蒙古蕕組培快繁技術(shù)研究

李相儒　袁勤

摘要 以蒙古蕕一年生樹上的當(dāng)年生嫩枝作為材料，研究了誘導(dǎo)、增殖、分化、生根培養(yǎng)基篩選、移栽等組培快繁技術(shù)，旨在為蒙古蕕工廠化育苗奠定技術(shù)基礎(chǔ)。結(jié)果表明：蒙古蕕誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.02 mg/L GA；最適增殖擴(kuò)繁及生根培養(yǎng)基為MS，且培養(yǎng)基MS中加入20 mg/L矮壯素矮化促壯效果最好；組培苗移栽成活率可達(dá)85%以上。

關(guān)鍵詞 蒙古蕕；組培快繁；移栽

中圖分類號(hào) Q943.1；S793.9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2016）21-0116-02

蒙古蕕（Caryopteris mongolica Bunge）隸屬馬鞭草科（Verbenaceae）蕕屬（Caryopteris）旱生灌木，是國(guó)家三級(jí)保護(hù)稀有種，主要分布于我國(guó)和蒙古國(guó)的部分地區(qū)，常生長(zhǎng)于海拔 1 100～1 300 m 的干旱草原和荒漠的石質(zhì)山坡、沙地、干旱河床及溝谷等地。馬鞭草科中諸多植物具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，有廣闊的開發(fā)利用前景，蒙古蕕是其中的一種。蒙古蕕具有顯著的多種用途的特性使其成為我國(guó)干旱和半干旱地區(qū)生態(tài)脆弱帶極好的生態(tài)樹種[1-2]。近年來(lái)，我國(guó)學(xué)者對(duì)蒙古蕕的花粉形態(tài)、生物學(xué)特性生態(tài)學(xué)特性、營(yíng)養(yǎng)成分、經(jīng)濟(jì)價(jià)值、植物區(qū)系地理成分、形態(tài)組織、化學(xué)成分和引種栽培管理等方面進(jìn)行了研究，但并未見到關(guān)于蒙古蕕組培方面的相關(guān)研究[3-5]。

蒙古蕕具有較高的科研及經(jīng)濟(jì)價(jià)值，由于放牧破壞，加之人工砍伐燒柴，使之種群數(shù)量日益減少，種子較難獲取。本研究進(jìn)行蒙古蕕組培快繁技術(shù)研究，一方面填補(bǔ)國(guó)內(nèi)蒙古蕕組培方面無(wú)研究的空白，另一方面對(duì)稀有種起到保護(hù)繁育作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

蒙古蕕新梢于2015年8月采自億利資源集團(tuán)沙旱生態(tài)科技園智能溫室苗床區(qū)，為一年生樹上的當(dāng)年生嫩枝，將嫩枝剪成10 cm的小段，清水沖洗干凈后備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基制備。選取4種配方不同的培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，各培養(yǎng)基中均添加30 g/L蔗糖、7 g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值在分裝前調(diào)至7，培養(yǎng)基在分裝后放在121～123 ℃的條件下滅菌20 min。4種培養(yǎng)基配方如下：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA（M1）、MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.01 mg/L GA（M2）、MS+1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.02 mg/L GA（M3）、MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA（M4）。

選取4種配方不同的培養(yǎng)基作為增殖培養(yǎng)基，各培養(yǎng)基中均添加30 g/L蔗糖、7 g/L瓊脂，培養(yǎng)基pH值在分裝前調(diào)至7，培養(yǎng)基在分裝后放在121～123 ℃的條件下滅菌20 min。4種培養(yǎng)基配方如下：

1/2MS（S1）、MS（S2）、1/2MS+0.1 mg/L 6-BA（S3）、MS+0.1 mg/L 6-BA（S4）。

1.2.2 外植體的建立與啟動(dòng)培養(yǎng)。取新抽生的未木質(zhì)化的嫩莖作為外植體，從葉柄處剪去葉片，再用蒸餾水沖洗4～5遍，浸泡在蒸餾水中，移到超凈臺(tái)上，在75%酒精中浸泡30 s，再用0.1%氯化汞溶液浸泡9 min，其間不斷震搖，使材料和消毒液充分接觸，消毒后用無(wú)菌水沖洗4～5次，將新梢分別剪成帶1個(gè)腋芽的莖段，接種到4種誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接種1個(gè)莖段。然后放在培養(yǎng)室中培養(yǎng)，要求溫度24～26 ℃，光周期12 h，培養(yǎng)室光照強(qiáng)度2 000 lx，每天光照13～15 h。接種30 d后，調(diào)查外植體的啟動(dòng)生長(zhǎng)狀況。每個(gè)處理分為3組，每組80瓶[6]。

1.2.3 增殖培養(yǎng)及生根培養(yǎng)。選取啟動(dòng)培養(yǎng)基成活率高且玻璃化率低的一組組培苗，將初培養(yǎng)的健壯瓶苗植株切成每段含1～2個(gè)腋芽的莖段，轉(zhuǎn)入以上4種增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，觀察其生長(zhǎng)狀況。每個(gè)處理分為3組，每組50瓶。

1.2.4 瓶苗矮化促壯。以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別加入10、20、30、40、50、70 mg/L 6種不同濃度的矮壯素，每個(gè)處理分為3組，每組30瓶。將生長(zhǎng)情況基本一致的蒙古蕕組培苗轉(zhuǎn)接至6種培養(yǎng)基中，觀察生長(zhǎng)情況。

