白念珠菌烯醇化酶的研究進(jìn)展*

王廷廷，賀政新，王縛鯤(1.河北醫(yī)科大學(xué)研究生院，石家莊 050000；.解放軍白求恩國(guó)際和平醫(yī)院檢驗(yàn)科，石家莊 050000)

·綜述·

白念珠菌烯醇化酶的研究進(jìn)展*

王廷廷1,2，賀政新2，王縛鯤2
(1.河北醫(yī)科大學(xué)研究生院，石家莊 050000；2.解放軍白求恩國(guó)際和平醫(yī)院檢驗(yàn)科，石家莊 050000)

念珠菌是與人類共生的條件致病菌，能導(dǎo)致系統(tǒng)性念珠菌感染和深部念珠菌侵襲。烯醇化酶是白念珠菌生長(zhǎng)過程中的一種關(guān)鍵的糖酵解代謝酶，同時(shí)也是侵襲感染過程中重要的免疫優(yōu)勢(shì)抗原，在白念珠菌致病、血清學(xué)診斷和宿主抵抗白念珠菌感染過程中發(fā)揮重要作用。對(duì)烯醇化酶的深入研究將為制備蛋白質(zhì)疫苗以及正確選擇臨床抗真菌藥物提供理論依據(jù)。該文就白念珠菌烯醇化酶的基因結(jié)構(gòu)、致病機(jī)制、診斷價(jià)值和疫苗研發(fā)方面作一綜述。

烯醇化酶；基因結(jié)構(gòu)；致病機(jī)制；血清學(xué)診斷；疫苗

隨著廣譜抗生素的廣泛使用以及侵入性手術(shù)的廣泛開展，侵襲性念珠菌病(invasive candidiasis，IC)的發(fā)病率和死亡率逐年增高。白念珠菌已成為美國(guó)醫(yī)院血流感染第4常見病原菌，致死率高達(dá)50%[1]。由于該病的臨床癥狀缺乏特異性，實(shí)驗(yàn)室診斷金標(biāo)準(zhǔn)方法血培養(yǎng)存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、陽性率低等缺點(diǎn)，尋找新的診斷標(biāo)志物迫在眉睫。烯醇化酶(enolase，Eno)又稱2-磷酸-D-甘油鹽水解酶，是主要存在于白念珠菌胞壁與胞漿中的一種糖酵解代謝關(guān)鍵酶，在念珠菌感染期間被大量分泌。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Eno分別占酵母相和菌絲相總蛋白質(zhì)的0.7%和2%[2]，是念珠菌中含量豐富的蛋白質(zhì)之一。通過研磨、硫酸銨沉淀、色譜等步驟將Eno進(jìn)行分離和純化，證實(shí)該酶是由440個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約為46 000～48 000；Eno在pH 6.8時(shí)活性最強(qiáng)，Mg2+為該酶的最有效活化劑[3]。蛋白質(zhì)組學(xué)研究顯示，Eno是念珠菌感染過程中的主要免疫優(yōu)勢(shì)抗原，其抗原或者抗體的檢測(cè)已成為IC實(shí)驗(yàn)室診斷研究的熱點(diǎn)。本文就Eno的基因及表達(dá)、參與念珠菌致病性、對(duì)IC的診斷價(jià)值、疫苗的開發(fā)與應(yīng)用4個(gè)方面進(jìn)行闡述。

1 烯醇化酶基因及表達(dá)

Eno基因是一種共享基因，存在于細(xì)菌、酵母、果蠅、兩棲動(dòng)物、鳥類和人類等物種體內(nèi)，含量豐富且具有高度保守性[4]。白念珠菌Eno有1或2個(gè)編碼基因編碼，通過DNA限制性酶切技術(shù)結(jié)合基因組southern印跡分析顯示Eno編碼基因ClaI和MnlI位點(diǎn)在其3′端區(qū)存在差異[5]。Sundstrom[2]等從白念珠菌cDNA文庫(kù)中對(duì)Eno基因進(jìn)行分離并測(cè)序，證實(shí)該基因是一個(gè)含有1 320 bp連續(xù)開放閱讀框的片段，編碼的440個(gè)氨基酸蛋白與釀酒酵母細(xì)胞編碼的Eno1和Eno2分別有78%和76%的同源性，與人類細(xì)胞的α、β烯醇化酶的相似性分別為65.1%和65.5%。與釀酒酵母細(xì)胞烯醇化酶A的晶體結(jié)構(gòu)相比較，發(fā)現(xiàn)白念珠菌Eno在α螺旋、β折疊和β轉(zhuǎn)角區(qū)域中保守性較強(qiáng)，但白念珠菌Eno殘基在134至138間以β結(jié)構(gòu)代替α螺旋[2]，這是造成二者Eno三級(jí)結(jié)構(gòu)差異較大的原因。

