揮發(fā)酚實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)
——氯仿萃取4-氨基安替吡啉

秦林強(qiáng) 鄭平杰 蔣長浩 儲(chǔ)德軍（高郵港郵供水有限公司，江蘇 高郵 225600）

揮發(fā)酚實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)
——氯仿萃取4-氨基安替吡啉

秦林強(qiáng) 鄭平杰 蔣長浩 儲(chǔ)德軍（高郵港郵供水有限公司，江蘇 高郵 225600）

用GB/T5750.4-2006(9.1)4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法檢測水樣中的揮發(fā)酚，運(yùn)用三氯甲烷萃取提純4-氨基安替吡啉溶液，可有效地降低空白值，使其符合國標(biāo)要求，且操作方便、簡單，使用的試劑污染小，相關(guān)線性、準(zhǔn)確度、精密度均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

揮發(fā)酚，三氯甲烷，4-氨基安替吡啉，萃取水中酚類屬有毒物質(zhì)，水體中本身含酚較少，超標(biāo)多是由于化工原料或廢液的泄露排放造成水體的污染從而引發(fā)各種疾病，同時(shí)含酚濃度高的廢水不宜用于農(nóng)田灌溉。揮發(fā)酚是水和廢水例行監(jiān)測工作中的必測項(xiàng)目之一。在我國，根據(jù)國標(biāo)5750-2006方法中規(guī)定，采用4-氨基安替吡啉分光光度法測定水中酚含量，該法在技術(shù)較為經(jīng)典可信，但在實(shí)際操作過程中存在許多問題，經(jīng)常出現(xiàn)空白值遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出允許值，從而影響其精密度、準(zhǔn)確度。雖說空白值與多方面的因素有關(guān)，而4-氨基安替吡啉無疑是最為主要的影響因素，受氧化影響，本試劑極易形成安替吡啉紅，從而使得空白值過高，基于此必須做提純處理[1]。本法建議用三氯甲烷（優(yōu)級(jí)純）萃取4-氨基安替吡啉，以達(dá)到提純的目的。

標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法感官性狀和物理指標(biāo)》GB/T5750.4-2006（9.1）、《水質(zhì)揮發(fā)酚的測定蒸餾后4-氨基安替吡啉分光光度法》GB/T7490-1987。

適用范圍：《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法感官性狀和物理指標(biāo)》GB/T5750.4-2006(9.1)適用于生活飲用水及其水源水中揮發(fā)性酚類化合物的測定[2]。

檢測濃度：《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)法感官性狀和物理指標(biāo)》GB/T5750.4-2006(9.1)最低檢測質(zhì)量為0.5μg酚。取水樣250ml，那么相應(yīng)的最低檢測質(zhì)量濃度應(yīng)該是0.002mg/L酚(以苯酚計(jì))。

測定原理：引用GB/T5750.4-2006中揮發(fā)性分類化合物的測定。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

本法所用純水為密理博純水儀制備，電阻率18.2MΩ/L；

CHCL3：解析純：CuSO4·5H2O(100g/L)：在100ml純水中加入硫酸銅（10克），此溶液有效期1年；氨水-氯化銨緩沖溶液(PH 9.8)：稱取20g氯化銨(NH4C1)溶于100 ml氨水(ρ20=0.88g/ml)中，此溶液有效期6個(gè)月；4-氨基安替吡啉溶液(20g/L)：在純水中，置入4-AAP，C10H13ON3（2.0g），同樣的要稀釋到100ml，將其存放于棕色瓶子之中，臨用時(shí)現(xiàn)配為佳；K3Fe(CN)6(80g/L)：稱取8.0g鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]，溶于純中，并稀釋至100ml，儲(chǔ)于棕色瓶中，臨用時(shí)配制；硫酸溶液(1+9)，此溶液有效期1年；酚標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心提供GBW(E)080241，濃度1000mg/L；酚標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：根據(jù)需要吸取酚標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液10 ml稀釋到100 ml，濃度為100mg/L，此溶液冷藏保存有效期6個(gè)月，再吸取該溶液10ml稀釋到1000ml，濃度為1.00mg/L。此溶液冷藏保存有效期1個(gè)月；7230G型分光光度計(jì)；250ml、500ml分液漏斗；500ml全玻璃蒸餾器；10ml具塞比色管；250ml，1000ml容量瓶；250ml量筒。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 水樣的采集和保存：

