兩種抗雌激素藥物對(duì)雌性斑馬魚(yú)脂肪代謝的影響

姚亞運(yùn)賈永義孫勝香吳思蘋(píng)張運(yùn)妮喬 芳張美玲周忠良杜震宇

(1. 華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 上海 200241; 2. 農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖州 313001; 3. 浙江省魚(yú)類健康與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖州 313001; 4. 浙江省淡水水產(chǎn)研究所, 湖州 313001)

兩種抗雌激素藥物對(duì)雌性斑馬魚(yú)脂肪代謝的影響

姚亞運(yùn)1,2,3,4賈永義1,2,3,4孫勝香1吳思蘋(píng)1張運(yùn)妮1喬 芳1張美玲1周忠良1杜震宇1

(1. 華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 上海 200241; 2. 農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖州 313001; 3. 浙江省魚(yú)類健康與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖州 313001; 4. 浙江省淡水水產(chǎn)研究所, 湖州 313001)

為探究雌激素對(duì)雌魚(yú)體內(nèi)脂肪代謝的影響, 研究分別使用50和250 μg/L的來(lái)曲唑(Letrozole、LET)與他莫昔芬(Tamoxifen、TAM)兩種抗雌激素藥物, 構(gòu)建了雌性斑馬魚(yú)(Danio rerio)雌激素缺乏模型和雌激素受體競(jìng)爭(zhēng)抑制模型, 并檢測(cè)兩種藥物處理后斑馬魚(yú)肝臟、內(nèi)臟和肌肉的甘油三酯(TG)含量變化以及肝臟內(nèi)雌激素和脂肪代謝相關(guān)基因的變化。結(jié)果顯示, 低濃度LET處理后雌魚(yú)肝臟和內(nèi)臟TG顯著上升(P＜0.05); 高濃度TAM處理后肝臟TG含量顯著降低(P＜0.05),其他各組處理TG均無(wú)差異?；騧RNA檢測(cè)結(jié)果表明, 兩種濃度LET和TAM處理的雌性斑馬魚(yú)芳香化酶(CYP19A)表達(dá)均顯著下調(diào)(P＜0.05), 低濃度TAM暴露導(dǎo)致雌激素受體(ERα)表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05)。此外, 兩種濃度LET處理均引起了脂肪酸合成酶(FAS)表達(dá)顯著上調(diào), 微粒體的TG轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05); 低濃度TAM引起了MTP表達(dá)顯著下調(diào)(P＜0.05), 而高濃度TAM組則引起了MTP表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.05)。綜合各相關(guān)指標(biāo), 研究結(jié)果表明雌激素確實(shí)在雌性斑馬魚(yú)脂肪代謝中發(fā)揮作用, 然而不同程度和方式的雌激素抑制會(huì)導(dǎo)致不同的脂代謝失調(diào)表現(xiàn), 這提示魚(yú)體內(nèi)雌激素紊亂所導(dǎo)致的脂代謝失調(diào)與雌激素濃度和作用通路上的受阻位點(diǎn)有關(guān), 并受到多重因子參與的內(nèi)分泌調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)。

雌激素; 脂肪代謝; 來(lái)曲唑; 他莫昔芬; 斑馬魚(yú)

