定心藤總黃酮對高脂血癥大鼠降血脂的作用研究*

楊 光，杜云龍，朱開梅，顧生玖△

(1.桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，廣西桂林 541001；2.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西桂林 541004)

·論 著· doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.04.001

定心藤總黃酮對高脂血癥大鼠降血脂的作用研究*

楊 光1，杜云龍2，朱開梅2，顧生玖2△

(1.桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科，廣西桂林 541001；2.桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西桂林 541004)

[摘要] 目的 探討定心藤總黃酮對高脂血癥大鼠的降血脂作用。方法 選擇雄性SD大鼠60只，分為6組:正常對照組(NC組)、模型對照組(MC組)、辛伐他汀陽性對照組(PC組)、定心藤總黃酮低劑量組(MIF1組)、定心藤總黃酮中劑量組(MIF2組)、定心藤總黃酮高劑量組(MIF3組)。NC組給予基礎(chǔ)飼料；MC組、PC組和MIF各亞組給予高脂飼料，造模同時給予藥物干預(yù)。喂養(yǎng)6周后，禁食12 h，一側(cè)眼球摘除法取血，分離血清，測定血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)；喂養(yǎng)12周后，禁食12 h，心臟采血，分離血清，檢測血清超氧化物歧化酶(SOD)， 丙二醛(MDA)，總抗氧化能力(T-AOC)的水平。結(jié)果 MIF能夠降低高脂血癥大鼠血清TC、TG、LDL-C、MDA和升高HDL-C、SOD、T-AOC的水平，與NC組相比，MC組TG、TC、LDL-C、MDA的水平明顯升高，HDL-C、SOD、MDA的水平明顯降低(P<0.05)；與MC相比，MIF各亞組TC、TG、LDL-C、MDA的水平明顯降低，HDL-C、SOD、T-AOC的水平明顯升高(P<0.05)。結(jié)論 MIF可能通過提高機體SOD、T-AOC和降低MDA的水平，達到降血脂的作用。

定心藤總黃酮；高脂血癥；抗氧化劑；動脈粥樣硬化

動脈粥樣硬化(atherosclerosis,As) 是由于各種原因?qū)е碌膭用}壁內(nèi)皮細(xì)胞完整性破壞，脂質(zhì)積聚，巨噬細(xì)胞游移及平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞增生為主的一種病理過程[1]；而導(dǎo)致As 的危險因素有高血脂、高血壓、糖尿病、吸煙等，有臨床研究和實驗表明[2]：血脂增高能夠在缺乏其他危險因素的情況下，獨立地誘發(fā)AS。定心藤(mappianthus iodoies，MI )是廣西瑤醫(yī)常用藥材“十八鉆”之一[3]，有研究:定心藤總黃酮(mappianthus iodoies flavonoids,MIF)具有清除自由基和抗氧化的活性表明[4]，但其具有降血脂的藥物活性，目前還鮮有文獻報道。據(jù)此，本研究通過構(gòu)建高脂血癥動物模型，探討MIF對高脂血癥大鼠血脂的干預(yù)作用，旨在為新藥開發(fā)和臨床利用MIF防治動脈粥樣硬化提供實驗和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 健康SPF級雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量(180±20)g，購自桂林醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，許可證號SCXK(桂)2013-0001。

