• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    楊樹PtROP家族基因的表達(dá)分析與功能預(yù)測(cè)

    2017-02-23 07:35:44王麗娟盧孟柱
    林業(yè)科學(xué)研究 2017年1期
    關(guān)鍵詞:擬南芥楊樹結(jié)構(gòu)域

    李 煜,張 進(jìn),王麗娟,盧孟柱*

    (1.林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所,北京 100091;2. 國(guó)家林業(yè)局林木培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所,北京 100091)

    楊樹PtROP家族基因的表達(dá)分析與功能預(yù)測(cè)

    李 煜1,2,張 進(jìn)1,2,王麗娟1,2,盧孟柱1,2*

    (1.林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所,北京 100091;2. 國(guó)家林業(yè)局林木培育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所,北京 100091)

    [目的]為探究ROP基因在林木中的功能。[方法]本研究以楊樹為模式,在全基因組水平上對(duì)ROP基因的家族成員、基因結(jié)構(gòu)、保守結(jié)構(gòu)域、氨基酸序列相似性及表達(dá)模式進(jìn)行了分析。[結(jié)果]顯示,楊樹PtROP基因家族包含13個(gè)成員,不同成員間在進(jìn)化上相對(duì)保守,均存在與GTP結(jié)合與水解相關(guān)的結(jié)構(gòu)域。這些基因在不同組織、不同脅迫條件下的表達(dá)具有明顯差異,說明它們參與不同的生物學(xué)過程。通過構(gòu)建功能基因網(wǎng)絡(luò)(functional gene network for poplar)發(fā)現(xiàn)PtROP基因主要參與了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。[結(jié)論] 楊樹PtROP基因家族包含13個(gè)成員參與不同的生物學(xué)過程,可能主要參與了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。

    楊樹;ROP;基因家族;基因表達(dá)模式

    G蛋白是一類GTP結(jié)合蛋白,按照G蛋白分子量和亞基組成可分為異源三聚體G蛋白、小G蛋白和幾種特殊的GTP結(jié)合蛋白[1]。小G蛋白家族又稱為Ras超家族,根據(jù)其成員之間結(jié)構(gòu)和功能的相似性,將Ras超家族分為五個(gè)不同的家族,分別是Ras、Rab、Arf、Ran和Rho家族[2],其中Rho家族又可被分為CDC42、RAC和RHO三個(gè)亞家族[3-4]。這五個(gè)家族成員在細(xì)胞中參與了不同的生物學(xué)過程,例如Ras家族成員參與調(diào)控細(xì)胞增殖,Rab家族和Arf家族成員在介導(dǎo)不同膜細(xì)胞器之間的囊泡運(yùn)輸中發(fā)揮重要作用,Ran家族成員主要調(diào)控與細(xì)胞核相關(guān)的一些細(xì)胞活動(dòng),而Rho家族成員在細(xì)胞骨架重組及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中行使重要功能[5]。

    與動(dòng)物或真菌Ras超家族不同,植物沒有Ras家族,而植物中Rho形成了獨(dú)特的一類,稱為ROP(Rho-related proteins from plants)[5]。自1993年首次從豌豆中發(fā)現(xiàn)Rho相似性GTPase以來,已在擬南芥、水稻與玉米等多種植物中進(jìn)行了鑒定[6]。ROP主要在與GTP結(jié)合的活性形式和與GDP結(jié)合的非活性形式之間循環(huán),該循環(huán)過程需要多種蛋白的參與,如鳥苷酸交換因子(guanine nucleotide exchange factor,GEF)、GTPase激活蛋白(GTPase activating protein,GAP)、鳥苷酸解離抑制因子(GDP dissociation inhibitor,GDI)等。一旦受體感知到上游信號(hào),鳥苷酸交換因子就催化ROP從GDP結(jié)合的非活性形式轉(zhuǎn)換為GTP結(jié)合的活性形式,具有活性的ROP蛋白與下游效應(yīng)蛋白結(jié)合發(fā)揮其生理功能[7]。ROP蛋白的結(jié)構(gòu)極為保守,主要包含與鳥苷酸結(jié)合和水解有關(guān)的5個(gè)高度保守結(jié)構(gòu)域、1個(gè)效應(yīng)因子結(jié)合區(qū)、1個(gè)插入序列和C端高度可變區(qū)。GTP結(jié)合結(jié)構(gòu)域和效應(yīng)因子結(jié)合區(qū)決定ROP蛋白的功能,插入序列的功能目前尚不清楚,C端高度可變區(qū)決定ROP蛋白的亞細(xì)胞定位[8]。

    ROP在植物發(fā)育與抗逆等生物學(xué)過程中具有重要的功能。在葉表皮鋪板細(xì)胞中,擬南芥ROP2調(diào)節(jié)PIN1的內(nèi)吞過程[9]。在擬南芥胚胎發(fā)育階段,ROP3在維持PIN1和PIN3在細(xì)胞膜上的極性分布方面具有重要作用[10]。擬南芥中多種ROP基因在花粉管尖端表達(dá),其中ROP1對(duì)花粉管的極性生長(zhǎng)起主要作用[11]。ROP還參與根毛的發(fā)育,超表達(dá)擬南芥ROP2,能增加根毛數(shù)量和密度,而AtROP4控制根毛的發(fā)生和尖端的伸長(zhǎng)[12]。此外,擬南芥保衛(wèi)細(xì)胞中的ROP2能夠被光激活來抑制光誘導(dǎo)的氣孔張開[13]。目前,在擬南芥基因組中共發(fā)現(xiàn)了10個(gè)ROP基因成員,水稻和玉米分別發(fā)現(xiàn)7個(gè)和9個(gè)[6]。雖然一些研究都表明ROPs廣泛參與了植物對(duì)激素,環(huán)境等信號(hào)的響應(yīng)及植物生長(zhǎng)發(fā)育過程,但各個(gè)ROP成員的功能還有待進(jìn)一步解析。楊樹全基因組序列雖已公布,但對(duì)ROP基因家族成員尚未進(jìn)行系統(tǒng)分析[14]。

