CAR-T免疫療法：腫瘤靶向治療的新策略

李孟捷+鄒秋玲+黨尉

摘 要 嵌合抗原受體T細(xì)胞（CAR-T）細(xì)胞是一種全新的治療惡性腫瘤的策略，它有別于傳統(tǒng)的手術(shù)、放療、化療、抗體藥物治療。CAR-T細(xì)胞療法在血液腫瘤的治療中有顯著療效。 本文將綜述CAR-T的結(jié)構(gòu)和抗腫瘤的原理、CAR-T細(xì)胞在臨床上的應(yīng)用以及CAR-T細(xì)胞治療所面臨的挑戰(zhàn)及廣闊前景。

關(guān)鍵詞 嵌合型抗原受體 免疫治療 腫瘤

中圖分類號：R730.51 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-1533（2017）03-0024-04

Chimeric antigen receptor T cell therapy： a new therapeutic strategy for cancer

LI Mengjie*， ZOU Qiuling， DANG Wei

[Sunshine Guojian Pharmaceutical （Shanghai） Co. Ltd.， Shanghai 201203， China]

ABSTRACT Chimeric antigen receptor T-Cell （CAR-T） is a new approach for the treatment of malignant neoplasms and even advanced malignancies. CAR-T cell therapy is different from traditional operation， radiotherapy， chemotherapy and monoclonal antibody drugs. CAR-T cell therapy has showed a significant effect in the treatment of patients with hematologic malignancies. This article reviews the structure of the principles of antitumor of CAR-T and its application， challenges and broad prospects in clinic.

KEy WORDS chimeric antigen receptor； immunotherapy； tumor

嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）是由抗體源性靶向區(qū)和T 細(xì)胞信號區(qū)融合而成。表達(dá)CAR后的T細(xì)胞可以識別、結(jié)合特定的腫瘤細(xì)胞表面抗原，分泌細(xì)胞因子，殺傷腫瘤細(xì)胞。CAR-T細(xì)胞治療作為一種全新的治療方式，被2013年《科學(xué)》雜志評為全球十大科技創(chuàng)新之首。CAR-T在血液腫瘤的治療中已經(jīng)取得顯著療效，但是在實(shí)體瘤的治療中仍存在很大的困難和挑戰(zhàn)，需要更多的探索和突破。目前國內(nèi)外已有上百個CAR-T的臨床實(shí)驗(yàn)在開展。本綜述將闡述CAR-T的結(jié)構(gòu)和抗腫瘤的原理、CAR-T細(xì)胞在臨床上的應(yīng)用以及CAR-T細(xì)胞治療所面臨的挑戰(zhàn)及廣闊前景。

1 CAR-T的結(jié)構(gòu)和原理

CAR-T細(xì)胞即嵌合抗原受體T細(xì)胞。CAR的基礎(chǔ)設(shè)計(jì)中包括一個腫瘤相關(guān)抗原結(jié)合區(qū)（通常來源于抗體抗原結(jié)合區(qū)域的scFv段）、一個胞外鉸鏈區(qū)、一個跨膜區(qū)和一個胞內(nèi)信號區(qū)[1]。一旦T細(xì)胞表達(dá)這種受體，單個融合分子便與抗原進(jìn)行特異性結(jié)合并激活T細(xì)胞，因此經(jīng)嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞具有抗體的特異性和效應(yīng)T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。CAR一旦與腫瘤相關(guān)抗原（tumor-associated antigen，TAA）結(jié)合，可通過由CD3或高親和性受體FceRI的胞內(nèi)區(qū)使T細(xì)胞活化，表現(xiàn)為CAR依賴的細(xì)胞殺傷、增殖及細(xì)胞因子釋放[2]。同時CAR-T細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)可超過1 000倍， 臨床實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)輸入CAR-T細(xì)胞六個月后患者體內(nèi)仍能檢測到高水平表達(dá)的CAR[3]?？偠灾珻AR-T細(xì)胞的靶向性、殺傷活性和持久性均較常規(guī)應(yīng)用的免疫細(xì)胞高。

