317例慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與臨床的關(guān)系

吳家箴，黃仁剛，楊興祥，劉 翔，江 南，林健梅

(四川省人民醫(yī)院感染科，成都 610072)

論著·臨床研究 doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.012

317例慢性乙型肝炎患者血清HBeAg、肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與臨床的關(guān)系

吳家箴，黃仁剛，楊興祥△，劉 翔，江 南，林健梅

(四川省人民醫(yī)院感染科，成都 610072)

[摘要] 目的 分析血清HBeAg陰性和陽性的慢性乙型肝炎(CHB)患者肝組織內(nèi)的HBsAg、HBcAg表達強度與臨床的關(guān)系。方法 317例CHB患者肝穿刺標(biāo)本分成血清HBeAg陰性組和HBeAg陽性組兩組，分析兩組肝組織內(nèi)HBsAg、HBcAg的表達強度及其與年齡、性別、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、血清HBV DNA載量、肝臟炎癥活動度分級和纖維化分期的關(guān)系。結(jié)果 HBeAg陰性組患者的年齡、ALT、肝臟炎癥活動度和纖維化程度大于HBeAg陽性組患者；但血清HBV DNA載量低于HBeAg陽性組患者(均P<0.05)。肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與年齡、ALT、肝臟炎癥程度和纖維化程度均無相關(guān)性(P>0.05)。血清HBeAg轉(zhuǎn)陰后，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度降低(t=12 349.0，P=0.00)；HBcAg與血清HBV DNA載量出現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(r=0.251，P=0.007)；與肝臟炎癥活動度和纖維化負向相關(guān)性消失(P>0.05)。結(jié)論 血清HBeAg轉(zhuǎn)陰后HBV其他抗原成分仍能與肝組織維持足夠活躍的免疫狀態(tài)。血清HBeAg轉(zhuǎn)陰后，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度降低，與血清HBV DNA載量出現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，與肝臟炎癥活動度和纖維化負向相關(guān)性關(guān)系弱化。

免疫組織化學(xué)；肝炎e抗原，乙型；肝炎表面抗原，乙型；肝炎核心抗原，乙型

[Abstract] Objective The relationship was analyzed between clinic and the expression intensity of HBsAg and HBcAg within the hepatic tissue from the serum HBeAg negative group and the positive group.Methods A total of 317 liver biopsy specimens were divided into the HBeAg negative group and the positive group,and the relationship was analyzed between the expression intensity of HBsAg and HBcAg within the hepatic tissue and their age,gender,ALT level,serum HBV-DNA load,hepatic inflammatory activity grading and fibrosis staging in the two groups.Results Age,ALT level,hepatic inflammatory activity grading and fibrosis of the serum HBeAg negative patients were greater than those of the serum HBeAg positive patients,while their serum HBV-DNA load and the expression intensity of HBcAg within the hepatic tissue were lower than those of the serum HBeAg positive patients (P<0.05).The expression intensity of HBsAg within the hepatic tissue between the serum HBeAg patients and the serum HBeAg positive patients was not significantly different,and it was not correlated with age,ALT level,hepatic inflammatory grading and fibrosis staging (P>0.05).After the serum HBeAg turned negative,the expression intensity of HBcAg within the hepatic tissue was decreased (P=0.00,t=12 349.0),and it became positively correlated with the serum HBV-DNA load(P=0.007,r=0.251) and its negative correlation with the hepatic inflammatory activity and fibrosis was weakened.Conclusion After the serum HBeAg turned negative,other antigenic components of HBV may still maintain the adequately active immune status within the hepatic tissue of organisms.After the serum HBeAg turned negative,the expression intensity of HBcAg within the hepatic tissue was decreased and became positively correlated with the serum HBV-DNA,while its negative correlation with the hepatic inflammatory activity grade and fibrosis stagings was weakened.