魚(yú)類脂肪代謝異常, 包括脂肪肝和腹部脂肪過(guò)度沉積是當(dāng)前養(yǎng)殖魚(yú)類中常見(jiàn)的營(yíng)養(yǎng)性病害, 因此魚(yú)類脂代謝異常的成因成為當(dāng)前魚(yú)類營(yíng)養(yǎng)生理學(xué)的重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容之一。目前, 此領(lǐng)域的研究主要將焦點(diǎn)集中在營(yíng)養(yǎng)與飼料對(duì)脂代謝的影響上[1]。此外, 也有研究關(guān)注環(huán)境因素包括環(huán)境污染物對(duì)魚(yú)類脂肪代謝的影響[2,3]。然而, 作為脂代謝的重要相關(guān)生理因素, 內(nèi)分泌環(huán)境對(duì)魚(yú)類脂代謝的影響至今仍少有人關(guān)注。在人體內(nèi), 絕經(jīng)期和更年期婦女體重往往高于絕經(jīng)前的婦女, 容易出現(xiàn)脂代謝紊亂并在腹部積蓄脂肪[4,5], 而這些女性一旦采用雌激素藥物治療, 其脂肪代謝就逐漸趨于正常[6,7]。因此,雌激素在人類脂肪代謝與脂肪沉積過(guò)程中起到了重要的作用[7]。在哺乳動(dòng)物中, 編碼雌激素合成最后一步關(guān)鍵酶-細(xì)胞色素P450芳香化酶的CYP19A基因敲除的小鼠在肝臟和腹部的脂肪積蓄都有明顯增多[8,9]。也有報(bào)道指出, 雌激素受體α (ERα)敲除的小鼠同樣出現(xiàn)腹部脂肪嚴(yán)重積累的現(xiàn)象[10,11]。這些研究表明, 哺乳動(dòng)物脂代謝受到雌激素的調(diào)控。然而, 雌激素在魚(yú)類脂肪代謝中的作用至今尚無(wú)研究報(bào)道。為了解雌激素對(duì)雌性魚(yú)類脂代謝的可能影響, 本研究采用雌性斑馬魚(yú)(Danio rerio)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象, 通過(guò)在水體中分別加入兩種不同濃度的抗雌激素藥物來(lái)曲唑(Letrozole, LET)與他莫昔芬(Tamoxifen, TAM), 分別抑制雌激素合成路徑和雌激素與受體結(jié)合路徑, 經(jīng)過(guò)5周暴露后, 以雌魚(yú)的肝臟、內(nèi)臟和肌肉甘油三酯沉積為表型指標(biāo), 結(jié)合相關(guān)基因的表達(dá)影響, 來(lái)探討兩種抗雌激素對(duì)雌性斑馬魚(yú)脂肪代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器: 酶標(biāo)儀(BIO-TEK), 普通PCR儀(My-Cycler, BIO-RAD), q-PCR儀(CFX Connect, BIORAD), 微量紫外分光光度計(jì)(Thermo Nanodrop2000),全自動(dòng)樣品快速研磨儀(上海凈信科技有限公司),冷凍離心機(jī)(Eppendorf centrifuge5415R)。

試劑: 他莫昔芬(Tamoxifen, TAM): 分子量為371.51, 純度＞99.0%, 購(gòu)自阿達(dá)瑪斯試劑有限公司、來(lái)曲唑(Letrozole, LET): 分子量為285.31, 純度＞99.0%, 購(gòu)自湖北遠(yuǎn)成藥業(yè)有限公司、二甲基亞砜(DMSO)購(gòu)自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司、甘油三酯測(cè)試盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司(TaKaRa biotechnology)、SYBR熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用的斑馬魚(yú)購(gòu)自上海市羽一熱帶觀賞魚(yú)養(yǎng)殖場(chǎng), 3—4月齡, 初始平均體重(0.14±0.01) g。水溫控制在(28±1)℃, 每天保持光照14h、黑暗10h,實(shí)驗(yàn)用水為曝氣并除氯后的自來(lái)水。實(shí)驗(yàn)魚(yú)在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中適應(yīng)一周后, 挑選健康活潑的雌性個(gè)體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