    本研究利用擬南芥ROP氨基酸序列,在楊樹基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源比對(duì),共鑒定出13個(gè)PtROP基因序列。在此基礎(chǔ)上,對(duì)楊樹PtROP基因進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化、基因結(jié)構(gòu)及保守結(jié)構(gòu)域分析,并對(duì)其在不同組織和不同脅迫條件下的表達(dá)情況進(jìn)行了分析,構(gòu)建了其基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。研究結(jié)果為將來系統(tǒng)解析楊樹ROP基因的功能奠定了基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    實(shí)驗(yàn)所用銀腺楊(P.alba×P.glandulosa)無性系84K,由中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院林木遺傳育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存。楊樹幼苗培養(yǎng)于人工培養(yǎng)箱,培養(yǎng)條件為16 h光照/8 h黑暗,晝夜溫度為23℃/20℃。分別取楊樹幼株(株高約80 cm)的頂端、幼葉、成熟葉、莖頂端、莖下部及根,分別提取總RNA。

    1.2 總RNA的提取

    總RNA提取參見QIAGEN RNeasy Plant Kit RNA描述的方法進(jìn)行。

    1.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

    用帶有Oligo(dT)的磁珠富集樣品總RNA中的mRNA,將富集的mRNA片段化后用隨機(jī)引物合成第一鏈cDNA,隨后合成雙鏈cDNA,再對(duì)雙鏈cDNA進(jìn)行純化,末端修復(fù)和添加測(cè)序接頭,最后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,建好的測(cè)序文庫(kù)用Illumina HiSeqTM2000測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行pair-end 100 bp測(cè)序,每個(gè)樣品分別獲得2G clean data。測(cè)序原始數(shù)據(jù)去除接頭及低質(zhì)量reads,獲得的clean reads利用TopHat2比對(duì)到毛果楊基因組上(http://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#!info?alias=Org_Ptrichocarpa,release 3.0)。標(biāo)準(zhǔn)化的FPKM值反映基因的表達(dá)水平。

    1.4 數(shù)據(jù)來源

    擬南芥ROP基因及其編碼的蛋白質(zhì)序列來源于TAIR(http://www.arabidopsis.org/index.jsp)數(shù)據(jù)庫(kù)。以擬南芥ROP蛋白序列為搜索對(duì)象,通過blastp程序在毛果楊基因組數(shù)據(jù)庫(kù)(http://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#!info?alias=Org_Ptrichocarpa,release 3.0)中搜索相似的蛋白序列,選取E≤10-10的序列作為候選序列,獲得的毛果楊ROP基因命名為PtROP1-13。

    1.5 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

    將擬南芥和楊樹PtROP氨基酸序列保存為FASTA格式,用Clustal X[15]對(duì)其氨基酸序列進(jìn)行多序列比對(duì),分別利用MEGA5.0[16]中Maximum-Likelihood(ML)法和Neighbor-Joining(NJ)法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

    1.6 基因結(jié)構(gòu)分析

    運(yùn)用在楊樹基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中下載的基因組DNA序列及CDS序列使用GSDS[17]程序(http://gsds.cbi.pku.edu.cn/)對(duì)楊樹PtROP基因的外顯子和內(nèi)含子進(jìn)行分析。楊樹PtROP基因組DNA序列及CDS序列下載自Phytozome數(shù)據(jù)庫(kù)(http://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html#!info?alias=Org_Ptrichocarpa, release 3.0)。

    1.7 基因表達(dá)分析

    分析楊樹不同脅迫條件下的PtROP基因成員的表達(dá)模式所用的基因芯片數(shù)據(jù)來自NCBI Gene Expression Omnibus(GEO)[18]數(shù)據(jù)庫(kù)。

    1.8 楊樹PtROP基因功能網(wǎng)絡(luò)分析

    利用網(wǎng)站(http://10.13.200.25/PoplarGene/index.php)對(duì)楊樹ROP基因進(jìn)行功能網(wǎng)絡(luò)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 楊樹PtROP基因鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化分析

    表1 楊樹PtROP基因家族成員基本信息Table1 Basic information of Populus PtROP gene

    A.最大似然法(ML)構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹;B.鄰接法(NJ)構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹A. Phylogenetic tree was constructed by the Maximum Likelihood method; B. Phylogenetic tree was constructed by the neighbor-joining method圖1 楊樹和擬南芥ROP基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析Fig. 1 Phylogenetic relationship between Populus and Arabidopsis ROP families

    2.2PtROP基因結(jié)構(gòu)及保守結(jié)構(gòu)域分析

    利用MEME結(jié)構(gòu)域搜索工具在楊樹PtROP中檢測(cè)到15個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域。結(jié)果表明, PtROP10中不存在motif 2,PtROP5不具有motif 5,而其它ROP均具有motif 1-7。Motif 1、2、3及5代表了ROP蛋白與GTP結(jié)合的結(jié)構(gòu)域(圖4),這四個(gè)結(jié)構(gòu)域中都存在與GTP結(jié)合的保守結(jié)合位點(diǎn)。PtROP5雖然不具有motif 5,但它具有其它與GTP結(jié)合的保守結(jié)合位點(diǎn)。對(duì)楊樹PtROP蛋白motif 2中第20位的蘇氨酸、motif 3中第10位的天冬氨酸分別進(jìn)行點(diǎn)突變,能夠改變ROP蛋白與GTP的親和性,使其成為顯性失活形式。如果對(duì)楊樹PtROP蛋白motif 1中將第6

