試以“中藥復(fù)方循證生物系統(tǒng)研究策略”闡述當(dāng)歸補(bǔ)血湯心臟保護(hù)的研究設(shè)想

閆奎坡，朱翠玲，孫彥琴，朱明軍，高 原，李 彬

·臨床醫(yī)學(xué)論著·

試以“中藥復(fù)方循證生物系統(tǒng)研究策略”闡述當(dāng)歸補(bǔ)血湯心臟保護(hù)的研究設(shè)想

閆奎坡，朱翠玲，孫彥琴，朱明軍，高 原，李 彬

“中藥復(fù)方循證生物系統(tǒng)研究策略(Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy，CHCF-EB-BRS)”是從中醫(yī)古醫(yī)籍、系統(tǒng)評(píng)價(jià)、質(zhì)量控制、臨床辨證治療療效評(píng)價(jià)、物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制等多層次對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行研究，充分闡明中藥復(fù)方的整體療效學(xué)、療效學(xué)機(jī)制及物質(zhì)成分的一種研究方法。本研究提出假說，擬在CHCF-EB-BRS策略指導(dǎo)下闡明當(dāng)歸補(bǔ)血湯對(duì)心肌缺血的多方面療效學(xué)研究、機(jī)制研究、物質(zhì)基礎(chǔ)的思路、設(shè)想及預(yù)期結(jié)果，從而指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步開展，以期為中藥復(fù)方研究提供一種思路。

中藥復(fù)方；循證醫(yī)學(xué)；生物系統(tǒng)研究策略；當(dāng)歸補(bǔ)血湯；心臟保護(hù)

Absract：Chinese herbal compound formula (CHCF) are widely used in clinic，with the development of evidence-based medicine，it has put forward a new challenge on Chinese herbal compound formula (CHCF).It has become a strategic planning to further research and develop CHCF，provide sufficient curative evidence，promote the modernization of traditional Chinese medicine，promote Chinese medicine culture，extend CHCF to the world.In this paper，the author put forward Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy (CHCF-EB-BRS)，which conducts multi-level study of CHCF from ancient medical books，system evaluation and analysis，quality control，clinical dialectical treatment curative effect evaluation，material basis and mechanism and so on.In order to reveal the material basis for the efficacy of CHCF and the related mechanism，finally to solve the bottleneck of the study of CHCF and provide a reference.CHCF clinical efficacy is verified multiply from ancient medical books，system evaluation and analysis，clinical study，furthermore，use a good quality control of CHCF for laboratory and clinical research.Various research levels of the strategy has been widely implemented in the basic and clinical research，but still lack of a systematic study of some CHCF.The proposed method is helpful to the further research on the development of traditional Chinese medicine.

“中藥復(fù)方循證生物系統(tǒng)研究策略”(Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy，CHCF-EB-BRS)”是閆奎坡、朱翠玲、朱明軍等提出的一種用于全面解釋中藥復(fù)方臨床療效的一種研究方法，具體研究方法見圖1[1]。中藥復(fù)方(Chinese herbal compound formula，CHCF)，作為中醫(yī)臨床治療疾病的主要工具與手段，是中醫(yī)用藥的基本形式，其臨床療效經(jīng)過幾千年的實(shí)踐已毋庸置疑[2-3]。循證醫(yī)學(xué)(evidence-based medicine，EBM)的快速興起及醫(yī)療模式的轉(zhuǎn)換，使CHCF的廣泛推廣遇到瓶頸[1，3]，同時(shí)，中醫(yī)藥學(xué)屬于復(fù)雜性科學(xué)(complexity science)[1]，中藥復(fù)方的療效究竟是由什么成分引起的？一直是中醫(yī)藥學(xué)術(shù)界長期存在的問題[2]，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是中藥復(fù)方研究的核心之一[2]。如何進(jìn)一步開展CHCF的研究和開發(fā)，提供充足的療效證據(jù)，促進(jìn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化，推廣CHCF至全球，為全世界人民服務(wù)已成為當(dāng)務(wù)之急。