白念珠菌Eno mRNA水平與念珠菌的酵母相或者菌絲相無關(guān)，而與生長(zhǎng)周期有關(guān)：mRNA含量在念珠菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的中間階段最高，在穩(wěn)定期水平較低[5]。當(dāng)白念珠菌在幾種不同的營(yíng)養(yǎng)條件下培養(yǎng)時(shí)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞無論是在葡萄糖培養(yǎng)基上還是在不可發(fā)酵的碳源培養(yǎng)基上都能生長(zhǎng)。但是在葡萄糖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速度顯著快于在乙醇培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度，其Eno mRNA水平也出現(xiàn)相應(yīng)的變化，可見在不同營(yíng)養(yǎng)條件下白念珠菌細(xì)胞生長(zhǎng)代謝狀態(tài)可發(fā)生變化[6]。

2 烯醇化酶與疾病發(fā)生

白念珠菌Eno的釋放與念珠菌的侵襲感染有關(guān)，寄生在淺表部位的白念珠菌一般不會(huì)釋放該酶[2]。在IC患者血清中檢出Eno抗原及抗Eno抗體水平明顯高于體檢健康者[7]。研究認(rèn)為Eno是IC的免疫優(yōu)勢(shì)抗原，但是其在致病過程中發(fā)揮的作用還不明確。研究發(fā)現(xiàn)白念珠菌與宿主細(xì)胞或組織粘附結(jié)合的能力對(duì)于它的侵襲與增殖非常重要，一些能與念珠菌結(jié)合的宿主細(xì)胞表面受體已被發(fā)現(xiàn)，主要是胞外基質(zhì)組分，如纖層蛋白、纖維蛋白原、纖維蛋白[8]。其侵襲過程主要是：白念珠菌細(xì)胞通過未知機(jī)制將Eno輸送至細(xì)胞表面，存在于胞體表面的Eno在侵染宿主時(shí)，可發(fā)揮纖溶酶原受體的作用，通過與纖溶酶原結(jié)合激活其轉(zhuǎn)化為有活性的纖溶酶，發(fā)揮蛋白質(zhì)水解酶的作用，降解細(xì)胞外基質(zhì)。這一過程利用宿主自身的纖溶系統(tǒng)破壞組織屏障，促進(jìn)病原體在組織中的侵襲與擴(kuò)散[8]。以下證據(jù)支持白念珠菌與人類纖溶酶原/纖溶酶結(jié)合而導(dǎo)致侵襲的發(fā)生：各種念珠菌菌株都可以與纖溶酶原或活化形式的纖溶酶結(jié)合；重組Eno可以以劑量依賴方式與125I標(biāo)記的纖溶酶結(jié)合而保留在鎳螯合親和柱基質(zhì)中；和許多纖溶酶原受體一樣，Eno的結(jié)合也是賴氨酸依賴性；與Eno結(jié)合的纖溶酶原能增加其對(duì)鏈激酶的親和力。為了闡明Eno-纖溶酶原相互作用的生物學(xué)意義，有研究通過體外實(shí)驗(yàn)證明了纖溶酶原能夠結(jié)合白念珠菌細(xì)胞，并誘導(dǎo)纖維蛋白溶解，具有增強(qiáng)穿過血腦屏障的作用[9]。Eno作為一種胞壁蛋白，還能與一些血漿凝血因子高分子量激肽原(HK)、激肽釋放酶原(PPK)和FXⅡ因子相結(jié)合，促使宿主細(xì)胞產(chǎn)生大量與血管活性肽相關(guān)的促進(jìn)炎癥反應(yīng)的激肽分子，觸發(fā)細(xì)胞表面激肽形成級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)[10]。此外，Silva等[11]發(fā)現(xiàn)將重組Eno預(yù)先與腸上皮黏膜細(xì)胞粘附后，可抑制其與白念珠菌胞體的結(jié)合，這提示在腸上皮細(xì)胞或黏液中可能存在一種能與Eno結(jié)合的受體，調(diào)控白念珠菌在腸黏膜上皮的粘附與增殖。菌體與宿主蛋白之間的相互作用促進(jìn)了念珠菌的粘附，并使念珠菌利用宿主自身的纖溶系統(tǒng)降解細(xì)胞外基質(zhì)和纖維蛋白,以幫助菌體穿透基底膜，突破內(nèi)皮細(xì)胞，破壞細(xì)胞的防御屏障，進(jìn)入血液循環(huán)或者深部組織、器官，為侵襲宿主導(dǎo)致IC奠定基礎(chǔ)。