    位的谷氨酰胺突變?yōu)榱涟彼?,ROP蛋白就成為了持續(xù)活性型形式(圖4)。

    圖2 楊樹PtROP基因結(jié)構(gòu)Fig. 2 Gene structures of PtROP genes

    2.3PtROP基因旁系同源基因?qū)Φ膹?fù)制

    通過比較其系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系、基因結(jié)構(gòu)及氨基酸序列相似性,在楊樹PtROP基因家族中共鑒定得到4對(duì)旁系同源基因?qū)?,分別是PtROP1/PtROP4、PtROP2/PtROP6、PtROP8/PtROP11及PtROP9/PtROP13,這些基因?qū)χg在氨基酸序列、內(nèi)含子的插入大小及插入位點(diǎn)都極為保守。PtROP1/PtOP4、PtROP2/PtROP6、PtROP8/PtROP11、PtROP9/PtROP13所在染色體片段區(qū)域的大部分基因都是同源基因,因此這四個(gè)基因?qū)赡苁怯捎谌旧w復(fù)制產(chǎn)生的(圖5)。計(jì)算這四個(gè)基因?qū)Ψ峭x替換率和同義替換率的比值,發(fā)現(xiàn)它們都小于0.4,因此基因?qū)χ械膬蓚€(gè)旁系同源基因復(fù)制后經(jīng)歷了純化選擇在功能上產(chǎn)生了一定程度的差異(表2)。根據(jù)楊樹擴(kuò)張度λ=9.1×10-9,估算出PtROP旁系同源基因?qū)赡苁窃?.74到17.30百萬年前產(chǎn)生的,其中PtROP1/PtROP4產(chǎn)生的最早,約在17.30百萬年前;PtROP8/PtROP11產(chǎn)生的最晚,約在8.74百萬年前。而PtROP2/PtROP6、PtROP9/PtROP13分別是在13.98百萬年前和11.77百萬年前產(chǎn)生的,這個(gè)時(shí)期與楊樹最近一次在13百萬年前發(fā)生的大規(guī)模片段復(fù)制時(shí)間大致相符[14]。

    圖3 楊樹與擬南芥ROP氨基酸序列相似性Fig. 3 Sequence similarites between Populus and Arabidopsis ROP proteins

    圖4 楊樹PtROP蛋白保守結(jié)構(gòu)域分布Fig. 4 Distribution of conserved motifs in PtROP proteins

    圖5 楊樹PtROP旁系同源基因?qū)ig. 5 PtROP paralogous gene pairs in P trichocarpa ROP gene family

    基因1基因2非同義替換率同義替換率非同義替換率/同義替換率時(shí)期(百萬年前)PtROP1PtROP40.0740.3150.23617.30PtROP2PtROP60.0130.2550.05213.98PtROP8PtROP110.0200.1590.1258.74PtROP9PtROP130.0200.2140.09411.77

    2.4 在不同組織、不同脅迫條件下的表達(dá)

    為了探究楊樹PtROP基因可能參與的生物學(xué)過程,利用課題組的RNA-seq數(shù)據(jù)和已公布的楊樹基因芯片數(shù)據(jù),分析了楊樹PtROP基因在不同組織及不同脅迫條件下的表達(dá)模式。與幼葉、老葉、幼莖、木質(zhì)化莖及根相比,楊樹PtROP1、PtROP2、PtROP8、PtROP11及PtROP12在頂點(diǎn)的表達(dá)水平較高,表明它們可能參與了頂端發(fā)育過程。PtROP7、PtROP9及ROP13特異性地在已木質(zhì)化的莖中表達(dá),說明這些基因可能參與楊樹次生生長(zhǎng)。PtROP1、PtROP8、PtROP9及PtROP12在老葉中的表達(dá)量最低,表明它們可能不參與光合作用及次生物質(zhì)的代謝過程(圖6)。

    圖6 楊樹PtROP基因在不同組織中的表達(dá)模式Fig.6 Expression analyses of PtROPs in various tissues

    在應(yīng)拉木和應(yīng)力木中PtROP7、PtROP9、PtROP10及PtROP13表達(dá)都顯著下調(diào),且PtROP7、PtROP9及PtROP13在次生莖中特異性高表達(dá),表明這三個(gè)基因的表達(dá)受外力的調(diào)控。對(duì)高溫、低溫、干旱和鹽脅迫條件下PtROP基因的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),13個(gè)基因中僅有PtROP7在低溫條件下下調(diào)表達(dá),表明大部分PtROP基因可能不直接對(duì)高、低溫、干旱和鹽等脅迫響應(yīng),或者其在脅迫條件下的穩(wěn)定表達(dá)對(duì)細(xì)胞功能的維持具有重要作用(圖7)。

    2.5 楊樹PtROP基因功能基因網(wǎng)絡(luò)分析

    為了進(jìn)一步解析PtROP基因的生物學(xué)功能,構(gòu)建了PtROP的功能基因網(wǎng)絡(luò)。發(fā)現(xiàn)與PtROP基因緊密聯(lián)系的基因主要分為四類,即Rho GDP-解離抑制活性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、tRNA修飾及Actin細(xì)胞骨架(表3)。其中,在整個(gè)網(wǎng)絡(luò)中大約50%的基因與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān),并且這些基因與楊樹PtROP基因的相關(guān)性都比較大,這與擬南芥中ROP參與了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的結(jié)果相符合,說明PtROP基因具有功能保守性。13個(gè)基因中,與PtROP2和PtROP3相關(guān)聯(lián)的基因最多,表明二者在整個(gè)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮主要作用。在網(wǎng)絡(luò)中,與tRNA修飾相關(guān)的基因占50%以上,但僅有PtROP4與之相關(guān)聯(lián),并且它們之間的相關(guān)性較小,可能PtROP4廣泛地參與到tRNA修飾中,但不在其中起主要作用,另外,PtROP4基因在13個(gè)PtROP基因中僅與PtROP1存在關(guān)聯(lián),顯示楊樹PtROP4可能在進(jìn)化過程中出現(xiàn)了功能分化(圖8)。

