P57、P53、Her-2及Ki-67在胎盤絨毛水腫性病變中的表達及其意義*

李昌秀,楊達榮,徐紅梅,楊 柳,劉俊玲，吳時軍,羅治彬

(1.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科 401520；2.重慶市第三人民醫(yī)院腫瘤科 400014)

·經驗交流· doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.030

P57、P53、Her-2及Ki-67在胎盤絨毛水腫性病變中的表達及其意義*

李昌秀1,楊達榮1,徐紅梅1,楊 柳1,劉俊玲1，吳時軍1,羅治彬2

(1.重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院病理科 401520；2.重慶市第三人民醫(yī)院腫瘤科 400014)

[摘要] 目的 研究P57、P53、Her-2及Ki-67在流產絨毛水腫(HA)、部分性葡萄胎(PHM)及完全性葡萄胎(CHM)中的表達，探討其在水泡狀胎塊發(fā)生、發(fā)展中的作用，為葡萄胎的早期診斷及鑒別診斷提供理論依據。方法 采用免疫組織化學(EnVision法)分別檢測P57、P53、Her-2及Ki-67在30例正常絨毛(NP)、30例HA、30例PHM及30例CHM中的表達。結果 P57在NP組、HA組、PHM組中的陽性表達率分別為96.66%、96.66%、93.33%，顯著高于在CHM組(3.33%)中的表達(P<0.01)；P53在PHM組(53.33%)中表達明顯高于在NP 組(16.66%)和HA組(20.00%)中的表達，而明顯低于在CHM組(80.00%)中的表達，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Her-2在CHM組中的表達為36.66%，明顯高于在NP組(10.00)和HA組(13.33%)中的表達(P<0.05),但是Her-2在PHM組(23.33%)與CHM組中的表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；PHM組和CHM組的Ki-67增殖指數分別為(48.03±18.77)%和(87.79±10.50)%，均高于HA組[(33.43±17.17)%]及NP組[(34.46±16.15)%]，P<0.01，而CHM組的Ki-67顯著高于PHM組(P<0.01)。結論 P57缺失而P53及Ki-67高表達可診斷為CHM；P57陽性而P53及Ki-67增殖指數均缺失或弱表達可診斷為HA。其他情況下均需要進一步做分子基因分型檢測；Her-2的表達對HA、PHM及CHM的鑒別意義不大。

水泡狀胎塊；流產水腫絨毛；P53；P57；Ki-67；Her-2

胎盤絨毛水腫性病變是一組以外觀呈透亮水泡狀的胎盤絨毛病變，臨床工作中常見包括完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole,CHM)、部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole,PHM) 及流產絨毛水腫 (hydropic abortuses,HA)。肉眼標本、組織形態(tài)學及臨床表現的不同常用于胎盤絨毛水腫性病變的診斷及鑒別，但是在病變早期，常常因肉眼標本、鏡下組織及臨床特征不典型而難以分型，甚至與HA鑒別困難。近年來有文獻報道了P57、P53和Ki-67在水泡狀胎塊分型與HA鑒別中的價值，但報道結果并不完全一致[1-3]。而且Her-2在不同類型的絨毛水腫性病變中的表達及意義研究甚少。本研究通過免疫組織化學方法觀察P57、P53、Her-2和Ki-67在不同的絨毛水腫性病變中的表達情況，探討聯(lián)合4個指標對絨毛水腫性病變鑒別診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010-2015年合川區(qū)人民醫(yī)院病理科經病理高級醫(yī)師診斷為HA、CHM和PHM的患者各30例作為研究對象。選取正常的絨毛組織(NP)30例作對照。所有存檔病例均經10%甲醛固定,石蠟包埋。

1.2 方法 P57、P53、Her-2及Ki-67單克隆抗體、EnVision試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液均購自福建邁新生物工程有限公司。所有組織經4 μm連續(xù)石蠟切片，嚴格按照EnVision檢測試劑盒說明書的步驟操作。

1.3 結果的判定 參照許良中等[3]的資料，綜合考慮切片中陽性細胞占所觀察同類細胞數的百分比和陽性細胞著色強度兩項指標，半定量判斷結果。P57、P53的觀察，先在低倍鏡下選取最強著色區(qū)，然后選10個高倍鏡視野(×400)，分別記數100個細胞，其顏色深淺評分：細胞核上無棕黃色顆粒為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。染色細胞所占百分比打分：無陽性細胞為0分、1%～10%為1分、11%～50%為2分、≥51%為3分。兩項乘積得分大于或等于3分定為陽性。Her-2陽性判斷方法：根據細胞膜有無顯色或強弱。0：完全未著色或小于10%細胞膜著色；(+)：≥10%呈微弱、不完整細胞膜著色；(++)：>10%呈弱-中度完整細胞膜著色；(+++)：>10%呈現強而完整的細胞膜著色?！?”為陰性，(+～+++)為陽性[4]。Ki-67只計數絨毛外的滋養(yǎng)細胞和絨毛間質細胞，Ki-67增殖指數=Ki-67陽性細胞數/計數細胞總數×100%。

