HLA-B27抗原檢測對眼部炎癥合并強直性脊柱炎的診斷意義

許曉風(fēng)，崔莉，毛羽，劉向祎

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院檢驗科1、風(fēng)濕免疫科2、北京同仁眼科中心3，北京100730)

HLA-B27抗原檢測對眼部炎癥合并強直性脊柱炎的診斷意義

許曉風(fēng)1，崔莉2，毛羽3，劉向祎1

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院檢驗科1、風(fēng)濕免疫科2、北京同仁眼科中心3，北京100730)

目的 探討HLA-B27抗原檢測對眼部炎癥患者合并強直性脊柱炎(AS)的診斷意義。方法 連續(xù)收集2012年1月至2015年10月北京同仁醫(yī)院初發(fā)非感染性眼部炎癥患者776例，依據(jù)發(fā)病部位將患者分為葡萄膜炎、鞏膜炎、角膜炎和結(jié)膜炎四組。檢測患者外周血淋巴細胞HLA-B27抗原表達，結(jié)合臨床資料明確患者是否合并AS。結(jié)果776例患者中149例確診合并AS，其中葡萄膜炎組130例，鞏膜炎組6例，角膜炎組6例，結(jié)膜炎組7例。葡萄膜炎組患者的HLA-B27陽性率為25.80%，明顯高于鞏膜炎組的4.27%、角膜炎組的6.45%和結(jié)膜炎組的12.12%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；HLA-B27抗原檢測對眼部炎癥患者合并AS診斷的靈敏度為94.63%，特異度為98.67%，陽性預(yù)測值為95.27%，陰性預(yù)測值為98.48%，正確指數(shù)為0.93。結(jié)論 合并AS的眼部炎癥患者主要表現(xiàn)為葡萄膜炎，也可表現(xiàn)為結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎等。臨床上對初發(fā)非感染性眼部炎癥患者進行HLA-B27抗原檢測，可以輔助診斷其是否合并AS。

HLA-B27；葡萄膜炎；角膜炎；鞏膜炎；結(jié)膜炎；流式細胞術(shù)

強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一種原因不明的自身免疫性疾病，主要累及骶髂關(guān)節(jié)、脊柱及四肢關(guān)節(jié)[1]。臨床上除表現(xiàn)為炎性腰背痛和關(guān)節(jié)周圍炎外，還可出現(xiàn)眼炎[2]。葡萄膜炎是AS常見的關(guān)節(jié)外表現(xiàn)[3]。目前關(guān)于葡萄膜炎合并AS的臨床分析報道較多[4-6]，而對于角膜炎、結(jié)膜炎等眼部炎癥合并AS的分析則報道較少，由于這些AS的關(guān)節(jié)外表現(xiàn)容易被忽視，臨床治療過程中往往只注意眼部的治療而忽視全身治療，導(dǎo)致眼部炎癥頻頻復(fù)發(fā)、視功能受損甚至致盲。為了分析HLA-B27抗原檢測對眼部炎癥合并AS的診斷意義，筆者采用流式細胞術(shù)法檢測初發(fā)非感染性眼部炎癥患者外周血淋巴細胞HLA-B27抗原表達，并結(jié)合病史詢問、?？撇轶w和影像學(xué)檢查等臨床資料確定眼部炎癥患者是否合并AS，以探討HLA-B27抗原檢測對初發(fā)眼部炎癥合并AS診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 連續(xù)收集2012年1月至2015年10月在北京同仁醫(yī)院確診的初發(fā)非感染性眼部炎癥患者776例，其中葡萄膜炎500例，鞏膜炎117例，角膜炎93例和結(jié)膜炎66例。776例患者中，男性376例，女性400例；年齡3～83歲，平均(42.85±15.03)歲。葡萄膜炎患者平均年齡(41.17±14.40)歲，結(jié)膜炎患者(43.02± 15.70)歲，鞏膜炎患者(42.04±14.99)歲，角膜炎患者(42.82±15.03)歲，各組患者年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。入選患者臨床上表現(xiàn)為急性發(fā)作，有不同程度的視力下降、眼紅、眼痛、畏光和流淚等，依據(jù)眼部炎癥相應(yīng)診斷標(biāo)準(zhǔn)，通過眼部?？茩z查(視力，裂隙燈、眼底和眼壓)和眼部輔助檢查(眼B超、OCT、FFA)明確診斷。所有患者經(jīng)風(fēng)濕免疫科醫(yī)生會診后確診，其中149例合并AS，包括葡萄膜炎130例、鞏膜炎6例、角膜炎6例和結(jié)膜炎7例，男性105例，女性44例，男女比例為2.39：1。男性患者的平均年齡為(41.23±11.93)歲，女性患者為(40.92±11.88)歲，二者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.29，P=0.77)。

