• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC與NupG微生物胞內(nèi)核苷分泌的作用研究進(jìn)展

    2017-02-22 06:51:08王夢(mèng)嬌方海田劉慧燕賀曉光吳慶趙貝貝
    生物技術(shù)通報(bào) 2017年2期
    關(guān)鍵詞:跨膜核苷谷氨酸

    王夢(mèng)嬌 方海田 劉慧燕 賀曉光 吳慶 趙貝貝

    (寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院,銀川 750021)

    轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC與NupG微生物胞內(nèi)核苷分泌的作用研究進(jìn)展

    王夢(mèng)嬌 方海田 劉慧燕 賀曉光 吳慶 趙貝貝

    (寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院,銀川 750021)

    核苷用途廣泛,微生物發(fā)酵法是其主要的生產(chǎn)方法之一。微生物細(xì)胞內(nèi)核苷的分泌對(duì)于高產(chǎn)核苷有重要的作用,其細(xì)胞膜上存在多種起運(yùn)輸作用的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與代謝產(chǎn)物的分泌。主要闡述核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC和NupG在微生物細(xì)胞內(nèi)核苷分泌過程中的作用。此外,介紹了轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的修飾改造對(duì)于核苷生物合成的影響,旨在為構(gòu)建高產(chǎn)菌株的育種策略提供依據(jù)。

    微生物;核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白;NupC;NupG

    核苷(Nucleosid)是一類糖苷胺(Glycosylamine)分子,組成物是核酸堿基加上核糖(Ribose)或脫氧核糖(Deoxyribose),堿基包括嘌呤(Purine)和嘧啶(Pyrimidine)兩類,根據(jù)堿基的不同又可將核苷分為嘧啶類核苷和嘌呤類核苷兩類。嘧啶類核苷主要有胸苷、尿苷和胞苷,嘌呤類核苷主要有腺苷和鳥苷。近幾十年來,核苷生物合成代謝調(diào)控機(jī)制的研究逐漸受到關(guān)注,國外學(xué)者在核苷產(chǎn)生菌遺傳改造方面開展了一些研究。核苷的分泌是一個(gè)非常復(fù)雜的代謝過程,是高產(chǎn)菌株特有的遺傳與生化機(jī)制和培養(yǎng)條件共同起作用的結(jié)果,受到多個(gè)因素的調(diào)控,包括細(xì)胞分泌系統(tǒng)的調(diào)控、細(xì)胞膜的通透性、代謝網(wǎng)絡(luò)的自身調(diào)節(jié)、代謝分流的限制、膜蛋白的調(diào)節(jié)及環(huán)境因子的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)等[1,2]。近年來,微生物通過跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)分泌代謝物質(zhì)受到愈來愈多的關(guān)注,成為一個(gè)重要的研究領(lǐng)域。微生物細(xì)胞膜是一類超分子體系,由蛋白質(zhì)、糖類及脂類等組成,與細(xì)胞的能量轉(zhuǎn)換、物質(zhì)運(yùn)送、信號(hào)的感受與傳導(dǎo)等基本生命活動(dòng)都密切相關(guān),能夠控制物質(zhì)出入細(xì)胞進(jìn)行物質(zhì)和信息交換[1]。細(xì)胞對(duì)溶質(zhì)的選擇性吸收和排放主要是通過細(xì)胞膜上以膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白為基礎(chǔ)的運(yùn)輸系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的[2]。由于核苷是親水性的分子,不能直接通過擴(kuò)散跨越生物膜,主要是通過一些跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)載體來實(shí)現(xiàn)細(xì)胞膜的跨越,其中,核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白通過介導(dǎo)核苷的轉(zhuǎn)運(yùn),具有分泌代謝產(chǎn)物、調(diào)節(jié)生命以及分泌其他生物大分子等的功能[3,4]。

    本文主要闡述核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC和NupG在微生物細(xì)胞內(nèi)核苷分泌過程中的作用。旨在為提出構(gòu)建胞苷高產(chǎn)菌株的育種策略,大規(guī)模、單一地發(fā)酵生產(chǎn)核苷,降低其生產(chǎn)成本,提高發(fā)酵生產(chǎn)效率提供參考。

    1 核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的分類和結(jié)構(gòu)

    由于核苷是親水性的分子,它們被動(dòng)擴(kuò)散跨越生物膜的能力是有限的,不能自由通過細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu),需要專門的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白協(xié)助核苷來完成細(xì)胞膜的跨越[5,6]。細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白能夠控制細(xì)胞內(nèi)、外物質(zhì)交流,對(duì)細(xì)胞的基本生命活動(dòng)起到關(guān)鍵作用。轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白一般具有多次跨膜的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu),能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)運(yùn)底物,利用能量驅(qū)動(dòng)逆濃度梯度主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)。根據(jù)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制在轉(zhuǎn)運(yùn)過程對(duì)底物特異性識(shí)別及轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白間的同源性,Paulsen等[7]對(duì)細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)行了系統(tǒng)分類,歸結(jié)為兩類核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白:一種為擴(kuò)散型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Equilibrative nucleoside transporter,ENT),另一種是富集型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Concentrative nucleoside transporter,CNT)。擴(kuò)散型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白又稱為依賴于濃度梯度的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,它只能利用濃度梯度將核苷從高濃度一側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)到低濃度一側(cè)。富集型核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白又稱為不依賴于濃度梯度的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,它既能將核苷從高濃度的一側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)到低濃度的一側(cè),又能利用 Na+協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)提供的動(dòng)力逆濃度梯度將核苷從低濃度的一側(cè)向高濃度的一側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)。

