黃芪生脈速溶片的制備和評價

楊 燕，沈悅敏，徐友江，單偉光

(1.浙江工業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，浙江 杭州 310014；2.浙江新光藥業(yè)，浙江 嵊州 312400)

黃芪生脈速溶片的制備和評價

楊 燕1，沈悅敏1，徐友江2，單偉光1

(1.浙江工業(yè)大學(xué) 藥學(xué)院，浙江 杭州 310014；2.浙江新光藥業(yè)，浙江 嵊州 312400)

采用減壓干燥法制備黃芪生脈(HQSM)速溶片并進行質(zhì)量評價.以膨脹率和溶解時間為指標，優(yōu)化處方工藝；以內(nèi)皮細胞損傷模型評價HQSM速溶片的內(nèi)皮細胞保護作用；以HPLC法研究HQSM速溶片的主要成份.結(jié)果表明：稀釋劑種類和質(zhì)量分數(shù)、預(yù)制片壓縮程度和真空度等因素顯著影響膨脹率和溶解時間；HQSM速溶片的水溶液具有抗內(nèi)皮細胞損傷作用，質(zhì)量濃度越大，作用越明顯；HQSM速溶片含黨參炔苷、五味子醇甲和原兒茶酸等成份.HQSM速溶片工藝簡單，溶解迅速，有明顯活性，含多種有效成份，具有良好的開發(fā)前景.

黃芪生脈；速溶片；減壓干燥；內(nèi)皮細胞保護

中藥速溶片能在少量水中迅速溶解得到澄明溶液，具有貯存穩(wěn)定，使用方便等優(yōu)點，應(yīng)用前景廣闊.但中藥復(fù)方存在劑量大，成份復(fù)雜，吸濕嚴重等問題，制備速溶片困難重重[1].現(xiàn)有研究主要集中在篩選高效崩解體系和避免生產(chǎn)過程引濕等方面.胡容峰等[2]以微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉和糊精為輔料，干法壓片制備復(fù)方丹參口腔速溶片，優(yōu)化處方的崩解時間為53 s，主要有效成分丹參酮的溶出速度參數(shù)T50=3.5 min.陳三寶[3]以西洋參提取物為原料，以羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素和低取代羥丙基纖維素為聯(lián)合崩解劑，以甘露醇為稀釋劑，制備西洋參口腔速溶片，崩解時間小于60 s，口感良好.林茵等[4]以黃芪有效部位提取物為原料，以明膠作為主要掩味材料，以甘露醇和甜蜜素為輔助矯味劑，以交聯(lián)羧甲纖維素鈉為崩解劑，直接壓片制備黃芪有效部位口腔速崩片.所得片劑30 s內(nèi)完全崩解，3 min釋藥85%以上.上述中藥速溶片的主要釋藥機理都是崩解，但因為崩解劑難溶于水，不可避免有沙礫感，并影響溶液的澄明度.

黃芪生脈(HQSM)是以黃芪、黨參、麥冬、五味子和南五味子為原料，提取濃縮得到的中藥復(fù)方提取物.HQSM口服液，具有益氣滋陰，養(yǎng)心補肺的功效，用于治療氣陰兩虛，心悸氣短的冠心病，具有良好的臨床療效[5-6].本課題擬以HQSM為原料，選擇水溶性輔料，采用新型減壓膨脹法制備HQSM速溶片，旨在研究處方工藝因素對高孔隙率速溶片的影響，并考察其用于制備中藥復(fù)方速釋制劑的可行性.

1 材料和儀器

HQSM濃浸膏(浙江新光藥業(yè)，No.20151117)；黨參炔苷對照品(上海金穗生物，No.20150909)；五味子醇甲對照品(上海金穗生物，No.20150730)；甘露醇(杭州普修生物)；乳糖(德國美劑樂)；糊精(杭州普修生物)；水溶性淀粉(安徽山河藥用輔料)；PEG 8000(陶氏化學(xué))；醋酸(分析純，上海凌峰化學(xué)試劑)；乙腈(色譜純，美國sigma)；人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs，中國科學(xué)院上海細胞庫)；HCY試劑(美國sigma)；RPMI-1640培養(yǎng)液(吉諾生物醫(yī)藥)；胎牛血清(賽默飛世爾)；噻唑藍(MTT，美國sigma).