CHCF-EB-BRS研究策略在此背景下產(chǎn)生的，本研究擬采用該研究策略闡明當(dāng)歸補(bǔ)血湯(Dangui-Buxue Tang，DBT)心臟保護(hù)的療效機(jī)制及物質(zhì)基礎(chǔ)。

圖1 CHCF-EB-BRS指導(dǎo)下CHCF質(zhì)量控制及在體研究策略流程圖

1 當(dāng)歸補(bǔ)血湯及其對(duì)冠心病的治療簡介

當(dāng)歸補(bǔ)血湯出自《內(nèi)外傷辨惑論》，由李東垣(金元時(shí)代)創(chuàng)制，黃芪和當(dāng)歸兩味藥以5∶1組成的，具有益氣生血活血功效[4-5]。冠心病屬于中醫(yī)“血瘀證”范疇，氣虛血瘀是其根本的病理改變，因之而產(chǎn)生的益氣活血法是治療冠心病的指導(dǎo)原則。當(dāng)歸補(bǔ)血湯能增強(qiáng)心肌收縮力，降低心肌耗氧量，以防止或減輕心肌損傷[6]。通過抑制血小板的聚集，可預(yù)防血栓的形成；通過降低血液黏度，加快血流，可改善血液對(duì)全身組織器官的供應(yīng)；當(dāng)歸補(bǔ)血湯具有降脂、抗氧化應(yīng)激，抗動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)的作用[7]。

2 益氣活血法(當(dāng)歸補(bǔ)血湯)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)

冠心病屬于中醫(yī)胸痹之范疇，臨床治療多以行氣活血、豁痰泄?jié)?、益氣養(yǎng)陰、溫陽通痹為法。近年來根據(jù)氣血相關(guān)理論，認(rèn)為氣虛血瘀是冠心病的主要病機(jī)，益氣活血法是中醫(yī)治療冠心病的基本治則。以益氣活血法為主治療冠心病已取得一定進(jìn)展。當(dāng)歸補(bǔ)血湯屬于益氣活血的經(jīng)典方劑，文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)益氣活血法大部分方藥均包含當(dāng)歸、黃芪兩味中藥，即使用了當(dāng)歸補(bǔ)血湯。目前的研究表明益氣活血法可以治療冠心病心絞痛、心肌梗死、冠心病心功能不全、嚴(yán)重的缺血型心肌病、冠脈支架術(shù)后再狹窄等，均發(fā)揮了重要的臨床作用。

3 當(dāng)歸補(bǔ)血湯化學(xué)成分組成及質(zhì)量控制

基礎(chǔ)研究表明[6，8-10]，當(dāng)歸補(bǔ)血湯主要由當(dāng)歸補(bǔ)血湯多糖組分、當(dāng)歸補(bǔ)血湯非多糖組分、黃芪多糖、黃芪甲苷、黃芪異黃酮、黃芪異黃烷、黃芪皂苷、當(dāng)歸多糖、阿魏酸組成。同時(shí)還有更詳細(xì)的研究當(dāng)歸補(bǔ)血湯所含化學(xué)成分。黃酮苷類包括毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷、芒柄花素、刺芒柄花素苷、9，10-二甲氧基紫檀烷3-O-B-葡萄糖苷、5，7-二羥基-4，-甲氧基異黃酮；氨基酸類包括苯丙氨酸和色氨酸；有機(jī)酸包括綠原酸、異綠原酸、香草酸、阿魏酸和壬二酸。但是這些研究并沒有明確其活性成分?，F(xiàn)研究認(rèn)為[6，8-10]黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、芒柄花素、阿魏酸、藁本內(nèi)酯是當(dāng)歸補(bǔ)血湯的主要活性成分，是目前當(dāng)歸補(bǔ)血湯的主要質(zhì)量控制指標(biāo)。