參考GB5750.02-2006中揮發(fā)酚的采集和保存。

1.2.2 水樣處理：

用量杯量取水樣250ml，并將水校放入全玻璃蒸餾瓶之中（500ml），將25ml純水加入蒸餾瓶之中。本環(huán)節(jié)中的指示劑為甲基橙，利用硫酸溶液調(diào)整PH值，使其為4。此時(shí)水樣逐漸變成橙色（之前為桔黃色）。同時(shí)加入玻璃珠與CuSO4·5H2O（5ml），蒸餾，直到形成餾出液（250ml）時(shí)，停止蒸餾。在水蒸汽的作用下，酚會(huì)以非常緩慢的速度揮發(fā)，要求所收集到的餾出液與原水樣必須具有同等的體系。通過研究試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)兩者的體系并不一致，即會(huì)對(duì)回收率造成一定影響。

注：不得用橡膠塞、膠皮管連接蒸餾瓶及冷凝器，否則可能出現(xiàn)干擾，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。

1.2.3 4-氨基安替吡啉溶液提純：

配制好100ml，20g/L4-氨基安替吡啉溶液后，將其倒入250ml分液漏斗中，用刻度吸管吸取10ml三氯甲烷，放入分液漏斗中，充分震蕩，靜置，棄去下層三氯甲烷溶液。

1.2.4 比色測定

①.把所有的水樣餾出液倒入分液漏斗之中（500ml）。分別取酚標(biāo)準(zhǔn)液即0.00，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00和10.0ml，同時(shí)將上述標(biāo)準(zhǔn)液倒乘有純水（100ml）的分液漏斗之中，并加入純水，最后溶液為250ml。

②.依將將氨水-氯化銨緩沖液（2ml）加入至所有分液漏斗之中，并使其混合均衡，此后又加入4-氨基安替吡啉溶液（指的是經(jīng)過三氯甲烷提純過，加入量為1.5ml，最后還要加入K3[Fe (CN)6]（1.5ml）溶液，并充分?jǐn)嚢杈?，最后靜放10分鐘。加入氯仿（10.0ml），需振搖兩分鐘，靜置使其分層。將棉花塞至分液漏斗之中，緩慢的將氯仿提取液放到干燥比色管之中，在460nm波長，結(jié)合分光光度計(jì)，參照比色皿，以氯仿為參照物，最后測定出吸光度。

③.從繪制的工作曲線上查出酚的質(zhì)量濃度。

2 結(jié)果和討論

配制四組曲線，其濃度與吸光度值關(guān)系如下表（單位：mg/L）

2.1 繪制吸光度對(duì)苯酚含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定結(jié)果如下圖

濃度：0、0.002、0.004、0.008、0.016、0.024、0.032、0.040；

吸光度：

0.039 、0.061、0.080、0.118、0.189、0.276、0.339、0.420

0.041 、0.072、0.091、0.129、0.211、0.281、0.369、0.451

0.036 、0.052、0.071、0.109、0.179、0.262、0.324、0.406

0.046 、0.072、0.088、0.126、0.189、0.264、0.336、0.412

四組吸光度對(duì)應(yīng)的R2分別是0.9992、0.9991、0.9993、0.9993滿足相關(guān)質(zhì)控要求，且空白值吸光度較低，均低于0.50，比未經(jīng)三氯甲烷萃取的空白值明顯下降，且符合國標(biāo)低于0.80的標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.2 質(zhì)控分析

（1）盲樣及平行

取中國環(huán)境監(jiān)測總站的揮發(fā)酚標(biāo)準(zhǔn)樣GSB 07-3180-2014 (200348)[(61.1±4.3)μg/L]10 mL，稀釋至1000 mL容量瓶中，每次取250 mL標(biāo)樣到500 mL的錐形分液漏斗中，測定3次，分析步驟如上所述，（控制好20g/L4-氨基安替吡啉溶液的體積與三氯甲烷萃取液的體積比為10:1）。