在對(duì)魚(yú)類慢性暴露研究中, LET和TAM的濃度在300 μg/L內(nèi)均有選擇, 如有研究用LET和TAM對(duì)日本青鳉(Oryzias latipes)進(jìn)行暴露, 發(fā)現(xiàn)300 μg/L以內(nèi)的LET與TAM都未引起生理毒性[12—14]。由此,本實(shí)驗(yàn)采用濃度為50和250 μg/L的LET和TAM兩種藥物來(lái)對(duì)雌性斑馬魚(yú)進(jìn)行慢性水體暴露, 藥物均使用國(guó)際類似研究中通用的二甲基亞砜(DMSO)作為助溶劑[15—17]。對(duì)照組為DMSO組, 其濃度為10 μL/L。每個(gè)暴露實(shí)驗(yàn)在7 L魚(yú)缸中進(jìn)行, 每種處理設(shè)兩個(gè)重復(fù), 每個(gè)平行缸養(yǎng)魚(yú)25條。實(shí)驗(yàn)期間, 每天以新配置的含相同藥物濃度的水將缸中水換去1/3, 保證養(yǎng)殖水體的藥物濃度保持一致。養(yǎng)殖過(guò)程中持續(xù)增氧, 水溫控制在(28±1)℃, 每天保持光照14h、黑暗10h。每天定量喂食兩次(飼料購(gòu)自山東升索漁用飼料研究中心, 每次投喂量定為體重2%)。根據(jù)此前的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 5周的抗雌激素藥物暴露可以使得斑馬魚(yú)出現(xiàn)明顯的脂代謝紊亂現(xiàn)象。因此,本實(shí)驗(yàn)持續(xù)5周, 5周后取肝臟、內(nèi)臟和肌肉, 取樣前禁食12h, 取樣過(guò)程均在冰上進(jìn)行。其中抽提RNA的樣品過(guò)液氮后至-80℃保存待用。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

肝臟、內(nèi)臟和肌肉組織的甘油三酯測(cè)定分別隨機(jī)取8尾魚(yú)的肝臟、內(nèi)臟(去肝臟外的部分)及肌肉組織, 兩尾魚(yú)的組織混一個(gè)樣, 其中肝臟(0.0041±0.0027) g、內(nèi)臟(0.023±0.009) g和肌肉(0.034±0.010) g, 分別按照重量(g)∶體積(μL)=1∶10、1∶20、1∶20加入無(wú)水乙醇, 勻漿后在4℃, 2500 r/ min條件下離心10min。取上清液, 使用甘油三酯測(cè)試盒(GPO-PAP酶法)測(cè)定甘油三酯含量。

肝臟組織的實(shí)時(shí)熒光定量PCR每組隨機(jī)取6尾魚(yú)肝臟組織, 每份肝臟組織(0.0041±0.0027) g,按照RNA提取步驟提取總RNA, 并在微量紫外分光光度計(jì)上測(cè)定A260/A280以及總RNA濃度, 然后將提取的總RNA使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為CDNA。在NCBI上查找到DGAT2、MTP的序列, 然后通過(guò)primer5.0設(shè)計(jì)引物, 所有引物均由鉑尚生物技術(shù)(上海)有限公司合成, 詳細(xì)列表如下。根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒的要求進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。其中以β-actin基因?yàn)閮?nèi)參基因, 以DMSO組為對(duì)照組, 最后采用2-ΔΔCt法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one way-ANOVA)及Tukey法檢驗(yàn)各組間差異性。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

2 結(jié)果

2.1 LET與TAM暴露雌性斑馬魚(yú)對(duì)肝臟、內(nèi)臟及肌肉甘油三酯的影響

50 μg/L的LET可以引起雌性斑馬魚(yú)的肝臟和內(nèi)臟的甘油三酯顯著性上調(diào)(P＜0.05); 而250 μg/L的TAM則引起雌性斑馬魚(yú)肝臟甘油三酯顯著降低(P＜0.05, 表 2)。

2.2 LET與TAM暴露雌性斑馬魚(yú)對(duì)其肝臟內(nèi)雌激素相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖 1所示, 兩種濃度的LET均能顯示CYP19A顯著性下調(diào)(P＜0.05)。兩種濃度的LET均沒(méi)有引起ERα顯著性差異(P＞0.05)。兩種濃度的TAM也均能引起CYP19A顯著性下調(diào)(P＜0.05); 而50 μg/L的TAM處理則引起ERα顯著性下調(diào)(P＜0.05), 250 μg/L的TAM則未引起ERα引的顯著性差異。

表 1 用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析的引物序列Tab. 1 Sequences of real time PCR primers