Eno不僅與免疫抑制患者IC的發(fā)生有關(guān)，同時(shí)也是正常人群中一種重要的過敏原。Kortekangas-Savolainen等用免疫印跡試驗(yàn)來檢測(cè)釀酒酵母的過敏原，結(jié)果顯示釀酒細(xì)胞提取物皮試試驗(yàn)陽性患者的血清能與釀酒酵母的22種抗原反應(yīng)，其中最主要的是48 000條帶，其位置與白念珠菌的Eno條帶基本一致，說明Eno可能是主要的過敏原[12]。此外，有研究證實(shí)Eno表面IgE結(jié)合位點(diǎn)可能定位于aa361-aa390之間[13]。白念珠菌的Eno與釀酒酵母、黃曲霉等的Eno有共同的抗原表位，這種引起過敏反應(yīng)的Eno主要在真菌表面進(jìn)行呈遞，可作為變應(yīng)原的主要免疫識(shí)別位點(diǎn)[14]，引起機(jī)體產(chǎn)生持續(xù)的過敏反應(yīng)和高滴度的IgE抗體，導(dǎo)致原有過敏癥狀患者過敏反應(yīng)加重和過敏性鼻炎、哮喘等癥狀。

3 烯醇化酶血清學(xué)診斷價(jià)值

Eno不僅參與病原菌與宿主的相互作用，還是診斷學(xué)研究的靶分子。以念珠菌特異性抗原或抗體為檢測(cè)對(duì)象的血清學(xué)方法，憑借其敏感、簡(jiǎn)便、易于開展的優(yōu)勢(shì)，成為實(shí)驗(yàn)室研究快速診斷IC的熱點(diǎn)。臨床上用ELISA對(duì)已經(jīng)確診的深部念珠菌侵襲性感染和念珠菌血癥患者進(jìn)行血清學(xué)Eno抗原的連續(xù)監(jiān)測(cè)，敏感性分別為85%和64%[15]。胡毓安等[16]首次評(píng)價(jià)了ELISA定量檢測(cè)Eno在IC中的診斷價(jià)值，采用的雙抗體夾心法可以識(shí)別白念珠菌增殖過程中產(chǎn)生的Eno抗原，具有較高的特異性。

考慮到念珠菌抗原在宿主體內(nèi)可能被快速清除，故研究抗Eno抗體在檢測(cè)中的價(jià)值更為廣泛。念珠菌侵襲感染期間，高免疫原性Eno蛋白質(zhì)的釋放刺激宿主產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答，促使大量淋巴細(xì)胞活化以及產(chǎn)生大量針對(duì)Eno的IgG抗體。本實(shí)驗(yàn)室在系統(tǒng)性念珠菌感染(systemic candidiasis，SC)小鼠血清中連續(xù)檢測(cè)到高滴度的抗Eno抗體[17]。Pitach等[18]應(yīng)用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)分析SC患者血清與15種白念珠菌原生質(zhì)體蛋白質(zhì)間的相互作用，顯示抗Eno抗體可作為SC的重要診斷標(biāo)志物。Mitsutake等[19]用免疫印跡方法對(duì)27例SC患者進(jìn)行抗Eno IgG抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在感染早期檢出率為62.9%，隨著病情發(fā)展檢測(cè)陽性率也增加到92.5%。膠乳凝集實(shí)驗(yàn)、ELISA、免疫固定電泳等方法越來越多地被用于抗Eno抗體的檢測(cè)[20-21]。本實(shí)驗(yàn)室以重組Eno作為檢測(cè)抗原，開發(fā)的膠體金免疫層析試紙，能夠在15 min內(nèi)完成抗Eno抗體檢測(cè)[22]。Li等[21]用Eno作為檢測(cè)抗原，發(fā)現(xiàn)用ELISA方法可以區(qū)分真菌侵襲性感染和定植，這與以往Van Deventer等的研究結(jié)果一致，而免疫對(duì)流電泳不能將兩者進(jìn)行區(qū)分[23]。1，3-β-D-葡聚糖檢測(cè)，又稱為G試驗(yàn)，是目前能夠輔助臨床診斷IC的方法之一。有研究將抗Eno抗體和G試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果相比較，發(fā)現(xiàn)抗Eno抗體檢測(cè)的敏感性、特異性、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值(46.7%、86.7%、21.2%、95.5%)均優(yōu)于 G 試驗(yàn)(33.3%、74.9%、9.3%、93.6%)，兩者聯(lián)合檢測(cè)可提高檢測(cè)的敏感性[24]。Pitarch等[25]發(fā)現(xiàn)非中性粒細(xì)胞減少患者的IC發(fā)病率和死亡率逐年增高，用蛋白質(zhì)組學(xué)分析顯示，血清學(xué)22種IgG抗體譜可將IC和非IC組進(jìn)行區(qū)分，該類標(biāo)志物中具有代表性的抗HSP90與抗Eno抗體聯(lián)合檢測(cè)則更能準(zhǔn)確地診斷IC。

