FQ—PCR檢測丹江口地區(qū)解脲支原體、沙眼衣原體的五年回顧性研究

鄧莉++宋丹++方正春

摘要：目的 分析研究實時熒光定量聚合酶鏈式反應（FQ-PCR）對解脲支原體、沙眼衣原體的檢測結(jié)果，以了解本地區(qū)在不同性別及年齡段的感染情況。方法 選取1000例疑似非淋菌性尿道炎患者，均采取FQ-PCR進行檢測，統(tǒng)計分析不同男女性別及年齡段的陽性檢出率。結(jié)果 UU和Ct的檢出率為44.50%，其中在女性患者中的檢出率（55.31%）要明顯高于男性（35.58%）（P<0.05）。其中女性患者UU的檢出率（37.61%）顯著高于男性（18.25%），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而Ct和UU+Ct在不同性別間檢出率無明顯差異（P>0.05）。18～40歲患者的陽性率（81.35%）顯著高于年齡大于40歲患者（18.65%），差異顯著（P<0.05）。結(jié)論 FQ-PCR對UU、Ct的檢出率較高，本地區(qū)以女性患者及18～40歲年齡段的檢出率較高，應加大對上述人群的監(jiān)管力度。

關(guān)鍵詞：FQ-PCR；解脲支原體；沙眼衣原體

A Retrospective Study of FQ-PCR in Danjiangkou Area of Ureaplasma Urealyticum and Chlamydia Trachomatis in Five Years

DENG Li1，SONG Dan1，F(xiàn)ANG Zheng-chun2

（1.Department of Clinical Laboratory，The First Hospital of Danjiangkou City，Danjiangkou 442700，Hubei，China；2.Department of Anesthesiology，The First Hospital of Danjiangkou City，Danjiangkou 442700，Hubei，China）

Abstract：Objective Analysis of real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR）of Ureaplasma urealyticum and Chlamydia trachomatis detection results， in order to understand the region in different gender and age of infection. Methods A total of 1000 cases of suspected patients with nongonococcal urethritis， FQ-PCR detection. Statistical analysis of different gender and age of the positive rate. Results The detection rate of UU and Ct was 44.50%， among which the detection rate （55.31%） in female patients was significantly higher than that in males（35.58%）（P<0.05）.The detection rate of UU（37.61%）in female patients was significantly higher than that in male （18.25%）， and the difference was statistically significant（P<0.05），while there was no significant difference between UU+Ct and Ct （P>0.05）. The positive rate （81.35%） of 18-40 years old patients was significantly higher than that in patients older than 40 years （18.65%）， and the difference was significant （P<0.05）. Conclusion The detection rate of UU in FQ-PCR and Ct is higher， the detection rate of female patients in the local area and the age of 18～40 years old is higher， and the supervision of these people should be increased.

Key words：FQ-PCR；Ureaplasma urealyticum；Chlamydia trachomatis

在臨床中，非淋菌性尿道炎（nongonococcalurethritis，NGU）屬于常見性傳播疾病[1-2]。該病在歐美等發(fā)達國家、地區(qū)的發(fā)病率居首位，且自2001年以來我國報道NGU發(fā)病率已經(jīng)超過淋病，在全國監(jiān)測8種性傳播疾病中居首位。NGU及并發(fā)癥，如睪丸炎、前列腺炎、盆腔炎、不孕不育等對人類的健康構(gòu)成極大的危害。因此需要對該癥進行及時診斷，以免耽誤治療[3-5]。而據(jù)統(tǒng)計在NGU中40%～70%的病例由解脲支原體（UU）和沙眼衣原體（Ct）引起。以前由于檢測手段的限制，對UU和Ct檢出率較低，無法及時治療。近年來隨著醫(yī)學的不斷進步，檢測手段也隨之進步，尤其是FQ-PCR技術(shù)的應用使得UU和Ct檢出率不斷增高，已成為臨床檢測UU和Ct的首先方法。為了解本地區(qū)5年來NGU的發(fā)病特點，本次研究選取FQ-PCR檢測方法對我院在2009年1月～2014年12月收治的疑似NGU進行檢測，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院在2009年1月～2014年12月收治疑似NGU患者1000例，病程為1 w～1年，男性主要表現(xiàn)為尿道口出現(xiàn)紅腫，分泌物較多，且尿頻；女性主要表現(xiàn)為陰道分泌增物多、瘙癢，且少數(shù)伴尿頻及下腹痛等。1000例患者中，男548例、女452例，年齡18～56歲，平均（38.89±3.45）歲。

1.2方法 標本采集：對于女性患者采取陰道窺器進行擴張陰道，選取無菌棉拭子將宮頸口過多分泌物涂去，用無菌拭子插入至宮頸管內(nèi)的1 cm處，將其停留15 s左右并旋轉(zhuǎn)3～5周，采集宮頸的分泌物，然后把棉拭子插入至試管中（盛有1ml無菌的生理鹽水）并將其洗下。對于男性患者將棉拭子插入至尿道口約2～4 cm，轉(zhuǎn)動數(shù)次拭子后立即將其放在試管中（盛有1 ml無菌的生理鹽水）。將棉拭子進行充分的洗滌，貼著壁將棉拭子中水分擠出，待混勻后，轉(zhuǎn)入至離心管內(nèi)以12000 r/min的速度離心10 min，棄上清，重復一次。加入50μl核酸提取液，在100℃下干浴10 min，再以12000 r/min的速度離心5 min，取上清液2 μl進行PCR反應。應用PCR檢測技術(shù)檢測UU、Ct，并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析 。