三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為0.0605、0.0613、0.0602，盲樣結(jié)果均在合格范圍內(nèi)，準(zhǔn)確度較高。

對(duì)三次測定的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，得其平均值為`x= 0.0607 mg/L，其標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）為0.57%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為9.39%，精密度較好。

（2）加標(biāo)回收

配制加標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)液為配制曲線用的標(biāo)準(zhǔn)GBW(E)080241（15114）[1000mg/L]，取10mL標(biāo)準(zhǔn)液定容至1000ml容量瓶中，配制成10mg/L的中間液，再從中間液中移取10ml定容至100ml容量瓶中，配制成1.00mg/L濃度的使用液。以原水作為本底，移取2.00ml，5.00ml的使用液，分別放入兩個(gè)1000ml容量瓶中，用原水定容至刻度線。配制成濃度為0.002mg/L和0.005mg/L的加標(biāo)量。每個(gè)加標(biāo)量平行測定三次，結(jié)果如下：0.002mg/L：0.00189、0.00193、0.00186，0.005mg/L：0.00488、0.00495、0.00490，加標(biāo)濃度為0.002mg/L的回收率分別為94.5%，96.5%，93.0%，加標(biāo)濃度為0.005mg/L的回收率分別為97.6%，99.0%，98.0%，回收率較好，均能控制在90%—110%，滿足國標(biāo)要求。

上述研究即可充分說明了，在測定樣品時(shí)，使用三氯甲烷萃取的4-氨基安替吡啉不會(huì)對(duì)測試的精密度、準(zhǔn)確度產(chǎn)生影響，而且滿足實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)控要求。

3 結(jié)語

測定水樣中的揮發(fā)酚時(shí)，常會(huì)遇到由于純水的質(zhì)量及各種試劑純度的影響，經(jīng)常出現(xiàn)一種現(xiàn)象，即空白值已經(jīng)超出了允許值范圍，而這樣一來其精密度、準(zhǔn)確度等都將受影響，而其中4-氨基安替吡啉無疑質(zhì)量無疑是最為主要的影響因素，受氧化影響，本試劑極易形成安替吡啉紅，從而使得空白值過高，正是因?yàn)檫@樣，所以有必要做提純處理。文獻(xiàn)[3]中的所使用的是苯提純，但實(shí)驗(yàn)操作中發(fā)現(xiàn)，該方案在操作結(jié)果上同樣可以降低4-氨基安替吡啉空白值濃度，但是比較三氯甲烷的萃取方法，苯有毒，容易形成二次污染。筆者認(rèn)為測定揮發(fā)酚用三氯甲烷預(yù)先萃取4-氨基安替吡啉溶液，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

①利用分光光度法，萃取4-氨基安替吡啉，檢測水樣揮發(fā)酚。通過此法，能夠?qū)⒖罩到档阶畹偷姆秶畠?nèi)，從而得出更為準(zhǔn)確的標(biāo)樣，具有良好的精密度，除此之外，還兼具萃取方便、無污染等特點(diǎn)。

②可得出更為精準(zhǔn)的測定標(biāo)準(zhǔn)樣品，具有較高的精密度。

③在具體配制本溶液時(shí)一業(yè)要注意適量，在三氯甲烷萃取后，放置時(shí)間過長會(huì)導(dǎo)致空白值升高，因此建議臨用時(shí)現(xiàn)配，以保證試劑純度。

④在具體萃取時(shí)要合理控制量，一次性量不能過多，控制好4-氨基安替吡啉溶液（20g/L）的體積與三氯甲烷萃取液的體積比為10:1為宜。

[1]鄭紅等.揮發(fā)酚測定中降低空白值方法的探討[N].海南大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版，2003.

[2]GB/T5749-2006生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S]，GB/T5750-2006生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法[S]。

[3]國家環(huán)保局水和廢水監(jiān)測分析方法(第3版)[M].北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社，1989.407-412

秦林強(qiáng)（1981-），男，江蘇省高郵市人，民族：漢，職稱：助工，學(xué)歷：本科。研究方向：檢測。