20世紀(jì)80年代晚期，以色列科學(xué)家Eshhar等[4]開發(fā)了第一種CAR-T細(xì)胞，即第一代CAR。第一代CAR-T細(xì)胞只在T細(xì)胞表面表達(dá)一個單鏈抗體基因，這個單鏈抗體表達(dá)后可以特異性識別腫瘤細(xì)胞表面的分子。第一代CAR很快投入臨床試驗(yàn)，令人遺憾的是，第一代CAR雖然具有特異性的細(xì)胞毒性，但沒有表現(xiàn)出顯著的療效。究其原因是因?yàn)榈谝淮鶦AR-T細(xì)胞在患者體內(nèi)持久性差，很快就會耗竭，CAR-T細(xì)胞還未接觸到大量的腫瘤細(xì)胞就已經(jīng)凋亡了[5-6]。為了加強(qiáng)CAR激活信號并突破第一代CAR的限制，結(jié)合了共刺激結(jié)構(gòu)的第二代CAR相繼被報(bào)道，第二代CAR的組成結(jié)構(gòu)中添加了T細(xì)胞完全活化和生存必須的第二信號分子（比如CD28或者4-1BB分子）[7-8]。第一個被詳細(xì)研究的T細(xì)胞共刺激信號受體是CD28，它能夠與靶細(xì)胞表面的B7家族成員結(jié)合。CD28提供了T細(xì)胞激活的第二刺激信號，CD28的共刺激能夠促進(jìn)T細(xì)胞的增殖，IL-2的合成和表達(dá)以及抗凋亡蛋白Bcl-xL的分泌。許多研究都表明[9-10]，搭載了“共刺激信號分子”的第二代CAR與第一代CAR相比，抗原特異性不變，T細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子分泌增加，抗細(xì)胞凋亡蛋白分泌增加，細(xì)胞死亡延遲。之后有研究人員將CD28用CD137（4-1BB）進(jìn)行替換，使用CD28還是4-1BB，不同的第二代CAR究竟孰優(yōu)孰劣，不同的研究者用不同的腫瘤在體內(nèi)和體外的研究中得到的結(jié)果不盡相同[5， 11-12]。最近有研究表明4-1BB分子使得CAR-T細(xì)胞具有更高的穩(wěn)定性，減緩了CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的耗竭[13]?？偠灾?，第二代CAR在隨后的臨床試驗(yàn)中產(chǎn)生了顯著的療效，從2010年起基于第二代CAR的臨床報(bào)道屢次引發(fā)震動，特別是對于復(fù)發(fā)性、難治性的急性淋巴細(xì)胞白血病（acute lymphocytic leukemia ，ALL）患者，其完全緩解率高達(dá)90%以上。然而在缺乏外源共刺激分子的情況下所有二代CAR均不能產(chǎn)生足夠的IL-2促進(jìn)T細(xì)胞增殖，當(dāng)給予外源性B7共刺激分子時這些轉(zhuǎn)基因CAR-T細(xì)胞則可產(chǎn)生IL-2促進(jìn)其增殖[14-15]。隨后，為了進(jìn)一步增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的存活，研究人員開發(fā)了第三代CAR，就是在第二代CAR的基礎(chǔ)上再增加一個第二信號分子，比如將CD28和4-1BB分子同時組裝進(jìn)CAR里面[16]。目前第二代和第三代的設(shè)計(jì)都各自已有臨床試驗(yàn)的應(yīng)用，臨床試驗(yàn)的數(shù)據(jù)仍需持續(xù)關(guān)注[17-19]。最新改良設(shè)計(jì)的第四代CAR-T表現(xiàn)出了克服免疫抑制微環(huán)境的能力，有望成為實(shí)體腫瘤治療中的重要手段[20-21]：第四代CAR-T是在第二/第三代CAR-T的基礎(chǔ)上表達(dá)一些關(guān)鍵的細(xì)胞因子，例如IL-12。IL-12被譽(yù)為T淋巴細(xì)胞的第三信號分子，可見其對T細(xì)胞功能的重要性。全身注射IL-12患者會引起嚴(yán)重的炎癥副反應(yīng)，但是通過CAR-T細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)局部表達(dá)后，可以在腫瘤病灶處招募NK細(xì)胞，或者直接逆轉(zhuǎn)被耗竭的腫瘤浸潤性T淋巴細(xì)胞，從而有效克服腫瘤免疫抑制微環(huán)境[22]。