    對(duì)大腸桿菌中2種核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupG和NupC的拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)研究[8]。雖然這2種蛋白質(zhì)都是核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,其功能比較相似,但在細(xì)胞內(nèi)的分布及拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)明顯不同。其研究發(fā)現(xiàn),NupG有12個(gè)跨膜螺旋,N端和C端位于胞內(nèi)一側(cè),而NupC只有10個(gè)跨膜螺旋,N端和C端位于細(xì)胞外側(cè)。NupG和NupC除了其拓?fù)鋵W(xué)結(jié)構(gòu)的不同,兩種蛋白空間上的折疊方式也有明顯的不同[9]。NupG N端的6個(gè)螺旋和C端的6個(gè)螺旋以同向平行假對(duì)稱的方式排列,對(duì)稱軸垂直于膜平面,N端和C端的兩個(gè)對(duì)稱部分在細(xì)胞內(nèi)一側(cè)距離很近,所以是以向外開口的構(gòu)象存在(圖1)。而NupC是以不對(duì)稱方式排列,并以向內(nèi)開口的構(gòu)象存在(圖2)。

    圖1 NupG結(jié)構(gòu)示意圖

    圖2 NupC結(jié)構(gòu)示意圖

    2 核苷分泌機(jī)理的理論分析

    Villas-Boas等[10]的研究認(rèn)為細(xì)胞的生長、細(xì)胞膜上受體蛋白的嵌入、細(xì)胞內(nèi)外的物質(zhì)交換以及再循環(huán)等細(xì)胞生理功能的實(shí)現(xiàn)都與細(xì)胞分泌活動(dòng)有關(guān),都涉及膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及其分子機(jī)制。張星元[11]、Baranyi等[12]提出了微生物的細(xì)胞經(jīng)濟(jì)學(xué)原理(節(jié)約原理、適應(yīng)原理、生命保障原理),細(xì)胞中存在經(jīng)濟(jì)性自我響應(yīng)機(jī)制。由此可知,若生產(chǎn)菌株細(xì)胞內(nèi)核苷濃度超過其閾值,必將受到細(xì)胞內(nèi)相關(guān)代謝調(diào)節(jié)機(jī)制的干預(yù),胞內(nèi)核苷的濃度過高,就會(huì)對(duì)合成核苷的代謝過程施加負(fù)反饋調(diào)節(jié),促進(jìn)核苷向胞外空間分泌,迫使其回到正常濃度。因此,無論從化學(xué)平衡的角度還是從生物學(xué)信息反饋的角度,及時(shí)將核苷轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外,都將有利于載流路徑上代謝主流的流動(dòng)。Chokkathukalam等[13]的研究也表明,細(xì)胞能夠感受環(huán)境的變化,產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),在面對(duì)內(nèi)外界一些環(huán)境因素變化時(shí)也會(huì)做出相應(yīng)的代謝變化,要不斷地通過細(xì)胞內(nèi)的代謝調(diào)控途徑來調(diào)節(jié)代謝水平以達(dá)到一種穩(wěn)態(tài),若這些應(yīng)激反應(yīng)失調(diào),就會(huì)使細(xì)胞代謝發(fā)生異變,并排出代謝產(chǎn)物,這可能是導(dǎo)致核苷向胞外分泌的因素之一。

    目前對(duì)代謝產(chǎn)物分泌機(jī)制的報(bào)道多見于對(duì)氨基酸特別是谷氨酸的研究,對(duì)于如何誘導(dǎo)谷氨酸分泌的認(rèn)識(shí)是最清楚的,但是對(duì)胞苷分泌過程調(diào)控機(jī)制方面的研究未見報(bào)道。分析谷氨酸棒桿菌谷氨酸分泌的研究成果,對(duì)于胞苷分泌機(jī)制的研究有重要的借鑒意義。張星元等[14]提出3種氨基酸分泌機(jī)制的模型:溢流代謝模型、受限的分解代謝模型和去調(diào)節(jié)的合成代謝模型;姚輝等[15]也提出3種谷氨酸分泌的假定模式:“泄漏”模式、“載體功能逆轉(zhuǎn)”模式及“特殊載體系統(tǒng)”模式,這3種假定模式是從細(xì)胞膜的組成、載體蛋白等方面研究谷氨酸的分泌,而且在細(xì)胞壁上存在的孔蛋白能允許親水溶質(zhì)透過細(xì)胞壁;Eggeling等[16]提出了解釋谷氨酸分泌機(jī)理的滲漏模型和代謝流改變模型;也有人采用局部麻醉和對(duì)細(xì)胞殼層施加滲透壓的方法來調(diào)節(jié)膜狀態(tài),認(rèn)為膜應(yīng)力可能激活谷氨酸的分泌[17]。但是,在每一種模式的輸送系統(tǒng)中,并不僅存在一種模型,幾種模型往往同時(shí)存在。這些研究結(jié)果在研究微生物的核苷分泌機(jī)制中具有重要參考價(jià)值,依據(jù)氨基酸及谷氨酸的分泌機(jī)理推測(cè),在微生物中核苷的分泌過程可能也有類似的模式及分泌機(jī)制。

