可溶性髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1與自發(fā)性腹膜炎腸黏膜通透性的關(guān)系

張曉蘋，趙宏軍，馬阿火，秦月花，孫愛靜，王曉麗，王興木

論著

可溶性髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1與自發(fā)性腹膜炎腸黏膜通透性的關(guān)系

張曉蘋1，趙宏軍2，馬阿火1，秦月花1，孫愛靜3，王曉麗1，王興木3

目的：探討可溶性髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)表達(dá)和肝硬化自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎(SBP)患者腸黏膜通透性的關(guān)系。方法：將23例肝硬化腹水并發(fā)SBP患者作為SBP組，33例肝硬化腹水患者作為非SBP組，20例健康體檢者作為健康對(duì)照組，檢測(cè)血清和腹水sTREM-1的表達(dá)水平，并計(jì)算尿乳果糖排泄率與甘露醇排泄率比值(LAC/MAN)，探討sTREM-1及LAC/ MAN在上述患者(人群)中有無差別及其相關(guān)性。結(jié)果：SBP組血清及腹水sTREM-1的表達(dá)分別為（217.28±87.65）pg/mL和（218.76±69.38）pg/mL，均高于非SBP組（55.51±14.28）pg/mL和（75.98±21.57）pg/mL(P＜0.05)；SBP組血清及腹水sTREM-1值與LAC/MAN比值呈正相關(guān)(r血清=0.518，r腹水=0.527，P＜0.05)，血清及腹水sTREM-1值與Child-Pugh評(píng)分呈正相關(guān)(r血清= 0.791，r腹水=851，P＜0.05)。結(jié)論：sTREM-1可增加自發(fā)性腹膜炎患者的腸黏膜通透性，而且與腸黏膜通透性損傷程度及肝功能損害相關(guān)。

可溶性髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1；自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎；腸黏膜通透性

自發(fā)性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis，SBP)是肝硬化常見的并發(fā)癥，腸黏膜屏障功能受損、通透性增加導(dǎo)致腸細(xì)菌移位，是肝硬化門靜脈高壓患者并發(fā)自發(fā)性腹膜炎的主要致病機(jī)制[1]，檢測(cè)肝硬化患者腸黏膜屏障的損傷有無及其程度，對(duì)于SBP的早期診斷具有重要意義。可溶性髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1(soluble triggering receptors expressed by myeloid cell-1,sTREM-1)是近來發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于髓樣細(xì)胞表面的免疫球蛋白超家族活化受體，其活化能促進(jìn)炎性介質(zhì)如TNF-ɑ、IL-6、IL-8等的大量產(chǎn)生[2]，是炎癥性疾病的重要標(biāo)志物，與C-反應(yīng)蛋白、降鈣素原等炎癥指標(biāo)相比，sTREM-1與炎癥的嚴(yán)重程度有更好的相關(guān)性，可用于評(píng)價(jià)療效和預(yù)后[3-4]。有研究表明，sTREM-1促進(jìn)胰腺炎相關(guān)的腸黏膜屏障功能的損害[5-6]。本研究選取2013年6月—2014年12月我院消化內(nèi)科收治的肝硬化腹水患者，23例并發(fā)SBP者作為SBP組，同期住院的肝硬化腹水未并發(fā)SBP的33例作為非SBP組，檢測(cè)其血清及腹水sTREM-1在肝硬化自發(fā)性腹膜炎患者中的變化及與腸黏膜通透性改變的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 56例患者入選，SBP組23例，非SBP組33例，兩組性別、年齡、肝硬化病因及Child-Pugh評(píng)分等方面無顯著性差異。健康體檢者20例。3組一般情況如表1。肝硬化符合2000年西安會(huì)議《病毒性肝炎防治方案》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，SBP參照2000年國(guó)際腹水俱樂部制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1)年齡＜18歲。（2)結(jié)核性、腫瘤性腹腔積液或繼發(fā)性腹膜炎。（3)合并惡性腫瘤。（4)2周內(nèi)使用過抗生素。均簽署知情同意書，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 3組一般臨床特征比較(n，)

表1 3組一般臨床特征比較(n，)

組別SBP組非SBP組對(duì)照組n 23 33 20性別(男/女) 14/9 23/10 12/8年齡(歲) 47.5±12.2 45.3±11.6 52.1±10.4病因(乙肝/丙肝/酒精/其他) 11/5/4/3 17/3/8/5 Child-Pugh評(píng)分(A/B/C) 2/13/8 2/17/14