    圖7 楊樹PtROP基因不同脅迫下的表達(dá)(PtROPs在不同脅迫下的變化倍數(shù)的log2轉(zhuǎn)換值)Fig.7 Expression analyses of PtROPs under various stresses

    表3 楊樹PtROP功能基因網(wǎng)絡(luò)中基因相關(guān)信息Table 3 Genes information in the PtROP gene functional network

    圖8 楊樹PtROP基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)Fig. 8 PtROP gene functional network

    3 討論

    楊樹是全球廣泛分布的重要經(jīng)濟(jì)樹種,具有生長(zhǎng)迅速,生物量大、輪伐期短等特點(diǎn),隨著楊樹全基因組測(cè)序的完成,楊樹已成為研究多年生林木生長(zhǎng)發(fā)育的模式樹木。在不同物種中對(duì)ROP基因的研究發(fā)現(xiàn)ROP基因廣泛地參與了植物的生長(zhǎng)發(fā)育和抗逆過程,而且ROP基因在初生細(xì)胞壁和次生細(xì)胞壁的沉積過程中具有重要作用[20]。因此對(duì)于楊樹ROP基因的研究,不僅在揭示木本植物發(fā)育和抗逆機(jī)理上具有重要意義,而且具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

    本研究利用已知的擬南芥ROP氨基酸序列在楊樹全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行相似性序列搜索,共檢測(cè)到13個(gè)PtROP基因成員,其中包含四個(gè)旁系同源基因?qū)?;進(jìn)化分析表明,這些基因可能來自全基因組染色體復(fù)制。楊樹PtROP基因結(jié)構(gòu)分析、系統(tǒng)進(jìn)化分析及氨基酸序列相似性分析表明,楊樹PtROP基因家族成員在結(jié)構(gòu)與氨基酸序列上極為保守。楊樹PtROP基因與擬南芥相同,分為四類,它們相對(duì)應(yīng)的類別,氨基酸序列相似度很高。對(duì)楊樹PtROP的motif研究表明,楊樹和擬南芥ROP一樣,都具有相同的與GTP結(jié)合的保守結(jié)構(gòu)域。這些研究結(jié)果預(yù)示著ROPs在楊樹中具有類似的、保守的功能。

    對(duì)楊樹PtROP基因家族成員在不同組織、不同脅迫條件下的表達(dá)情況進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)不同的PtROP基因在不同的組織中表達(dá)存在差異,表明它們可能參與了不同的生物學(xué)過程。研究發(fā)現(xiàn)擬南芥ROP11影響次生細(xì)胞壁的沉積,在超表達(dá)持續(xù)活性型ROP11擬南芥中,正在分化的木質(zhì)部細(xì)胞次生壁上沒有紋孔的形成,而ROP效應(yīng)因子ROPGEF4的缺失導(dǎo)致次生壁上紋孔數(shù)量減少[21]。桉樹ROP1也能夠影響次生細(xì)胞壁的沉積,其在形成層和正在分化的木質(zhì)部細(xì)胞中都有很高的表達(dá)水平,在擬南芥中超表達(dá)持續(xù)活性型的桉樹ROP1基因抑制次生木質(zhì)部的木質(zhì)化和木葡聚糖沉積[22]。本研究發(fā)現(xiàn)楊樹PtROP7、PtROP9與PtROP13特異性地在莖的次生長(zhǎng)生中高豐度表達(dá),表明這三個(gè)基因可能參與了楊樹次生生長(zhǎng)過程。PtROP7、PtROP9與PtROP13同屬于楊樹PtROP基因家族的第三類,可能存在功能上的冗余,以保障在莖的次生維管發(fā)育中發(fā)揮重要作用。

    已有研究表明,植物ROP蛋白參與了多種逆境脅迫。例如,油菜ROP5和ROP9在高溫脅迫后表達(dá)發(fā)生明顯變化[23],玉露桃冷害脅迫后,果實(shí)中的ROP基因表達(dá)量顯著降低[24]。本研究通過對(duì)高溫、低溫、干旱與鹽等脅迫條件下楊樹PtROP的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),PtROP基因?qū)@些脅迫沒有產(chǎn)生顯著響應(yīng),可能是由于楊樹PtROP基因功能的特化,趨于基本維持細(xì)胞正常的信息與物質(zhì)的流動(dòng)。通過楊樹PtROP的功能基因網(wǎng)絡(luò)分析,發(fā)現(xiàn)楊樹PtROP基因主要參與了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,這與上述推測(cè)是一致的[25]。