高效液相色譜(1200，美國安捷倫)；真空干燥箱(DZF-6020，上海精宏)；低溫高速臺式離心機(17R，賽默飛世爾)；酶標儀(VersaMax，美國Molecular Devices)；CO2細胞培養(yǎng)箱(180-250，賽默飛世爾).

2 方 法

2.1 HQSM速溶片的制備

取處方量的HQSM濃浸膏(水份質(zhì)量分數(shù)為30%)和稀釋劑，混合均勻制備濕料.將濕料切成等體積小塊(約200 mg)，裝入自制模具的圓形?？?直徑7.0 mm)，壓制成一定高度圓柱狀預(yù)制片.將預(yù)制片置于減壓干燥器中，于45 ℃，不同真空度條件下干燥30 min，得到HQSM速溶片.

2.2 膨脹率和溶解時間的測定

游標卡尺測定預(yù)制片干燥前后的直徑和高，膨脹率P計算式為

(1)

式中：R0和R為預(yù)制片干燥前后的直徑；H0和H為預(yù)制片干燥前后的高.

學(xué)校是兒童學(xué)習(xí)的場所，學(xué)校教育是兒童接受教育必不可少的要素。關(guān)于鄉(xiāng)村小學(xué)應(yīng)肩負的重要使命，林春生在《抗戰(zhàn)期中的鄉(xiāng)村小學(xué)》中提出了“鄉(xiāng)村小學(xué)要與地方領(lǐng)袖合作，竭力協(xié)助完成軍事計劃；組織與訓(xùn)練青年；對鄉(xiāng)村民眾灌輸愛國愛民的民族思想和戰(zhàn)時常識；設(shè)法提高農(nóng)村的戰(zhàn)時生產(chǎn)。”［10］

將HQSM速溶片置于200 mL去離子水(37 ℃)中，完全分散的時間計為溶解時間.

2.3 內(nèi)皮細胞保護效果評價

HUVEC細胞用10%胎牛血清的RPML-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，以每孔150 μL(8 000個細胞)懸液接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h.加入50 μL的HCY水溶液(16 mmol/L)，培養(yǎng)5 d，MTT法檢測細胞活力(D)[7]，以加相應(yīng)溶劑的細胞為空白組，細胞存活率計算式為

(2)

陰性對照：HCY模型組，HCY的最終濃度為4 mmol/L.實驗組：HCY(4 mmol/L)+ HQSM速溶片低中高質(zhì)量濃度的水溶液(1,10,100 μg/mL).培養(yǎng)5 d，MTT法測定細胞活力，以加相應(yīng)溶劑的細胞為空白組，按式(2)計算細胞存活率.統(tǒng)計學(xué)分析，評價實驗組結(jié)果與陰性對照組之間是否存在顯著性差異.

2.4 成份研究

精密稱取1.16 mg原兒茶酸對照品，1.05 mg黨參炔苷對照品和1.24 mg五味子醇甲對照品，分別置于5 mL容量瓶中，加甲醇超聲定容，得到相應(yīng)儲備液.精密移取200 μL原兒茶酸儲備液，800 μL黨參炔苷儲備液和300 μL五味子醇甲儲備液，于容量瓶中混合搖勻，即得混合對照品溶液.

取三片HQSM速溶片粉碎，精密稱取300 mg細粉于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，過濾，濾液揮干，用200 μL流動相復(fù)溶，離心，即得供試品溶液.

HPLC色譜條件[8]：依利特C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相A乙腈-B 0.1%醋酸水溶液.梯度洗脫：0～25 min，8%～12%A；25～40 min，12%～30%A；40～55 min， 30%～100%A；55～60 min，100%A；檢測波長254 nm；流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃；進樣量10 μL.

3 結(jié)果和分析

3.1 稀釋劑種類對膨脹率和溶解時間的影響

固定預(yù)制片中稀釋劑質(zhì)量分數(shù)為75%，研究稀釋劑種類的影響(圖1).結(jié)果表明：甘露醇為稀釋劑時膨脹率最高，溶解最迅速.乳糖、糊精、水溶性淀粉和PEG 8000為稀釋劑時，預(yù)制片均有一定的膨脹性，溶解時間略延長，但都小于60 s.膨脹性和溶解性的差異可能與稀釋劑本身的密度、成型性和水溶性等有關(guān).甘露醇是冷凍干燥[9]和噴霧干燥[10]常用的賦形劑，也同樣適用于本實驗.