1.2 標(biāo)本留取 入院24 h內(nèi)及治療后1周留取標(biāo)本(SBP患者經(jīng)過護(hù)肝、利尿、抗生素等治療1周，非SBP患者經(jīng)過一般護(hù)肝、利尿等治療1周)。禁食8 h。次日清晨空腹采靜脈血，離心取血清，于-80℃低溫冰箱保存，用于sTREM-1的檢測(cè)。采血同日行腹腔穿刺，留取腹水進(jìn)行腹水多形核細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)菌培養(yǎng)及sTREM-1檢測(cè)。對(duì)照組于清晨空腹采靜脈血留取標(biāo)本。

1.3 檢測(cè)方法 (1)sTREM-1檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法。sTREM-1 ELISA試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司。顯色基質(zhì)偶氮法試劑盒購自上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所。所有操作嚴(yán)格按說明書進(jìn)行。(2)尿乳果糖/甘露醇排泄率比值測(cè)定（LAC/MAN）?；颊呓? h，于次日清晨空腹口服乳果糖(LAC)、甘露醇(MAN)及生理鹽水混合液50 mL(含5 g甘露醇、10 g乳果糖)。收集隨后6 h尿液，混勻計(jì)總量，采用高壓液相色譜儀檢測(cè)尿中LAC、MAN濃度。計(jì)算相應(yīng)尿LAC排泄率與MAN排泄率比值(LAC/MAN),此比值代表腸黏膜通透性水平。（3）血清、腹水hsCRP檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法；TNFα采用放射免疫法測(cè)定；IL-8采用免疫透射比濁法進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定方法嚴(yán)格按試劑盒操作流程說明進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，sTREM與LAC/MAN的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清sTREM-1水平 SBP組為(217.28± 87.65)pg/mL，顯著高于非SBP組(55.51±14.28)pg/ mL和正常對(duì)照組(43.99±12.89)pg/mL(P＜0.001)。非SBP組血清sTREM-1濃度與正常對(duì)照組無差異(P＞0.05)。

2.2 腹水sTREM-1水平 SBP組為(218.76± 69.38)pg/mL，顯著高于非SBP組(75.98±21.57)pg/mL (P＜0.001)。

2.3 治療前后sTREM-1水平 SBP組治療1周后，血清sTREM-1從治療前的(217.28±87.65)pg/mL下降至(52.02±16.36)pg/mL(P＜0.05)，腹水sTREM-1從治療前的(218.76±69.38)pg/mL下降至(74.07± 25.81)pg/mL(P＜0.001)。非SBP組血清sTREM-1、腹水sTREM-1在治療前后無明顯變化(P＞0.05)，見表2。

2.4 尿LAC/MAN比值 SBP組尿LAC%、LAC/MAN比值顯著高于非SBP組及對(duì)照組(P＜0.001)，非SBP組尿LAC%、LAC/MAN比值顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。SBP組及非SBP組尿MAN%較對(duì)照組均降低(P＜0.05)。治療1周后，SBP組尿LAC%、LAC/ MAN比值較治療前明顯下降(P＜0.001)，尿MAN%無明顯變化(P＞0.05)；非SBP組尿LAC%、MAN%、LAC/MAN比值在治療前后的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均＞0.05)。見表3。

表2 兩組患者sTREM-1水平表達(dá)在治療前后的變化(，pg/mL)

表2 兩組患者sTREM-1水平表達(dá)在治療前后的變化(，pg/mL)

注：與非SBP組同時(shí)間點(diǎn)比較，aP＜0.05；與同組治療前比較，bP＜0.05;與對(duì)照組比較，cP＜0.05

標(biāo)本血清腹水對(duì)照組12.11±2.26 SBP組治療前217.28±87.65a、c218.76±69.38a治療后52.02±16.36b、c74.07±25.81b非SBP組治療前55.51±14.28c75.98±21.57治療后49.82±17.51c78.35±21.04

表3 3組尿LAC%、MAN%、LAC/MAN比值在治療前后的變化()

表3 3組尿LAC%、MAN%、LAC/MAN比值在治療前后的變化()