抗Eno抗體滴度在疾病的不同發(fā)展階段有相應(yīng)的改變。血清學(xué)抗體監(jiān)測(cè)不僅可以幫助臨床醫(yī)生診斷念珠菌感染，還可以監(jiān)測(cè)病程的發(fā)展以及幫助臨床醫(yī)生評(píng)價(jià)臨床抗真菌治療效果。在念珠菌侵襲感染的早期，抗Eno抗體即可增高并可維持一段時(shí)間；而當(dāng)臨床治愈念珠菌感染時(shí)，IgG抗體逐漸下降并消失，IgA、IgM抗體恢復(fù)到正常范圍，預(yù)示抗Eno抗體的滴度變化與SC的恢復(fù)有關(guān)，并有可能作為SC患者的預(yù)后標(biāo)志物[26-27]。

4 烯醇化酶疫苗開發(fā)與應(yīng)用

疫苗具有毒副作用小，靶向選擇性等優(yōu)點(diǎn)，將成為預(yù)防和治療念珠菌感染的有效措施。已有多種疫苗用來預(yù)防和治療IC，如滅活菌苗、蛋白質(zhì)組分疫苗、胞壁成分疫苗等，其針對(duì)白念珠菌的免疫原性和功效在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中已被研究，甚至部分已經(jīng)在臨床試驗(yàn)中驗(yàn)證了其療效及安全性[28]。

當(dāng)將重組Eno免疫小鼠，再給小鼠注射白念珠菌細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)在腎臟、腦組織、肺、脾等組織結(jié)構(gòu)中的真菌量大大減少，其血清抗Eno IgG1和IgG2a抗體滴度高達(dá)51 200，減少了炎癥細(xì)胞的產(chǎn)生，IL-12和IL-8水平增加；TH2型細(xì)胞因子IL-10水平較對(duì)照組水平大大增高，可見重組Eno的接種可保護(hù)小鼠免于念珠菌的侵襲[29]，這可能與TH1或TH2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答保護(hù)作用相關(guān)。目前，已有一種組合β-甘露聚糖和念珠菌蛋白肽表位的合成糖肽疫苗用于對(duì)抗小鼠播散性念珠菌的侵襲[30]，但是這種基于化學(xué)合成糖肽疫苗的方法比較繁瑣、復(fù)雜，很難得到廣泛開發(fā)與使用。Shibasaki等開發(fā)了一種新的抗念珠菌感染口服疫苗，減少了制備注射型疫苗的繁瑣步驟，并用小鼠模型研究模擬口服Eno疫苗的臨床功效，結(jié)果發(fā)現(xiàn)口服疫苗的小鼠產(chǎn)生大量抗Eno IgG抗體，存活率大大增加；同時(shí)，乳酸桿菌可作為一種有效的佐劑，可以協(xié)助產(chǎn)生高滴度抗體[31-32]，且該方法加工過程較少。目前，Eno的免疫調(diào)節(jié)及作為疫苗候選抗原分子的免疫保護(hù)作用并不清晰，還需要進(jìn)一步研究。