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是病毒、肝細胞和機體免疫系統(tǒng)之間相互作用的動態(tài)過程。目前多數(shù)學(xué)者認為肝細胞受HBV入侵后，HBV本身并不直接引起肝細胞損害[1]。HBV只是利用肝細胞攝取的養(yǎng)料賴以生存并在肝細胞內(nèi)復(fù)制，HBV復(fù)制的HBsAg、HBeAg和HBcAg釋放在肝細胞膜上，激發(fā)人體的免疫系統(tǒng)來辨認并發(fā)生抗原抗體反應(yīng)造成肝細胞的損傷和破壞，從而產(chǎn)生一系列臨床癥狀。對在肝細胞表面的HBV抗原所引起的宿主細胞免疫應(yīng)答是肝細胞損傷的決定性因素。本研究著重于在血清HBeAg陰性和陽性兩組慢性乙型肝炎(chronic hepatits B,CHB)患者中肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg的表達強度，及其與臨床的關(guān)系，進一步探討HBV抗原與CHB發(fā)病和進展存在的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2012年12月在本院做肝穿刺活檢的317例CHB患者,其中男177例，女140例，男女比例1.26∶1.00，年齡15～70歲，平均(30.0±18.0)歲。所有納入CHB患者診斷符合我國2010年修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》更新版[2]，均無失代償性肝病的臨床表現(xiàn)和實驗室依據(jù)，排除合并其他病毒性肝炎、藥物性肝病、遺傳性肝病、血吸蟲性肝病及自身免疫性疾病、內(nèi)分泌與代謝疾病、血液系統(tǒng)疾病，均未接受干擾素α、核苷(酸)類、甾體激素類、甘草酸類藥物治療。每例患者臨床及生化、影像學(xué)資料均采集自肝穿刺前1周之內(nèi)。

1.2 肝組織病理檢測 首先彩超定位確定穿刺位置和深度,局部麻醉后用美國巴德活檢針MN1816獲取肝組織。標(biāo)本長度均在1 cm以上，置于10%甲醛溶液內(nèi)固定,石蠟包埋切片,行蘇木精-伊紅(hematine-eosin,HE)染色、網(wǎng)狀纖維染色及免疫組織化學(xué)LDP法染色。肝穿標(biāo)本鏡下包含4個及4個以上可供評價匯管區(qū)，由本院病理科醫(yī)師讀片,在光鏡下觀察判定炎癥活動度分級、纖維化分期和肝組織內(nèi)HBsAg、HBcAg的表達強度。肝組織炎癥活動度分級(G0～G4)和纖維化分期(S0～S4)的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2000年修訂的《病毒性肝炎防治方案》[3]。檢測肝組織內(nèi)HBsAg、HBcAg表達采用免疫組織化學(xué)LDP法染色，試劑購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。肝組織內(nèi)HBsAg、HBcAg表達強度的評價參考半定量計分法:在排除非特異性染色前提下，黃色、棕色和棕褐色顆粒為陽性。染色強度參照Chu等[4]提出的標(biāo)準(zhǔn):無肝細胞著色為(-)，著色肝細胞小于10%為(1+)，10%～50%為(2+)，>50%為(3+)。

1.3 實驗室檢測 (1)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)采用日本OlympusAU2700型全自動生化分析儀檢測,其正常值上限為40 IU/L。(2)乙型肝炎標(biāo)志物采用ELISA檢測(Hamilton全自動酶聯(lián)免疫分析儀2420,試劑購自北京萬泰生物藥業(yè)有限公司)。(3)血清HBV DNA采用實時熒光定量PCR檢測法(ABI 7500實時PCR定量檢測儀,試劑購自中山大學(xué)達安基因股份有限公司)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料年齡、ALT、HBV DNA為非正態(tài)分布，采用均數(shù)±四分位數(shù)間距(M±QR)表示，比較采用秩和檢驗。計數(shù)資料用率或構(gòu)成比表示，比較采用χ2檢驗；等級資料采用例數(shù)表示，比較采用秩和檢驗；數(shù)據(jù)相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 年齡、性別、ALT、血清HBV DNA載量、肝臟炎癥活動度和纖維化在血清HBeAg陰性與陽性組之間的差異 血清HBeAg陰性組的年齡、ALT、炎癥活動度和纖維化顯著高于陽性組，但血清HBV DNA顯著低于陽性組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。血清HBeAg陰性組的年齡顯著大于陽性組(P=0.00)，ALT顯著大于陽性組(P=0.02)，炎癥活動度和纖維化顯著高于陽性組(P=0.00)，但血清HBV DNA載量顯著低于陽性組(P=0.00)。見表1。

2.2 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度在血清HBeAg陰性與陽性組之間的差異 血清HBeAg陰性組的肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與陽性組學(xué)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.521)；血清HBeAg陰性組肝組織內(nèi)HBcAg表達強度顯著低于陽性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.00)。見表2。

