UPLC-Q-TOF MSE技術(shù)結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫篩查方法快速分析巴戟天化學(xué)成分

王美玲，張清清，付 爽，劉月紅，梁釧鐳，陳 娜，丁永勝，王海麗，瞿曉梅，趙保勝，高曉燕

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京中醫(yī)藥研究院，北京 100029)

UPLC-Q-TOF MSE技術(shù)結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫篩查方法快速分析巴戟天化學(xué)成分

王美玲1，張清清1，付 爽1，劉月紅1，梁釧鐳1，陳 娜1，
丁永勝1，王海麗1，瞿曉梅1，趙保勝2，高曉燕1

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100102；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京中醫(yī)藥研究院，北京 100029)

采用UPLC-Q-TOF MSE技術(shù)結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫篩查方法對巴戟天中的化學(xué)成分進(jìn)行了快速鑒定。對于已知化合物，利用其名稱、分子式、結(jié)構(gòu)式等信息補(bǔ)充完善UNIFI數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行數(shù)據(jù)篩查，依據(jù)其精確分子質(zhì)量、特征離子、中性丟失、MS/MS裂解規(guī)律、色譜保留行為等信息，結(jié)合對照品信息和文獻(xiàn)報道等對其進(jìn)行驗證；對于未知成分，根據(jù)其精確分子質(zhì)量、質(zhì)譜裂解碎片、色譜保留行為以及已知同類化合物的特征碎片，對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。本實驗共鑒定出110個化合物，包括8個寡糖類、12個環(huán)烯醚萜類、58個蒽醌類化合物和32個其他類化合物；推斷出8個未知化合物，包括1個有機(jī)酸、2個苷類化合物、5個環(huán)烯醚萜類成分，其中4個是潛在的新化合物，另外4個為巴戟天中首次發(fā)現(xiàn)的化合物。該方法可對巴戟天藥材中的化學(xué)成分進(jìn)行快速、全面的分析，為巴戟天藥材的質(zhì)量控制和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定基礎(chǔ)。

UPLC-Q-TOF MSE；UNIFI數(shù)據(jù)庫；巴戟天；快速鑒定；表征

巴戟天為茜草科(Rubiaceae)植物巴戟天(MorindaofficinalisHow.)的根，是“四大南藥”之一，有補(bǔ)腎陽、壯筋骨、祛風(fēng)濕的功效[1]，也有抗抑郁、抗癌、抗炎鎮(zhèn)痛等作用[2]。這些藥效作用與巴戟天所含多種類型的化學(xué)成分有關(guān)。目前針對巴戟天化學(xué)成分的研究仍以色譜分離為主，缺乏對其整體的研究。由于中藥化學(xué)成分復(fù)雜多樣、含量差異較大，利用傳統(tǒng)分離、純化的方法耗時耗力，且對于新化合物的發(fā)現(xiàn)缺乏針對性，這將阻礙其藥理作用及機(jī)制研究的進(jìn)展。

近年來，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)成為天然藥物中活性成分快速分離和鑒定的有力手段[3]。常規(guī)的液質(zhì)聯(lián)用鑒定化合物的方法是手動提取每個色譜峰，根據(jù)色譜峰的準(zhǔn)分子離子峰、碎片離子峰以及保留時間等信息，結(jié)合對照品及文獻(xiàn)數(shù)據(jù)來推斷化合物的結(jié)構(gòu)，該方法耗時且效率較低[4]。