綜上所述，Eno是白念珠菌生長(zhǎng)過程中的一種關(guān)鍵代謝酶，Eno基因及表達(dá)的研究對(duì)于了解白念珠菌分泌Eno的機(jī)制有重要意義。盡管目前對(duì)Eno的研究較多，但是其在IC的致病過程中發(fā)揮的作用及具體機(jī)制還需要人們更深步的研究，這一領(lǐng)域的研究進(jìn)展將為制備Eno蛋白疫苗以及正確選擇臨床抗菌藥物提供理論依據(jù)。迄今為止，盡管還沒有一種滿意的快速診斷IC的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，但是抗Eno抗體的檢測(cè)，特別是ELISA方法，有望進(jìn)一步得到規(guī)范，結(jié)合現(xiàn)有的真菌診斷技術(shù)方法，成為臨床輔助診斷IC的依據(jù)。

[1]Andes DR, Safdar N, Baddley JW,etal. Impact of treatment strategy on outcomes in patients with candidemia and other forms of invasive candidiasis: a patient-level quantitative review of randomized trials[J]. Clin Infect Dis,2012, 54(8):1110-1122.

[2]Sundstrom P, Aliaga GR. Molecular cloning of cDNA and analysis of protein secondary structure ofCandidaalbicansenolase, an abundant, immunodominant glycolytic enzyme[J]. J Bacteriol,1992, 174(21):6789-6799.

[3]Kustrzeba-Wojcicka I and Golczak M. Enolase fromCandidaalbicans--purification and characterization[J]. Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol,2000, 126(1):109-120.

[4]Van der Straeten D, Rodrigues-Pousada RA, Goodman HM,etal. Plant enolase: gene structure, expression, and evolution[J]. Plant Cell,1991, 3(7):719-735.

[5]Postlethwait P,Sundstrom P. Genetic organization and mRNA expression of enolase genes ofCandidaalbicans[J]. J Bacteriol,1995, 177(7):1772-1779.

[6]Mason AB, Buckley HR, Gorman JA. Molecular cloning and characterization of theCandidaalbicansenolase gene[J]. J Bacteriol,1993, 175(9):2632-2639.

[7]Clancy CJ, Nguyen ML, Cheng S,etal. Immunoglobulin G responses to a panel ofCandidaalbicansantigens as accurate and early markers for the presence of systemic candidiasis[J]. J Clin Microbiol,2008, 46(5):1647-1654.

[8]Ghosh AK, Jacobs-Lorena M. Surface-expressed enolases ofPlasmodiumand other pathogens[J]. Memorias do Instituto Oswaldo Cruz,2011, 106(Suppl 1):85-90.

[9]Jong AY, Chen SH, Stins MF,etal. Binding ofCandidaalbicansenolase to plasmin(ogen) results in enhanced invasion of human brain microvascular endothelial cells[J]. J Med Microbiol,2003, 52(Pt 8):615-622.

[10]Seweryn K, Karkowska-Kuleta J, Wolak N,etal. Kinetic and thermodynamic characterization of the interactions between the components of human plasma kinin-forming system and isolated and purified cell wall proteins ofCandidaalbicans[J]. Acta Biochim Pol,2015, 62(4):825-835.

[11]Silva RC, Padovan AC, Pimenta DC,etal. Extracellular enolase ofCandidaalbicansis involved in colonization of mammalian intestinal epithelium[J]. Front Cell Infect Microbiol,2014, 4:66.

[12]Kortekangas-Savolainen O, Kalimo K, Lammintausta K,etal. IgE-binding components of bake′s yeast(Saccharomyces cerevisiae) recognized by immunoblotting analysis. Simultaneous IgE binding to mannan and 46-48 kD allergens ofSaccharomycescerevisiaeandCandidaalbicans[J]. Clin Exp Allergy,1993, 23(3):179-184.

[13]Ito K, Ishiguro A, Kanbe T,etal. Characterization of IgE-binding epitopes onCandidaalbicansenolase[J]. Clin Exp Allergy,1995, 25(6):529-535.

[14]Funk J, Schaarschmidt B, Slesiona S,etal. The glycolytic enzyme enolase represents a plasminogen-binding protein on the surface of a wide variety of medically important fungal species[J]. Int J Med Microbiol,2016, 306(1):59-68.

[15]Walsh TJ, Hathorn JW, Sobel JD,etal. Detection of circulating candida enolase by immunoassay in patients with cancer and invasive candidiasis[J]. N Engl J Med,1991, 324(15):1026-1031.