A—甘露醇；B—乳糖；C—糊精；D—水溶性淀粉；E—PEG 800圖1 稀釋劑種類對膨脹率和溶解時間的影響Fig.1 The effect of diluents on expansivity and dissolution time

3.2 稀釋劑質(zhì)量分數(shù)對膨脹率和溶解時間的影響

以甘露醇為稀釋劑，研究稀釋劑質(zhì)量分數(shù)的影響(圖2).結(jié)果表明：稀釋劑為67.5%時，濕料過濕，預(yù)制片成型困難，無法得到片型產(chǎn)品.稀釋劑為70%～77.5%時，預(yù)制片在減壓干燥過程中可產(chǎn)生不同程度的膨脹；稀釋劑為75%時，膨脹率最大，溶解速度最快；稀釋劑為80%時，幾乎無膨脹，溶解時間也很長.這種現(xiàn)象的可能原因是稀釋劑質(zhì)量分數(shù)的變化導(dǎo)致預(yù)制片中水份和粘性成份的質(zhì)量分數(shù)隨之發(fā)生變化；只有水份質(zhì)量分數(shù)和體系粘度適宜時，快速減壓引起的水份瞬間蒸發(fā)才能形成高孔隙率且不會坍塌的骨架.

圖2 稀釋劑質(zhì)量分數(shù)對膨脹率和溶解時間的影響Fig.2 The effect of diluents content on expansivity and dissolution time

3.3 壓縮程度對膨脹率和溶解時間的影響

固定預(yù)制片的模具直徑為7 mm，調(diào)節(jié)預(yù)制片的壓縮高度，研究壓縮程度的影響(圖3).結(jié)果表明：壓縮過緊(片高4.75 mm)時，物料粘模，難以得到完整的預(yù)制片；壓縮程度在一定的范圍內(nèi)(片高4.75～5.75 mm)，預(yù)制片均有良好的膨脹率和速溶性；當片高為5.25 mm時體系的膨脹率最高，相應(yīng)的體系密度為0.99 g/cm3.

圖3 壓縮程度對膨脹率和溶解時間的影響Fig.3 The effect of compression degree on expansivity and dissolution time

3.4 真空度對膨脹率和溶解時間的影響

固定干燥溫度為45 ℃，研究真空度的影響(圖4).結(jié)果表明：真空度越小膨脹率越大，溶解時間越快.當真空度為0.01 atm時，預(yù)制片的膨脹最為明顯，溶解時間也最快.這可能與減壓干燥時真空度下降速度快，而熱能傳導(dǎo)速度慢有關(guān).當真空度為0.01 atm時，水的沸點僅為7 ℃，預(yù)制片在抽真空過程中就會因水氣瞬間蒸發(fā)而快速膨脹；當真空度提高至0.1 atm時，水的沸點上升至為45 ℃，水份完全蒸發(fā)需要依賴體系溫度緩慢上升；隨著真空度繼續(xù)提高，水份瞬間蒸發(fā)的能量下降，預(yù)制片的膨脹率也隨之下降，相應(yīng)的溶解時間延長.

圖4 真空度對膨脹率和溶解時間的影響Fig.4 The effect of vacuum degree on expansivity and dissolution time

3.5 優(yōu)化處方工藝

m(HQSM濃浸膏)∶m(甘露醇)=1∶3混合制濕料，切成200 mg小塊，壓制成預(yù)制片(直徑7 mm，高5.25 mm).置于0.01 atm，45 ℃的條件下進行減壓干燥30 min.優(yōu)化速溶片膨脹率為(128.6±13.8)%，溶解時間為(4.0±1.0) s,n=6.

3.6 內(nèi)皮細胞保護作用

HCY是血管疾病的獨立危險因子，高HCY血癥與動脈粥樣硬化形成之間存在病理學(xué)關(guān)聯(lián)[11].現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)丹皮酚[7]、鹽酸川芎嗪[12]和通心絡(luò)膠囊[13]均能對抗HCY誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞損傷，其機制可能與氧化應(yīng)激作用有關(guān).