本研究擬基于UPLC-Q-TOF MS技術(shù)，結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫篩查，制訂一種天然產(chǎn)物整體解決方案的多成分鑒定策略。該策略共分為3步：1) 建立巴戟天數(shù)據(jù)庫。通過檢索Scifinder、Chemspider 等數(shù)據(jù)庫并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報道[5-8]，收錄151個化合物的信息，包括化合物的名稱、分子式和結(jié)構(gòu)式(結(jié)構(gòu)式保存為.mol格式的文件)等；2) 鑒定已知化合物。將采集的Continuum原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入UNIFITM定性分析軟件，通過設(shè)置適當(dāng)?shù)牟杉瘏?shù)對各主要分子離子峰進(jìn)行識別、校正，并與已建立的目標(biāo)數(shù)據(jù)庫自動匹配，所有匹配化合物的結(jié)構(gòu)需結(jié)合特征離子、色譜保留時間、精確分子質(zhì)量、分子碎片峰、對照品信息和相關(guān)文獻(xiàn)等進(jìn)行進(jìn)一步驗證，排除假陽性結(jié)果；3) 表征未知化合物。依據(jù)精確分子質(zhì)量和元素組成分析，得到可能的分子式，通過高能通道中的特征碎片及色譜保留行為，推斷其可能的結(jié)構(gòu)類型，以分子式為檢索條件，在Scifinder、Chemspider等在線數(shù)據(jù)庫中搜索可能的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，將可能的結(jié)構(gòu)信息帶入UNIFI軟件中進(jìn)一步驗證；對于數(shù)據(jù)庫中未檢索到的成分，根據(jù)其精確質(zhì)量數(shù)、質(zhì)譜裂解碎片、保留行為以及已知同類化合物的特征碎片等進(jìn)行結(jié)構(gòu)推斷。本工作應(yīng)用該策略對巴戟天化學(xué)成分進(jìn)行整體研究，希望為全面表征巴戟天的化學(xué)成分提供有力手段。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

Synapt G2-SI UPLC-Q-TOF MS色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國Waters公司產(chǎn)品，配有Masslynx 4.1質(zhì)譜工作站；KQ5200DA型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

乙腈，甲酸：均為質(zhì)譜純，美國Fisher公司產(chǎn)品；實驗用水：屈臣氏蒸餾水；5種游離蒽醌，包括大黃素(批號：110765-20010)、大黃酸(批號：110757-200206)、大黃素甲醚(批號：110758-201013)、蘆薈大黃素(批號：110756-200110)和大黃酚(批號：110796-201017)：純度均大于98%，由中國藥品生物制品檢定所提供；耐斯糖(批號：T03F6C2)：上海源葉生物科技有限公司產(chǎn)品；巴戟天藥材：安國市仁德興藥材有限公司產(chǎn)品，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院楊瑤珺教授鑒定為茜草科植物巴戟天MorindaofficinalisHow.的干燥根。

1.2 樣品溶液及對照品溶液的制備

將干燥的巴戟天藥材粉碎，精密稱取兩份2.0 g藥材粉末，置于磨口三角瓶中，分別加入20 mL 50%和95%的甲醇水溶液，超聲提取1 h，以12 000 r/min離心10 min，取上清液，備用。

精密稱取適量的大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、耐斯糖對照品，加入甲醇超聲溶解，并定容至10 mL，于4 ℃避光保存。

1.3 實驗條件

1.3.1 色譜條件 寡糖類化合物采用Acquity UPLC BEH Amide色譜柱(2.1 mm×100 mm×1.7 μm)分離；流動相：0.1%甲酸水(A)，乙腈(B)；梯度洗脫程序：0～2 min(65%B)，2～6 min(65%～60%B)，6～8 min(60%～55%B)，8～10 min(55%B)；柱溫：40 ℃；樣品室溫度：4 ℃；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：2 μL。

