán)四硅氧烷中，經(jīng)高溫焚燒，預(yù)處理后得到具有通孔的硅膠整體柱。該整體柱具有優(yōu)異的分離性能，且解決了常規(guī)液相色譜柱填充的問題[38]。

1.3 有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱

有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱，主要通過硅烷化試劑將有機(jī)功能單體引入到硅膠基質(zhì)中制備而得。在此類整體柱中，無機(jī)材料提供機(jī)械強(qiáng)度穩(wěn)定的聚合骨架，結(jié)合在無機(jī)相上且均勻分布的有機(jī)基團(tuán)則可以改善材料的性能[39]。有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱壽命長，機(jī)械性能高，且具有良好的兼容性，與傳統(tǒng)的無機(jī)硅膠整體柱相比，避免了化學(xué)改性，同時也提高了整體柱的重現(xiàn)性[40-41]。

Silva等人通過溶膠凝膠法，分別采用不同的前驅(qū)體四乙氧基硅烷、四乙氧基硅烷-甲基三甲氧基硅烷混合物，和不同的催化劑尿素-醋酸混合物、氫氧化銨，制備了2種不同的硅膠納米雜化整體柱，成功分離了苯的衍生物、除草劑混合物和抗氧化劑混合物，為有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱在環(huán)境科學(xué)方面的研究提供了參考價值[42]。張少文等人采用溶膠凝膠法，制備了表面含有酰胺基團(tuán)的瓊脂糖鍵合硅膠雜化整體柱。制得的整體柱骨架結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、機(jī)械強(qiáng)度高、通透性好、重現(xiàn)性好，且該方法很好地解決了以瓊脂糖凝膠作為載體的免疫親和柱不易保存、易發(fā)生溶脹等缺點(diǎn)，對生物分子的富集具有高選擇性和高富集倍數(shù)[43]。Zhao等人以金納米粒子為媒介，通過一步共縮合作用將寡核苷酸適配子固載在有機(jī)-無機(jī)雜化整體柱表面，制備得到一種新型適配子有機(jī)-無機(jī)雜化親和整體柱。該整體柱成功用于富集和追蹤檢測人血清樣品中的凝血酶，具有卓越的特異性和高靈敏性，對于今后將不同類型納米粒子整體柱應(yīng)用于分析科學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域中提供了可能[44]。

2 展望

綜上所述，整體柱作為第4代色譜填料已廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、醫(yī)藥衛(wèi)生和化學(xué)化工等學(xué)科領(lǐng)域。在制備過程中，通過選取不同的功能單體及材料可制備得到多種不同類別的整體柱，同時，通過進(jìn)一步的修飾或改性，可應(yīng)用于多種色譜分離模式，滿足了分析領(lǐng)域一直追求的快速高效分離分析。此外，與傳統(tǒng)的填充柱分離材料相比，整體柱制備成本低、分辨率高、穩(wěn)定性好、使用壽命長、種類繁多，在今后的發(fā)展中勢必有廣泛的應(yīng)用前景。

[1] Moeina M M，El-Beqqalia A，Abdel-Rehimb A，et al.Preparation of monolithic molecularly imprinted polymer sol gel packed tips for high-throughput bioanalysis:extraction and quantification of 1-tyrosine in human plasma and urine samples utilizing liquid chromatography and tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography B，2014，967（15）：168-173

[2] 王娜妮，張揚(yáng)，董宇，等.聚合物整體柱在中藥分析中的應(yīng)用[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2015（33）：1716-1718.

[3] Guiochon.Monolithic columns in high-performance liquid chromatograph[J].Journal of Chromatography A，2007，1168（1/2）：101-168.

[4] Kobayashia H，Tokudaa D，Ichimarua J，et al.Faster axial band dispersion in a monolithic silica column than in a particle-packed column[J].Journal of Chromatography A，2006，1109（1）：2-9.

[5] 張志剛，劉金剛，李婧實(shí)，等.整體柱的制備與應(yīng)用[J].精細(xì)與專用化學(xué)品，2015，23（1）.

[6] Rohr T，Hilder E F，Donovan J J，et al.Photografting and the control of surface chemistry in three-dimensional porous polymer monoliths[J].Macromolecules，2003，36（5）：1677-1684.