    3 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC對(duì)核苷分泌的作用

    NupC屬于易化擴(kuò)散性核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ENT),通過介導(dǎo)核苷由胞內(nèi)向胞外分泌,該轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是根據(jù)電化學(xué)勢(shì)梯度驅(qū)動(dòng)的單向跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),將核苷由高濃度一側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)到低濃度一側(cè)[18]。同時(shí),NupC能夠在向外開口的狀態(tài)和向內(nèi)開口的狀態(tài)間發(fā)生異構(gòu)變化,引發(fā)核苷的結(jié)合位點(diǎn)交替開口向細(xì)胞膜的兩側(cè),從而將核苷分泌到細(xì)胞外。而NupC的C端和N端均位于大腸桿菌的細(xì)胞外側(cè),組氨酸含正電荷側(cè)鏈,引入多聚組氨酸親和標(biāo)簽會(huì)影響NupC的表達(dá)。NupC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)核苷的分泌機(jī)制可能與核苷內(nèi)分子的磷酸化、去磷酸化有關(guān)。Zhu等[19]由非特異性5-磷酸酶催化,抑制其轉(zhuǎn)運(yùn)核苷的內(nèi)在活性,細(xì)胞內(nèi)的CMP和UMP可以去磷酸化形成胞嘧啶和尿嘧啶。胞嘧啶核苷脫氨酶(cdd基因編碼)作用于胞嘧啶核苷可以進(jìn)一步脫去氨基形成尿苷[20]。在dra-nupC-pdp操縱子中,pdp基因編碼嘧啶核苷磷酸化酶催化降解的尿苷形成尿嘧啶并分泌到細(xì)胞外[21]。最初研究大腸桿菌,證明NupC可作為核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,利用H+協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)提供動(dòng)力轉(zhuǎn)運(yùn)腺苷和胞嘧啶核苷[22]。類似大腸桿菌的還有金黃色葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、枯草芽孢桿菌等,以NupC作為能量來源或核苷酸從頭合成的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[23]。

    4 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupG對(duì)核苷分泌的作用

    NupG屬于主動(dòng)擴(kuò)散載體超家族(major facilitator superfamily,MFS)。Munch-Petersen等[24]研究發(fā)現(xiàn),通過NupG染色體突變證明已被克隆在質(zhì)粒載體的DNA片段能夠誘導(dǎo)合成NupG核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupG需要有相應(yīng)的結(jié)合位點(diǎn)與之結(jié)合才能對(duì)核苷的分泌起到作用。有研究表明,核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupG與所需的羥基基團(tuán)結(jié)合,必須存在C-3'和C-5'核糖位置。更重要的是用于結(jié)合核糖部分NupG核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和低聚糖之間的進(jìn)化關(guān)系是一致的[25]??梢杂?0世紀(jì)60年代提出的交替開放模型(alternating access model)[26]來解釋其對(duì)核苷分泌的機(jī)制。轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupG首先在膜的一側(cè)暴露其與底物的結(jié)合位點(diǎn),底物分子在與蛋白結(jié)合的同時(shí)可以誘導(dǎo)蛋白的構(gòu)象發(fā)生較大變化,使蛋白的開口由向胞外開放變成向細(xì)胞另外一側(cè)開放,進(jìn)一步引起對(duì)核苷物質(zhì)的分泌,從而完成整個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)的過程[27];當(dāng)?shù)孜锝Y(jié)合時(shí)可以引起鹽橋弱化,使底物結(jié)合產(chǎn)生的能量驅(qū)動(dòng)蛋白的構(gòu)象變化[28]。

    5 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的修飾改造對(duì)于核苷合成的影響

    通過改造核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的代謝工程對(duì)于核苷類物質(zhì)的合成具有重要作用,可以通過過表達(dá)編碼核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC和NupG來提高轉(zhuǎn)運(yùn)效率。NupG作為大腸桿菌核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,屬于主動(dòng)擴(kuò)散載體超家族,其N端位置位于胞質(zhì)一側(cè),在構(gòu)建重組 NupG時(shí),不需要考慮引入和包含信號(hào)序列[29],類似的蛋白質(zhì)還有 LacY和GlpF[30,31]。NupG轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白其C端位于胞質(zhì)一側(cè),可以在該位置引入多聚組氨酸親和標(biāo)簽,符合正電荷氨基酸向內(nèi)原則,重組構(gòu)建NupG其表達(dá)不受影響[29]。

    對(duì)于生產(chǎn)菌株來說,趙偉睿等[32]認(rèn)為控制細(xì)胞膜通透性的方法有控制磷脂的合成、控制細(xì)胞壁的合成等。在微生物中,通過改變細(xì)胞膜滲透性對(duì)代謝控制具有非常重要的作用[33]。微生物自身存在著許多種負(fù)責(zé)物質(zhì)跨膜運(yùn)輸?shù)奶禺惡头翘禺愞D(zhuǎn)運(yùn)蛋白,因此加強(qiáng)這些通道蛋白的表達(dá)就有可能降低細(xì)胞對(duì)底物和產(chǎn)物的傳質(zhì)阻力。這對(duì)于解決發(fā)酵過程中由于產(chǎn)物不能及時(shí)排出而造成的產(chǎn)物抑制效應(yīng)是一個(gè)極其有效的方法。因此,可通過基因敲除和過量表達(dá)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證這些基因在核苷生產(chǎn)菌株中的功能,將為核苷生產(chǎn)菌的設(shè)計(jì)與核苷分泌機(jī)制的研究提供更有價(jià)值的理論依據(jù)。