蒽醌和環(huán)烯醚萜類化合物采用Acquity HSS T3色譜柱(2.1 mm×100 mm×1.8 μm)分離，梯度洗脫程序：0～2 min(0.5%B)，2～4 min(0.5%～2%B)，4～6 min(2%～28%B)，6～8 min(28%～40%B)，8～12 min(40%～65%B)，12～16 min(65%～80%B)，16～18 min(80%B)，18～22 min(80%～98%B)，22～24 min(98%B)，24.1 min(0.5%B)；柱溫：40 ℃；樣品室溫度：4 ℃；流速：0.4 mL/min；進(jìn)樣量：2 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件 采用ESI源負(fù)離子模式檢測，亮氨酸腦啡肽作為校正液。毛細(xì)管電壓2.2 kV，錐孔電壓40 V，離子源溫度100 ℃，脫溶劑氣溫度400 ℃，脫溶劑氣流速800 L/h，采用MSE掃描模式檢測。低能通道碰撞電壓6 V，高能通道碰撞電壓10～80 V，質(zhì)量掃描范圍m/z100～1 500，采用Continuum模式下的3D數(shù)據(jù)采集，MassLynx V4.1數(shù)據(jù)處理工作站以及以中藥數(shù)據(jù)庫為基礎(chǔ)的UNIFI 1.7軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 實驗條件的優(yōu)化

由于巴戟天提取物中含有許多同分異構(gòu)體，尤其是蒽醌類、環(huán)烯醚萜類化合物，雖然可以通過提取離子色譜圖區(qū)分重疊峰，但對于元素組成相同、裂解規(guī)律相似的同分異構(gòu)體，需要足夠清晰的色譜分離才能被識別。為全面鑒定和表征巴戟天中的各類成分，本實驗對提取溶劑、色譜條件、質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。通過比較主峰的峰面積及響應(yīng)值，確定寡糖類最佳提取溶劑為50%甲醇溶液，而環(huán)烯醚萜類、蒽醌類及其他類成分在95%甲醇溶液中提取效率較高。由于每類化合物的極性不同，實驗選擇了兩種色譜柱，最終優(yōu)化的色譜條件已于1.3.1節(jié)中列出。通過比較正、負(fù)離子2種掃描模式，發(fā)現(xiàn)在負(fù)離子模式下質(zhì)譜響應(yīng)更強(qiáng)，故實驗選擇在負(fù)離子模式下進(jìn)行，得到巴戟天甲醇提取化合物的基峰強(qiáng)度(base peak integration, BPI)色譜圖示于圖1。

2.2 已知化合物的鑒定

利用UNIFITM定性分析軟件匹配化合物的結(jié)構(gòu)需通過標(biāo)準(zhǔn)品和文獻(xiàn)報道進(jìn)一步驗證，排除假陽性結(jié)果。本實驗共鑒定出110個化合物，包括8個寡糖類、12個環(huán)烯醚萜類、58個蒽醌類化合物，以及32個其他類化合物。

2.2.1 低聚糖的鑒定 寡糖類化合物是巴戟天抗抑郁的主要有效成分，相鄰寡糖之間相差一個分子質(zhì)量為162 u(C6H10O5)的六碳糖。寡糖類成分的極性較強(qiáng)，在C18色譜柱上難以保留，因此選用適合糖類分析的Amide色譜柱?；赨NIFI軟件推斷的裂解碎片，結(jié)合文獻(xiàn)中的質(zhì)譜數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)品對照方法，共鑒定了8個寡糖類成分。下面以峰3為例，闡述寡糖類成分的鑒定過程。峰3的準(zhǔn)分子離子峰為m/z665.214 7[M-H]-，其高能通道質(zhì)譜圖和裂解碎片示于圖2。峰3產(chǎn)生[M-H-(C6H10O5)n]-、[M-H-(C6H10O5)n-H2O]-碎片離子，這與耐斯糖標(biāo)準(zhǔn)品的碎片離子一致，結(jié)合文獻(xiàn)報道[9-10]，可將該化合物鑒定為耐斯糖，其可能的裂解途徑示于圖3。

圖1 負(fù)離子模式下，巴戟天50%醇提物的BPI圖(a)和95%醇提物的BPI圖(b)Fig.1 BPI chromatogram of 50% methanol extracts (a) and95% methanol extracts (b) of Morinda officinalis How.in negative ion mode