2.3 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與年齡相關(guān)關(guān)系分析 血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與年齡無相關(guān)性(P=0.358和P=0.623)。血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與年齡均存在負向相關(guān)性(r=-0.277，P=0.003和r=-0.157，P=0.025)。見表3。

2.4 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與性別的相關(guān)關(guān)系 血清HBeAg陰性和陽性組兩組中，肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度均在男女患者間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。見表3。

2.5 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與ALT相關(guān)關(guān)系分析 血清HBeAg陰性和陽性組,肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與ALT無相關(guān)關(guān)系(P=0.231和P=0.191)。血清HBeAg陰性組,肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與ALT無相關(guān)性(P=0.622)；血清HBeAg陽性組,與ALT存在輕度負向相關(guān)性(P=0.047,r=-0.142)。見表4。

2.6 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與血清HBV DNA載量相關(guān)關(guān)系分析 血清HBeAg陰性組，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與血清HBV DNA載量無相關(guān)關(guān)系(P=0.347)；肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與血清HBV DNA載量呈正相關(guān)(r=0.251，P=0.007)。血清HBeAg陽性組，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與血清HBV DNA載量呈輕度正相關(guān)(r=0.201，P=0.006)；肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與血清HBV DNA無相關(guān)性,(P=0.088)。見表4。

2.7 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與肝臟炎癥活動度分級的相關(guān)關(guān)系分析 血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與炎癥活動度無相關(guān)關(guān)系(P=0.897和P=0.065)。血清HBeAg陰性組，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與炎癥活動度無相關(guān)關(guān)系(P=0.913)；血清HBeAg陽性組，與炎癥活動度存在負向相關(guān)性(r=-0.168，P=0.017)。見表5。

2.8 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與肝臟纖維化分期的相關(guān)關(guān)系分析 血清HBeAg陰性和陽性組，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與纖維化無相關(guān)關(guān)系(P=0.858和P=0.428)。血清HBeAg陰性組，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與纖維化無相關(guān)關(guān)系(P=0.780)；血清HBeAg陽性組，與纖維化存在負向相關(guān)性(r=-0.202，P=0.040)，見表5。

表1 317例患者年齡、性別、ALT、血清HBV DNA載量、G和S在HBeAg陰性與陽性組之間的差異

表2 317例患者肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度在血清HBeAg陰性與陽性組之間的差異

表3 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與年齡性別關(guān)系

表4 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與ALT、血清HBV DNA關(guān)系

表5 肝組織內(nèi)HBsAg和HBcAg表達強度與炎癥活動度、纖維化的相關(guān)關(guān)系

3 討 論

CHB的發(fā)病機制是免疫損傷而不是HBV對肝細胞的直接細胞毒作用[5]。肝細胞表面的HBV抗原引起的宿主細胞免疫應(yīng)答是肝細胞損傷的決定性因素，其程度決定患者的臨床特點和病情嚴(yán)重程度。HBsAg、HBeAg、HBcAg是HBV復(fù)制過程中產(chǎn)生的重要的HBV蛋白抗原。臨床普遍認為HBsAg是HBV感染的重要標(biāo)志，血清HBeAg和肝組織中HBcAg是HBV感染及復(fù)制的特異性標(biāo)志[6]。

血清HBeAg是HBV感染及復(fù)制的特異性標(biāo)志之一。血清HBeAg陽性患者的HBV DNA復(fù)制活躍，有強傳染性[9]。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者的年齡、ALT、肝臟炎癥活動度和纖維化顯著大于陽性患者；但血清HBV DNA、肝組織內(nèi)HBcAg表達強度顯著低于陽性患者。與Chu等[7]報道HBeAg陽性CHB患者HBV DNA載量顯著高于HBeAg陰性患者的結(jié)果一致。符合血清HBeAg陰性CHB患者病程更長，在長期的逐步免疫清除靶抗原之一的HBeAg的過程中，不同程度的引起肝組織細胞破壞，導(dǎo)致肝組織的纖維化較高[8]。提示血清HBeAg轉(zhuǎn)陰的CHB患者，雖然HBV病毒復(fù)制降低,肝組織內(nèi)HBcAg表達強度降低，但肝臟炎癥活動度相關(guān)的指標(biāo)如ALT和肝臟炎癥活動度并未出現(xiàn)緩解的跡象，因此HBV其他抗原成分(如HBsAg和HBcAg等)可能仍然能夠與機體在肝組織產(chǎn)生和維持足夠活躍的免疫狀態(tài)。

