酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果對(duì)比分析

陳李好

【摘要】 目的：對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果進(jìn)行對(duì)比。方法：選擇196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本作為研究對(duì)象，分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb，并對(duì)兩種方法的檢測(cè)陽性率和HBsAb最低檢出結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果：196份標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，檢出HBsAb陽性標(biāo)本139份，陽性率為70.92%；經(jīng)微粒子酶免疫分析法檢測(cè)，檢出HBsAb陽性標(biāo)本157份，陽性率為80.10%。微粒子酶免疫分析法檢測(cè)陽性率較酶聯(lián)免疫吸附法高（P<0.05）。微粒子酶免疫分析法測(cè)定HBsAb濃度為14.1 IU/L時(shí)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)為陰性。結(jié)論：采取微粒子酶免疫分析法對(duì)HBsAb定量檢測(cè)，不但可在兒童乙肝疫苗接種后展開HBsAb濃度變化動(dòng)態(tài)觀察，進(jìn)而對(duì)免疫效果進(jìn)行判斷，且還能夠以HBsAb濃度變化來對(duì)再次免疫接種時(shí)間予以確定，對(duì)比酶聯(lián)免疫吸附法具有一定的優(yōu)勢(shì)。在今后的臨床檢驗(yàn)工作中，值得對(duì)其給予足夠的重視，并展開推廣，改善乙肝疫苗接種后免疫效果監(jiān)測(cè)工作質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 酶聯(lián)免疫吸附法； 微粒子酶免疫分析法； HBsAb； 定量檢測(cè)； 對(duì)比

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.33.024 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2016）33-0048-02

目前在國(guó)內(nèi)，大部分醫(yī)院的檢驗(yàn)科會(huì)采取酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)血清乙型肝炎表面抗原（HBsAg）以及乙型肝炎表面抗體（HBsAb）展開檢測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附法在檢驗(yàn)工作中，具有操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，但是值得注意的是，其靈敏度、重復(fù)性相對(duì)較差，很容易受到鉤狀效應(yīng)、標(biāo)本濃度等因素的影響，進(jìn)而出現(xiàn)假陰性結(jié)果，造成漏診或者是誤診[1]。近幾年，隨著科學(xué)技術(shù)的提高，微粒子酶免疫分析法問世，文獻(xiàn)[2]報(bào)道，微粒子酶免疫分析法在HBsAb檢測(cè)中，存在一定的優(yōu)勢(shì)。有研究表明兒童在接種乙肝疫苗后較成人更易產(chǎn)生乙型肝炎表面抗體[3]，本次研究中，出于對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果進(jìn)行對(duì)比的目的，對(duì)196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb，并對(duì)比分析結(jié)果，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究中資料來源于筆者所在醫(yī)院收集到的接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本，共選擇196份作為研究對(duì)象。標(biāo)本來源于123例女性和73例男性。標(biāo)本受試者均采取0、1、6個(gè)月3針的免疫程序接種乙肝疫苗。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 將選擇的196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法兩種不同的方法檢測(cè)HBsAb，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。

1.2.2 檢測(cè)方法 本次研究的檢測(cè)過程中所需要的儀器主要包括：Biocel l2010酶標(biāo)儀、美國(guó)雅培I2000全自動(dòng)免疫分析儀及其配套試劑、ELISA試劑盒（由廈門英科新創(chuàng)生物工程有限公司提供）及Biocel lA201洗板機(jī)。酶聯(lián)免疫吸附法：采取雙抗原夾心法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。微粒子酶免疫分析法：同樣采取雙抗原夾心法進(jìn)行。被測(cè)抗體與包被在微粒子上的抗原進(jìn)行充分的結(jié)合，然后將其與標(biāo)記堿性磷酸酶的抗原進(jìn)行充分的結(jié)合，ALP可對(duì)4-甲基傘形酮磷酸鹽產(chǎn)生催化作用，使其分解成為具有一定熒光性的物質(zhì)，熒光變化率水平與被測(cè)抗體的濃度水平呈現(xiàn)正比例關(guān)系，濃度測(cè)定結(jié)果超過10 IU/L時(shí)，視為檢測(cè)結(jié)果陽性，濃度測(cè)定結(jié)果不足10 IU/L時(shí)，視為結(jié)果陰性[4]。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

（1）觀察酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法兩種方法的檢測(cè)陽性率；（2）酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb最低檢出結(jié)果。取1份HBsAb陽性標(biāo)本，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法及微粒子酶免疫分析法測(cè)定3次，求得其檢測(cè)結(jié)果的平均值，倍比稀釋血清分別采取酶聯(lián)免疫吸附法及微粒子酶免疫分析法進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)檢測(cè)3次之后取平均值即得。HBsAb檢測(cè)結(jié)果陽性的判定標(biāo)準(zhǔn)包括：微粒子酶免疫分析法檢測(cè)結(jié)果達(dá)到10 IU/L以上，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)的樣本吸光度/CUTOFF值水平>1.0。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用SPSS 18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用字2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)結(jié)果比較

