痤瘡合劑的療效及對兔耳痤瘡模型動(dòng)物中血清中IL-8、TNF-α含量的影響

張琳+顧煒+樸美淑+吳景東

摘 要 目的：觀察痤瘡合劑對痤瘡的療效，并初步探求其治療痤瘡的作用機(jī)制。方法：家兔耳廓部造模成功后，將家兔分為6組進(jìn)行治療。通過觀察局部外觀變化并檢測血清中IL-8、TNF-α含量證實(shí)痤瘡合劑對痤瘡動(dòng)物的炎癥抑制作用。結(jié)果：與正常對照組比較，其余5組IL-8、TNF-α含量均顯著升高；與模型對照組比較，痤瘡合劑低、中、高劑量組及藥物對照組炎癥因子含量均顯著下調(diào)，且高劑量組含量的下調(diào)更為顯著（P<0.01）。結(jié)論：痤瘡合劑治療痤瘡呈量效依賴關(guān)系，其作用機(jī)制可能與抑制血清中相關(guān)炎癥因子水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞 痤瘡合劑 白介素-8 腫瘤壞死因子-α

中圖分類號：R286； R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）03-0065-04

ZHANG Lin1**， GU Wei2， PIAO Meishu3， WU Jingdong4***

（1. 93279 Forles Political Office， Dandong 118000， China； 2. the Hospital affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110032， China； 3. Korean Wonkwang University， Seoul， Korea； 4. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110847， China）

ABSTRACT Objective： To observe the effect of acne mixture on acne and preliminarily explore its mechanism in the treatment of acne. Methods： The rabbits were divided into 6 groups to be treated after the modeling succeeded. The inhibition of acne mixture to the inflammation of experimental animals was verified by the observation of the changes of local appearance and the determination of IL-8 and TNF-α levels in serums. Results： Compared with normal control group， the IL-8 and TNF-α levels five groups were significantly higher in the other 5 groups than in the control group （P<0.01） and the levels of inflammatory factors were significantly down-regulated in the groups with low， medium and high dose of acne mixture compared with the model group （P<0.01）， and furthermore their down-regulation was more significant in the high dose group than in the low and medium groups. Conclusion： The efficacy of acne mixture for the treatment of acne presents dose-dependent relationship and its mechanism of action may be related to the inhibition of the levels of inflammatory factors in serum.

KEy WORDS acne mixture； IL-8； TNF-α

痤瘡（acne）是臨床常見的慢性炎癥性皮膚疾病，在中青年人群中發(fā)病率高，嚴(yán)重影響患者自信心。遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院針對青年人痤瘡的發(fā)病特點(diǎn)，以清肺胃濕熱、解毒散結(jié)為治療原則，研制了痤瘡合劑，臨床應(yīng)用效果較好。因目前對痤瘡合劑作用機(jī)制的研究較少，本研究擬通過實(shí)驗(yàn)觀察低、中、高劑量痤瘡合劑對痤瘡的療效，并嘗試探討其抗炎作用的機(jī)制，為臨床推廣應(yīng)用提供有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品及制備

痤瘡合劑（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑）；清熱暗瘡膠囊（批號：Z20070425）；痤瘡合劑的方藥組成有：夏枯草、枇杷葉、地黃、牡丹皮、黃連、桑白皮、連翹、金銀花、黃芩、牛蒡子、川芎、防風(fēng)、牡蠣、蟬蛻、北沙參、葛根、香附；煤焦油（美國MG217，批號：81511）；IL-8試劑盒（武漢云克隆，批號：SEA080Rb）；TNF-α試劑盒（武漢云克隆，批號：SEA133Rb）。

1.2 主要儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀（奧地利安圖，anthos 2010型）；離心機(jī)（中國翔宇，PB300）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康家兔48只，雄性，體重2.5～3 kg，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。家兔購買后于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)1周，以適應(yīng)環(huán)境，飼以白菜、胡蘿卜，自由飲食、飲水，單籠飼養(yǎng)，以防止互相撕咬導(dǎo)致兔耳損傷。48只家兔隨機(jī)分成6組，每組8只，分別為 ①空白對照組；②模型對照組；③痤瘡合劑低劑量組；④痤瘡合劑中劑量組；⑤痤瘡合劑高劑量組；⑥藥物對照組（清熱暗瘡膠囊組）。

1.3.1 造模

除空白對照組外，其余各組家兔按照Kligman法造模[1]，用玻璃棒在兔雙耳內(nèi)側(cè)面耳管開口處涂煤焦油，每日1次，每次約0.5 ml，造模持續(xù)2周。第15天取耳部痤瘡病變皮膚活檢，確定造模成功后，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 干預(yù)方法

空白對照組不予處理，模型對照組每日給予20 ml生理鹽水，低、中、高劑量組每日灌胃痤瘡合劑20 ml，低劑量組按等效劑量的3倍劑量給藥，中劑量組按等效劑量的6倍劑量給藥，高劑量組按等效劑量的9倍劑量給藥。低、中、高劑量藥物按每天用藥量不同分別煎煮成20 ml水煎液，每日灌胃1次。清熱暗瘡膠囊臨床成人用量為2.4 g/d，分2次服用，經(jīng)等效劑量換算后，兔用藥量為0.12 g/（kg·d），溶于20 ml生理鹽水后，每日灌胃1次，各組均連續(xù)治療2周。