中藥湯劑延續(xù)千年，本研究采用湯劑作為質(zhì)量控制(quality control，QC)標(biāo)準(zhǔn)。首先是藥物的選擇，經(jīng)藥品專家鑒定，藥物按照經(jīng)典方劑的比例進(jìn)行搭配，藥物煎煮之前的處理、浸泡、煎煮時(shí)間等，當(dāng)歸補(bǔ)血湯可依據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行[2]，最終得到湯劑或者制備凍干粉等。之后對(duì)藥物進(jìn)一步處理，并對(duì)其質(zhì)控成分進(jìn)行定性和定量的檢測(cè)。中醫(yī)藥質(zhì)量控制在保證中藥的質(zhì)量，達(dá)到預(yù)期的療效，確保藥效及安全方面發(fā)揮了關(guān)鍵的作用。

4 BAP指導(dǎo)當(dāng)歸補(bǔ)血湯在體、離體研究

當(dāng)歸補(bǔ)血湯的心臟保護(hù)作用研究按照?qǐng)D1的流程圖(包括了當(dāng)歸補(bǔ)血湯的QC部分)進(jìn)行。CHCF-EB-BRS應(yīng)用的3個(gè)主要要點(diǎn)是：方劑成分在血中的測(cè)量、吸收成分與母方療效的比較、吸收成分劑量等于母方中的量[2]。方劑ABC在血中的定量：一般在研究方劑整體藥效的同時(shí)，利用UPLC、LC-MS-MS等儀器同步測(cè)定口服方劑后血中吸收的化學(xué)成分，明確方劑吸收入體內(nèi)成分是BAP研究的前提與指導(dǎo)思想；吸收成分劑量等于母方中的量，該要點(diǎn)是CHCF-EB-BRS指導(dǎo)DBT在體研究的關(guān)鍵，由圖1可以看出，DBT質(zhì)量控制的5種成分對(duì)急性缺血大鼠的劑量等于DBT母方的含量，只有這樣才能充分體現(xiàn)劑量和母方含量的關(guān)系；吸收成分的療效最終和母方療效進(jìn)行比較，因?yàn)橹挥型ㄟ^比較才能發(fā)現(xiàn)吸收成分療效是否可以代表母方的療效。DBT及其ABC心臟保護(hù)作用的在體研究，選擇經(jīng)典的冠脈結(jié)扎導(dǎo)致急性缺血的心肌梗死模型，同時(shí)選用公認(rèn)的整體和組織水平療效評(píng)估(如大鼠狀態(tài)、TTC標(biāo)記心肌梗死面積等)、分子層面的療效評(píng)估(如炎癥因子、凋亡指標(biāo)、mRNA等)，做到多層面炎癥ABC和母方的療效。

CHCF-EB-BRS、指導(dǎo)DBT離體研究策略，筆者僅以DBT及其活性成分對(duì)大鼠原代細(xì)胞的干預(yù)予以說明。由于傳統(tǒng)中藥復(fù)方湯劑中重金屬、其他藥物污染、電解質(zhì)等造成的粗制劑，直接進(jìn)行細(xì)胞干預(yù)，即使殺毒、滅菌后可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果[2]。按照BAP策略，能夠揚(yáng)長避短，藥效學(xué)物質(zhì)明確后，基本代表母方的療效；離體實(shí)驗(yàn)分析的藥物成分得到精簡；藥效學(xué)物質(zhì)是吸收入體內(nèi)的成分(藥效成分的直接證據(jù))；不存在內(nèi)源與外源性干擾。同時(shí)還可以參考血藥濃度范圍進(jìn)行研究，亦可采用ABC療效和血清藥效學(xué)比較的模式研究。