    6 可能存在的其他核苷分泌機(jī)制

    在微生物細(xì)胞內(nèi)核苷分泌過程中,除了轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC和NupG之外,還有一些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白也起到了重要的作用。大多數(shù)已知功能的NAT 家族的蛋白都與核酸(包括嘌呤和嘧啶)特異性的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。根據(jù)序列比較,有研究對(duì)NAT家族提出利用質(zhì)子或鈉離子共轉(zhuǎn)運(yùn)底物的分子機(jī)理。自2007年開始顏寧教授等對(duì)NAT家族蛋白進(jìn)行研究,首先利用現(xiàn)代結(jié)構(gòu)生物學(xué)的方法對(duì)這一家族代表性成員大腸桿菌尿嘧啶-質(zhì)子共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Uracil:proton Symporter)UraA進(jìn)行研究,終于在2010年4月首次獲得了UraA與底物尿嘧啶高分辨率三維精細(xì)結(jié)構(gòu),其分辨率高達(dá)2.8?,研究表明,蛋白底物尿嘧啶在跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的過程中首先被準(zhǔn)確地定位在兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間,進(jìn)而通過門控結(jié)構(gòu)域和核心結(jié)構(gòu)域之間的構(gòu)像變化完成整個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)過程,其中胞嘧啶(cytosine)分子的運(yùn)輸也是通過協(xié)同運(yùn)輸?shù)牡鞍證odB完成的[31],經(jīng)過脫氨基作用,又進(jìn)一步被尿嘧啶磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(UPRTase)修飾,從而被細(xì)胞利用。UraA不但對(duì)尿嘧啶轉(zhuǎn)運(yùn)功能,對(duì)尿嘧啶的衍生物5-氟尿嘧啶也能夠特異性轉(zhuǎn)運(yùn)。這為解釋5-氟尿嘧啶作為抗癌的化療藥物如何進(jìn)入細(xì)胞提供了良好的分子機(jī)理[34]。另外,還存在一些膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,如在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)的乳糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白LacY以及大腸桿菌甘油-3-磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GlpT,大腸桿菌蛋白 NhaA在對(duì)Na+、H+反向轉(zhuǎn)運(yùn)的機(jī)制研究也有類似的結(jié)果。Mohanty等[35]通過對(duì)位于胞質(zhì)側(cè)的腸桿菌水通道N端和C端的研究表明,雖然其N端或C端分別含有6-10個(gè)組氨酸的重組AqpZ 蛋白,但不會(huì)受多聚組氨酸的長度和位置對(duì)表達(dá)產(chǎn)生影響。Sheremet等[36]在對(duì)解淀粉芽胞桿菌AJ1991中研究發(fā)現(xiàn),途徑末端代謝物存在強(qiáng)烈的酶水平反饋抑制作用,過表達(dá)編碼核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的pbuE基因,肌苷產(chǎn)量較AJ1991提高100%,達(dá)到6 g/L,而過表達(dá)來自大腸桿菌的編碼核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的nepl基因,肌苷產(chǎn)量可以提高190%。

    7 結(jié)語

    隨著膜蛋白和代謝組學(xué)等研究技術(shù)的日益發(fā)展,核苷代謝調(diào)控機(jī)制受到了廣泛的關(guān)注,核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白通過介導(dǎo)核苷跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)起到了關(guān)鍵作用,而不同的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有各自的底物轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)和選擇性。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多已知功能轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族都與核酸(包括嘌呤和嘧啶)特異性的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān),但是關(guān)于轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)理仍知之甚少,如底物識(shí)別與結(jié)合機(jī)制、水解機(jī)制、跨膜方式等。本文結(jié)合核苷分泌機(jī)理的理論研究,對(duì)核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白NupC和NupG結(jié)構(gòu)及分泌機(jī)制進(jìn)行分析,闡述了它們對(duì)核苷分泌的作用,提出了通過修飾改造NupC和NupG來提高轉(zhuǎn)運(yùn)效率的策略,為大規(guī)模、單一地發(fā)酵生產(chǎn)核苷,降低其生產(chǎn)成本,提高發(fā)酵生產(chǎn)效率提供參考。由于轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究越來越深入,這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能將需要利用更多先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段并可能利用分子動(dòng)力學(xué)模擬(molecular dynamics simulation)等方法對(duì)核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)理從分子水平上得以全面詮釋。

    [1]劉永康, 陳國民. 細(xì)胞膜對(duì)大分子物質(zhì)及顆粒物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2006(5):674-675.

    [2]馬蓉, 張立軍, 丁銳, 等. 大腸桿菌氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究進(jìn)展[J]. 科技通報(bào), 2012, 3:49-56, 99.

    [3] 王晶敏. 核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在細(xì)胞水平跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)作用的研究進(jìn)展[J]. 國外醫(yī)學(xué)·藥學(xué)分冊(cè), 2003, 1:17-22.

    [4] 李劍, 李光永, 王道文. 核苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究進(jìn)展[J]. 科學(xué)通報(bào), 2002, 7:481-484.

    [5] Martinussen J, Willemo?s M, Kilstrup M. Nucleotide metabolism[M]. Second Edition. Comprehensive Biotechnology, 2011:91-107.

    [6]Charles L. Turnbough Jr, Robert L, et al. Regulation of pyrimidine biosynthetic gene expression in bacteria:repress ion without repressors[J]. Microbiology and Molecular Biology Reviews, 2008, 72(2):266-300.

    [7]Paulsen IT, Sliwinski MK, Saier MH. Microbial genome analyses:Global comparisons of transport capabilities based on phylogenies, bioenergetics and substrate specificities[J]. J Mol Biol, 1998, 277:573-592.

