近20年氣滯血瘀證動(dòng)物造模進(jìn)展研究

李楠，劉麗＊，李碩熙

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦二科，黑龍江 哈爾濱 150040）

近20年氣滯血瘀證動(dòng)物造模進(jìn)展研究

李楠，劉麗＊，李碩熙

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦二科，黑龍江 哈爾濱 150040）

本文主要討論近20年氣滯血瘀證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型造模方法。發(fā)現(xiàn)單一因素造模主要以腎上腺素注射液為主，多因素主要以化學(xué)藥物聯(lián)合其他方法：物理因素（夾尾、冰水浴、束縛、聲光電等）；飲食（高脂高糖）等；環(huán)境因素（晝夜顛倒及改變照明等）為主；而選用多因素造模越來越普遍。本文總結(jié)出選用大鼠、多因素、慢性造模更適合臨床氣滯血瘀證的研究，以期為今后的實(shí)驗(yàn)提供有利的指導(dǎo)。

氣滯血瘀；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；造模方法

1 氣滯血瘀模型

本動(dòng)物模型模仿人類氣滯血瘀狀態(tài)，患者臨床往往出現(xiàn)心煩氣躁，易激惹的情感狀態(tài)，血液黏稠易凝，流速降低，血管痙攣狀態(tài)等[1]?？v觀近20年來文獻(xiàn)報(bào)道，我們可以總結(jié)出造模成功的動(dòng)物往往精神抑郁或煩躁不安，易激惹，活動(dòng)減少，白晝異常興奮或夜晚嗜睡，毛發(fā)變黃干枯，目赤，唇四白發(fā)黑，舌紫暗，舌下絡(luò)脈瘀紫，耳色變深瘀斑，爪甲色黃開裂，進(jìn)食量少，排泄物少，飲水少，體質(zhì)量減輕，血液流變學(xué)可檢測(cè)各項(xiàng)凝血指標(biāo)等均可支持氣滯血瘀證造模成功。前人的實(shí)踐給后人研究血瘀證生物表征模型的建立以很大啟發(fā)[2]。造模方法主要有注射腎上腺素；夾尾；束縛；聲光電；冰水??；電針；干預(yù)飲食等。

1.1 單一因素造模 章正祥[3]采用注射腎上腺素的方法造模。《內(nèi)經(jīng)·經(jīng)脈別論》曰：疾走恐懼，汗出于肝。腎上腺素由腎上腺分泌，通過增加心輸出量，有供養(yǎng)機(jī)體超負(fù)運(yùn)轉(zhuǎn)的作用。當(dāng)人興奮、恐懼時(shí)，這種激素分泌增加。注射腎上腺素是為了模仿動(dòng)物激怒恐懼狀態(tài)，從而實(shí)現(xiàn)氣滯血瘀模型。

1.2 多因素造模 除了注射腎上腺素以外，還有物理因素（包括聲、光、電）、環(huán)境因素等。陳輝[4]等指出，以上物理因素刺激動(dòng)物，則可促進(jìn)其交感神經(jīng)活動(dòng)增強(qiáng)，出現(xiàn)微循環(huán)障礙等血瘀表現(xiàn)。而環(huán)境作為治病因素在“整體觀念”中即有體現(xiàn)。王文麗[5]用大鼠采用高脂飲食加夾尾刺激。高脂飲食配方為：6%蔗糖，1%谷氨酸鈉，5%蛋黃粉，8%花生油，1.5%膽固醇，0.4%甲基硫氧嘧啶，78.1%基礎(chǔ)飼料。夾尾頻率為每次30分鐘，每天4次。王家歷[6]選用大鼠實(shí)驗(yàn)，采用多因素造模分別為夾尾每次30 min，每日2次；束縛每次30 min；冰水浴1oC-4oC冰水中每日游泳5 min，每日2次；傾斜鼠籠45度2 h，每日1次。晝夜顛倒，改變照明24 h；懸尾10 min；禁食24 h；皮下注射腎上腺素1 g/L 1次，每只0.1 mL；每日給予上述刺激中的一種。Wang等[7]采用注射腎上腺素及冰水浴的方法造模，腎上腺素濃度0.8 mg/kg，兩次注射間隔4 h，第一次注射2 h后冰水浴5 min。陳嘉斌等[8]分別采用電針刺激、中藥灌胃、以及注射腎上腺素等方法聯(lián)合造模，電刺激方法如下于：固定板上對(duì)足底進(jìn)行電針刺激，頻率2 HZ，刺激3 h/d，固定3 h/d，共計(jì)處理20 d；中藥灌胃造模方法如下：灌胃黃連、石膏水煎劑，給藥劑量15 g/kg，灌胃2次/d，每次2 mL，共計(jì)處理15 d），腎上腺素造模方法如下：腎上腺素組皮下注射0.1%腎上腺素，每只0.2 mL，每天1次，共計(jì)處理7 d造模。測(cè)量血流變、高中低切變率、血漿黏度等指標(biāo)。

2 總結(jié)