化合物峰1～8的每個相鄰峰之間相差162 u，它們具有相同的裂解行為，均產(chǎn)生丟失n(C6H10O5)、n(C6H10O5)-H2O的特征碎片離子。根據(jù)裂解碎片的類型、Amide色譜柱上的保留行為，并結(jié)合文獻(xiàn)報道[10]，對峰1～8進(jìn)行鑒定，其結(jié)果列于附表1(篇幅所限，請登錄《質(zhì)譜學(xué)報》官網(wǎng)下載附表1。網(wǎng)址：http:∥www.jcmss.com.cn/CN/volumn/current.shtml)。

2.2.2 環(huán)烯醚萜的鑒定 巴戟天中的環(huán)烯醚萜類化合物是一類生物活性較強(qiáng)的化合物，其C1位多為羥基，且C1—OH性質(zhì)活潑，多與葡萄糖結(jié)合成苷。本實驗共鑒定出12個化合物，以峰15為例闡述其鑒定過程。峰15的準(zhǔn)分子離子峰為m/z389.108 9[M-H]-，其高能通道質(zhì)譜圖和裂解碎片示于圖4(裂解碎片詳細(xì)信息列于附表1)。峰15產(chǎn)生m/z227.055 8 [M-H-C6H10O5]-，m/z345.118 7 [M-H-CO2]-碎片離子，結(jié)合文獻(xiàn)[11]，可推斷該化合物為去乙酰車葉草苷酸，其可能的裂解途徑示于圖5。

圖2 負(fù)離子模式下，化合物峰3的高能質(zhì)譜圖Fig.2 MS spectra in high energy scan of peak 3 in negative ion mode

圖3 負(fù)離子模式下，化合物峰3可能的質(zhì)譜裂解途徑Fig.3 Fragmentation pathway of peak 3 in negative ion mode

圖4 負(fù)離子模式下，化合物峰15的高能質(zhì)譜圖Fig.4 MS spectra in high energy scan of peak 15 in negative ion mode

此外，負(fù)離子模式下還存在一系列的環(huán)烯醚萜類成分，其分子式分別為C16H22O11(峰13、14、16、17)，C26H30O15(峰19)，C9H12O3(峰22)，C17H26O11(峰24、27)，C18H24O12(峰23、28)和C18H22O11(峰31)。根據(jù)裂解碎片類型、含量高低和在反相C18柱上的色譜行為，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[6-7,11-12]進(jìn)行鑒定，其結(jié)果列于附表1。

2.2.3 蒽醌類化合物的鑒定 蒽醌類化合物是巴戟天化學(xué)成分中研究最早、最多的一類，其結(jié)構(gòu)特點是母核均為蒽醌類單母核，取代基多為甲基、甲氧基、羥甲基、羥基等。本實驗共鑒定了58個靶標(biāo)蒽醌類化合物。

峰47、50、56、71、81具有相同的準(zhǔn)分子離子峰m/z285.039 6 [M-H]-，其分子式為C15H8O6，這5個化合物可能互為同分異構(gòu)體。高能通道存在共有特征碎片m/z285.039 6 [M-H]-和m/z257.045 0 [M-CO-H]-。文獻(xiàn)[10]報道，分子式為C15H8O6的化合物有ω-羥基大黃素、1,3,6-三羥基-2-甲氧基蒽醌、1,3,5,6-四羥基-2-甲基蒽醌。峰47、50、71和81的高能通道中存在m/z270.017 1 [M-H-CH3]-、m/z242.021 8 [M-H-CH3-CO]-的碎片信息，表明取代基中有甲基或甲氧基存在，據(jù)此可推斷為1,3,6-三羥基-2-甲氧基蒽醌或1,3,5,6-四羥基-2-甲基蒽醌。峰56的基峰離子為m/z253.049 8 [M-H-CH2OH]-，沒有m/z270.017 1、242.021 8的碎片信息，推斷其為ω-羥基大黃素。

圖5 去乙酰車葉草苷酸可能的質(zhì)譜裂解途徑Fig.5 Fragmentation pathway of deacetylasperulosidic acid in negative ion mode