    [8]http//bioweb. pasteur. fr/seqanal/interfaces/toppred. html

    [9]Madej T, Lanczycki CJ, Zhang D, et al. MMDB and VAST+:tracking structural similarities between macromolecular complexes[J]. Nucleic Acids Res, 2014, 42(Database issue):D297-303.

    [10]Villas-Boas S, Han TL, Liu T, et al. What is the relationship between intracellular and extracellular metabolites? The theory of“metabolic overflow” put into test[J]. New Biotechnology, 2014, 31:S28-S29.

    [11]張星元. 發(fā)酵原理[M]. 北京:科學(xué)出版社, 2011.

    [12]Baranyi J, Metris A, George SM. Bacterial economics:Adaptation to stress conditions via stage-wise changes in the response mechanism[J]. Food Microbiology, 2015, 45:162-166.

    [13]Chokkathukalam A, Kim DH, Barrett MP, et al. Stable isotopelabeling studies in metabolomics:new insights into structure and dynamics of metabolic networks[J]. Bioanalysis, 2014, 6(4):511-524.

    [14]張星元, 李秀敏, 楊毅, 等. 谷氨酸棒桿菌的氨基酸輸送系統(tǒng)的存在、功能及其在氨基酸生產(chǎn)上的重要性[J]. 無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 23(3):105-110.

    [15]姚輝, 張建華, 毛忠貴. 谷氨酸棒狀桿菌的谷氨酸分泌模式初探[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2013, 39(5):54-58.

    [16]Eggeling L, Krumbach K, Shahm H. L-Glutamate efflux with Corynebacterium glutamicum:why is penicillin treatment or Tween addition doing the same[J]. J Mol Microbiol Biotechnol, 2001, 3(1):67-68.

    [17]Puech V, Chami M, Lemassu A, et al. Structure of the cell envelope of corynebacteria:importance of the non-covalently bound lipids in the formation of the cell wall permeability barrier and fracture plane[J]. Microbioloy, 2001, 147:1365-1382.

    [18]Ramadan A, Naydenova Z, Stevanovic K, et al. The adenosine transport ENT1 in cardiomyocytes is sensitive to inhibition by ethanol in akinase-dependent manner:implications for ethanol-dependent cardioprotection and nucleoside analog drug cytotoxicity[J]. Purinergic Signalling, 2014, 10(2):305-312.

    [19]Zhu H, Yang SM, Yuan ZM, et al. Metabolic and genetic factors affecting the productivity of pyrimidine nucleoside in Bacillus subtilis[J]. Microbial Cell Factories, 2015, 14:54.

    [20]Song BH, Jan N. Chromosomal location, cloning and nucleotide sequence of the Bacillus subtilis cdd gene encoding cytidine/ deoxycytidine deaminase[J]. Mol Gen Genet, 1989;216:462-468.

    [21]Saxild HH, Andersen LN, Hammer K. Dra-nupC-pdp operon of Bacillus subtilis:nucleotide sequence, induction by deoxyribonucleosides, and transcriptional regulation by the deoR-encoded DeoR repressor protein[J]. J Bacteriol, 1996, 178:424-434.

    [22]Henderson PJ, Herbert RB. The nucleoside transport proteins, NupC and NupG, from Escherichia coli:specific structural motifs necessary for the binding of ligands[J]. Org Biomol Chem, 2005, 3:462-470.

    [23]Karatza P, Frillingos S. Cloning and functional characterization of two bacterial members of the NAT/NCS2 family in Escherichia coli[J]. Mol Membr Biol, 2005, 22(3):251-261.

    [24]Munch-Petersen A, Jensen N, et al. Cloning and expression of genes encoding the nupG nucleoside transport system in Escherichia coli[J]. The Cell Membran, 1984, 411(2):85-99.

    [25]Zhu H, Yang SM, Yuana ZM, et al. Metabolic and genetic factors affecting the productivity of pyrimidine nucleoside in Bacillus subtilis[J]. Microbial Cell Factories, 2015, 14(54):2-12 .

    [26]Jardetzky O. Simple allosteric model for membrane pumps[J]. Nature, 1966, 211:969-970.

    [27]Mitchell P. A general theory of membrane transport from studies of bacteria[J]. Nature, 1957, 180(4577):134-136.

    [28]Smirnova I, Kasho V, Choe JY, et al. Sugar binding induces an outward facing conformation of LacY[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104:16504-16509.

    [29]Monné M, Chan KW, Slotboom DJ, et al . Functional expression of eukaryotic membrane proteins in Lactococcus lactis[J]. Protein Sci, 2005, 14(12):3048-3056.

    [30]Abramson J, Smirnova I, Kasho V, et al . Structure and mechanism of the lactose permease of Escherichia coli[J]. Science, 2003, 301(5633):610-615.

    [31]Huang Y, Lemieux MJ, Song JM. Structure and mechanism of theglycerol-3-phosphate transporter from Escherichia coli[J]. Science, 2003, 301(5633):616-620.

    [32]趙偉睿, 胡升, 黃俊, 等. 微生物細(xì)胞通透性改善方法與策略[J]. 中國生物工程雜志, 2014, 34(3):125-131.

    [33]Yamada S, Awano N, Inubushi K, et al. Effect of drug transporter genes on cysteine export and overproduction in Escherichia coli[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2006, 72(7):4735-4742.

    [34]Kuhn JG. Fluorouracil and the new oral fluorinated pyrimidines[J]. Ann Pharmacother, 2001, 35(2):217-227.