HBsAg是HBV感染的重要標(biāo)志。肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與血清HBV DNA的關(guān)系，近年文獻報道不一，如張文杰等[10]報道呈正相關(guān)；樂曉華等[11]則認為無相關(guān)性。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與血清HBV DNA無相關(guān)性；血清HBeAg陽性患者，兩者呈正相關(guān)。而肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與肝臟炎癥活動度和纖維化的關(guān)系，近年研究結(jié)果較為一致，張文杰等[10]、樂曉華等[11]和陸偉等[12]均報道無相關(guān)性。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者的組織內(nèi)HBsAg表達強度與陽性患者無統(tǒng)計學(xué)差異。在血清HBeAg陰性和陽性組兩組患者中，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與年齡、ALT、肝臟炎癥活動度和纖維化均無相關(guān)性。提示可能由于HBsAg是HBV的外膜蛋白不含核酸，不是免疫攻擊的靶抗原[13]，所以導(dǎo)致上述結(jié)果。而肝組織內(nèi)HBsAg表達強度與血清HBV DNA關(guān)系尚需進一步研究。

肝組織內(nèi)HBcAg是HBV核心區(qū)基因產(chǎn)物，是機體特異性細胞毒性淋巴細胞攻擊的主要靶抗原，也是病毒復(fù)制的最確切指標(biāo)[14]。肝內(nèi)HBV的感染狀態(tài)如肝細胞內(nèi)HBcAg的表達及分布等，某種程度上也是乙型肝炎患者肝組織炎性反應(yīng)的體現(xiàn)[15]。肝細胞內(nèi)HBcAg的表達強度與血清HBV DNA關(guān)系，近年有文獻報道，如厲新妍等[16]和董曉鋒等[17]報道呈顯著的正相關(guān)。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與血清HBV DNA呈正相關(guān)；在血清HBeAg陽性患者，兩者無相關(guān)性。而HBcAg表達強度與肝臟炎癥活動度分級和纖維化分期的關(guān)系，近年文獻報道不一。張文杰等[10]報道呈正相關(guān)；陸偉等[12]報道HBeAg陰性患者HBcAg表達水平與肝組織病理學(xué)分級呈顯著正相關(guān)，與病理學(xué)分期無顯著相關(guān)性。HBeAg陽性患者，HBcAg表達水平與肝組織病理學(xué)分級和分期呈顯著負相關(guān)。本研究顯示：血清HBeAg陰性患者的組織內(nèi)HBcAg表達強度顯著低于陽性患者。血清HBeAg陰性患者，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度與肝臟炎癥活動度和纖維化無相關(guān)性；在血清HBeAg陽性患者，兩者呈負向相關(guān)。提示血清HBeAg轉(zhuǎn)陰后，肝組織內(nèi)HBcAg表達強度降低，與血清HBV DNA載量出現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系，與肝臟炎癥活動度和纖維化負向相關(guān)性關(guān)系弱化。

肝細胞內(nèi)HBV抗原的復(fù)制和表達激發(fā)炎癥活動，引起一系列的組織病變。血清HBeAg轉(zhuǎn)陰后，肝組織內(nèi)HBsAg表達強度和HBcAg表達強度的變化，與HBV DNA、肝臟炎癥活動度和纖維化等相關(guān)關(guān)系發(fā)生變化，應(yīng)繼續(xù)深入研究。

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Association of serum HBeAg,expression intensity of HBsAg and HBcAg in hepatic tissue with clinical characteristics in 317 chronic hepatitis B patients

WuJiazhen,HuangRengang,YangXingxiang△,LiuXiang,JiangNan,LinJianmei

(DepartmentofInfection,thePeople′sHospitalofSichuan,Chengdu,Sichuan610072,China)

immunhistochemistry;hepatitis B e antigens;hepatitis B surface antigens;hepatitis B core antigens

吳家箴(1980-)，主治醫(yī)師，本科，主要從事慢性肝病診斷與治療學(xué)研究。△

，E-mail:xxyang508@tom.com。

R512.62

A

1671-8348(2017)04-0468-04

2016-09-10

2016-10-18)