1.2.5 瓶苗的馴化移栽。將生長(zhǎng)60 d的組培苗和生長(zhǎng)30 d的組培苗同時(shí)進(jìn)行煉苗，閉瓶煉苗5 d左右，移栽前2～3 d開蓋煉苗，每天對(duì)瓶苗噴水1次，以保持瓶?jī)?nèi)足夠的濕度。3 d后取出組培苗，用清水洗凈根上的培養(yǎng)基，分別栽入用MS營(yíng)養(yǎng)液與蛭石基質(zhì)按1 L∶1.5 kg的比例混合的基質(zhì)和溫室裸地栽培區(qū)。栽后用棚膜遮蓋進(jìn)行保溫、定時(shí)噴水保濕。待幼苗開始生長(zhǎng)后揭去棚膜。蛭石基質(zhì)栽培苗30 d后移入溫室裸地栽培區(qū)，定期噴水。每個(gè)處理分為3組，每組30株。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體在不同培養(yǎng)基上的誘導(dǎo)分化效果

由表1可知，同一新梢的外植體在不同的培養(yǎng)條件下其成活率及玻璃化率明顯不同，處理M3誘導(dǎo)蒙古蕕外植體成活率高達(dá)96.77%，且玻璃化率只有20.00%；其次是處理M1，成活率高達(dá)81.25%，且玻璃化率為26.92%；處理M2、M4成活率在55%～70%，但其玻璃化率較高。因此，培養(yǎng)基M3可作為誘導(dǎo)分化的最佳培養(yǎng)基。

2.2 不同濃度激素配比對(duì)蒙古蕕生根的影響

試驗(yàn)表明，蒙古蕕的增殖培養(yǎng)與生根培養(yǎng)可在同一培養(yǎng)基下進(jìn)行，且蒙古蕕在增殖培養(yǎng)過程中無(wú)愈傷組織出現(xiàn)，可大大加快繁殖速度，降低生產(chǎn)成本。由表2可知，將瓶苗放到增殖培養(yǎng)基中，7 d左右開始生根，4種增殖培養(yǎng)基中，以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的S1、S3生根率較低，都在5%以下；以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的S2、S4生根率較高且以培養(yǎng)基S2為最好，可作為增殖生根的最佳培養(yǎng)基。

2.3 矮壯素梯度試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，矮壯素的加入，對(duì)株高有明顯的抑制作用。濃度越高，株高迅速下降。矮壯素的濃度從0～40 mg/L，平均株高逐漸變小，但濃度從30 mg/L開始植株葉片開始發(fā)育不良；矮壯素濃度在50、70 mg/L時(shí)株高明顯降低且生長(zhǎng)緩慢，矮而不壯，此時(shí)植株的上部及葉片發(fā)育不良。因此，高濃度的矮壯素，不利于蒙古蕕的矮化促壯。附加20 mg/L矮壯素的生根培養(yǎng)基，苗矮壯，葉片肥厚，起到矮化植株的作用，為后期無(wú)菌苗的移栽成活提供了保障。

2.4 不同移栽方法及苗木質(zhì)量對(duì)移栽效果的影響

根據(jù)觀察結(jié)果，蒙古蕕組培苗的緩苗期為5～8 d。蒙古蕕煉苗后成活率為90.68%，顯著高于未煉苗處理（72.31%）。將生長(zhǎng)30 d煉苗后的蒙古蕕組培苗栽入蛭石基質(zhì)中成活率較高，成活率可達(dá)到88.89%，而直接移栽至大田里成活率很低，只有10%～20%；生長(zhǎng)60 d的組培苗在基質(zhì)及大田中成活率都很低?？傮w來(lái)看，蒙古蕕組培苗生長(zhǎng)30 d經(jīng)過煉苗后先移栽到基質(zhì)里進(jìn)行培養(yǎng)，可大大提高成活率。

3 結(jié)論

優(yōu)良的快繁體系是利用組織培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)工廠化育苗的保障，在組織培養(yǎng)中無(wú)菌苗的建立是組培快繁的基礎(chǔ)，而外植體的快速啟動(dòng)是再生體系建立的關(guān)鍵。因此，用培養(yǎng)基MS+1.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.02 mg/L GA+30 g/L 蔗糖+7 g/L 瓊脂，pH值=7.0培養(yǎng)后誘導(dǎo)分化效果最好，適合作為啟動(dòng)培養(yǎng)基；繼代增殖培養(yǎng)及生根培養(yǎng)中使用MS培養(yǎng)基較為合適，生根率也較高；培養(yǎng)基MS中加入20 mg/L矮壯素矮化促壯效果最好，可為后期無(wú)菌苗的移栽成活提供保障；蒙古蕕組培苗生長(zhǎng)30 d經(jīng)過煉苗后先移栽到基質(zhì)里進(jìn)行培養(yǎng)，成活率可達(dá)85%以上。

移栽馴化是工廠化育苗能否成功的關(guān)鍵，優(yōu)質(zhì)的苗木是移栽成活的關(guān)鍵，因此在基質(zhì)內(nèi)移栽成活較高外還需摸索其他移栽方法，提高移栽成活率，達(dá)到工廠化育苗的要求。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 王曉江，李愛平.生態(tài)灌木蒙古蕕的生物生態(tài)學(xué)特性及其經(jīng)濟(jì)價(jià)值評(píng)價(jià)[J].干旱區(qū)資源與環(huán)境，2006，20（2）：191-194.

[2] 郭春燕.蒙古蕕生殖生物學(xué)研究[D].呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[3] 謝乾瑾.蒙古蕕抗旱生理生態(tài)特性的研究[D].北京：北京林業(yè)大學(xué)，2011.

[4] 李勃，高鴻永.基質(zhì)和沙土不同配比對(duì)蒙古蕕容器苗生長(zhǎng)的影響[J].草原與草業(yè)，2015，27（1）：54-56.

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