1.3.3 采集血清

麻醉后，耳緣靜脈取血，分裝于離心管中，靜置30 min，1 000 r/min離心5 min，取上清，分裝于離心管中，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測各組家兔血清中IL-8、TNF-α的含量。

1.4 血清中IL-8、TNF-α含量測定

將用于家兔血清IL-8、TNF-α含量檢測的ELISA試劑盒從4 ℃冰箱中取出，室溫靜置30 min，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 兔耳痤瘡模型外觀變化

正常對照組兔耳廓呈淡紅色，厚度適中，其上毛細(xì)血管清晰可見，未見角栓及毛囊結(jié)節(jié)；模型對照組造模成功2周后兔耳部紅腫，表皮明顯增厚，可見明顯毛囊角栓，毛囊口呈突起，有多處結(jié)節(jié)；痤瘡合劑低劑量組兔耳表皮增厚，毛囊角栓和結(jié)節(jié)與模型對照組相比明顯減少，但仍有較多未治愈粉刺存在；痤瘡合劑中劑量組兔耳表皮厚度已基本正常，毛囊角栓和結(jié)節(jié)只有少量存在，部分角栓脫落后遺留點(diǎn)狀凹陷的毛囊；痤瘡合劑高劑量組和藥物對照組皮損恢復(fù)狀態(tài)與痤瘡合劑中劑量組相近（圖1）。

2.2 治療后家兔血清IL-8、TNF-α含量檢測結(jié)果

與正常對照組比較，其余5組IL-8、TNF-α含量均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，表1）；與模型對照組比較，痤瘡合劑低、中、高劑量組及藥物對照組含量均顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，表1）；低、中、高劑量各組間對照，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01，P<0.05，表1）；與中劑量組比較，高劑量組IL-8、TNF-α含量顯著下調(diào)，差異有極顯著意義（P<0.01，P<0.05，表1），而藥物對照組TNF-α含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05，表1）。

3 討論

本研究在中醫(yī)整體觀念及辨證論治的指導(dǎo)下，對痤瘡模型采用的痤瘡合劑方，發(fā)揮了良好的治療效果[2]。

方中金銀花、連翹清熱解毒，芳香透邪，消癰散結(jié)，為治熱毒瘡癰要藥[3]。黃芩清肺熱，黃連瀉胃火，二藥相伍，可以清瀉肺胃火毒[4]。桑白皮、枇杷葉瀉肺胃之熱且降逆氣、俾火；沙參清熱并能養(yǎng)陰，以防邪熱傷陰；夏枯草清熱散結(jié)，牡蠣軟堅(jiān)散結(jié)[5]，合用以助癤腫消散；牛蒡子疏散熱毒[6]，散結(jié)消腫，防風(fēng)辛散透表[7]，蟬蛻宣散透邪[8]，葛根解肌散邪[9]，四藥合用，促使熱毒邪氣從肌表而散；地黃涼血清熱，牡丹皮涼血散瘀，川芎活血行氣，香附行氣止痛[10]，血暢氣行，則郁熱火毒易解。諸藥合用，共奏清肺胃濕熱，解毒散結(jié)之功。

本研究從兔耳外觀表現(xiàn)觀察，并結(jié)合IL-8、TNF-α含量檢測結(jié)果分析，可以證實(shí)痤瘡合劑對兔耳痤瘡模型確有療效，結(jié)果顯示痤瘡合劑高劑量組的治療效果最好，IL-8、TNF-α含量下降最明顯，要優(yōu)于中、低劑量組和藥物對照組，但是TNF-α含量下降的程度在高劑量組和藥物對照組中相比相差甚微，與中低劑量組相比，IL-8、TNF-α含量在清熱暗瘡膠囊藥物對照組的下降程度更低。

本研究同時(shí)初步探討了痤瘡合劑起效的作用機(jī)制，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)炎癥是痤瘡發(fā)病的重要因素之一，參與痤瘡炎癥反應(yīng)的主要有IL-1α、IL-4、IL-8及TNF-α等細(xì)胞因子[11]。我們曾經(jīng)將IL-1α、IL-6在痤瘡合劑高中低劑量組和藥物對照組中含量下降做過對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雖然與本研究檢測的細(xì)胞因子不同，但是統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果同樣是痤瘡合劑高劑量組療效最好[12]。有研究通過檢測痤瘡患者治療前后的細(xì)胞因子IL-1、IL-6、IL-8，發(fā)現(xiàn)炎癥介質(zhì)的表達(dá)水平明顯不一樣，表明痤瘡的發(fā)生與這幾種炎性細(xì)胞因子有關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了其在痤瘡發(fā)病機(jī)制中的重要作用[13]。IL-8通過受體IL8-RA和IL8-RB產(chǎn)生多種生物學(xué)功能，包括促炎性細(xì)胞趨化、促血管生成、促有絲分裂和誘導(dǎo)細(xì)胞增殖等[14]。TNF-α是通過激活炎性細(xì)胞使其產(chǎn)生一系列的炎性介質(zhì)，進(jìn)而引起痤瘡的發(fā)病。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)痤瘡合劑顯著降低血清IL-8、TNF-α的水平，具有良好的抗炎作用，可為今后臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但目前研究還停留在初級階段，下一步將對其炎癥受體及相關(guān)信號通路進(jìn)行深入研究。

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