2 CAR-T細(xì)胞的臨床應(yīng)用

CAR-T細(xì)胞治療的整個過程如下[5]：首先從患者血液中分離得到的白細(xì)胞通過流式或者磁珠分選得到CD4+和CD8+ T細(xì)胞，T細(xì)胞再使用微球或者人工抗原呈遞細(xì)胞（antigen-presenting cells，APC）進(jìn)行激活和擴(kuò)增，然后再采用不同的方式（慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、轉(zhuǎn)座子和RNA）將改造好的CARs轉(zhuǎn)入T細(xì)胞，經(jīng)過改造的T細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量控制后再重新回輸入患者體內(nèi)以發(fā)揮療效。

目前CAR-T細(xì)胞治療的臨床實(shí)驗(yàn)主要集中在惡性血液病中。其中研究最多的是CD19這個靶標(biāo)，CD19特異性表達(dá)于惡性和正常B細(xì)胞以及B細(xì)胞前體細(xì)胞，而造血干細(xì)胞及非造血細(xì)胞則不存在CD19表達(dá)[23]。許多臨床數(shù)據(jù)顯示CART19針對B-ALL的應(yīng)答率均高于80%[24-26]。盡管進(jìn)一步的研究仍在繼續(xù)，但是CAR-T細(xì)胞至少在1例患者體內(nèi)存在超過10年之久[27]，這也預(yù)示著CAR-T細(xì)胞可能就是一種“活著的藥物”。同時臨床試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)CD19基因表達(dá)下調(diào)或者基因突變會導(dǎo)致B-ALL的復(fù)發(fā)率提高[28-29]。因此其他靶點(diǎn)（CD20，CD22）[19， 30]的臨床試驗(yàn)也在開展中。同時靶向兩個目標(biāo)分子的雙靶標(biāo)CAR-T治療可能會改善這種逃逸。

對于非B細(xì)胞性惡性血液腫瘤（例如多發(fā)性骨髓瘤）也有一些新的靶點(diǎn)分子應(yīng)用于CAR-T治療。B細(xì)胞成熟抗原（B cell maturation antigen，BCMA）在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中高表達(dá)，BCMA-CART細(xì)胞在異種移植模型中可以殺死人的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞[31]，相應(yīng)的一期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行。惡性髓系血液病的治療在過去幾十年均未取得很大的進(jìn)展，可能CAR-T治療方法將改善這種現(xiàn)狀?；贑D33、CD123靶點(diǎn)的CAR-T治療也已在一期臨床試驗(yàn)中[32-33]。但是由于CD33、CD123在正常的血液干細(xì)胞中也表達(dá)，有研究者提出可以將CAR-T治療和骨髓移植手術(shù)結(jié)合使用[34]。眾所周知CAR-T治療在實(shí)體瘤中遇到了很大的挑戰(zhàn)。這主要源于實(shí)體瘤在漫長的形成過程中，在腫瘤細(xì)胞周圍營造了一個免疫抑制的微環(huán)境；另外大部分針對實(shí)體瘤的靶點(diǎn)分子在正常組織中也有表達(dá)。目前開展的針對實(shí)體瘤的CAR-T臨床試驗(yàn)主要集中在以下幾個靶點(diǎn)：靶向HER-2治療HER-2過表達(dá)的實(shí)體瘤[35]；靶向GD-2治療成神經(jīng)細(xì)胞瘤和黑色素瘤（NCT01822652和NCT02107963）；靶向EGFRvⅢ以治療成膠質(zhì)細(xì)胞瘤[36-37]。其他的TAA主要還有Mesothelin、PSMA、GPC3、MET、CEA、MUC1和MUC16等[18]，因此CAR-T細(xì)胞療法在抗腫瘤方面已開展了廣泛的應(yīng)用。