2 結 果

2.1 P57在各組中的表達 P57呈細胞核陽性表達，表達部位為滋養(yǎng)細胞、絨毛間質細胞及蛻膜細胞，見圖1、2。P57在NP、HA和PHM組分別為96.66%、96.66%、93.33%，顯著高于在CHM組(3.33%)中的表達(χ2=52.26、52.26、48.65，P<0.01)。P57在PHM組中的表達低于HA組和NP組中的表達，但差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.00、0.00，P>0.05)，見表1。

2.2 P53在各組中的表達 P53陽性定位于細胞核，見圖3、4。P53在CHM組中表達為80.00%，明顯高于NP組(16.66%)、HA組(20.00%)和PHM組(53.33%)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=24.09、21.40、4.80，P<0.05)。PHM組明顯高于HA組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.71，P<0.01)。而HA組和NP組差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.11，P>0.05)。見表1。

圖1 P57在PHM組織中的表達(SP×400)

圖2 P57在CHM組織中的表達(SP×200)

圖3 P53在PHM組織中的表達(SP×200)

圖4 P53在CHM組織中的表達(SP×400)

2.3 Her-2在各組中的表達 Her-2陽性定位于絨毛外的滋養(yǎng)細胞和絨毛間質細胞的細胞膜，為棕黃色或淺黃色顆粒，見圖5、6。Her-2在CHM組中的表達為36.66%，明顯高于NP組(10.00)和HA組(13.33%)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.96、4.35,P<0.05)。而PHM組(23.33%)與CHM、HA組及NP組之間差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.26、1.00、1.92，P>0.05)，見表1。

圖5 Her-2在PHM中的表達(SP×200)

圖6 Her-2在CHM組織中的表達(SP×400)

圖7 Ki-67在PHM組織中的表達(SP×200)

圖8 Ki-67在CHM組織中的表達(SP×400)

2.4 Ki-67在各組中的表達 Ki-67陽性定位于細胞核，見圖7、8。在PHM組和CHM組Ki-67增殖指數分別與HA組及NP組比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=3.32、3.34、14.38、15.16，P<0.01)，而CHM組也明顯高于PHM組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.81，P<0.01)，見表2。

表1 P57、P53及Her-2在各組標本組織中的表達

表2 Ki-67在各組標本組織中的表達

3 討 論

HA、PHM、CHM三者有不同的妊娠結局和預后，準確的診斷直接影響患者的治療方案選擇和預后判斷。而三者外觀均是呈葡萄狀的水泡樣組織，特別是病變早期，在組織學上，滋養(yǎng)細胞增生及HA均不夠典型時，如果單純從形態(tài)學診斷就容易造成誤診或漏診，而影響患者的治療和預后。所以，尋找一種簡單而可靠的診斷指標，對于胎盤絨毛水腫性病變的鑒別診斷和分型都非常重要。

P57定位于染色體11p15.5，是細胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子和腫瘤抑制基因，抑制細胞增殖和腫瘤形成。近年來，國內外學者對有關P57基因在水泡狀胎塊中表達及鑒別診斷意義的研究越來越多，發(fā)現P57基因又是親源印跡基因，系母源性等位基因表達，這對鑒別PHM和CHM起到非常重要的作用，并提出P57可以用于形態(tài)學上難以客觀區(qū)別的CHM和PHM的鑒別[5]。由于CHM是雄性二倍體，PHM是雌雄異型三倍體，流產水腫是雙親二倍體，所以,P57表達缺失的CHM容易從P57陽性的PHM和HA中別鑒別出來。陳云新等[6]的研究顯示，P57陽性率在PHM為100%，CHM不表達。而本研究發(fā)現，P57在CHM組中的陽性率為3.33%，PHM組為93.33%，HA組為96.66%，CHM組30例患者中有1例P57陽性，這與McConnell等[7]的研究一致。McConnell等[7]同時用P57免疫組織化學和分子基因型檢測技術分析水泡狀胎塊標本時，發(fā)現1例形態(tài)典型的CHM彌漫表達P57。而且通過短串聯(lián)重復序列的分子基因型檢測和單個核苷酸多態(tài)性陣列的全基因組拷貝數分析證實了該例的確是雄性二倍體，卻保留有母系6號和11號染色體的拷貝。正是由于母系6號和11號染色體的存在，所以異常表達P57。本研究的P57陽性病例可能是保留著母系6號和11號染色體的CHM，也有可能是P57假陽性的CHM，需進一步做分子基因型檢測以明確診斷。