    4 結(jié)論

    本研究以楊樹為模式,在全基因組水平上對(duì)ROP基因的家族成員、基因結(jié)構(gòu)、保守結(jié)構(gòu)域、氨基酸序列相似性及表達(dá)模式進(jìn)行了分析。發(fā)現(xiàn)楊樹中共有13個(gè)PtROP基因,它們的基因結(jié)構(gòu)相似,功能結(jié)構(gòu)域是保守的。根據(jù)氨基酸序列相似性及C端高度可變區(qū)結(jié)構(gòu),楊樹PtROP被分為四類:第一類(PtROP10)、第二類(PtROP8、PtROP11和PtROP12)、第三類(PtROP7、PtROP9和PtROP13)及第四類(PtROP1-6)。對(duì)PtROP基因的復(fù)制情況進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)PtROP基因家族中存在四對(duì)旁系同源基因?qū)?PtROP1/PtROP4、PtROP2/PtROP6、PtROP8/PtROP11及PtROP9/PtROP13),它們都是通過全基因組復(fù)制產(chǎn)生的。四個(gè)基因?qū)Χ冀?jīng)歷了純化選擇。PtROP旁系同源基因?qū)赡苁窃?.74到17.30百萬年前產(chǎn)生的。對(duì)PtROP基因家族成員在不同組織和不同脅迫響應(yīng)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)PtROP基因家族成員表達(dá)模式具有明顯差異。通過構(gòu)建PtROP功能基因網(wǎng)絡(luò),發(fā)現(xiàn)PtROP可能參與了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、tRNA修飾及細(xì)胞骨架形成等過程。

    本研究系統(tǒng)分析了楊樹PtROP家族的成員及其進(jìn)化關(guān)系,研究PtROP基因在木本植物發(fā)育過程中的表達(dá)特性和可能的功能,為進(jìn)一步研究其在木本植物特別是次生生長(zhǎng)過程中的作用奠定了基礎(chǔ)。

    [1] Assmann S M. Heterotrimeric and unconventional GTP binding proteins in plant cell signaling[J]. The Plant Cell, 2002, 149(suppl 1): S355-S373.

    [2] Kahn R A, Der C J, Bokoch G M. The ras superfamily of GTP-binding proteins: guidelines on nomenclature[J]. The FASEB Journal, 1992, 6(8): 2512-2513.

    [3] Chant J, Stowers L. GTPase cascades choreographing cellular behavior: movement, morphogenesis, and more[J]. Cell, 1995, 81(1): 1-4.[4] Hall A. Rho GTPases and the actin cytoskeleton[J]. Science, 1998, 279(5350): 509-514.

    [5] Vernoud V, Horton A C, Yang Z,etal. Analysis of the small GTPase gene superfamily ofArabidopsis[J]. Plant Physiology, 2003, 131(3): 1191-1208.

    [6] Pandey G K, Sharma M, Pandey A,etal. GTPases: Versatile Regulators of Signal Transduction in Plants[M]. Springer, 2015.

    [7] Ren H, Lin D. ROP GTPase Regulation of Auxin Transport inArabidopsis[J]. Molecular Plant, 2015, 8(2): 193-195.

    [8] Berken A, Wittinghofer A. Structure and function of Rho-type molecular switches in plants[J]. Plant Physiology and Biochemistry, 2008, 46(3): 380-393.

    [9] Nagawa S, Xu T, Lin D,etal. ROP GTPase-dependent actin microfilaments promote PIN1 polarization by localized inhibition of clathrin-dependent endocytosis[J]. PLoS Biol, 2012, 10(4): e1001299.

    [10] Huang J, Liu H, Chen M,etal. ROP3 GTPase contributes to polar auxin transport and auxin responses and is important for embryogenesis and seedling growth inArabidopsis[J]. The Plant Cell, 2014, 26(9): 3501-3518.

    [11] Li H, Wu G, Ware D,etal. Arabidopsis Rho-related GTPases: differential gene expression in pollen and polar localization in fission yeast[J]. Plant Physiology, 1998, 118(2): 407-417.

    [12] Molendijk A J, Bischoff F, Rajendrakumar C S V,etal.Arabidopsisthaliana Rop GTPases are localized to tips of root hairs and control polar growth[J]. The EMBO Journal, 2001, 20(11): 2779-2788.[13] Jeon B W, Hwang J U, Hwang Y,etal. TheArabidopsissmall G protein ROP2 is activated by light in guard cells and inhibits light-induced stomatal opening[J]. The Plant Cell, 2008, 20(1): 75-87.[14] Tuskan G A, Difazio S, Jansson S,etal. The genome of black cottonwood,Populustrichocarpa(Torr. & Gray)[J].Science, 2006, 313(5793): 1596-1604.

    [15] Thompson J D, Gibson T J, Plewniak F,etal. The CLUSTAL_X windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools[J]. Nucleic Acids Research, 1997, 25(24): 4876-4882.

    [16] Tamura K, Peterson D, Peterson N,etal. MEGA5: molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology and Evolution, 2011, 28(10): 2731-2739.

    [17] Guo A Y, Zhu Q H, Chen X,etal. [GSDS: a gene structure display server[J]. Yi Chuan= Hereditas/Zhongguo Yi Chuan Xue Hui Bian Ji, 2007, 29(8): 1023-1026.

    [18] Barrett T, Edgar R. [19] Gene Expression Omnibus: Microarray Data Storage, Submission, Retrieval, and Analysis[J]. Methods in enzymology, 2006, 411: 352-369.

    [19]Zheng Z L, Yang Z. The Rop GTPase switch turns on polar growth in pollen[J]. Trends in plant science, 2000, 5(7): 298-303.

    [20] Oda Y, Fukuda H. Emerging roles of small GTPases in secondary cell wall development[J]. Frontiers in Plant Science, 2014, 5.

    [21] Oda Y, Fukuda H. Initiation of cell wall pattern by a Rho-and microtubule-driven symmetry breaking[J]. Science, 2012, 337(6100): 1333-1336.