注：與非SBP組同時(shí)間點(diǎn)比較，aP＜0.05；與同組治療前比較，bP＜0.05；與對(duì)照組比較，cP＜0.05

LAC（%）MAN（%）LAC/MAN SBP組治療前0.726±0.02a、c7.420±0.01c0.100±0.013a、c治療后0.502±0.02b、c7.680±0.60c0.06±0.004b、c非SBP組治療前0.466±0.05c7.310±0.07c0.072±0.006c治療后0.43±0.02c7.300±0.50c0.05±0.006c對(duì)照組0.180±0.02 8.310±0.60 0.022±0.004

2.5 sTREM-1與hsCRP,TNFα，IL-8平行檢測(cè)的關(guān)系 SBP組血清和腹水中sTREM-1、hsCRP、TNF α和IL-8濃度見表4。SBP患者腹水和血清中hsCRP和TNFα水平存在顯著差異（P＜0.05）；而腹水和血清中sTREM-1和IL-8無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。

表4 SBP組患者血清與腹水中TREM-1、hsCRP、TNFα和IL-8平行檢測(cè)的關(guān)系()

表4 SBP組患者血清與腹水中TREM-1、hsCRP、TNFα和IL-8平行檢測(cè)的關(guān)系()

注：與血清檢測(cè)值比較，aP＜0.05

標(biāo)本血清腹水sTREM-1(pg/mL) 217.28±87.65 218.76±69.38 hsCRP(mg/L) 13.21±4.41 18.56±5.17aTNFα(ng/mL) 106.36±15.45 156.87±18.65aIL-8(pg/dL) 50.33±15.48 53.67±12.65

2.6 sTERM-1與尿LAC/MAN相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示，SBP組血清sTREM-1與尿LAC/MAN比值呈正相關(guān)(r=0.518,P＜0.05)，腹水sTREM-1與尿LAC/MAN比值呈正相關(guān)(r=0.527，P＜0.05)。見圖1。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，血清sTREM-1與Child-Pugh評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.791,P＜0.05)，腹水sTREM-1與Child-Pugh評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.851, P＜0.05)。

圖1 sTERM-1與LAC/MAN相關(guān)性散點(diǎn)圖

3 討論

肝硬化失代償期患者多處于門靜脈高阻力、高動(dòng)力循環(huán)狀態(tài)。由于其獨(dú)特的血流動(dòng)力學(xué)改變,使得腸微循環(huán)發(fā)生改變，腸黏膜過度充血、淤血發(fā)生缺血、缺氧、水腫、糜爛，導(dǎo)致肝硬化患者腸黏膜屏障破壞、腸通透性增加[9]。目前多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)及臨床研究表明,肝硬化門脈高壓患者腸黏膜通透性會(huì)增加，腸黏膜通透性的改變可能參與了肝硬化SBP等嚴(yán)重并發(fā)癥的病理生理過程[10-11]。

LAC和MAN均不在體內(nèi)代謝，以原型的方式從尿中排出，通過尿LAC/MAN比值的測(cè)定可反應(yīng)腸黏膜通透性的變化，已被廣泛應(yīng)用于肝硬化、急性胰腺炎、腸梗阻、燙傷、燒傷等疾病所致腸黏膜通透性的研究中[12-13]。但因其標(biāo)本的留取及檢測(cè)均較復(fù)雜，目前主要運(yùn)用于科研，在肝硬化患者的臨床治療中難以常規(guī)應(yīng)用[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，肝硬化SBP組、非SBP組病人尿LAC/MAN明顯增高，且SBP組又高于非SBP組，提示腸黏膜通透性的改變與肝硬化SBP的發(fā)生相關(guān)。TREM-1是一種細(xì)胞膜受體，屬于免疫球蛋白超家族[15]，選擇性地表達(dá)于成熟單核-巨噬細(xì)胞、中心粒細(xì)胞等髓樣細(xì)胞表面，能提高促炎介質(zhì)的產(chǎn)生，并抑制抗炎介質(zhì)的表達(dá)[16-17]。sTREM-1為TREM-1的可溶性形式，在機(jī)體感染過程中能夠釋放于體液或血液，能夠反映感染的嚴(yán)重程度，并與患者的預(yù)后相關(guān)[18-19]。有研究發(fā)現(xiàn)，sTREM-1在膿毒血癥的診斷及嚴(yán)重程度的判斷上優(yōu)于CRP和PCT[20]。有文獻(xiàn)提及，sTREM-1在繼發(fā)性腹膜炎中升高，用于判斷腹腔手術(shù)后感染引起的繼發(fā)性腹膜炎[21]。本研究中，肝硬化SBP患者血清及腹水中的sTREM-1濃度均顯著高于非SBP組、對(duì)照組，而非SBP組的血清sTREM-1濃度與健康對(duì)照組無明顯差異。經(jīng)過抗感染治療1周后，SBP組血清及腹水sTREM-1均明顯下降。提示血清及腹水sTREM-1水平的升高是反映肝硬化腹水合并SBP的靈敏指標(biāo)。另外本研究發(fā)現(xiàn)，血清及腹水中的sTREM-1濃度均與尿LAC/MAN比值呈正相關(guān)，其機(jī)制可能是促進(jìn)炎性介質(zhì)TNFα、IL-6的分泌增多，增加腸黏膜的通透性，導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥，或刺激腹腔局部巨噬細(xì)胞直接分泌有關(guān)。因此，血清及腹水中sTREM-1水平有助于肝硬化SBP的診斷及治療效果的監(jiān)測(cè)，可能與其增加肝硬化患者腸黏膜通透性有關(guān)。