CAR-T細(xì)胞療法給腫瘤治療帶來了新希望，但是臨床試驗(yàn)中所產(chǎn)生的不良反應(yīng)也越來越引起研究者的重視。細(xì)胞因子釋放綜合征（cytokine release syndrome，CRS）是CAR-T 細(xì)胞治療常見且致死性的并發(fā)癥。CRS的發(fā)生率和嚴(yán)重程度因CAR-T細(xì)胞輸入而不同，這與CAR結(jié)構(gòu)、患者的腫瘤負(fù)荷及類型等多因素相關(guān)[38]。目前仍不清楚是否CRS是達(dá)到最好療效所必須的，一般認(rèn)為部分的CRS毒性是需要的。因此如何平衡CAR-T細(xì)胞治療和有效性和安全性需要更多的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)給予更好的解答。CRS經(jīng)常伴隨著高水平IL-6的分泌，應(yīng)用IL-6受體拮抗劑（tocilizumab）可明顯改善CAR-T治療后的嚴(yán)重CRS問題[39]，因此在CAR-T細(xì)胞治療過程中及時恰當(dāng)控制CRS是非常重要的。B細(xì)胞發(fā)育不全可以注射丙球蛋白作為補(bǔ)充治療，CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)消失后B細(xì)胞可以恢復(fù)。而對于CRA-T治療后的神經(jīng)毒性，除癲癇需要接受抗癲癇藥物治療外，其他大部分神經(jīng)癥狀是可逆的。隨著更多的患者接受CAR-T細(xì)胞治療，臨床研究已經(jīng)重視毒性反應(yīng)及其處理辦法的研究，包括減少CAR-T細(xì)胞的輸入劑量、細(xì)胞因子封鎖、類固醇以及補(bǔ)充免疫蛋白的最佳給藥時間和劑量[40]。

3 CAR-T細(xì)胞療法的現(xiàn)狀和發(fā)展前景

CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)在各種細(xì)胞治療策略中表現(xiàn)出了最具前景的發(fā)展態(tài)勢。但實(shí)際上，CAR-T細(xì)胞治療也面臨不少挑戰(zhàn)。例如：①CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)實(shí)質(zhì)上是一種靶點(diǎn)依賴型的治療，良好的治療靶點(diǎn)比較少；②某些腫瘤相關(guān)抗原在正常細(xì)胞有低水平表達(dá)，導(dǎo)致CAR-T治療可能會產(chǎn)生脫靶毒性，引發(fā)嚴(yán)重的副反應(yīng)；③CAR-T細(xì)胞在實(shí)體瘤治療中的瓶頸；④部分患者本身T細(xì)胞功能低下甚至無法體外擴(kuò)增；⑤基于病毒表達(dá)體系的CAR-T技術(shù)的生物安全性值得重視。針對這些問題科學(xué)家們也在不斷地探索中。對于CAR-T臨床應(yīng)用的安全性，目前的主要策略是改用非病毒載體改造CAR-T，及通過自殺基因控制CAR-T細(xì)胞的過度擴(kuò)增及降低嚴(yán)重不良反應(yīng)[41]。非病毒基因轉(zhuǎn)染方式包括“睡美人（sleeping beauty，SB）”轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)和mRNA轉(zhuǎn)染[42-43]。在治療實(shí)體瘤方面，臨床前的研究顯示第四代CAR-T具有更好的抗腫瘤免疫抑制微環(huán)境的能力和腫瘤殺傷能力，有望在血液腫瘤和實(shí)體腫瘤中發(fā)揮更大作用[22]。還有一些研究發(fā)現(xiàn)[44]，在CAR-T細(xì)胞中共表達(dá)趨化因子CCR2b，也可以增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的歸巢能力。應(yīng)用間皮素特異性mRNA-CAR-T細(xì)胞治療間皮素高表達(dá)的晚期實(shí)體瘤取得了較好的臨床療效，這也為CAR-T細(xì)胞針對實(shí)體瘤的治療設(shè)計(jì)提供了新的策略。目前的細(xì)胞療法都是個體化的，需要使用患者自體的T細(xì)胞進(jìn)行體外轉(zhuǎn)化和培養(yǎng)，不利于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模量產(chǎn)。法國Cellectis公司開發(fā)通用型CAR-T，即釆用正常第三方細(xì)胞來源的T細(xì)胞，通過敲除內(nèi)源性TCR基因以排除同種異體TCR導(dǎo)致的移植物抗宿主?。╣raft-versus-host disease，GVHD），且能進(jìn)一步提高CAR-T的殺腫瘤效率。這種策略顯著拓寬了CAR-T的細(xì)胞來源，使得CAR-T細(xì)胞療法更具商業(yè)化前景。