P53基因是抑癌基因，具有調控細胞生長、誘導細胞衰老和凋亡的作用。突變型P53在大多數惡性腫瘤中高表達，而且與腫瘤的預后密切相關。而Ki-67是細胞增殖的一個重要生物學指標,其陽性表達率常作為評價腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預后的重要指標。近年來，P53和Ki-67也常常用于鑒別胎盤絨毛水腫性病變中[8-9]。李軍紅等[10]研究發(fā)現P53的表達及Ki-67在葡萄胎(HM)組中的表達高于HA組，對鑒別PHM和HA有重要價值。本研究采用免疫組織化學也發(fā)現突變型P53在CHM組(80.00%)和PHM組(53.33%)中的表達均高于HA組(20.00%)和NP組(16.66%)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。這提示CHM和PHM中P53蛋白的高表達與抑癌基因P53的突變有關， P53蛋白的檢測有助于水泡狀胎塊與HA的鑒別。同時，筆者也發(fā)現PHM組(48.03±18.77)%和CHM組(87.79±10.50)%的Ki-67增殖指數也都高于HA組(33.43±17.17)%及NP組(34.46±16.15)%，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。該結果與Khooei等[11]研究結果一致。但是Khooei等[11]進一步強調，雖然Ki-67在HM和HA中的表達差異有統(tǒng)計學意義，但是Ki-67仍不能單獨用于鑒別HM與HA，因為Ki-67在各組的表達陽性程度上存在著相當大的重疊。所以，筆者認為聯(lián)合P53和Ki-67增殖指數可較為準確地反映HM和HA的絨毛外的滋養(yǎng)細胞和絨毛間質細胞增殖活性，可作為評估病變是HM還是HA的重要參考指標。

Her-2定位于17q12,是表皮生長因子受體家族的成員之一，在很多惡性腫瘤組織中表達并用作監(jiān)測預后的標記物。Fulop等[12]對16例PHM、25例CHM和11例HA進行研究發(fā)現,Her-2表達于CHM的絨毛外滋養(yǎng)細胞，且明顯強于PHM和HA，這對HM的分型診斷及惡變預后起到非常重要的作用。同樣，Yazaki-Sun等[13]對已經發(fā)展為胎盤滋養(yǎng)細胞腫瘤的35例HM和自然愈合的32例HM行Her-2和P53的檢測，發(fā)現兩者在惡變的HM中強表達，提示Her-2和P53對HM惡變及預后判斷起著非常重要的作用。但Menczer等[14]用免疫組織化學染色對23例CHM和10例PHM進行Her-2檢測，發(fā)現6例陽性(CHM和PHM各3例)，而且Her-2在后來進展為妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤的HM中的表達強于未進展為妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤的HM中的表達，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。而本研究結果顯示，Her-2在CHM組中的表達高于NP和HA組(P<0.05),這可能提示滋養(yǎng)細胞有增生。但Her-2在CHM組和PHM組中的表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),這對診斷CHM組和PHM組無明顯鑒別作用。

HM和HA的早期診斷及鑒別診斷對臨床的治療及疾病的預后都非常重要。聯(lián)合檢測P57、P53及Ki-67增殖指數有助于HM的分型和HA的鑒別診斷。P57缺失而P53及Ki-67高表達可診斷為CHM。而P57陽性而P53及Ki-67均缺失或弱表達可診斷為HA。當P57陽性而P53及Ki-67高表達時可能為PHM，但還需進一步做分子基因型檢測，以排除母系6號和11號染色體陽性的CHM的可能。Her-2陽性對CHM和PHM的鑒別意義不大，但Her-2聯(lián)合P53和Ki-67的表達情況可以作為預測HM惡變的參考指標。Her-2陽性可能提示HM的絨毛外的滋養(yǎng)細胞和絨毛間質細胞有增生，但其如何參與HM的絨毛外的滋養(yǎng)細胞和絨毛間質細胞增生，如何導致HM惡變的機制和意義還需收集大量妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤的病例進一步研究。

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重慶市衛(wèi)生和計劃生育委員會醫(yī)學科研計劃項目(20143054)。 作者簡介：李昌秀(1979-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事醫(yī)學病理學研究?！?/p>

，E-mail:luozhibincq@126.com。

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