[7] Yao K，Yun J，Shen S，et al.Characterization of a novel continuous supermacroporous monolithic cryogel embedded with nanoparticles for protein chromatography[J].Journal of Chromatography A，2006，1109（1）：103-110.

[8] Li W J，Zhou X，Ye J J，et al.Development of a γ-aluminananoparticle-functionalized porous polymer monolith for the enrichment of sudan dyes in red wine samples[J].Journal of Separation Science，2013，36（20）：3330-3337.

[9] 譚瑩.牛血清蛋白分子生物整體柱的制備及當(dāng)歸提取液的分離分析[D].杭州：浙江工業(yè)大學(xué)，2006.

[10] Lin S L，Wu Y R，Lin T Y，et al.Preparation and evaluation of poly（alkyl methacrylate-co-methacrylic acid-coethylene dimethacrylate）monolithic columns for separating polar small molecules by capillary liquid chromatography[J].Analytica Chimica Acta，2015（871）：57-65.

[11] Zhu G，Yuan H，Zhao P，et al.Macroporous polyacrylamide-based monolithic column with immobilized pH gradient for protein analysis[J].Electrophoresis，2006，27（18）：3578-3583.

[12] Zhou Y F，Song N Z，Zheng H J，et al.Preparation of an allyloxy-cucurbit[6]uril-modified polymer monolithic column for microextraction of estrogens in cosmetics[J].New Journal of Chemistry，2015，39（12）：9714-9721.

[13] Chirica G S，Remcho V T.Novel monolithic columns with templated porosity[J].Journal of Chromatography A，2001，924（1/2）：223-232.

[14] Zou H F，Wu M H，Wang F J，et al.Recent developments in preparation of monolithic columns and their applications in proteomic analysis[J].Chinese Journal of Chromatography，2009，27（5）：526-536.

[15] Xu Y，Zhang W P，Zeng P，et al.A butyl methacrylate monolithic column prepared in-situ on a microfluidic chip and its applications[J].Sensors，2009，9（5）：3437-3446.

[16] Liu Y，Wang M M，Ai L F，et al.Determination of sudan dyes in chili pepper powder by online solid-phase extraction with a butyl methacrylate monolithic column coupled to liquid chromatography with tandem mass spectrometry[J].Journal of Separation Science，2014，37（13）：1648-1655.

[17] Yusuf K，Badjah-Hadj-Ahmed A Y，Aqel A，et al.Fabrication of zeolitic imidazolate framework-8-methacrylate monolith composite capillary columns for fast gas chromatographic separation of small molecules[J].Journal of Chromatography A，2015，1406：299-306.

[18] Sneekes E J，Damen M，Swart R，et al.Isoform separation of a multi-acetylated protein using capillary polystyrenedivinylbenzene monolithic columns[J].Journal of Chromatography A，2008，1194（2）：199-204.

[19] Hirano T，Kitagawa S，Ohtani H，et al.Evaluation of interactions between metal ions and nonionic surfactants in high-concentration HCl using low-pressure high-performance liquid chromatography with low-flow-resistance polystyrene-based monolithic column[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry，2013，405（25）：8319-8326.

[20] Chuang S H，Chang C Y，Liu C Y.Polystyrene monolithic column functionalized with copper-iminodiacetate complex as a stationary phase for open tubular capillary electrochromatography[J].Journal of Chromatography A，2004，1044（1/2）：229-236.

[21] Huang H Y，Liu Y C，Cheng Y J.Development of capillary electrochromatography with poly（styrene-divinylbenzene-vinylbenzenesulfonic acid） monolith as the stationary phase[J].Journal of Chromatography A，2008，1190（1/2）：263-270.

[22] Matsui J，Kato T，Takeuchi T，et al.Molecular recognition in continuous polymer rods prepared by a molecular imprinting technique[J].Analytical Chemistry，1993，65（17）：2223-2224.

[23] Vlakh E G，Stepanova M A，Korneeva Yu M，et al.Molecularly imprinted macroporous monoliths for solid-phase extraction:effect of pore size and column length on recognition properties[J].Journal of Chromatography B，2016（1029）：198-204.