4 結(jié)語

2012 年一名叫 Emily 的化療不敏感白血病小患者接受了CAR-T治療后，到今年已經(jīng)第 4年無癌生存。CAR-T 技術(shù)為腫瘤治療開啟了新的篇章，眾多的科學(xué)家仍在積極探索研究中，多家大型制藥企業(yè)也在關(guān)注和投資。目前主要競爭者為諾華、朱諾治療公司以及美國凱特公司。CAR-T細(xì)胞治療有望在明年獲得上市批準(zhǔn)，造福更多的患者。優(yōu)化 CAR-T的結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)出性能高，又安全的 CAR-T 以及CAR-T細(xì)胞的大規(guī)模生產(chǎn)是當(dāng)前所面臨的技術(shù)難關(guān)。今后 CAR-T細(xì)胞治療新策略在于：①多靶標(biāo)的CAR-T，臨床前實(shí)驗(yàn)顯示出更強(qiáng)的抗瘤效應(yīng)；②CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)仍需與其他治療手段相配合來達(dá)到最佳治療效果；③異體CAR-T細(xì)胞的開發(fā)；④CAR-T治療和免疫檢查點(diǎn)的單克隆抗體（例如PD-1，PD-L1）的聯(lián)合使用。隨著技術(shù)的不斷改良優(yōu)化，臨床經(jīng)驗(yàn)的積累，多方面資源的整合，我們期待它將會為腫瘤患者們帶來更多的驚喜。

參考文獻(xiàn)

[1] Cheadle EJ， Gornall H， Baldan V， et al. CAR T cells： driving the road from the laboratory to the clinic[J]. Immunol Rev， 2014， 257（1）： 91-106.

[2] Abken H， Hombach A， Heuser C. Immune response manipulation： recombinant immunoreceptors endow T-cells with predefined specificity[J]. Curr Pharm Des， 2003， 9（24）： 1992-2001.

[3] Ramos CA， Savoldo B， Dotti G. CD19-CAR trials[J]. Cancer J， 2014， 20（2）： 112-118.

[4] Gross G， Waks T， Eshhar Z. Expression of immunoglobulinT-cell receptor chimeric molecules as functional receptors with antibody-type specificity[J]. Proc Natl Acad Sci， 1989， 86 （24）： 10024-10028.

[5] Barrett DM， Singh N， Porter DL， et al. Chimeric antigen receptor therapy for cancer[J]. Annu Rev Med， 2014， 65： 333-347.

[6] Jensen MC， Popplewell L， Cooper LJ， et al. Antitransgene rejection responses contribute to attenuated persistence of adoptively transferred CD20/CD19-specific chimeric antigen receptor redirected T cells in humans[J]. Biol Blood Marrow Transplant， 2010， 16（9）： 1245-1256.

[7] Krause A， Guo HF， Latouche JB， et al. Antigen-dependent CD28 signaling selectively enhances survival and proliferation in genetically modified activated human primary T lymphocytes[J]. J Exp Med， 1998， 188（4）： 619-626.

[8] Milone MC， Fish JD， Carpenito C， et al. Chimeric receptors containing CD137 signal transduction domains mediate enhanced survival of T cells and increased antileukemic efficacy in vivo[J]. Mol Ther， 2009， 17（8）： 1453-1464.

[9] Kowolik CM， Topp MS， Gonzalez S， et al. CD28 costimulation provided through a CD19-specific chimeric antigen receptor enhances in vivo persistence and antitumor efficacy of adoptively transferred T cell[J]. Cancer Res， 2006， 66（22）： 10995-11004.