    [22] Foucart C, Jauneau A, Gion J M,etal. Overexpression ofEgROP1, a Eucalyptus vascular-expressed Rac-like small GTPase, affects secondary xylem formation inArabidopsisthaliana[J]. New Phytologist, 2009, 183(4): 1014-1029.

    [23] Chan J, Pauls K P. Brassica napus Rop GTPases and their expression in microspore cultures[J]. Planta, 2007, 225(2): 469-484.[24] Jin W, Xu C, Li X,etal. Expression ofROP/RACGTPasegenes in postharvest loquat fruit in association with senescence and cold regulated lignification[J]. Postharvest Biology and Technology, 2009, 54(1): 9-14.

    [25] Miyawaki K N, Yang Z. Extracellular signals and receptor-like kinases regulating ROP GTPases in plants[J]. Frontiers in Plant Science, 2014, 5.

    (責(zé)任編輯:張 研)

    Expression and Functional Analysis ofROPGene Family inPopulus

    LIYu1,2,ZHANGJin1,2,WANGLi-juan1,2,LUMeng-zhu1,2

    (1.State Key Laboratory of Tree Genetics and Breeding, Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China;2.Key Laboratory of Tree Breeding and Cultivation, State Forestry Administration, Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry,Beijing 100091, China)

    [Objective]To explore the putative function ofROPsin forest trees. [Method]A genome-wide analysis ofROPswas performed, including the phylogeny, gene structure, conserved motifs, ROP amino sequences similarity betweenPopulusandArabidopsisROP proteins and the expression patterns usingPopulusas a model. [Result]The results showed that there were 13 members ofPtROPgenes inPopulusand thePtROPgenes were conserved during evolution of species, all of them containing GTP binding and hydrolysis-related domains. Furthermore, the expression profiles revealed thatPopulusPtROPhad distinct expression pattern across different tissues and different stress conditions, suggesting thatPtROPgenes were involved in different biological processes. In addition, the analysis onPtROPgene functional network was conducted. It is predicted thatPopulusPtROPgenes were mainly involved in signal transduction.[Conclude]In this study, systematically bioinformatics analysis onPtROPwere conducted which laid the foundation for the further exploration of poplarPtROPfunctions.

    Populus; ROP; gene family; gene expression pattern

    10.13275/j.cnki.lykxyj.2017.01.001

    2016-02-01

    國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31270699)。

    李 煜,男,在讀碩士。主要方向:林木極性生長(zhǎng)調(diào)控。E-mail:linxueliyu@163.com
    * 通訊作者:研究員,博士生導(dǎo)師,從事分子生物學(xué)研究。E-mail:lumz@caf.ac.cn