此外，負(fù)離子模式下還存在一系列蒽醌類成分，其分子式分別為C15H10O4(峰41、55、89、90、95)，C15H10O5(峰42、51、53、67、80、92)，C16H12O5(峰43、61、83、99)，C16H10O6(峰44、65)，C15H8O6(峰46、54、66、70)，C15H8O5(峰48、52、57、69、88)，C15H8O7(峰58、64)，C15H8O4(峰59、84)，C14H8O5(峰49、63、74)，C14H8O3(峰60、68、73)和C15H10O3(峰71、76、79)。根據(jù)裂解碎片類型、含量高低和在反相C18柱上的色譜行為，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[7,13-14]進(jìn)行鑒定，其結(jié)果列于附表1。

2.2.4 其他類化合物的結(jié)構(gòu)分析及鑒定 對于一些含量較低、種類較少且規(guī)律性不強(qiáng)的化合物，根據(jù)已有文獻(xiàn)[5-8]，應(yīng)用提取離子色譜法(extracted ion chromatogram, EIC)及UNIFI軟件的自動匹配功能進(jìn)行提取與鑒定，共推斷出32個其他類化合物，包括有機(jī)酸類、氨基酸等成分。實驗測得的各化合物準(zhǔn)分子離子峰的精確質(zhì)量數(shù)均在5×10-6誤差范圍內(nèi)，具體質(zhì)譜數(shù)據(jù)列于附表1。

2.3 未知化合物的表征

本實驗共鑒定出8個未知化合物(峰18、21、25、26、29、30、32、104)，其中4個為潛在的新化合物，另外4個為巴戟天中首次發(fā)現(xiàn)的化合物。

峰18的準(zhǔn)分子離子峰為m/z405.103 6 [M-H]-，與去乙酰車葉草苷酸相比多了一個O原子，其高能通道質(zhì)譜圖示于圖6。高能通道存在m/z225.040 0 [M-H-C6H12O6]-、m/z361.113 6 [M-H5-CO2]-、m/z181.049 9 [M-H-C6H12O6-CO2]-碎片離子(具體裂解碎片信息列于附表1)，與去乙酰車葉草苷酸的裂解規(guī)律相似，推斷其結(jié)構(gòu)可能在7,8雙鍵處加了一個羥基。在Scifinder、Chemspider 等在線數(shù)據(jù)庫中未檢索到與之相匹配的結(jié)構(gòu)，因此推斷化合物18為潛在新化合物，暫時將其命名為羥基-去乙酰車葉草苷酸。

峰25和26的準(zhǔn)分子離子峰為m/z447.113 6 [M-H]-，根據(jù)精確分子質(zhì)量計算該化合物的分子式為C18H24O13，與車葉草酸相比多了一個O原子。其高能通道存在m/z447.113 6 [M-H]-、m/z387.093 0 [M-H-CH3COOH]-、m/z179.054 9 [M-H-C12H14O7]-、m/z113.023 4 [M-H-C13H23O10]-碎片離子，推斷其結(jié)構(gòu)為7,8位雙鍵處加了一個羥基，暫時將其命名為7-羥基車葉草酸或其同分異構(gòu)體。