[10] Savoldo B， Ramos CA， Liu E， et al. CD28 costimulation improves expansion and persistence of chimeric antigen receptor-modified T cells in lymphoma patients[J]. J Clin Invest， 2011， 121（5）： 1822-1826.

[11] Sadelain M， Brentjens R， Riviere I. The basic principles of chimeric antigen receptor design[J]. Cancer Discov， 2013， 3（4）： 388-398.

[12] Levine BL. Performance-enhancing drugs： design and production of redirected chimeric antigen receptor （CAR） T cells[J]. Cancer Gene Therapy， 2015， 22（2）： 79-84.

[13] Long AH， Haso WM， Shern JF， et al. 4-1BB costimulation ameliorates T cell exhaustion induced by tonic signaling of chimeric antigen receptors[J]. Nat Med， 2015，21（6）： 581-590.

[14] Beecham EJ， Ortiz-Pujols S， Junghans RP. Dynamics of tumor cell killing by human T lymphocytes armed with an anticarcinoembryonic antigen chimeric immunoglobulin T-cell receptor[J]. J Immunother， 2000， 23（3）： 332-343.

[15] Brentjens RJ， Santos E， Nikhamin Y， et al. Genetically targeted T cells eradicate systemic acute lymphoblastic leukemia xenografts[J]. Clin Cancer Res， 2007， 13（18 Pt 1）： 5426-5435.

[16] Carpenito C， Milone MC， Hassan R， et al. Control of large， established tumor xenografts with genetically retargeted human T cells containing CD28 and CD137 domains[J]. Proc Natl Acad Sci， 2009， 106（9）： 3360-3365.

[17] Wang J， Jensen M， Lin Y， et al. Optimizing adoptive polyclonal T cell immunotherapy of lymphomas， using a chimeric T cell receptor possessing CD28 and CD137 costimulatory domains[J]. Hum Gene Ther， 2007， 18（8）： 712- 725.

[18] Fesnak AD， June CH， Levine BL. Engineered T cells： the promise and challenges of cancer immunotherapy[J]. Nat Rev Cancer， 2016， 16（9）： 566-581.

[19] Till BG， Jensen MC， Wang J， et al. CD20-specific adoptive immunotherapy for lymphoma using a chimeric antigen receptor with both CD28 and 4-1BB domains： pilot clinical trial results[J]. Blood， 2012， 119（17）： 3940-3950.

[20] Chmielewski M， Kopecky C， Hombach AA， et al. IL-12 release by engineered T cells expressing chimeric antigen receptors can effectively Muster an antigen-independent macrophage response on tumor cells that have shut down tumor antigen expression[J]. Cancer Res， 2011， 71（17）： 5697-5706.

[21] Pegram HJ， Lee JC， Hayman EG， et al. Tumor-targeted T cells modified to secrete IL-12 eradicate systemic tumors without need for prior conditioning[J]. Blood， 2012， 119（18）： 4133-4141.

[22] Chmielewski M， Hombach AA， Abken H. Of CARs and TRUCKs： chimeric antigen receptor （CAR） T cells engineered with an inducible cytokine to modulate the tumor stroma[J]. Immunol Rev， 2014， 257（1）： 83-90.

[23] Scheuermann RH， Racila E. CD19 antigen in leukemia and lymphoma diagnosis and immunotherapy[J]. Leuk Lymphoma， 1995， 18（5-6）： 385-397.

[24] Davila ML， Riviere I， Wang X， et al. Efficacy and toxicity management of 19-28z CAR T cell therapy in B cell acute lymphoblastic leukemia[J]. Sci Transl Med， 2014， 6（224）： 224ra225.

[25] Grupp SA， Kalos M， Barrett D， et al. Chimeric antigen receptor-modified T cells for acute lymphoid leukemia[J]. N Engl J Med， 2013， 368（16）： 1509-1518.

[26] Maude SL， Frey N， Shaw PA， et al. Chimeric antigen receptor T cells for sustained remissions in leukemia[J]. N Engl J Med， 2014， 371（16）： 1507-1517.