[16]胡毓安, 李芳秋, 馬春芳, 等. 白念珠菌烯醇化酶雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法的建立[J]. 臨床檢驗(yàn)雜志,2013, 31(8):565-568.

[17]He ZX, Chen J, Li W,etal. Serological response and diagnostic value of recombinantcandidacell wall protein enolase, phosphoglycerate kinase, and β-glucosidase[J]. Front Microbiol,2015, 6:920.

[18]Pitarch A, Jimenez A, Nombela C,etal. Serological proteome analysis to identify systemic candidiasis patients in the intensive care unit: Analytical, diagnostic and prognostic validation of anti-Candidaenolase antibodies on quantitative clinical platforms[J]. Proteomics Clin Appl,2008, 2(4):596-618.

[19]Mitsutake K, Kohno S, Miyazaki T,etal. Detection ofCandidaenolase antibody in patients with candidiasis[J]. J Clin Lab Anal,1994, 8(4):207-210.

[20]Lain A, Moragues MD, Ruiz JC,etal. Evaluation of a novel enzyme-linked immunosorbent assay to detect immunoglobulin G antibody to enolase for serodiagnosis of invasive candidiasis[J]. Clin Vaccine Immunol,2007, 14(3):318-319.

[21]Li FQ, Ma CF, Shi LN,etal. Diagnostic value of immunoglobulin G antibodies againstCandidaenolase and fructose-bisphosphate aldolase for candidemia[J]. BMC Infect Dis,2013, 13:253.

[22]He ZX, Shi LC, Ran XY,etal. Development of a lateral flow immunoassay for the rapid diagnosis of invasive candidiasis[J]. Front Microbiol,2016, 7:1451.

[23]van Deventer AJ, van Vliet HJ, Hop WC,etal. Diagnostic value of anti-Candidaenolase antibodies[J]. J Clin Microbiol,1994, 32(1):17-23.

[24]廖紅, 李芳秋, 張國(guó)勇, 等. 抗烯醇化酶抗體與(1-3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)診斷侵襲性念珠菌病的臨床比較[J]. 中國(guó)真菌學(xué)雜志,2014, 9(5):271-274.

[25]Pitarch A, Nombela C, Gil C. Serum antibody signature directed againstCandidaalbicansHsp90 and enolase detects invasive candidiasis in non-neutropenic patients[J]. J Proteome Res,2014, 13(11):5165-5184.

[26]Pitarch A, Diez-Orejas R, Molero G,etal. Analysis of the serologic response to systemicCandidaalbicansinfection in a murine model[J]. Proteomics,2001, 1(4):550-559.

[27]Pitarch A, Abian J, Carrascal M,etal. Proteomics-based identification of novelCandidaalbicansantigens for diagnosis of systemic candidiasis in patients with underlying hematological malignancies[J]. Proteomics, 2004, 4(10):3084-3106.

[28]Wang X, Sui X, Yan L,etal. Vaccines in the treatment of invasive candidiasis[J]. Virulence,2015, 6(4):309-315.

[29]Li W, Hu X, Zhang X,etal. Immunisation with the glycolytic enzyme enolase confers effective protection againstCandidaalbicansinfection in mice[J]. Vaccine,2011, 29(33):5526-5533.

[30]Xin H, Dziadek S, Bundle DR,etal. Synthetic glycopeptide vaccines combining beta-mannan and peptide epitopes induce protection against candidiasis[J]. Proc Natl Acad Sci U S A,2008, 105(36):13526-13531.

[31]Shibasaki S, Karasaki M, Tafuku S,etal. Oral immunization against candidiasis using lactobacillus casei displaying enolase 1 fromCandidaalbicans[J]. Sci Pharm,2014, 82(3):697-708.

[32]Shibasaki S, Ueda M. Oral vaccine development by molecular display methods using microbial cells[J]. Methods Mol Biol,2016, 1404:497-509.

(本文編輯：周萬青，劉群)

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃(ZD20140031，20150317)；解放軍白求國(guó)際和平醫(yī)院計(jì)劃課題(201430，201514)。

王廷廷，1990年生，女，碩士研究生，從事分子檢驗(yàn)診斷研究。

王縛鯤，主任醫(yī)師，博士，E-mail:wangfk8@sina.com。

10.13602/j.cnki.jcls.2017.04.15

R446.5

A

2017-01-22)