峰29的準(zhǔn)分子離子峰為m/z443.191 0[M-H]-，根據(jù)精確分子質(zhì)量計算該化合物的分子式為C21H32O10。其高能通道存在m/z183.102 1[M-H-C11H17O7]-碎片離子和m/z179.054 8、161.044 8等環(huán)烯醚萜苷特征離子，推斷峰29為環(huán)烯醚萜苷類化合物。在Chemspider在線數(shù)據(jù)庫中檢索得到化合物Methyl(1S,4aS,5R,7aS)-5-butoxy-1-(β-D-glucopyranosyloxy)-7-methyl-1,4a,5,7a-tetrahydrocyclopenta[c]pyran-4-carboxylate(CSID： 28509365)，其結(jié)構(gòu)與實驗測得的多級質(zhì)譜碎片相符，據(jù)此推斷該化合物為CSID：28509365或其同分異構(gòu)體，這是在巴戟天植物中首次發(fā)現(xiàn)的化合物。同理，峰30的分子式為C16H28O9，存在m/z183.102 3[M-H-C6H12O6]-、m/z201.113 2 [M-H-C6H10O5]-特征碎片及m/z179.054 8、161.044 8糖苷碎片，經(jīng)Chemspider在線數(shù)據(jù)庫檢索，化合物(1S,4R,4aS,6S,7S,7aR)-4,6-Dihydroxy-4,7-dimethyloctahydrocyclopenta[c]pyran-1-yl-β-D-glucopyranoside(CSID：28286650)的結(jié)構(gòu)與以上質(zhì)譜信息相符，據(jù)此可推斷峰30為CSID：28286650化合物或其異構(gòu)體。峰32的分子式為C17H30O9，根據(jù)其高能通道存在m/z179.054 8、161.044 8糖苷碎片的信息及其色譜保留行為，推斷該化合物可能為苷類化合物。在Scifinder、Chemspider等在線數(shù)據(jù)庫中未檢索到與之相匹配的結(jié)構(gòu)，因此該化合物可能為潛在新化合物。

圖6 負(fù)離子模式下，化合物峰18的高能質(zhì)譜圖Fig.6 MS spectra in high energy scan of peak 18 in negative ion mode

峰21的準(zhǔn)分子離子峰為m/z373.112 7[M-H]-，根據(jù)精確分子質(zhì)量計算該化合物的分子式為C16H22O10，與去乙酰車葉草苷酸相比少一個O原子，其高能通道存在m/z211.060 0 [M-H-C6H10O5]-、m/z193.050 3 [M-H-C6H12O6]-、m/z149.059 6[M-H-C6H12O6-CO2]-等環(huán)烯醚萜特征離子，因此推斷峰21為環(huán)烯醚萜類化合物。在Scifinder、Chemspider等在線數(shù)據(jù)庫中搜索其可能的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，代入UNIFI軟件中進(jìn)一步篩查，最終發(fā)現(xiàn)其與geniposidic acid的結(jié)構(gòu)相匹配，因此推斷該化合物為geniposidic acid或其同分異構(gòu)體，這也是在巴戟天植物中首次發(fā)現(xiàn)的化合物。峰104存在m/z373.112 7 [M-H]-、m/z225.222 2 [M-H-CH2O2]-等碎片離子，與2-羥基棕櫚酸的結(jié)構(gòu)匹配，推斷其為2-羥基棕櫚酸或其同分異構(gòu)體。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，UPLC-Q-TOF MSE技術(shù)結(jié)合UNIFI天然產(chǎn)物解決方案可提高化合物篩查和鑒定的效率，但UNIFI給出的理論斷裂位點與實際裂解行為存在差異。以峰3為例，根據(jù)UNIFI提供的斷裂位點無法得到m/z485.149 8[M-H-C6H12O6]-碎片離子，而推斷碎片是在丟失葡萄糖殘基的基礎(chǔ)上脫水形成的m/z485.149 8 [M-H-C6H10O5-H2O]-，并且得到文獻(xiàn)的支持[9]。根據(jù)總結(jié)的各類化合物的特征碎片及色譜保留行為，推斷其可能的結(jié)構(gòu)類型，再將Scifinder、Chemspider等在線數(shù)據(jù)庫中搜索的可能的結(jié)構(gòu)信息代入UNIFI軟件中進(jìn)一步驗證，進(jìn)行未知化合物的鑒定，這將為未知化合物的鑒定提供思路。巴戟天中蒽醌類和環(huán)烯醚萜類化合物中同分異構(gòu)體較多，且多為取代基位置異構(gòu)體，目前，利用UPLC-Q-TOF MSE技術(shù)尚不能區(qū)分取代基位置異構(gòu)體，需進(jìn)一步通過NMR進(jìn)行確定。