    [35]Mohanty AK, Wiener MC. Membrane protein expression andproduction:effects of polyhistidine tag length and position[J]. Protein Expr Purif, 2004, 33(2):311-325.

    [36]Sheremet AS, Gronskiy SV, Akhmadyshin RA, et al. Enhancement of extrancellular purine nucleoside accumulation by Bacillus strains through genetic modifications of genes involved in nucleoside export[J]. Jlnd Microbiol Biotechnol, 2011, 38(1):65-70.

    (責(zé)任編輯 狄艷紅)

    Research Progresses on the Role of Transport Proteins NupC and NupG During the Nucleoside Secretion Processing in Microbial Cells

    WANG Meng-jiao FANG Hai-tian LIU Hui-yan HE Xiao-guang WU Qing ZHAO Bei-bei
    (School of Agriculture,Ningxing University,Yingchuan 750021)

    The nucleosides are used extensively,and microbial fermentation is one of main methods of producing it. The secretion of nucleoside in microbial cells plays a critical role for high-yield nucleoside. There are many transport proteins as the role of transportation in the cell membrane,which are involved in the secretion of metabolites. Here,this article mainly elaborates the role of nucleoside transport proteins such as NupG and NupC during the nucleoside secretion process in microbial cells. Additionally,the effects of modification for transport protein on nucleoside biosynthesis were introduced,aiming at providing evidence for the breeding strategy of engineering high-yield strains.

    microbes;nucleoside transporter;NupC;NupG

    10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.02.004

    2016-05-08

    國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(3130542,31560445)