由圖5可知：陰性對照的細胞存活率為68.1%，HCY誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷模型建立成功.經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，HQSM速溶片低中高劑量組(1，10，100 μg/mL)的細胞存活率與陰性對照組相比，均有顯著性差異(分別為P<0.05，P<0.01和P<0.001).說明HQSM速溶片溶液低中高質(zhì)量濃度的水溶液均有抗HCY誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞損傷作用，質(zhì)量濃度越大作用越明顯.內(nèi)皮細胞保護作用的研究，從細胞水平揭示了HQSM速溶片具有治療動脈粥樣硬化的潛力.

圖5 HQSM速溶片的內(nèi)皮細胞保護作用Fig.5 The endothelial cytoprotection activity of HQSM fast dissolving tablets

3.7 成份研究

由圖6可知：HQSM速溶片采用HPLC梯度洗脫可同時檢測到原兒茶酸、黨參炔苷和五味子醇甲等多種成份，此結(jié)果與生脈飲(黨參方)[8]和相關(guān)藥材[14]的檢測結(jié)果基本吻合，有助于后期的質(zhì)量標準建立.現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明：原兒茶酸對大鼠心肌缺血/再灌注損傷具有保護作用[15]；黨參皂苷的調(diào)血脂和抗氧化作用可能是治療動脈粥樣硬化的重要藥理學(xué)基本[16].五味子能改善心功能，增強心臟血管舒收力[17].進一步考察原兒茶酸、黨參炔苷和五味子醇甲的內(nèi)皮細胞保護活性，將有助于研究HQSM速溶片的作用機理，并為篩選科學(xué)的質(zhì)量控制指標提供實驗基礎(chǔ).另外，考慮到HQSM復(fù)方中成份復(fù)雜，后期擬結(jié)合多種檢測方法和來源探究[18-19]，開展系統(tǒng)的成份分析.例如：陳建真等[20]采用HPLC-DAD法從自制HQSM膠囊中分得16個特征峰，陸鋮等[21]采用HPLC法從市售HQSM口服液中測出五味子乙素、五味子酯甲、黨參炔苷和魯斯可皂苷元四種成份.

圖6 HPLC色譜圖及其成份Fig.6 HPLC chromatogram and the active ingredients

4 結(jié) 論

本課題利用HQSM浸膏高粘度的特性，調(diào)節(jié)處方工藝制備預(yù)制片，使其在減壓干燥條件下自行膨脹，形成高孔隙率的速溶片.本方法無需將中藥浸膏噴霧干燥制備浸膏粉，可節(jié)省大量能耗和輔料，并防止出現(xiàn)浸膏粉吸濕等問題，具有工藝簡便高效等優(yōu)點，為新型中藥復(fù)方速釋制劑的開發(fā)提供了有益的啟示.初步細胞藥效學(xué)和成份研究進一步證明了HQSM速溶片有內(nèi)皮細胞保護作用，含多種活性成份，具有良好的開發(fā)前景.

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Preparation and evaluation of Huang Qi Sheng Mai fast dissolving tablets

YANG Yan1, SHEN Yuemin1, XU Youjiang2, SHAN Weiguang1

(1.College of Pharmaceutical Science, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, China; 2.Zhejiang Xinguang Pharmaceutical Co., Ltd., Shengzhou 312400, China)

To prepare Huang Qi Sheng Mai (HQSM) fast dissolving tablets by vacuum drying method, and evaluate their properties. The expansivity and dissolution time were used as index to optimize the formulation and technology. The endothelial cytoprotection activity of tablets was evaluated using endothelial cells injured model. Active ingredients in tablets were investigated by HPLC. The results illustrated that diluents type, diluents content, compression extent and vacuum degree had a significant influence on the expansivity and dissolution time. Tablets solutions had endothelial cytoprotection activity, which was increased with the solution concentration. Lobetyolin, schisandrin and protocatechuic acid were found in tablets. HQSM fast dissolving tablets could be easily prepared and had significant advantages, such as fast dissolving, obvious activity and various active ingredients. It had a potential to be used in practice.

Huang Qi Sheng Mai; fast dissolving tablets; vacuum drying; endothelial cytoprotection

(責(zé)任編輯：劉 巖)

2016-04-27

浙江省博士后科研項目(BSH1502032)

楊 燕(1982—)，女，浙江湖州人，講師，博士，研究方向為藥劑學(xué)，E-mail:yangyan10@zjut.edu.cn.

R283.6

A

1006-4303(2017)01-0056-04