小薊對敗血癥休克大鼠血漿炎癥因子及代謝相關(guān)指標(biāo)的影響

楊曉玲+梁軍+田玨

摘要：目的 觀察小薊對敗血癥休克大鼠血漿炎癥因子和代謝指標(biāo)的作用。方法 復(fù)制敗血癥休克大鼠模型，BL420生物機能實驗系統(tǒng)測定大鼠心率和平均動脈壓，ELISA法檢測血漿IL-1β、TNF-α和IL-6水平，全自動生化分析儀測定各組大鼠血漿葡萄糖水平。結(jié)果 敗血癥休克模型組大鼠心率增加，平均動脈壓降低，IL-1β、TNF-α、IL-6和LDH水平升高，血糖降低；小薊干預(yù)后，大鼠心率減慢，平均動脈壓升高，IL-1β、TNF-α、IL-6和LDH水平降低，血糖增加。結(jié)論 小薊能減輕敗血癥休克大鼠的過度炎癥反應(yīng)并改善機體的代謝水平。

關(guān)鍵詞：小薊；敗血癥休克；炎癥因子；LDH；血糖

敗血癥休克（Septic shock）是由病原微生物感染所致[1]，病情進展迅速，發(fā)病機制復(fù)雜，且治療困難，死亡率高。炎癥反應(yīng)過度被認(rèn)為是影響敗血癥休克進程的重要機制[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)中藥小薊具有涼血止血，祛瘀消腫的作用[3]，在外傷感染、膿毒癥、腸癰等疾病治療中具有一定的療效[4]。

1資料與方法

1.1主要試劑及儀器 BL-420F+生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；REVCO超低溫冰箱（日本）；M450酶標(biāo)儀（美國BIO-TEK儀器公司）；全自動生化分析儀（北京普朗公司）；Finnpipette可調(diào)微量加樣器（芬蘭）。TNF-α、IL-1、IL-6和LDH ELISA檢測試劑盒、抑肽酶均購自Sigma公司。其余為市售分析純。小薊購自安徽新型中藥材飲片有限公司。

1.2動物分組 取2月齡體重190～210 g雄性健康SD大鼠45只（購自寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心），隨機分為假手術(shù)組、模型組和小薊組。假手術(shù)組及模型組給予生理鹽水灌胃2 ml/d；小薊組予小薊0.196 g/kg·d，生理鹽水2 ml稀釋灌胃，連續(xù) 2w。按文獻方法制備敗血癥休克模型，大鼠經(jīng)乙醚麻醉，行中下腹正中無菌2.5 cm切口，將盲腸移出腹腔，在回盲瓣下方結(jié)扎盲腸末端，用18#針頭在結(jié)扎線遠(yuǎn)端盲腸兩側(cè)穿兩孔，溢出少量腸內(nèi)容物，再將盲腸還納入腹腔，逐層縫合關(guān)閉腹腔，碘伏消毒并包扎傷口，術(shù)后1 min及8 h背部皮下注射生理鹽水40 ml/kg以防脫水。

1.3心功能測定 術(shù)后18 h用20%烏拉坦6 ml/kg腹腔麻醉，左頸總動脈插管連接BL-420F+生物機能實驗系統(tǒng)記錄心率和平均動脈壓。

1.4 ELISA法檢測血漿TNF-α、IL-1、IL-6和乳酸脫氫酶（LDH）的含量 從頸總動脈取血5 ml，10%EDTA 20 μl和抑肽酶650 KIU抗凝，于4℃ 3000 r/min離心10 min，分離血漿。按照ELISA檢測試劑盒說明書檢測血漿TNF-α、IL-1β、IL-6和LDH含量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算各組動物血漿中炎癥因子的含量。

1.5血糖檢測 用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血漿葡萄糖（Glu）水平。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法 采用prism5.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料多組間比較采用單因素方差分析，組間的兩兩比較采用SNK檢驗。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，以P<0.05為差異有顯著性。