    王夢(mèng)嬌,女,碩士研究生,研究方向:微生物發(fā)酵與代謝工程;E-mail:1563437986@qq.com

    方海田,男,博士,副教授,研究方向:微生物發(fā)酵與代謝工程;E-mail:fanght@nxu.edu.cn

    猜你喜歡
    跨膜核苷谷氨酸
    囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)體對(duì)血壓及血管功能的影響
    跨膜運(yùn)輸,孰是孰非?
    RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定猴頭菌片中5種核苷
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    HPLC法同時(shí)測(cè)定新疆貝母中3種核苷類成分
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    基于正交設(shè)計(jì)的谷氨酸發(fā)酵條件優(yōu)化
    N-月桂?;劝彼猁}性能的pH依賴性
    問:如何鑒定谷氨酸能神經(jīng)元
    氧自由基和谷氨酸在致熱原性發(fā)熱機(jī)制中的作用與退熱展望
    蛹蟲草中4種核苷的含量分析
    長期治療,受益終生:淺談核苷(酸)類藥物的長期治療
    肝博士(2015年2期)2015-02-27 10:49:43
    国产亚洲欧美98| 精品久久久久久久久av| 久久人妻av系列| av女优亚洲男人天堂| 色哟哟·www| 国产男人的电影天堂91| 少妇被粗大猛烈的视频| .国产精品久久| 久久精品国产清高在天天线| 熟女电影av网| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线免费观看不下载黄p国产| av视频在线观看入口| 99热只有精品国产| 亚洲自拍偷在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 午夜免费男女啪啪视频观看 | h日本视频在线播放| 联通29元200g的流量卡| 成人亚洲精品av一区二区| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲av一区综合| 高清日韩中文字幕在线| 最好的美女福利视频网| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久久久久中文| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线观看一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 成年av动漫网址| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 少妇人妻精品综合一区二区 | 日韩精品中文字幕看吧| 色av中文字幕| 精品一区二区三区视频在线| 俺也久久电影网| 欧美一区二区国产精品久久精品| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产综合懂色| 成人鲁丝片一二三区免费| 成人av在线播放网站| а√天堂www在线а√下载| 国产欧美日韩精品亚洲av| 免费av毛片视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久精品大字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 韩国av在线不卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久久久久久黄片| 国产三级在线视频| 亚洲成人久久性| 欧美区成人在线视频| 亚洲,欧美,日韩| 国产大屁股一区二区在线视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久午夜亚洲精品久久| 俄罗斯特黄特色一大片| 午夜福利18| 白带黄色成豆腐渣| 赤兔流量卡办理| 亚洲久久久久久中文字幕| 99riav亚洲国产免费| 激情 狠狠 欧美| 精品午夜福利在线看| 久久热精品热| 国产男靠女视频免费网站| 免费观看在线日韩| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品一二三区在线看| 少妇熟女欧美另类| 国产片特级美女逼逼视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 九九热线精品视视频播放| 久久人人爽人人爽人人片va| 日本 av在线| 午夜福利在线在线| 亚洲成人av在线免费| 免费看光身美女| 在线观看66精品国产| 91在线观看av| 波多野结衣巨乳人妻| av专区在线播放| 精品久久久久久久久久久久久| 成年免费大片在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产一区二区激情短视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲自拍偷在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 人妻夜夜爽99麻豆av| 波野结衣二区三区在线| 国内精品一区二区在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品一区二区免费欧美| 日本三级黄在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲成人久久爱视频| 国产片特级美女逼逼视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 一区二区三区四区激情视频 | 97碰自拍视频| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品一区二区性色av| 中文字幕av成人在线电影| 国产爱豆传媒在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 寂寞人妻少妇视频99o| 高清午夜精品一区二区三区 | 男人狂女人下面高潮的视频| 日本黄色片子视频| 亚洲欧美清纯卡通| 91久久精品国产一区二区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 九九在线视频观看精品| 全区人妻精品视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品亚洲一级av第二区| 中文资源天堂在线| 色5月婷婷丁香| 中文字幕av在线有码专区| 国产成人一区二区在线| 亚洲av免费高清在线观看| 丝袜美腿在线中文| 一区二区三区四区激情视频 | 国产乱人视频| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| av专区在线播放| 日韩欧美在线乱码| 免费人成在线观看视频色| 成人综合一区亚洲| 午夜久久久久精精品| 级片在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 精品日产1卡2卡| 国产精品一二三区在线看| 女人被狂操c到高潮| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 晚上一个人看的免费电影| 欧美极品一区二区三区四区| 干丝袜人妻中文字幕| 日本黄色片子视频| 晚上一个人看的免费电影| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲av电影不卡..在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 成人欧美大片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 在线国产一区二区在线| 欧美激情国产日韩精品一区| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 日日啪夜夜撸| 成人国产麻豆网| 热99在线观看视频| 99热网站在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 天堂动漫精品| 亚洲精品色激情综合| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久久久久久午夜电影| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 变态另类丝袜制服| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久久久久久久久黄片| 国产男人的电影天堂91| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 午夜福利18| 日本与韩国留学比较| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日韩三级伦理在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 俄罗斯特黄特色一大片| 日本a在线网址| 欧美成人a在线观看| 免费在线观看成人毛片| 亚洲不卡免费看| 男女那种视频在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 婷婷亚洲欧美| 天天一区二区日本电影三级| 在线a可以看的网站| 日韩一本色道免费dvd| 在线观看一区二区三区| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 乱系列少妇在线播放| 国产在线精品亚洲第一网站| 成人特级黄色片久久久久久久| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲av熟女| 校园春色视频在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 午夜影院日韩av| 成人漫画全彩无遮挡| 久久精品国产亚洲网站| 免费观看精品视频网站| av福利片在线观看| www日本黄色视频网| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美高清性xxxxhd video| 18+在线观看网站| 一区二区三区高清视频在线| 五月玫瑰六月丁香| 男女之事视频高清在线观看| 久久久久九九精品影院| 欧美色欧美亚洲另类二区| 内地一区二区视频在线| 国产探花在线观看一区二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 久久人人精品亚洲av| 亚洲专区国产一区二区| 国产高潮美女av| www日本黄色视频网| 日本精品一区二区三区蜜桃| 乱人视频在线观看| 久久午夜福利片| 久久精品夜色国产| 内地一区二区视频在线| 成人一区二区视频在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产伦一二天堂av在线观看| 九九在线视频观看精品| 99国产极品粉嫩在线观看| 色吧在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 99riav亚洲国产免费| 亚洲成a人片在线一区二区| 在线播放国产精品三级| 看黄色毛片网站| av福利片在线观看| av天堂在线播放| 国产精品,欧美在线| 嫩草影院精品99| 久久九九热精品免费| 亚洲av不卡在线观看| 成人欧美大片| 日本成人三级电影网站| 波多野结衣高清无吗| 国产精品久久久久久精品电影| 18禁在线播放成人免费| 国产欧美日韩一区二区精品| 校园春色视频在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲精品在线观看二区| 久久精品国产清高在天天线| 嫩草影院新地址| 亚洲成人久久爱视频| 精品久久久久久久久久久久久| 少妇熟女aⅴ在线视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产不卡一卡二| 欧美一区二区国产精品久久精品| 日韩欧美精品免费久久| 免费看日本二区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲av二区三区四区| 最好的美女福利视频网| 十八禁网站免费在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产中年淑女户外野战色| 日日干狠狠操夜夜爽| 好男人在线观看高清免费视频| 国产v大片淫在线免费观看| 免费观看精品视频网站| 免费av不卡在线播放| 日韩欧美精品v在线| 麻豆国产97在线/欧美| 久久久久国内视频| 