1.2 高脂飼料配方[5]3.0%膽固醇，10.0%豬油，0.2%丙基硫氧嘧，0.5%膽酸鈉，3.3%白糖，83.0%普通飼料，由桂林醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.3 藥品與試劑 定心藤來自于中科院廣西植物研究所藥用植物園，經(jīng)廣西植物研究所曹明副研究員鑒定為茶茱萸科定心藤屬植物定心藤的干燥藤莖，MIF由本實驗室從定心藤中提取[6-7]:利用微波輔助提取法提取MIF，將提取物利用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，在波長510 nm處測定吸收度計算MIF水平(約為61.2%)。臨用前再以生理鹽水溶解，配制成40、80、160 mg/kg不同劑量稀釋液灌胃大鼠。三酰甘油(triglyceride,TG)檢測試劑盒(產(chǎn)品編號6106-2013)，膽固醇(total cholesterol,TC)檢測試劑盒(產(chǎn)品編號2864-2013)，低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-C,LDL-C)檢測試劑盒(產(chǎn)品編號2893-2013)均由德國羅氏診斷有限公司提供；高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-C,HDL-C)檢測試劑盒(產(chǎn)品編號2893-2013 )由北京九強生物技術(shù)股份有限公司提供；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)檢測試劑盒(產(chǎn)品編號20151024)、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)檢測試劑盒(產(chǎn)品編號20151022)、總抗氧化能力(T-AOC)測試試劑盒(產(chǎn)品編號20151028)由南京建成生物有限公司提供；辛伐他汀片由汕頭金石制藥總廠生產(chǎn)(產(chǎn)品編號20057473)；丙基硫氧嘧啶由美侖制藥股份有限公司生產(chǎn)(產(chǎn)品編號M0401A)；維生素D3(產(chǎn)品編號1114B031)由北京索萊寶生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.4 儀器 BT423S 型電子天平(Sartorius AG，德國賽多利斯股份公司)，超聲波清洗器(上海之信儀器有限公司)，小型真空干燥箱、SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科貿(mào)有限公司)，EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(N-1100，上海愛朗儀器有限公司)，LegendRT-Plus型臺式離心機(美國 Thermo Fisher Sorvall公司)，Cobas501全自動生化分析儀(上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司)，UV2550紫外分光光度計(島津有限公司)，酶標(biāo)儀(美國伯騰儀器有限公司)。

1.5 方法

1.5.1 實驗方法 雄性SD大鼠60只，分籠飼養(yǎng)，自由取水。飼養(yǎng)溫度(20±3)℃，密閉，開燈與閉燈時間各12 h。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，每組10只，隨機分為6組:正常對照組(NC組)、模型對照組(MC組)、辛伐他汀組(PC組，陽性對照)、MIF低劑量組(MIF1組)、MIF中劑量組(MIF2組)、MIF高劑量組(MIF3組)。NC組給予基礎(chǔ)飼料；MC組、PC組和MIF組給予高脂飼料，構(gòu)建高脂血癥動物模型[8-9]，造模同時給予藥物干預(yù)。NC組和MC組灌胃給予生理鹽水2 mL，1次/天,PC組灌胃給予辛伐他汀10 mg/kg，1次/d；MIF1，MIF2，MIF3組分別灌胃給予MIF(40、80、160 mg/kg)，1次/d；均自由飲水，每周稱1次大鼠體質(zhì)量，實驗過程中觀察老鼠的飲食、飲水，活動量及毛色等情況，于第1、3、7周給予腹腔注射維生素D3(60萬U/kg)。

1.5.2 血清學(xué)檢測 大鼠喂養(yǎng)6周后，禁食12 h，一側(cè)眼球摘除法取血，經(jīng)抗凝處理后，立即離心10 min(3 000 r/min)，取血清，檢測血脂。用酶比色法測定TC，TG，HDL-C；用直接法測定LDL-C；喂養(yǎng)12周后，禁食12 h，腹腔注射3%水合氯醛麻醉，剖口胸腔，心臟采血，離心，分離血清，用黃嘌呤氧化酶法測定血清SOD，硫代巴比妥酸法測定MDA水平，化學(xué)法測定T-AOC的水平，各指標(biāo)測定嚴(yán)格參照試劑盒說明書進行操作。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠的一般狀況 實驗期間MIF1、MIF2和MIF3組大鼠各死亡1只，解剖發(fā)現(xiàn):氣道黏膜水腫，考慮灌胃過程中損傷氣道，導(dǎo)致死亡。NC組大鼠生長狀況良好,毛色有光澤,活動良好,攝食、飲水正常，體質(zhì)量變化明顯；MC組大鼠開始進食良好,隨著高脂飲食時間的延長,進食減少，大鼠毛色漸發(fā)黃,光澤度差；MIF1組大鼠毛色漸發(fā)黃，光澤度差，活動較好，進食減少，與MC組形態(tài)相似；PC組和MIF2、MIF3組實驗早期進食良好，隨著高脂飲食時間延長，大鼠毛色光澤度良好，進食稍下降，活動量一般。

