“植物細胞骨架的顯示和觀察”的簡化方法

趙紫平

(甘肅省臨夏中學 731100)

1 提出問題

細胞骨架是細胞重要的結(jié)構(gòu)，它是由蛋白質(zhì)絲組成的復(fù)雜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)其組成成分和形態(tài)結(jié)構(gòu)可分為微管、微絲和中間纖維，它們對于細胞形態(tài)的維持，細胞的生長、運動、分裂、分化、物質(zhì)運輸、能量轉(zhuǎn)換、信息交流和基因表達等起到重要的作用。在高中階段，涉及細胞結(jié)構(gòu)的基本實驗有細胞膜的制備、線粒體和葉綠體的觀察以及DNA和RNA在細胞中的分布等實驗。這些實驗的開展，有利于學生對細胞的整體結(jié)構(gòu)和部分細胞器有一定的了解。但是如果真正要讓學生對細胞的結(jié)構(gòu)有整體的了解，還應(yīng)該開設(shè)“細胞骨架的顯示和觀察”實驗。然而對大多數(shù)的普通高中來說，沒有條件和設(shè)備來支持完成細胞骨架的顯示和制備。按照高中對于實驗要求來說，只要能顯示和觀察就可以，所以可以進行如下的簡化實驗。

2 實驗原理

用適當濃度的Triton X-100處理細胞時，可將細胞質(zhì)膜和細胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)和全部脂質(zhì)溶解抽提，但細胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)不受到破壞而得到保存，經(jīng)戊二醛固定處理和考馬斯亮藍R250染色后，能在光鏡下觀察到由微絲組成的微絲束為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，就是細胞骨架。

3 實驗步驟

3.1 儀器用具 顯微鏡、燒杯、玻璃滴管、容量瓶、試劑瓶、鑷子、剪刀、載玻片、蓋玻片、吸水紙等。

3.2 實驗試劑 6 mmol/L磷酸緩沖液(pH 6.8)、M-緩沖液、1% Triton X-100液、3%戊二醛、0.2%考馬斯亮藍R250染料、1/15 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)，實驗材料可以選洋蔥鱗葉。

3.3 具體步驟 ①取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，用剪刀剪成約1 cm2大小，置于裝有pH 6.8磷酸緩沖液的50 mL燒杯中，使其下沉；②用吸管吸去磷酸緩沖液，用1% Triton X-100液，處理20～30 min；用吸管吸去Triton X-100液，再加入M-緩沖液，反復(fù)洗滌3次，每次10 min，除去Triton X-100；用吸管吸去M-緩沖液，加入3%戊二醛溶液，固定0.5～1 h；用吸管吸去固定液，用6 mmol/L磷酸緩沖液(pH 6.8)反復(fù)沖洗3次，每次10 min；用吸管吸去6 mmol/L磷酸緩沖液(pH 6.8)，加入0.2%考馬斯亮藍R250染液，染色20～30 min，吸去染液，用蒸餾水洗1～2次；③用鑷子取出標本，置于載玻片上，用解剖針攤平，滴一滴蒸餾水，加蓋玻片，制成臨時裝片。

4 實驗結(jié)果

在顯微鏡下觀察洋蔥鱗莖表皮細胞的細胞質(zhì)，視野中被染成深藍色的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，即為細胞骨架結(jié)構(gòu)。