    S792.11

    A

    1001-1498(2017)01-0001-09

    猜你喜歡
    擬南芥楊樹結(jié)構(gòu)域
    擬南芥:活得粗糙,才讓我有了上太空的資格
    蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域劃分方法及在線服務(wù)綜述
    跟蹤導(dǎo)練(五)
    尿黑酸對(duì)擬南芥酪氨酸降解缺陷突變體sscd1的影響
    口算本失蹤記
    楊樹山漫畫作品欣賞
    喜劇世界(2017年10期)2017-06-01 12:39:29
    兩種LED光源作為擬南芥生長(zhǎng)光源的應(yīng)用探究
    擬南芥干旱敏感突變體篩選及其干旱脅迫響應(yīng)機(jī)制探究
    重組綠豆BBI(6-33)結(jié)構(gòu)域的抗腫瘤作用分析
    組蛋白甲基化酶Set2片段調(diào)控SET結(jié)構(gòu)域催化活性的探討
    女警被强在线播放| 精品电影一区二区在线| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲精品国产色婷婷电影| 丁香欧美五月| 免费不卡黄色视频| 18禁观看日本| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 久久热在线av| 国产精品久久久久久精品电影 | 我的亚洲天堂| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产精品99久久99久久久不卡| 大型av网站在线播放| 精品久久久精品久久久| 日韩三级视频一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲男人的天堂狠狠| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲成a人片在线一区二区| 啦啦啦免费观看视频1| 国语自产精品视频在线第100页| 最新美女视频免费是黄的| 两个人视频免费观看高清| 美女午夜性视频免费| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久久久久久精品吃奶| 黄色成人免费大全| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲电影在线观看av| 精品欧美国产一区二区三| 在线观看www视频免费| 大香蕉久久成人网| 不卡一级毛片| 中文字幕人妻熟女乱码| 免费在线观看日本一区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日韩国内少妇激情av| 999久久久精品免费观看国产| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲久久久国产精品| 精品国产乱码久久久久久男人| av网站免费在线观看视频| 男人操女人黄网站| 久久草成人影院| 色综合欧美亚洲国产小说| 国内精品久久久久精免费| 国产精品野战在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久久久亚洲av毛片大全| 午夜影院日韩av| 国产av一区二区精品久久| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲七黄色美女视频| 在线观看午夜福利视频| 好男人在线观看高清免费视频 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜福利成人在线免费观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产精品日韩av在线免费观看 | 精品不卡国产一区二区三区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品乱码久久久久久99久播| 黄片小视频在线播放| 免费高清在线观看日韩| 青草久久国产| 午夜福利成人在线免费观看| 国产单亲对白刺激| av天堂久久9| 天天一区二区日本电影三级 | 国产成人影院久久av| 十分钟在线观看高清视频www| 一级毛片女人18水好多| 精品高清国产在线一区| 在线观看www视频免费| 国产精品久久久久久精品电影 | 精品熟女少妇八av免费久了| 99久久精品国产亚洲精品| 久久青草综合色| 啪啪无遮挡十八禁网站| 一区二区日韩欧美中文字幕| 午夜福利18| 亚洲久久久国产精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 日本vs欧美在线观看视频| 国产人伦9x9x在线观看| 国产精品98久久久久久宅男小说| ponron亚洲| 少妇被粗大的猛进出69影院| 91av网站免费观看| 香蕉丝袜av| 久99久视频精品免费| 69精品国产乱码久久久| 极品人妻少妇av视频| 欧美大码av| 欧美日韩精品网址| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久中文看片网| 天天添夜夜摸| 禁无遮挡网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 中文字幕最新亚洲高清| 淫妇啪啪啪对白视频| 脱女人内裤的视频| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| av免费在线观看网站| 精品国产亚洲在线| 精品电影一区二区在线| 乱人伦中国视频| 亚洲成人国产一区在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 女人精品久久久久毛片| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 神马国产精品三级电影在线观看 | 日韩欧美在线二视频| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲专区字幕在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 在线视频色国产色| 欧美在线黄色| 久久中文看片网| av在线播放免费不卡| 黄片小视频在线播放| 成在线人永久免费视频| 精品人妻在线不人妻| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久精品91蜜桃| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产精华一区二区三区| 久久久久久久久免费视频了| 国产乱人伦免费视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲av成人av| 中国美女看黄片| 女警被强在线播放| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美一级毛片孕妇| 淫妇啪啪啪对白视频| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品亚洲美女久久久| 色老头精品视频在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 在线观看一区二区三区| 亚洲第一青青草原| 最近最新中文字幕大全免费视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 一夜夜www| 视频在线观看一区二区三区| 日本一区二区免费在线视频| 伦理电影免费视频| 精品国产国语对白av| 女同久久另类99精品国产91| 在线永久观看黄色视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产激情欧美一区二区| 国产精品久久久av美女十八| 给我免费播放毛片高清在线观看| 无限看片的www在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 一级作爱视频免费观看| 亚洲国产欧美网| 啦啦啦免费观看视频1| 电影成人av| 久久人妻av系列| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美另类亚洲清纯唯美| ponron亚洲| 极品教师在线免费播放| 午夜久久久在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美日韩乱码在线| www国产在线视频色| 国产精品99久久99久久久不卡| 91麻豆精品激情在线观看国产| 99在线视频只有这里精品首页| 91九色精品人成在线观看| 久久亚洲精品不卡| 欧美日韩一级在线毛片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 禁无遮挡网站| 女性被躁到高潮视频| 久久天堂一区二区三区四区| 99香蕉大伊视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 在线观看一区二区三区| 日本一区二区免费在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| videosex国产| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 嫩草影院精品99| 日本在线视频免费播放| 亚洲全国av大片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲电影在线观看av| 极品教师在线免费播放| 国产精品一区二区在线不卡| 免费看a级黄色片| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久人妻av系列| 午夜福利18| a级毛片在线看网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲av熟女| 日本在线视频免费播放| 久久欧美精品欧美久久欧美| 黄片大片在线免费观看| 一本大道久久a久久精品| 午夜福利18| 亚洲五月婷婷丁香| 超碰成人久久| 亚洲av成人av| 伦理电影免费视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久亚洲真实| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产成年人精品一区二区| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜两性在线视频| 香蕉丝袜av| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 操出白浆在线播放| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲精品国产色婷婷电影| 乱人伦中国视频| 黄片大片在线免费观看| 色老头精品视频在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 中文字幕色久视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 18禁美女被吸乳视频| 国产成人av激情在线播放| 色在线成人网| 精品熟女少妇八av免费久了| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美日韩乱码在线| 一级毛片高清免费大全| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲全国av大片| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲av成人一区二区三| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲国产精品久久男人天堂| 涩涩av久久男人的天堂| 成人手机av| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲精品国产一区二区精华液| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 又大又爽又粗| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲人成77777在线视频| 国产片内射在线| 神马国产精品三级电影在线观看 | 亚洲午夜理论影院| 99国产精品免费福利视频| 成人三级做爰电影| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲一区中文字幕在线| 久久香蕉国产精品| 淫妇啪啪啪对白视频| 一区福利在线观看| 中出人妻视频一区二区| 波多野结衣av一区二区av| 一进一出抽搐动态| 国产精品99久久99久久久不卡| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美日本视频| 日韩三级视频一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费av毛片视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 男人舔女人的私密视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 日本黄色视频三级网站网址| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲,欧美精品.