4 結(jié)論

本實驗建立了一種基于UPLC-Q-TOF MSE技術(shù)對巴戟天藥材中的化學(xué)成分進(jìn)行快速和較全面的分析方法。根據(jù)化合物的精確分子質(zhì)量、色譜保留行為，總結(jié)出各類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律，結(jié)合文獻(xiàn)報道，同時借助UNIFI軟件平臺，共鑒定出110個化合物，包括8個寡糖類、12個環(huán)烯醚萜類、58個蒽醌類化合物和32個其他類化合物；鑒定出8個未知化合物，包括1個有機(jī)酸、2個苷類化合物、5個環(huán)烯醚萜類成分。該方法可快速、有效地對中藥(復(fù)方)組分或其不同極性部位的成分進(jìn)行特征圖譜表征和結(jié)構(gòu)分析，可為中藥化學(xué)成分的深入研究提供方法參考。

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Characterization ofMorindaofficinalisHow. by UPLC-Q-TOF MSECoupled with UNIFI Database Filter

WANG Mei-ling1, ZHANG Qing-qing1, FU Shuang1, LIU Yue-hong1, LIANG Chuan-lei1, CHEN Na1, DING Yong-sheng1, WANG Hai-li1, QU Xiao-mei1, ZHAO Bao-sheng2, GAO Xiao-yan1

(1.SchoolofChineseMateriaMedica,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,china;2.AcademyofTraditionalChineseMedicine,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,china)

Liquid chromatography coupled with high resolution mass spectrometry (LC-HRMS) was widely used for the identification of components from traditional Chinese medicine (TCM), but the characterization of the unknown compounds was still a great challenge currently. Therefore, there is an urgent need to establish a strategy for rapid and comprehensive identification of chemical ingredients in TCMs. In this study, a multiple ingredients identification strategy was proposed based on the UPLC-Q-TOF MSEcoupled with the UNIFI informatics platform. This method includes three steps: the first step was to set up an in-house library based on the literature to complement the UNIFI database. The second step was to screen and verify the known ingredients from raw data. The peaks were screened preliminarily by UNIFITMplatform based on the in-house database. For the known compounds, based on the accurate mass, fragment ions, neutral losses, retention behaviors, reference standards, previous reports, the compounds were validated furtherly. The last step was to identify or characterize the chemical structures of the potential novel components with similar MS fragmentation pattern of the identified ingredients. The possible molecular formula was obtained by the accurate mass. The candidate compounds were obtained by the online database possible structure was verified by “Fragment match” function and characteristic fragments. This strategy was successfully applied to identify and deduct components ofMorindaofficinalisHow.. A total of 110 chemical components are identified fromMorindaofficinalisHow., including 8 oligosaccharides, 12 iridoids, 58 anthraquinones and 32 other compounds. 8 components are tentatively characterized, including 5 iridoids, 2 glycosides compounds and 1 organic acid. Four of them are potential new compounds, the other components are found inMorindaofficinalisHow. for the first time. This study provides an efficient data processing strategy to rapidly profile the chemical constituents of complicated herbal extracts.

UPLC/Q-TOF MSE; UNIFI database; MorindaofficinalisHow.; quick identification; characterization

2016-07-11;

2016-11-17

教育部大學(xué)生創(chuàng)新性實驗計劃項目(201610026050)資助

王美玲(1990—)，女(漢族)，山東東營人，碩士研究生，中藥分析學(xué)專業(yè)。E-mail: wangmeiling@bucm.edu.cn

趙保勝(1973—)，男(漢族)，河北衡水人，副研究員，從事中藥藥效與物質(zhì)基礎(chǔ)研究。E-mail: zhaobs1973@163.com

高曉燕(1967—)，女(滿族)，河北承德人，研究員，從事中藥分析學(xué)研究。E-mail: gaoxiaoyan0913@sina.com

O657.63

A

1004-2997(2017)01-0075-08

10.7538/zpxb.2017.38.01.0075