美女高潮的动态| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 在线观看午夜福利视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av成人精品一区久久| 波野结衣二区三区在线| 欧美日韩精品成人综合77777| 丰满乱子伦码专区| 亚洲av免费高清在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 久久鲁丝午夜福利片| av天堂在线播放| a级毛片a级免费在线| 精品一区二区三区视频在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 伊人久久精品亚洲午夜| 免费看a级黄色片| 亚洲精品一区av在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产淫片久久久久久久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 白带黄色成豆腐渣| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 乱人视频在线观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 欧美精品国产亚洲| 久久精品国产亚洲网站| 国内精品一区二区在线观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲三级黄色毛片| 寂寞人妻少妇视频99o| 99久久精品热视频| 夜夜爽天天搞| 国产av一区在线观看免费| 国产熟女欧美一区二区| 日韩三级伦理在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 成年av动漫网址| 黄色一级大片看看| 日韩中字成人| 国产高清有码在线观看视频| 免费看日本二区| 搞女人的毛片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 成人漫画全彩无遮挡| 国产中年淑女户外野战色| 免费一级毛片在线播放高清视频| 免费在线观看影片大全网站| 国产成年人精品一区二区| 99riav亚洲国产免费| 国产av一区在线观看免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 69av精品久久久久久| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲在线自拍视频| 悠悠久久av| 国产精品日韩av在线免费观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久欧美国产精品| 亚洲精品在线观看二区| 深爱激情五月婷婷| 中出人妻视频一区二区| 伦理电影大哥的女人| 亚洲综合色惰| 男插女下体视频免费在线播放| 国产精品一区二区免费欧美| 国产高潮美女av| a级毛片a级免费在线| 久久99热6这里只有精品| 国产精品99久久久久久久久| 搡老岳熟女国产| 91久久精品国产一区二区成人| 内地一区二区视频在线| 在线天堂最新版资源| 久久精品国产清高在天天线| 最近在线观看免费完整版| 看片在线看免费视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久久综合国产亚洲精品| 老司机福利观看| 看十八女毛片水多多多| 日韩制服骚丝袜av| 春色校园在线视频观看| 亚洲在线观看片| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 欧美成人免费av一区二区三区| 直男gayav资源| 国产探花极品一区二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久午夜福利片| 亚洲人成网站高清观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 日韩亚洲欧美综合| 国产大屁股一区二区在线视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 最近2019中文字幕mv第一页| 18+在线观看网站| 国产一区二区三区av在线 | 我要看日韩黄色一级片| 午夜福利成人在线免费观看| 变态另类丝袜制服| 秋霞在线观看毛片| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产视频内射| 亚洲经典国产精华液单| 欧美精品国产亚洲| 啦啦啦啦在线视频资源| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av.av天堂| 国产精品一区www在线观看| 18+在线观看网站| www日本黄色视频网| 禁无遮挡网站| 少妇的逼水好多| 在线观看一区二区三区| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 一级黄片播放器| 国产极品精品免费视频能看的| 97在线视频观看| 色av中文字幕| 国产免费一级a男人的天堂| 黄色视频,在线免费观看| 久久草成人影院| 欧美日韩综合久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成年免费大片在线观看| .国产精品久久| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久久国产成人精品二区| 国产老妇女一区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 内地一区二区视频在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 色播亚洲综合网| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 黄片wwwwww| 亚洲国产精品成人久久小说 | 小说图片视频综合网站| 国内精品美女久久久久久| 我要搜黄色片| 天堂网av新在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲成人久久爱视频| 网址你懂的国产日韩在线| 国产黄a三级三级三级人| 99热这里只有精品一区| 国产乱人视频| 一级毛片我不卡| 欧美日本视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美一区二区亚洲| 亚洲天堂国产精品一区在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美高清成人免费视频www| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 少妇熟女欧美另类| 国产老妇女一区| 国产黄色小视频在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产男靠女视频免费网站| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产午夜精品论理片| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲美女搞黄在线观看 | 日韩欧美精品免费久久| 91在线观看av| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 亚洲久久久久久中文字幕| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美在线一区亚洲| 国产精品野战在线观看| 日本 av在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 欧美日韩综合久久久久久| 超碰av人人做人人爽久久| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 最近在线观看免费完整版| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲图色成人| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久九九热精品免费| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 高清毛片免费看| 99国产极品粉嫩在线观看| 插阴视频在线观看视频| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产成人福利小说| 亚洲国产精品久久男人天堂| 婷婷精品国产亚洲av在线| 日本欧美国产在线视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲不卡免费看| 日本五十路高清| 国内精品宾馆在线| 婷婷亚洲欧美| 嫩草影院精品99| 国产成人a区在线观看| 在线观看一区二区三区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品人妻偷拍中文字幕| 最近在线观看免费完整版| 一个人看的www免费观看视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 99热这里只有是精品50| 男女下面进入的视频免费午夜| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美日韩在线观看h| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 99久国产av精品| 国产高清激情床上av| 极品教师在线视频| 国产三级中文精品| 三级毛片av免费| 午夜影院日韩av| 女人被狂操c到高潮| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲av中文av极速乱| 久久久国产成人免费| 亚洲中文字幕日韩| 性插视频无遮挡在线免费观看| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 在线观看午夜福利视频| 久久久久国产网址| 日本免费a在线| 赤兔流量卡办理| 麻豆国产97在线/欧美| 精品久久久噜噜| 国产一区亚洲一区在线观看| 又爽又黄a免费视频| 丰满的人妻完整版| 九九爱精品视频在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久草成人影院| 亚洲成人精品中文字幕电影| 最新在线观看一区二区三区| 97碰自拍视频| 久久精品夜色国产| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费在线观看成人毛片| 国产男靠女视频免费网站| 久久久久性生活片| 国产乱人视频| 久久精品夜色国产| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美xxxx性猛交bbbb| 中文字幕av成人在线电影| 能在线免费观看的黄片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 麻豆国产av国片精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产亚洲精品久久久com| 全区人妻精品视频| 国产成人影院久久av| 插逼视频在线观看| 国产成人影院久久av| 女同久久另类99精品国产91| videossex国产| 小说图片视频综合网站| 日韩欧美精品免费久久| 在线观看66精品国产| videossex国产| 精品不卡国产一区二区三区| 69av精品久久久久久| h日本视频在线播放| 亚洲国产精品成人综合色| 黄色一级大片看看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品乱码一区二三区的特点| 免费观看人在逋| 午夜日韩欧美国产| 久久久久久伊人网av| 特大巨黑吊av在线直播| 村上凉子中文字幕在线| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲欧美精品综合久久99| 一级a爱片免费观看的视频| 久久久国产成人精品二区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品无大码| 极品教师在线视频| avwww免费| 级片在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 丰满人妻一区二区三区视频av| 午夜精品一区二区三区免费看| 天堂√8在线中文| 久久亚洲国产成人精品v| a级毛片a级免费在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 免费看美女性在线毛片视频| 黄色一级大片看看| 成人无遮挡网站| 寂寞人妻少妇视频99o| 简卡轻食公司| 国产精品福利在线免费观看|