[24] Zhai H Y，Su Z H，Chen Z G，et al.Molecularly imprinted coated graphene oxide solid-phase extraction monolithic capillary column for selective extraction and sensitive determination of phloxine B in coffee bean[J].Analytica Chimica Acta，2015（865）：16-21.

[25] Yang S，Wang Y H，Jiang Y D，et al.Molecularly imprinted polymers for the identification and separation of chiral drugs and biomolecules[J].Polymers，2016，8（216）：2-16.

[26] Wang X H，Dong Q，Ying L L，et al.Enhancement of selective separation on molecularly imprinted monolith by molecular crowding agent[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry，2017（409）：201-211.

[27] Dong H X，Zheng M X，Ou Y L，et al.A chiral stationary phase coated by surface molecularly imprinted polymer for separating 1，1′-binaphthalene-2，2′-diamine enantiomer by high performance liquid chromatography[J].Journal of Chromatography A，2015（1376）：172-176.

[28] Du X W，Zhang Y X，She Y X，et al.Fluorescent competitive assay for melamine using dummy molecularly imprinted polymers as antibody mimics[J].Journal of Integrative Agriculture，2016，15（5）：1166-1177.

[29] Yang X，Dong X，Zhang K，et al.A molecularly imprinted polymer as an antibody mimic with affinity for lysine acetylated peptides[J].Journal of Materials Chemistry B，2015，4（5）：920-928.

[30] Wu Y，Zhang W P，Chen Y，et al.Electroosmotic pumpsupported molecularly imprinted monolithic column for capillary chromatographic separation of nitrophenol isomers[J].Electrophoresis，2015，36（23）：2881-2887

[31] Shao H K，Zhao L G，Chen J，et al.Preparation，characterization and application of molecularly imprinted monolithic column for hesperetin[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2015（111）：241-247.

[32] Li Q，Wang J，Yang L J，et al.Estimation of interaction between oriented immobilized green fluorescent protein and its antibody by high performance affinity chromatography and molecular docking[J].Journal of Molecular Recognition Jmr，2015，28（7）：438-446.

[33] Ishizuka N，Kobayashi H，Minakuchi H，et al.Monolithic silica columns for high-efficiency separations by highperformance liquid chromatography[J].Journal of Chromatography A，2002，960（1/2）：85-96.

[34] 付增輝.一種無機(jī)聚合物硅凝膠及其制備方法：中國，CN106396578[P].2017-02-15.

[35] 謝傳輝.毛細(xì)管硅膠整體柱的制備及其應(yīng)用[D].大連：中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所，2005.

[36] 任呼博.整體柱的制備及其色譜性能的研究[D].聊城：聊城大學(xué)，2009.

[37] 劉嬋.無機(jī)硅膠整體柱的制備及其在表面增強(qiáng)拉曼光譜研究中的應(yīng)用[D].武漢：湖北大學(xué)，2013.

[38] 龔彩榮，李雪云，范國樑，等.高效液相色譜硅膠整體柱及其制備方法：中國，CN103406112[P].2013-11-27.

[39] Li W，F(xiàn)ries D P，Malik A.Sol-gel stationary phases for capillary electrochromatography[J].Journal of Chromatography A，2004，1044（1-2）：23-52.

[40] Khimich N N.Synthesis of silica gels and organic-inorganic hybrids on their base[J].Glass Physics and Chemistry，2004，30（5）：430-442.

[41] Bai L，Liu H，Liu Y，et al.Preparation of a novel hybrid organic-inorganic monolith for the separation of iysozyme by high performance liquid chromatography[J].Journal of Chromatography A，2011，1218（1）：100-106.

[42] Silva R G C，Bottoli C B G，Collins C H.New silica gelbased monolithic column for nano-liquid chromatography，used in the HILIC mode[J].Journal of Chromatographic Science，2012，50（8）：649-657.

[43] 張少文，彭傳云，吳春來，等.一種瓊脂糖鍵合硅膠雜化整體柱的制備方法及其應(yīng)用：中國，CN106334343[P].2017-01-18.

[44] Zhao J C，Zhu Q Y，Zhao L Y，et al.Preparation of an aptamer based organic-inorganic hybrid monolithic column with gold nanoparticles as an intermediary for the enrichment of proteins[J].Analyst，2016，141（16）：4961-4967.

10.13752/j.issn.1007-2217.2017.03.001

2017-04-17