1.3統(tǒng)計學意義 數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進行處理，計量數(shù)據(jù)用平均值±方差（x±s）表示，t檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1男女患者病原體檢出率比較 病原體檢出率為44.50%，女性患者的檢出率（55.31%）要明顯高于男性（35.58%）（P<0.05）。其中女性患者UU的檢出率（37.61%）顯著高于男性（18.25%），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而Ct和UU+Ct在不同性別間檢出率無明顯差異（P>0.05），見表1。

2.2不同年齡層次病原體檢出率比較 18～40歲患者的陽性率（81.35%）顯著高于年齡大于40歲患者（18.65%），差異顯著（P<0.05），見表2。

3 討論

NGU是一類經(jīng)過性傳播泌尿生殖系統(tǒng)的炎癥，近年來，據(jù)報道在西方國家和我國部分省市發(fā)病率均已經(jīng)超過傳統(tǒng)淋病和梅毒，居于各類性傳播疾病的首位，NGU發(fā)病比較緩慢并且無明顯臨床癥狀，往往因隱匿性的感染而延誤了治療，因此易導致嚴重并發(fā)癥[6-7]。

UU是常見的且被公認的生殖泌尿道感染致病病原體，其大小介于病毒和細菌之間，無細胞壁，呈現(xiàn)多形性，且可在無活動的細胞培養(yǎng)基中進行繁殖。Ct寄生于真核細胞內(nèi)，具有獨特的發(fā)育周期，早期Ct感染無特殊的臨床表現(xiàn)而容易漏誤診[8-9]。CT和UU均寄生于泌尿生殖道，能夠通過性進行傳播，同時也可以通過孕婦血液及生殖道等途徑傳播給胎兒和新生兒，可引前列腺炎、不孕癥、早產(chǎn)等多種疾病[10]。

因此早期的診斷和治療及其重要，但是以前由于受到檢驗技術(shù)限制，未引起人們重視。細胞培養(yǎng)法雖然一直作為診斷的金標準，特異性和敏感性均較高，但對條件和技術(shù)要求高，且復雜費時，很難在臨床實驗室中開展。直接免疫熒光技術(shù)檢測CT抗原，該法快速、簡便、特異性好，費用低，重復性好，但敏感性不佳。PCR被廣泛應用在核酸的分析中，PCR法直接檢測病原體基因是最直接的感染證據(jù)，并且簡單快速，可以在數(shù)小時內(nèi)得到明確的結(jié)果。PCR法的高敏感性，可以把目的基因片段在短短的數(shù)小時內(nèi)擴增至數(shù)萬倍以上，但是普通的PCR技術(shù)具有擴增產(chǎn)物容易污染、無法定量以及致癌物危害等缺點，近年來經(jīng)過研究出現(xiàn)了新的檢測方法FQ-PCR，采用熒光技術(shù)及閉管檢測，避免了交叉污染，且對UU、Ct的檢測有高度特異性及敏感性，完全克服上述缺點。目前實時熒光定量PCR技術(shù)成熟，因此不易造成漏診，這對患者感染的極早期或潛伏期或無癥狀帶菌者的診斷有相當重要的意義，是值得推薦的檢驗方法[11-12]。

本次研究顯示病原體的檢出陽性率為44.50%，檢出率較高，與報道相似。而女性的檢出率為53.10%，顯著高于男性（35.58%），差異顯著。其中Ct、UU+Ct的陽性檢出率在不同性別之間無顯著性差異，而UU在女性的檢出率（37.61%）要顯著高于男性檢出率（18.25%），差異顯著，這可能和男女泌尿生殖道不同密切相關(guān)，相對而言女性的泌尿生殖道更適于UU的生長而男性生殖道在進行排尿時有一定的沖洗作用，從而排掉了部分的病原體。

據(jù)報道從該病的年齡構(gòu)成分布結(jié)果顯示約80%的感染者年齡小于40歲。一方面與性接觸史或者配偶感染史有關(guān)系；一方面與該年齡段處于生育活動高峰年齡有關(guān)；一方面與此年齡段的女性性行為比較活躍，喜歡穿緊身衣褲或者在非經(jīng)期使用護墊引起會陰部潮濕而導致病原菌繁殖等一系列生活習慣相關(guān)；另一方面與該年齡段的男性工作、社交頻繁、生活壓力較大、吸煙喝酒等一系列不良社會行為密切有關(guān)。本次研究顯示18～40歲的感染率為81.35%，略高于文獻報道，這說明本地區(qū)要對青壯年尤其是青年人加強性相關(guān)道德教育以及性傳播疾病的相關(guān)科普知識，并對高危人群加強監(jiān)測力度。

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編輯/安樺