1.2 儀器與試劑 采用美國Beckman-CouLter公司的FC500流式細胞儀。HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE (批號A07739)，陰性對照IgG2a-FITC/IgG1-PE(批號IM1255U)和溶血劑OptiLyse C(批號A11895)均購自美國Beckman-CouLter公司。取靜脈血2 mL，EDTA抗凝。

1.3 檢測方法 按照試劑盒的操作要求，將100 μL抗凝全血加入試管底部，再加入20 μL雙標(biāo)記熒光抗體，混勻后孵育20 min，加入溶血劑500 μL裂解紅細胞，混勻室溫避光孵育10 min，室溫300 g離心5 min，棄上清，加入1 mL PBS液離心漂洗一次，加入1 mL PBS液后混勻，并于2 h內(nèi)上機檢測完畢。每份標(biāo)本測定5 000個細胞，陰性對照管除抗體改為雙標(biāo)記的小鼠IgG2a-FITC/IgG1-PE外，其余步驟同上。

1.4 結(jié)果判斷 用雙標(biāo)記的同型對照設(shè)立陰陽性分界線。用HLA-B27自動軟件獲取和分析數(shù)據(jù)。在FLI/FL2點圖中計算HLA-B27陽性/HLA-B7陰性細胞所占淋巴細胞百分比，當(dāng)此百分比大于80%且HLA-B27FL1信號的平均熒光強度大于界值8.0(由Beckman-CouLter公司提供),報告為HLA-B27陽性，否則為陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS21.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，理論頻數(shù)小于5時，采用Fisher精確概率法進行組間率的比較；計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同眼部炎癥患者HLA-B27的陽性率比較776例患者中148例HLA-B27表達陽性，陽性率為19.07%(148/776)，106例男陽性患者平均年齡(41.45±12.82)歲，42例女陽性患者平均年齡(41.84± 11.22)歲，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.43，P=0.67)。葡萄膜炎組HLA-B27陽性率[25.80%(129/500)]明顯高于鞏膜炎組[4.27%(5/117)]、角膜炎組[6.45%(6/93)]和結(jié)膜炎組[12.12%(8/66)]，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2= 42.93，P＜0.05)。

2.2 合并AS眼部炎癥患者HLA-B27表達情況及HLA-B27檢測診斷AS價值 合并AS的149例眼部炎癥患者中葡萄膜炎組HLA-B27陽性125例，陽性率為96.15%(125/130)；鞏膜炎組4例，陽性率為66.67% (4/6)；角膜炎組5例，陽性率為83.33%(5/6)；結(jié)膜炎組7例，陽性率為100%(7/7)；總陽性率為94.63% (141/149)。HLA-B27檢測對不同眼部炎癥患者診斷AS價值，見表1。

表1 HLA-B27檢測對不同眼部炎癥患者診斷AS的價值

3 討論

葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜是常見的眼部炎癥。葡萄膜炎是眼科常見的一類致盲性疾病，其種類繁多[7]，若治療不及時病程遷延不愈可以致盲[4]。以往人們對HLA-B27抗原與葡萄膜炎的關(guān)系關(guān)注較多[8-10]，而對其他眼部炎癥與HLA-B27抗原的關(guān)系研究較少。流式細胞術(shù)檢測外周血淋巴細胞表面HLA-B27抗原是利用HLA-B27的McAb和淋巴細胞表面的HLA-B27抗原結(jié)合，通過檢測熒光強度和細胞表達百分?jǐn)?shù)來間接定量B27表達強度[11]，已成為目前檢測外周血淋巴細胞HLA-B27抗原的主要方法。本文通過分析776例初發(fā)非感染性眼部炎癥患者外周血淋巴細胞HLA-B27抗原表達情況，探討了HLA-B27抗原檢測對眼部炎癥合并AS的診斷意義。

葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎四組患者的發(fā)病年齡無顯著差異。葡萄膜炎組患者HLA-B27陽性率為25.8%，明顯高于鞏膜炎組的4.27%、角膜炎組的6.45%和結(jié)膜炎組的12.12%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；表明HLA-B27陽性眼部炎癥主要表現(xiàn)為葡萄膜炎，也可表現(xiàn)為結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎，部分非感染性眼部炎癥的發(fā)病可能與HLA-B27有關(guān)。在臺灣的非感染性葡萄膜炎患者中，HLA-B27相關(guān)性葡萄膜炎最常見[12]，這與我們的結(jié)果是基本一致的。在某些機制作用下，HLA-B27抗原分子重鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中異常折疊形成二聚體表達于細胞表面，可能參與疾病的發(fā)生發(fā)展[13-14]。在我國北方人群中HLA-B27的B2704亞型比B2705亞型更易患葡萄膜炎[15]，說明不同亞型其作用機制可能是不同的，不同亞型累及的眼部解剖學(xué)部位也可能不同；關(guān)注不同亞型在不同眼部炎癥中的表達與AS患病情況之間的關(guān)系將是我們今后研究的方向。另外我們發(fā)現(xiàn)66例非感染性結(jié)膜炎患者中有8例HLA-B27陽性，陽性率(12.12%)高于Rostoms等[16]報道的普通人群HLA-B27陽性率(5～10%)，說明合并AS的眼部炎癥患者結(jié)膜也可能是其好發(fā)部位。

葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎四組合并AS患者外周血淋巴細胞HLA-B27抗原陽性率不同，但統(tǒng)計學(xué)分析表明HLA-B27抗原檢測對葡萄膜炎、鞏膜炎、角膜炎和結(jié)膜炎等眼部炎癥患者合并AS的診斷均有較好的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值，同時正確指數(shù)也較高；說明外周血淋巴細胞HLA-B27抗原檢測可用于葡萄膜炎、鞏膜炎、角膜炎和結(jié)膜炎等眼部炎癥合并AS患者的輔助診斷；也說明AS的關(guān)節(jié)外表現(xiàn)不僅表現(xiàn)為葡萄膜炎也可表現(xiàn)為結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎等眼部炎癥；相對于葡萄膜炎而言，結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎等眼部炎癥合并AS的患病率較低。宋國祥等[4]報道AS合并葡萄膜炎的發(fā)病率是20%～30%，本文葡萄膜炎患病率是26%，與其報道一致。李坤鵬等[17]報道AS患者可出現(xiàn)鞏膜炎和結(jié)膜炎，但其發(fā)生率遠低于葡萄膜炎，這與我們的研究一致；李坤鵬等[17]還報道鞏膜炎患者中AS患者占5.8%，略高于我們的研究(5.18%)。由于這些關(guān)節(jié)外癥狀可以早于腰背痛與關(guān)節(jié)炎出現(xiàn)，容易被忽視，所以眼科醫(yī)生和風(fēng)濕科醫(yī)生的合作至關(guān)重要，對葡萄膜炎、結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎等眼部炎癥患者尤其是40歲左右中青年患者，應(yīng)結(jié)合其全身臨床表現(xiàn)，對疑似AS患者早期進行外周血淋巴細胞HLA-B27抗原檢測，以利于早期診斷和早期全身治療。我們發(fā)現(xiàn)眼部炎癥合并AS的患者的男女比例為2.39：1，男性患患者數(shù)高于女性，其發(fā)病機制可能與性別有關(guān)；同時男性患者的平均年齡為(41.23±11.93)歲，女性患者的平均年齡為(40.92±11.88)歲，兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.29，P=0.77)。說明無論男性還是女性，眼部炎癥合并AS患者均好發(fā)于中青年，這也符合AS本身好發(fā)于中青年男性的發(fā)病特點[18]。

綜上所述，眼部炎癥合并AS患者主要表現(xiàn)為葡萄膜炎，也可表現(xiàn)為結(jié)膜炎、角膜炎和鞏膜炎，男性多于女性，好發(fā)于中青年；臨床上對初發(fā)非感染性眼部炎癥患者進行HLA-B27抗原檢測，有助于其是否合并AS的輔助診斷。

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Diagnosis significance of HLA-B27 test for ophthalmitis complicated with ankylosing spondylitis.

XU Xiao-feng1, CUI Li2,MAO Yu3,LIU Xiang-yi1.Department of Clinical Laboratory1,Department of Immunology and Rheumatology2, Beijing Tongren Eye Center3,Beijing Tongren Hospital,Capital MedicalUniversity,Beijing 100730,CHINA

ObjectiveTo investigate the value of human leukocyte antigen B27(HLA-B27)detection in diagnosis of ophthalmitis complicated with ankylosing spondylitis(AS).MethodsA total of 776 patients newly diagnosed as non-infective ophthalmitis from January 2012 to October 2015 in Beijing Tongren Hospital were collected.The patients were divided into uveitis group,scleritis group,iritis group and conjunctivitis group according to pathogenic sites. They were tested for HLA-B27 expression in peripheral blood lymphocytes in order to identify the combination of AS based on clinical data.ResultsAmong the 776 patients,149 were diagnosed with AS,including 130 patients in uveitis group,6 patients in scleritis group,6 patients in iritis group and 7 patients in conjunctivitis group.HLA-B27 positive rate were 25.80%in uveitis group,which was significantly higher than 4.27%in scleritis group,6.45%in iritis group and 12.12%in conjunctivitis group,with statistically significant differences(P＜0.05).When HLA-B27 detection was used to diagnose ophthalmitis with AS,the sensitivity,specificity,positive predictive value,negative predictive value and correct index were 94.63%,98.67%,95.27%,98.48%,0.93.ConclusionOphthalmitis complicated with AS is primarily manifested as uveitis,but also as conjunctivitis,iritis and scleritis.HLA-B27 detections could be helpful in the auxiliary diagnosis of ophthalmitis complicated withAS.

HLA-B27;Uveitis;Iritis;Scleritis;Conjunctivitis;Flow cytometry

R771.2

A

1003—6350（2017）02—0237—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.02.022

2016-07-14)

劉向祎。E-mail：liuxiangyi2010@163.com