196份標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，檢出HBsAb陽性標(biāo)本139份，陽性率為70.92%；經(jīng)微粒子酶免疫分析法檢測(cè)，檢出HBsAb陽性標(biāo)本157份，陽性率為80.10%。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)出的陽性結(jié)果使用微粒子酶免疫分析法檢測(cè)均為陽性，微粒子酶免疫分析法檢測(cè)陽性率較酶聯(lián)免疫吸附法高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb最低檢出值比較

微粒子酶免疫分析法測(cè)定HBsAb濃度為14.1 IU/L及以下時(shí)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)為陰性，由此證實(shí)，微粒子酶免疫分析法對(duì)血清HBsAb定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性更高，可以對(duì)乙肝疫苗接種后免疫效果進(jìn)行反映，具體見表1。

3 討論

目前臨床上多采取酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)血清乙肝表面抗體進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)乙肝疫苗免疫效果進(jìn)行了解的目的。然而，實(shí)踐與研究發(fā)現(xiàn)，這一操作比較繁瑣，重復(fù)性相對(duì)較差，檢測(cè)所需時(shí)間較長(zhǎng)，無法對(duì)體內(nèi)HBsAb展開定量檢測(cè)。近期文獻(xiàn)[5]報(bào)道發(fā)現(xiàn)，微粒子酶免疫分析法在HBsAb定量分析中，具有快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高等諸多優(yōu)勢(shì)。

本次研究中，出于對(duì)酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb的臨床效果進(jìn)行對(duì)比的目的，對(duì)196份接種乙肝疫苗后血清標(biāo)本分別采取酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb，并對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，196份標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，檢出HBsAb陽性標(biāo)本139份，陽性率為70.92%；經(jīng)微粒子酶免疫分析法檢測(cè)，檢出HBsAb陽性標(biāo)本157份，陽性率為80.10%，且經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)出的陽性結(jié)果使用微粒子酶免疫分析法檢測(cè)均為陽性，微粒子酶免疫分析法檢測(cè)陽性率較酶聯(lián)免疫吸附法高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。另外，通過酶聯(lián)免疫吸附法與微粒子酶免疫分析法檢測(cè)HBsAb最低檢出值分析，微粒子酶免疫分析法測(cè)定HBsAb濃度為14.1 IU/L時(shí)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)為陰性。由此證實(shí)，微粒子酶免疫分析法對(duì)血清HBsAb定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性更高，可以對(duì)乙肝疫苗接種后免疫效果進(jìn)行反映，在今后的臨床檢驗(yàn)工作中，應(yīng)對(duì)其給予足夠的重視。根據(jù)肖琴[6]的報(bào)道，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法和微粒子酶免疫分析法法測(cè)定乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物，各有其優(yōu)點(diǎn)，但采用微粒子酶免疫分析法的靈敏度更具有一定的優(yōu)勢(shì)，更能為臨床提供診斷依據(jù)。姜立民等[7]也報(bào)道了通過酶聯(lián)免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法對(duì)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物測(cè)定，結(jié)果顯示，微粒子酶免疫分析法比酶聯(lián)免疫吸附法更加精確，這與本文的研究結(jié)果一致。

通過本次研究筆者體會(huì)到，酶聯(lián)免疫吸附法為對(duì)血清HBsAb進(jìn)行檢測(cè)的主要方法的一種，且屬于抗原抗體在固相表面進(jìn)行充分反應(yīng)，參與僅為孔底的接觸部分，其余的抗原或抗體均需要實(shí)施擴(kuò)散處理，與固相抗體或固相抗原進(jìn)行充分的接觸，屬于逐漸平衡的過程，因此檢測(cè)過程中所需的時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。除此外，酶聯(lián)免疫吸附法的手工操作過程相對(duì)比較的復(fù)雜，檢測(cè)的靈敏度水平卻相對(duì)較低，不能夠?qū)z測(cè)額進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定，由于需要對(duì)處于結(jié)合態(tài)的抗原或抗體、游離狀態(tài)下抗體或抗原實(shí)施準(zhǔn)確的分離處理，因此大多數(shù)情況下需要進(jìn)行反復(fù)加樣、洗板等操作，很容易造成人為誤差[8-10]。微粒子酶免疫分析法主要是利用熒光酶免技術(shù)，經(jīng)全自動(dòng)酶免分析儀對(duì)HBsAb水平進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定，從標(biāo)本加樣操作開始直到得出相應(yīng)的結(jié)果，均由相關(guān)儀器在自動(dòng)化狀態(tài)下完成，從而有效避免了人為誤差，實(shí)現(xiàn)了全自動(dòng)、快速、準(zhǔn)確，并且可定量分析，靈敏度以及特異性均顯著提高，重復(fù)性得到改善[11]。

綜上所述，采取微粒子酶免疫分析法對(duì)HBsAb定量檢測(cè)，不但在兒童乙肝疫苗接種后展開HBsAb濃度變化動(dòng)態(tài)觀察，進(jìn)而對(duì)免疫效果進(jìn)行判斷，且還能夠以HBsAb濃度變化來對(duì)再次免疫接種時(shí)間予以確定，對(duì)比酶聯(lián)免疫吸附法具有一定的優(yōu)勢(shì)。在今后的臨床檢驗(yàn)工作中，值得對(duì)其給予足夠的重視并展開推廣，改善乙肝疫苗接種后免疫效果監(jiān)測(cè)工作質(zhì)量。

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