[27] Scholler J， Brady TL， Binder-Scholl G， et al. Decade-long safety and function of retroviral-modified chimeric antigen receptor T cells[J]. Sci Transl Med， 2012， 4（132）： 132ra153.

[28] Curran KJ， Riviere I， Silverman LB， et al. Multi-center clinical trial of CAR T cells in pediatric/young adult patients with relapsed B-cell ALL[J]. Blood， 2015， 126： 2533.

[29] Grupp SA， Maude SL， Shaw PA， et al. Durable remissions in children with relapsed/refractory ALL treated with T cells engineered with a CD19-targeted chimeric antigen receptor（CTL019）[J]. Blood， 2015， 126： 681.

[30] Haso W， Lee DW， Shah NN， et al. Anti-CD22-chimeric antigen receptors targeting B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia[J]. Blood， 2013， 121（7）： 1165-1174.

[31] Carpenter RO， Evbuomwan MO， Pittaluga S， et al. B-cell maturation antigen is a promising target for adoptive T-cell therapy of multiple myeloma[J]. Clin Cancer Res， 2013， 19（8）： 2048-2060.

[32] Kenderian SS， Ruella M， Shestova O， et al. CD33-specific chimeric antigen receptor T cells exhibit potent preclinical activity against human acute myeloid leukemia[J]. Leukemia， 2015， 29（8）： 1637-1647.

[33] Mardiros A， Dos Santos C， McDonald T， et al. T cells expressing CD123-specific chimeric antigen receptors exhibit specific cytolytic effector functions and antitumor effects against human acute myeloid leukemia[J]. Blood， 2013， 122（18）： 3138-3148.

[34] Gill S， Tasian SK， Ruella M， et al. Preclinical targeting of human acute myeloid leukemia and myeloablation using chimeric antigen receptor-modified T cells[J]. Blood， 2014， 123（15）： 2343-2354.

[35] Ahmed N， Brawley VS， Hegde M， et al. Human epidermal growth factor receptor 2 （HER2）-specific chimeric antigen receptormodified T cells for the immunotherapy of HER2-positive sarcoma[J]. J Clin Oncol， 2015， 33（15）： 1688-1696.

[36] Morgan RA， Johnson LA， Davis JL， et al. Recognition of glioma stem cells by genetically modified T cells targeting EGFRvIII and development of adoptive cell therapy for glioma[J]. Hum Gene Ther， 2012， 23（10）： 1043-1053.

[37] Johnson LA， Scholler J， Ohkuri T， et al. Rational development and characterization of humanized anti-EGFR variant III chimeric antigen receptor T cells for glioblastoma[J]. Sci Transl Med， 2015， 7（275）： 275ra222.

[38] Xu XJ， Tang YM. Cytokine release syndrome in cancer immunotherapy with chimeric antigen receptor engineered T cells[J]. Cancer Lett， 2014， 343（2）： 172-178.

[39] Frey NV， Porter DL. Cytokine release syndrome with novel therapeutics for acute lymphoblastic leukemia[J]. Hematology Am Soc Hematol Educ Program， 2016（1）： 567-572.

[40] Lee DW， Gardner R， Porter DL， et al. Current concepts in the diagnosis and management of cytokine release syndrome[J]. Blood， 2014， 124（2）： 188-195.

[41] Jones BS， Lamb LS， Goldman F， et al. Improving the safety of cell therapy products by suicide gene transfer[J]. Front Pharmacol， 2014， 5： 254.

[42] Maiti SN， Huls H， Singh H， et al. Sleeping beauty system to redirect T-cell specificity for human applications[J]. J Immunother， 2013， 36（2）： 112-123.

[43] Beatty GL， Haas AR， Maus MV， et al. Mesothelin-specific chimeric antigen receptor mRNA-engineered T cells induce antitumor activity in solid malignancies[J]. Cancer Immunol Res， 2014， 2（2）： 112-120.

[44] Craddock JA， Lu A， Bear A， et al. Enhanced tumor trafficking of GD2 chimeric antigen receptor T cells by expression of the chemokine receptor CCR2b[J]. J Immunother， 2010， 33（8）： 780-788.