| 老司机福利观看| 亚洲精品在线观看二区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成人国产综合亚洲| 天天添夜夜摸| 午夜日韩欧美国产| 国产黄a三级三级三级人| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久天堂一区二区三区四区| 日本在线视频免费播放| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲欧美激情综合另类| 97碰自拍视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久国产精品影院| 啪啪无遮挡十八禁网站| 一本大道久久a久久精品| 国产精品日韩av在线免费观看 | 国产精品爽爽va在线观看网站 | 欧美乱码精品一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲精华国产精华精| 老司机深夜福利视频在线观看| videosex国产| 久久久久久久久中文| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美一级毛片孕妇| 国产真人三级小视频在线观看| 99香蕉大伊视频| 国产亚洲av高清不卡| 夜夜爽天天搞| 成年版毛片免费区| 欧美在线一区亚洲| 欧美精品亚洲一区二区| or卡值多少钱| 99精品在免费线老司机午夜| 国产精品九九99| 国产精品永久免费网站| 丝袜在线中文字幕| 成年人黄色毛片网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久九九精品影院| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久九九热精品免费| 亚洲最大成人中文| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久久久久久久中文| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品一区二区免费欧美| 一a级毛片在线观看| www国产在线视频色| 村上凉子中文字幕在线| 首页视频小说图片口味搜索| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 精品福利观看| 亚洲全国av大片| 真人一进一出gif抽搐免费| 日日夜夜操网爽| 亚洲成人国产一区在线观看| 精品久久久久久成人av| 国产高清视频在线播放一区| av福利片在线| 亚洲成人久久性| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 好男人电影高清在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲在线自拍视频| 国产在线观看jvid| 久久草成人影院| 午夜福利18| 母亲3免费完整高清在线观看| 丝袜美足系列| 国产成人精品在线电影| 国产成人啪精品午夜网站| 国产一区在线观看成人免费| 日韩有码中文字幕| 日韩精品青青久久久久久| 久9热在线精品视频| 看免费av毛片| www.999成人在线观看| 欧美大码av| 亚洲国产精品sss在线观看| 在线av久久热| 亚洲电影在线观看av| 一区二区三区精品91| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品免费一区二区三区在线| 1024视频免费在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲欧美精品综合久久99| 搡老岳熟女国产| 两性夫妻黄色片| 亚洲三区欧美一区| 男人操女人黄网站| netflix在线观看网站| 在线观看一区二区三区| 51午夜福利影视在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 中文字幕人妻熟女乱码| 韩国精品一区二区三区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品免费视频内射| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 美女免费视频网站| 亚洲avbb在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美一级毛片孕妇| av欧美777| 人妻久久中文字幕网| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 在线av久久热| 动漫黄色视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 一本综合久久免费| 久久久久久国产a免费观看| 日日爽夜夜爽网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 两人在一起打扑克的视频| 精品国产亚洲在线| 国产欧美日韩精品亚洲av| 色av中文字幕| 亚洲成人国产一区在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 多毛熟女@视频| 亚洲少妇的诱惑av| 成年女人毛片免费观看观看9| 一区二区三区高清视频在线| 精品国产一区二区久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| av片东京热男人的天堂| 欧美在线黄色| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 少妇的丰满在线观看| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久热在线av| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 麻豆国产av国片精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 精品欧美国产一区二区三| 男人舔女人的私密视频| 99riav亚洲国产免费| 久久精品91蜜桃| 精品熟女少妇八av免费久了| 中文亚洲av片在线观看爽| 99在线视频只有这里精品首页| ponron亚洲| 真人一进一出gif抽搐免费| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产成人精品久久二区二区91| 曰老女人黄片| 狠狠狠狠99中文字幕| 在线观看66精品国产| 大香蕉久久成人网| 亚洲三区欧美一区| 99久久国产精品久久久| 在线观看一区二区三区| 欧美中文日本在线观看视频| 国产主播在线观看一区二区| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 在线观看午夜福利视频| 亚洲色图av天堂| 黄色视频,在线免费观看| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久久大精品| 一本大道久久a久久精品| 成在线人永久免费视频| 精品福利观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 青草久久国产| svipshipincom国产片| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产不卡一卡二| 视频在线观看一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 高清黄色对白视频在线免费看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲中文字幕日韩| 99在线视频只有这里精品首页| 日韩免费av在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲五月色婷婷综合| 久热这里只有精品99| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美午夜高清在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久国产乱子伦精品免费另类| 午夜成年电影在线免费观看| 99re在线观看精品视频| 三级毛片av免费| 美女午夜性视频免费| 久久草成人影院| 国产精品免费一区二区三区在线| 咕卡用的链子| 国产亚洲欧美在线一区二区| 老司机深夜福利视频在线观看| 在线观看午夜福利视频| 女同久久另类99精品国产91| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲五月色婷婷综合| 黄片大片在线免费观看| av天堂在线播放| 99久久国产精品久久久| 午夜a级毛片| 一级毛片精品| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美性长视频在线观看| 后天国语完整版免费观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 他把我摸到了高潮在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品二区激情视频| 国产片内射在线| 亚洲无线在线观看| 岛国在线观看网站| 青草久久国产| 欧美日韩黄片免| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久亚洲精品不卡| 国产精品一区二区在线不卡| 成在线人永久免费视频| 少妇 在线观看| 麻豆av在线久日| 纯流量卡能插随身wifi吗| 老司机福利观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 看片在线看免费视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 曰老女人黄片| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产不卡一卡二| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产不卡一卡二| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品久久久人人做人人爽| 成人亚洲精品av一区二区| АⅤ资源中文在线天堂| 老司机在亚洲福利影院| 日韩欧美免费精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日韩视频一区二区在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲性夜色夜夜综合| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 午夜免费激情av| 国产成人精品久久二区二区免费| 日日干狠狠操夜夜爽| 悠悠久久av| 免费看十八禁软件| 欧美日韩黄片免| 亚洲欧美精品综合久久99| www.999成人在线观看| 亚洲avbb在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 美女大奶头视频| 级片在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 成人国产综合亚洲| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 两人在一起打扑克的视频| av电影中文网址| 两个人视频免费观看高清| 91在线观看av| 午夜福利视频1000在线观看 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 性色av乱码一区二区三区2| 9191精品国产免费久久| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 真人一进一出gif抽搐免费| 美女免费视频网站| 一级毛片高清免费大全| 亚洲精品久久国产高清桃花| 成人特级黄色片久久久久久久| 女人被狂操c到高潮| 日本精品一区二区三区蜜桃| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 制服诱惑二区| 日本欧美视频一区| 一进一出抽搐动态| 久久久国产欧美日韩av| 日韩大尺度精品在线看网址 | 国产在线精品亚洲第一网站| 午夜亚洲福利在线播放| 9热在线视频观看99| 人人妻人人澡人人看| 少妇被粗大的猛进出69影院| svipshipincom国产片| 极品教师在线免费播放|