2.2 各組大鼠干預(yù)前和干預(yù)后體質(zhì)量變化 干預(yù)前，各組大鼠體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義；干預(yù)后，與NC組相比，其他各組體質(zhì)量均明顯降低(P<0.05)，與MC組相比，PC組、MIF2 組、MIF3組體質(zhì)量增加明顯(P<0.05)，MIF1組體質(zhì)量增加不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 定心藤總黃酮干預(yù)各組大鼠前后的體質(zhì)量變化

a:P<0.05,與NC組比較;b:P<0.05,與MC組比較。

2.3 對高脂血癥大鼠6周后血脂的影響 與NC組相比，MC組大鼠血清TC、TG、LDL-C明顯升高，HDL-C明顯降低(P<0.05)，提示造模成功。與MC組比較，MIF3組可明顯降低模型大鼠血清TC、TG、LDL-C和升高HDL-C 的水平(P<0.05)，其MIF2、MIF1組降血脂的效果依次減弱，呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。與MC組相比,MIF1、MIF2及MIF3組的TG水平明顯降低，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；MIF2、MIF3組的TC明顯降低，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而MIF1組的TC水平，降低不明顯，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),MIF1、MIF2及MIF3組HDL-C的水平明顯升高，LDL-C的水平明顯降低，具有一定的量效關(guān)系，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，表明MIF可明顯降低高脂血癥大鼠血清TG，TC,LDL-C的水平，升高HDL-C的水平。見表2。

2.4 對高脂血癥大鼠12周后SOD，MDA，T-AOC的影響 與NC組相比，MC組MDA的水平明顯升高，SOD和T-AOC的水平明顯降低，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與MC組相比，MIF1、MIF2及MIF3組的MDA水平明顯降低，MIF2、MIF3組的SOD和T-AOC水平明顯升高，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表2 定心藤總黃酮對高脂血癥大鼠血脂的影響

a:P<0.05,與NC組比較;b:P<0.05,與MC組比較。

表3 定心藤總黃酮對高脂血癥大鼠SOD、MDA、T-AOC的影響

a:P<0.05,與NC組比較;b:P<0.05,與MC組比較。

3 討 論

在AS的發(fā)病機制中，高脂血癥與AS密切相關(guān)[10]。高脂血癥時，血管內(nèi)皮細(xì)胞脂質(zhì)沉積，內(nèi)皮細(xì)胞自由基釋放增加，直接損傷動脈壁的抗氧化功能[11-12]；同時，血液中LDL-C可以在內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的氧自由基和催化酶的作用下，被氧化為Ox-LDL，而Ox-LDL又有新的生物活性，可以加速脂質(zhì)沉積， 引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和功能障礙，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[13]，這些作用均是啟動As發(fā)生和發(fā)展的重要環(huán)節(jié)[14]。

本實驗表明：MIF能夠改善高脂血癥大鼠的體質(zhì)量變化，由表1的實驗結(jié)果可知：MC組大鼠體質(zhì)量出現(xiàn)先增加后下降的變化趨勢，且隨著時間的延長，體質(zhì)量下降趨勢明顯，與相關(guān)研究報道相符[15]：多種原因所致的甲狀腺功能低下均伴有體質(zhì)量下降，并隨病程的延長而加重，由于配制的高脂飼料中含有抗甲狀腺藥物，可導(dǎo)致甲狀腺功能低下，促使體質(zhì)量出現(xiàn)先增加后下降的趨勢，給予PC及高劑量的MIF有助于緩解高脂飼料對大鼠體質(zhì)量所造成的影響；由表2可知，MIF能夠降低高脂血癥大鼠的血脂水平，考慮MIF能溝通過減少脂質(zhì)的吸收、合成和增加脂質(zhì)的排出達到降血脂的作用，盡而對大鼠體質(zhì)量產(chǎn)生影響，有研究表明[16]：黃酮類化合物能夠減少脂質(zhì)的吸收，增加脂質(zhì)的排出，通過激活能量代謝的信號分子來啟動脂代謝的分解途徑或抑制生脂基因的表達來減少脂質(zhì)的合成。