5 結(jié) 語

CHCF作為中醫(yī)臨床治療疾病的主要工具與手段，是中醫(yī)用藥的基本形式，其臨床療效經(jīng)過幾千年的實(shí)踐已毋庸置疑。但是，在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科研水平如此高度發(fā)達(dá)的今天，仍以“君臣佐使、四氣五味、升降沉浮”等抽象的傳統(tǒng)中醫(yī)理論，不從方劑產(chǎn)生療效的物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制來解釋方劑及其配伍規(guī)律，就很難被現(xiàn)代醫(yī)學(xué)所接受[2]。CHCF的“藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確”正是中醫(yī)藥現(xiàn)代化及中醫(yī)藥走向世界亟待解決的關(guān)鍵問題和制約瓶頸[2]。因?yàn)镃HCF的藥效物質(zhì)不清楚，難以制訂科學(xué)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，難以獲得可重復(fù)療效，存在用藥安全隱患。雖個(gè)別CHCF初步闡明藥效物質(zhì)，但研究還不夠深入，十萬個(gè)方劑的藥效物質(zhì)還是待研究的廣闊領(lǐng)域。如何揭開CHCF藥效學(xué)物質(zhì)的神秘面紗，讓中醫(yī)藥為全世界服務(wù)，成為所有中醫(yī)藥人的一個(gè)愿望。為此，筆者作為工作在中醫(yī)院一線的臨床醫(yī)師在全力研究CHCF的過程中，結(jié)合自己的臨床及研究歷程，同時(shí)參考了國內(nèi)外大量的研究報(bào)告，深入學(xué)習(xí)了流行病學(xué)、循證醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物系、中藥藥理學(xué)等多門課程，提出CHCF-EB-BRS策略，該策略從CHCF的古醫(yī)籍挖掘、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的循證評(píng)價(jià)到直接的臨床研究，確立某個(gè)復(fù)方的臨床療效，繼之開展多項(xiàng)基礎(chǔ)研究，從動(dòng)物研究到離體組織及細(xì)胞層面的研究，從而驗(yàn)證該方的臨床療效及療效基礎(chǔ)物質(zhì)。

CHCF-EB-BRS研究CHCF的策略正是在多年來復(fù)方研究的基礎(chǔ)上，吸取了中藥基本理論、藥理學(xué)、藥物制劑學(xué)、化學(xué)、分子生物學(xué)等研究成果，逐步發(fā)展起來的，已經(jīng)初步解決了部分中藥復(fù)方的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)其結(jié)構(gòu)、含量進(jìn)行了初步闡明，目前該策略正指導(dǎo)若干研究進(jìn)行中。

致謝：感謝我院2012級(jí)研究生李露露、豐俊鵬、左亞東、軒靜靜在文獻(xiàn)檢索方面的協(xié)助。

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(本文編輯王雅潔)

Assumption on the Cardioprotection of Danggui Buxue Decoction Based on Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy

Yan Kuipo，Zhu Cuiling，Sun Yanqin，Zhu Mingjun，Gao Yuan，Li Bin

The First Affiliated Hosipital，Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，Henan，China

Chinese herbal compound formula；evidence-based medicine；biosystem research strategy；Danggui Buxue decoction；cardioprotection

國家自然科學(xué)基金青年基金(No.81303073，81503419，81503435)；河南中醫(yī)學(xué)院省屬科研業(yè)務(wù)專項(xiàng)(No.2014KYYWF-YQ12)；河南中醫(yī)學(xué)院一附院院內(nèi)博士項(xiàng)目(No.2012KJ32)；河南省科技攻關(guān)重點(diǎn)項(xiàng)目(No.112102310317)；河南省高?？萍紕?chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃(No.13IRTSTHN012)；河南省中醫(yī)藥防治心血管疾病創(chuàng)新型科技團(tuán)隊(duì)(No.C20130050)；河南省科技攻關(guān)計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(No.142102310289)

河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院(鄭州 450008)

朱翠玲，E-mail：zhudaifu666@hotmail.com

R289.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.03.002

1672-1349(2017)03-0264-04

2016-08-20)

引用信息：閆奎坡，朱翠玲，孫彥琴，等.試以“中藥復(fù)方循證生物系統(tǒng)研究策略”闡述當(dāng)歸補(bǔ)血湯心臟保護(hù)的研究設(shè)想[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(3)：264-267.