閆珊珊等[9]指出，氣滯血瘀是一個(gè)漫長(zhǎng)的病理過程，短時(shí)間之內(nèi)造?？尚哦容^弱，且缺乏量化標(biāo)準(zhǔn)。且單一因素造模周期長(zhǎng)，成功率低，病變的全面性和準(zhǔn)確性無法保障。復(fù)合因素造模能提高成功率，降低死亡率。實(shí)驗(yàn)人員也認(rèn)識(shí)到了這些不足，任建勛等[10]通過實(shí)驗(yàn)證明了多因素刺激對(duì)于血液流變學(xué)的影響比單一因素刺激更明顯。近20年文獻(xiàn)的查詢中，筆者發(fā)現(xiàn)，單一因素造模主要以腎上腺素注射液為主，多因素主要以化學(xué)藥物腎上腺素為主聯(lián)合其他方法如物理因素（夾尾、冰水浴、束縛、聲光電等）；飲食因素（高脂高糖等）；環(huán)境因素（晝夜顛倒及改變照明等）；而選用多因素造模越來越普遍，這是因?yàn)榕c單一的西醫(yī)化學(xué)藥物刺激（腎上腺素等）相比，物理以及情志刺激更符合中醫(yī)證候之于人的進(jìn)展過程，保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。其次，王婷婷等[1]驗(yàn)證了只要達(dá)到造模的目的不需要對(duì)每一種方法都應(yīng)用在動(dòng)物身上。從倫理學(xué)的角度來講，這也體現(xiàn)了對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尊重和情感關(guān)懷。此外，不同的藥物濃度，以及刺激強(qiáng)度的差異均可不同程度的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以上方法還需反復(fù)、多次實(shí)驗(yàn)，通過對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的反復(fù)計(jì)算，推導(dǎo)，從而精益求精，得出最具有參考價(jià)值的實(shí)驗(yàn)操作方法。田金洲等[11]等指出，臨床上研究氣滯血瘀證模型進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的動(dòng)物最多的是大鼠，其次是小鼠，也有兔等等。而筆者認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)更適合用大鼠。這是因?yàn)椋海?）生理習(xí)性：小鼠天性怕驚，實(shí)驗(yàn)員抓取小鼠時(shí)易受傷。大鼠性情較為溫和，依從性較小鼠為優(yōu)；小鼠體型較小，身體嬌嫩，對(duì)環(huán)境適應(yīng)性差，對(duì)疾病抵抗能力差，過冷過熱均會(huì)造成死亡；如果采用小鼠將對(duì)實(shí)驗(yàn)室的條件要求更為嚴(yán)苛。而大鼠抗病能力強(qiáng)，不易感染病菌，生存時(shí)間長(zhǎng)，基本可以持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。（2）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：驗(yàn)證氣滯血瘀造模實(shí)驗(yàn)需要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，大鼠體型大于小鼠，因此對(duì)于實(shí)驗(yàn)所需血量以及所需器官量較小鼠更多、更易獲得[12]。

將中醫(yī)的氣滯血瘀證通過造模表現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型身上對(duì)于臨床試驗(yàn)研究治療氣滯血瘀證的進(jìn)展以及治療有里程碑的意義。

[1]王婷婷,賈乘,陳宇,等.大鼠氣滯血瘀證模型的建立及影響因素分析[J].中國(guó)中藥雜志,2012(11): 1629-1633.

[2]杜金行,史載祥.血瘀證及活血化瘀研究回顧與展望[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,22(4): 1-4.

[3]章正祥,曹克剛,王芬,等.皮下注射腎上腺素復(fù)制氣滯血瘀模型的血流動(dòng)力學(xué)初探[J].天津中醫(yī)藥,2011,28(1): 9-11.

[4]陳輝,吳英,楊思進(jìn).血瘀證動(dòng)物模型造模方法研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2010(8): 98-99.

[5]王文麗,李冬梅,施雷.痰瘀同治法干預(yù)咳嗽變異性哮喘大鼠病癥結(jié)合動(dòng)物模型氣道慢性炎癥療效的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2017(1): 223-226.

[6]王家歷.化瘀止痛散對(duì)氣滯血瘀EM的臨床療效和模型鼠的HMGB1、OPN等影響的研究[D].山東中醫(yī)藥大學(xué),2016.

[7]Wang Y,Yan J,Li S,et al.Composition of the essential oil from danggui-zhiqiao herb-pair and its analgesic activity and effect on hemorheology in rats with blood stasis syndrome [J].Pharmacogn Mag,2016,12(48): 271-275.

[8]陳嘉斌,柴可夫,鄭楊,等.三種方法建立糖尿病氣滯血瘀證型大鼠模型的對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,37(3):234-239.

[9]閆珊珊,竇維華,董少龍,等.血瘀證動(dòng)物模型的制作及存在問題的探討[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2004,10(2): 35-37.

[10]任建勛,林成仁,王敏,等.多因素整合建立氣滯血瘀證動(dòng)物模型研究[J].中藥藥理與臨床,2007(5): 210-211.

[11]田金洲,王永炎,徐意,等.血瘀證動(dòng)物模型的種類、評(píng)價(jià)與研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2006,29(6): 396-400.

[12]郝光榮.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)[M].北京: 第二軍醫(yī)大學(xué)出版社.1999.

黑龍江省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（No.H2015026）