SOD、T-AOC和MDA能夠反映人體抗氧化酶體系的功能狀態(tài)，SOD可對抗氧自由基對細(xì)胞造成的損害；T-AOC可直接反映機體抗氧化酶的活力,間接地反映出機體所受的脂質(zhì)過氧化損傷程度，其含量與細(xì)胞的抗氧化能力正相關(guān)，與機體脂質(zhì)過氧化呈負(fù)相關(guān)；MDA可以反映脂質(zhì)過氧化的程度，研究表明：紫蘇總黃酮[17]、山楂總黃酮[18]、藤茶總黃酮[19]中的總黃酮能夠提高機體的抗氧化能力，減輕脂質(zhì)過氧化物MDA的生成，維持機體抗氧化酶系的平衡。本研究通過檢測血清SOD、MDA、T-AOC的水平發(fā)現(xiàn)：MC組大鼠SOD和T-AOC明顯降低，MDA明顯升高，說明高脂血癥大鼠的抗氧化酶遭到了一定程度的損傷，MC組TG,TC,LDL-C明顯升高,HDL-C明顯降低，經(jīng)過MIF干預(yù)后，抗氧化能力和血脂水平得到明顯改善，且血脂水平的變化與抗氧化能力的水平變化呈現(xiàn)一定的相關(guān)性，因此，本研究初步考慮MIF的降血脂機制可能是通過升高MC組大鼠SOD、T-AOC和降低MDA的水平，提高機體的抗氧化能力，有效清除自由基，抵抗脂質(zhì)過氧化物生成，減少和抑制Ox-LDL的產(chǎn)生，達到降血脂和抗As的作用。

綜上所述，MIF具有一定的降血脂作用，但其確切的作用機制尚待進一步深入研究，本文旨在為尋找新的降血脂、抗氧化和預(yù)防動脈粥樣硬化的天然藥物提供理論基礎(chǔ)和臨床依據(jù)。

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Effects of decreasing lipidemia by mappianthus iodoies flavone in SD rats*

YangGuang1,DuYunlong2,ZhuKaimei2,GuShengjiu2△

(1.DepartmentofIntenalMedicine-Cardiovascular,AffiliatedHospitalofGuilinMedicalUniversity,Guilin，Guangxi541001,China；2.CollegeofPharmacy,GuilinMedicalUniversity，Guilin，Guangxi541004，China)

Objective To explore effect of decreasing blood lipid by mappianthus iodoies flavone in rats model.Methods We selected sixty healthy male SD rats,which were randomly divided into six groups:normal control group (NC),model control group (MC),simvastatin group positive control group (PC),low dose group of mappianthus iodoies flavonoids (MIF1 group),middle dose group of mappianthus iodoies flavonoids (MIF2 group),high dose group of mappianthus iodoies flavonoids (MIF3 group).After 6 weeks,absolute diet 12 h,the rats of blood samples were drawn from orbit and it was collected to detect serum total cholesterol(TC),serum triglyceride(TG),low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C),high density lipoprotein cholesterol (HDL-C).After 12 weeks,absolute diet 12 h,get blood from heart,serum,centrifugal separation measure serum SOD,MDA content,test the content of T-AOC.Results Mappianthus iodoies flavonoids can decrease the level of TG,TC,LDL-C,MDA and improve HDL-C,SOD and T-AOC in lipid of lipidemia rats.Especially compared with the NC group,the level of TG,TC,LDL-C,MDA in MC group were increased,and HDL-C,SOD,T-AOC level were decreased in rats fed high fat diet(P<0.05),meanwhile the levels of TC,TG and LDL-C in the treatment groups were decreased,and HDL-C levels were increased(P<0.05);MIF group,which are compared with MC,the level of TC,TG，LDL-C and MDA weresignificantly decreased and the level of HDL-C,SOD,T-AOCwere increased significantly(P<0.05).Conclusion Mappianthus iodoies flavone may improve the level of SOD,T-AOC and decrease the level of MDA to decrease lipid.

mappianthus iodoies flavonoids; hyperlipidemia; antioxidant; atherosclerosis

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目(桂科能159832-46，桂科合14123001-22)；桂林市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目(20150102-8，20150102-7，20150105-6，20140105-11，20140122-5，20140105-5)；廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點實驗室開放基金項目(FPRU2015-5)。 作者簡介：楊光(1988-)，在讀碩士，主要從事冠心病的基礎(chǔ)與臨床研究?！?/p>

，E-mail:gushengjiu@163.com。

R285.5

A

1671-8348(2017)04-0433-03

2016-09-19

2016-10-21)