2結(jié)果

2.1小薊對敗血癥大鼠心率的影響 與假手術(shù)組大鼠相比，模型組大鼠心率增加了72次/min；平均動脈壓降低23.2mmHg；小薊干預(yù)后，大鼠心率降低了25次/min，平均動脈壓升高了17 mmHg（P均<0.05），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，見圖1。

2.2小薊對敗血癥大鼠血漿炎癥因子和代謝指標(biāo)的影響 與假手術(shù)組大鼠相比，模型組血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量分別升高了4.57倍、2.56倍及6.66倍，LDH的含量升高了1.73倍，Glu下降了49.1%（P均<0.05）；與模型組相比，小薊組血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量分別降低了68.17%、51.98%及79.27%，血清LDH的含量降低了14.9%，Glu升高了24.5%（P均<0.05），見表1。

3討論

敗血癥休克是由病原微生物及其毒素在體內(nèi)引起的一種以微循環(huán)障礙和血流動力學(xué)異常為主的病理過程，嚴(yán)重時可以出現(xiàn)細(xì)胞損害甚至是多系統(tǒng)器官功能衰竭，發(fā)病機制復(fù)雜。當(dāng)機體抵抗力下降，侵入機體的病原微生物大量繁殖并釋放毒性產(chǎn)物，激活機體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生和釋放各種生物活性物質(zhì)和炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致血流動力學(xué)異常。結(jié)扎盲腸并使之穿孔是目前較為常用的復(fù)制動物敗血癥休克模型的方法，本研究以SD大鼠復(fù)制敗血癥休克模型，結(jié)果顯示，模型組大鼠的心率明顯高于假手術(shù)組，平均動脈壓也顯著低于假手術(shù)組，出現(xiàn)了血流動力學(xué)的顯著異常，表明敗血癥休克動物模型復(fù)制成功。

在敗血癥急性反應(yīng)階段，機體可以出現(xiàn)發(fā)熱、炎癥介質(zhì)大量生成、凝血功能障礙、血管壁通透性增加、代謝反應(yīng)異常等變化[2]，同時由于微循環(huán)長期缺血缺氧，酸性代謝產(chǎn)物堆積，出現(xiàn)代謝異常。已經(jīng)證實：敗血癥休克時存在炎癥-抗炎反應(yīng)平衡失調(diào)[2]。IL-6、TNF-α和IL-1β等炎癥介質(zhì)能啟動瀑布式炎癥級聯(lián)反應(yīng)并損傷組織細(xì)胞[2]。本研究發(fā)現(xiàn)，敗血癥休克大鼠血漿IL-1β、TNF-α和IL-6水平顯著增高，血糖降低，乳酸脫氫酶明顯增多，表明敗血癥休克的機體存在炎癥反應(yīng)過度和代謝異常。

小薊是多年生菊科植物，具有"清火、疏風(fēng)、豁痰，解疔瘡癰疽腫毒"的功效，對外傷感染、膿毒癥、腸癰等疾病治療中具有一定的療效[4]。本研究結(jié)果顯示：小薊干預(yù)組大鼠血漿IL-1β、TNF-α和IL-6水平比模型組顯著降低，血糖水平明顯升高，而乳酸脫氫酶則明顯下降，表明小薊能夠減輕敗血癥休克過程中的炎癥反應(yīng)的持續(xù)擴大，改善機體的代謝和局部的微循環(huán)，對敗血癥休克具有一定的預(yù)防或治療作用。

參考文獻：

[1]Akcay E K，Cagil N，Yulek F，et al.眼瞼的壞死性筋膜炎繼發(fā)于腮腺炎[J].歐洲眼科雜志，2008，10（1）：128-130.

[2]Yoo CH，Yeom JH Heo JJ，et al.干擾素β防止致命的內(nèi)毒素的和膿毒性休克SIRT1 upregulation[J].科學(xué)報告，2014，4：4220-4220.

[3]中國藥典[S].2005年版，第一部.

[4]楊泰然，徐廣濤，徐曉雪，等.小薊化學(xué)成分的分離與鑒定[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2015，32（6）：419-423.

編輯/丁一