經(jīng)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，血清及腹水中的sTREM-水平與肝硬化患者的Child-Pugh評(píng)分呈正相關(guān)。提示隨著sTREM-1水平的升高，肝功能損害加重，腸黏膜通透性也增加。因此，如患者腸黏膜通透性升高，提示患者肝功能損害加重，預(yù)后不佳，通過檢測(cè)血清及腹水的sTREM-1水平可以及早發(fā)現(xiàn)及干預(yù)。依據(jù)歐洲肝病年會(huì)SBP共識(shí)文件制定的標(biāo)準(zhǔn),患者腹水感染經(jīng)抗生素治療控制后,其腸黏膜通透性僅能下降至相當(dāng)于非SBP組水平,這可能是部分SBP患者感染控制后預(yù)后仍差的原因所在。在治療上,通過改善腸黏膜通透性是否可以改善肝硬化SBP患者的預(yù)后,是否可以成為治療SBP的重要手段之一,有待進(jìn)一步深入研究。

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（收稿：2016-06-06 修回：2016-10-20）

（責(zé)任編輯 劉洪斌 屈振亮）

Association of Soluble Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cell-1 with Intestinal Mucosal Perme-ability in Patients with Spontaneous Bacterial Peritonitis

ZHANG Xiao-ping，ZHAO Hong-jun，MAA-huo,et al. Department of Gastroenterology,Shaoxing People's Hospital of Zhejiang Province,Shaoxing (312000),China

ObjectiveTo investigate association of soluble triggering receptors expressed by myeloid cell-1 (sTREM-1)on intestinal mucosal permeability in cirrhotic patients with spontaneous bacterial peritonitis(SBP).MethodsTwenty-three patients with SBP were taken as SBP group,the concurrent 33 cirrhotic ascites patients without SBP were taken as non-SBP group,and 20 healthy cases as healthy control group.The serum and ascitic fluid levels of sTREM-1 were measured,the levels of urinary excretion of LAC/MAN ratios were calculated.ResultsThe sTREM-1 concentration of(217.28±87.65)pg/mL in serum and(218.76±69.38)pg/mL in ascites in SBP group were both higher than those in non-SBP group[(55.51±14.28)pg/mL,(75.98±21.57)pg/mL, respectively]with statistical differences between the two groups(P＜0.05).The levels of the serum and ascitic fluid sTREM-1 had significantly correlated with the levels of urinary excretion of LAC/MAN ratios(rserum=0.518，rascites=0.527，P＜0.05)，and the levels of the serum and ascitic fluid sTREM-1 had significantly correlated with Child-Pugh classification(rserum=0.791，rascites=851).ConclusionsTREM-1 may promote intestinal mucosal permeability in patients with SBP,and is also associated with the degree of intestinal permeability damage and impaired liver function.

Soluble triggering receptor expressed on myeloid cell-1;spontaneous bacterial peritonitis;intestinal mucosal permeability

R656.7

A

1007-6948(2017)01-0003-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2017.01.001

浙江省紹興市科技局基金項(xiàng)目資助（2013B70078）

浙江省紹興市人民醫(yī)院1.消化內(nèi)科;2.神經(jīng)內(nèi)科;3.中心實(shí)驗(yàn)室（紹興 312000）

張曉蘋，E-mail：xpzhang_sx@126.com