表 2 斑馬魚(yú)肝臟、內(nèi)臟、肌肉中的脂肪含量Tab. 2 Effects of LET and TAM on the triglyceride content in liver, viscera and muscle of female zebrafish (%)

2.3 LET與TAM暴露雌性斑馬魚(yú)對(duì)其肝臟脂肪代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

如圖 2所示, 兩種濃度的LET均能引起脂肪酸合成酶mRNA(FAS)顯著性上調(diào)(P＜0.05), 此外均引起了微粒體的甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)表達(dá)顯著性下調(diào)(P＜0.05); 低濃度的TAM引起MTP顯著性下調(diào)(P＜0.05), 但是高濃度的TAM卻引起MTP顯著性上調(diào)(P＜0.05)。

3 討論

本研究的目的是通過(guò)LET與TAM兩種藥物分別構(gòu)建雌激素缺乏模型和雌激素受體競(jìng)爭(zhēng)抑制模型, 以期探討雌激素及雌激素受體與雌魚(yú)脂肪代謝的關(guān)系。兩種濃度的LET均引起了CYP19A下調(diào),表明雌激素的合成代謝已受到藥物暴露的干擾。而脂肪含量測(cè)定結(jié)果表明, 低濃度的LET的確導(dǎo)致脂肪在雌性斑馬魚(yú)各組織中的積累。從脂肪代謝基因表達(dá)來(lái)看, 兩種濃度LET均引起了脂肪酸合成酶(FAS)表達(dá)顯著上調(diào), 微粒體的甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)表達(dá)顯著下調(diào), 甘油三酯合成基因DGAT2有上調(diào)趨勢(shì), 而脂肪分解相關(guān)基因CPT-1和PPARa則有下調(diào)趨勢(shì)。這提示在LET處理的雌性斑馬魚(yú)中, 出現(xiàn)了脂肪酸和甘油三酯合成增加、脂肪酸分解下降的代謝失衡。又由于MTP的表達(dá)下調(diào), 這又將減弱肝臟將甘油三酯向肝外轉(zhuǎn)運(yùn)的效率,從而最終導(dǎo)致甘油三酯在組織中的積累。與本研究相類似, 雌激素缺乏的小鼠會(huì)引起脂肪積累和肥胖傾向[8,9]。值得注意的是, 在本研究中, 雖然不同濃度的LET暴露后, 雌性斑馬魚(yú)的脂肪代謝基因變化情況相似, 然而就組織脂肪積蓄而言, 僅有低濃度的LET會(huì)顯著導(dǎo)致肝臟和內(nèi)臟甘油三酯積累, 但是高濃度的LET卻并未引起各組織的甘油三酯的積累。此結(jié)果提示, 雌激素對(duì)于雌魚(yú)的脂肪代謝的影響并不是線性的, 不同濃度雌激素可能存在不同的對(duì)魚(yú)體代謝起作用的作用途徑。對(duì)其他動(dòng)物的研究表明, 雌激素合成相關(guān)的芳香化酶的缺乏會(huì)增加體內(nèi)睪酮和瘦素的濃度, 從而影響脂肪代謝[9], 因此雌激素缺乏會(huì)通過(guò)干擾其他內(nèi)分泌因子的濃度變化從而影響脂肪代謝。在本實(shí)驗(yàn)中, 兩種濃度的LET暴露均下調(diào)了CYP19A的表達(dá), 而最終所導(dǎo)致的體內(nèi)脂肪積累趨勢(shì)不同, 這也提示雌激素所介導(dǎo)的脂肪代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與體內(nèi)的雌激素濃度或與受抑制程度存在相關(guān)性, 值得進(jìn)一步研究。

在本實(shí)驗(yàn)中, 盡管兩種濃度TAM也都引起了CYP19A的下調(diào), 低濃度的TAM還引起了ERα的下調(diào)。然而, 與LET效果不同, 在本實(shí)驗(yàn)中TAM暴露并沒(méi)有引發(fā)脂肪在組織中的積蓄, 肝臟脂肪反而在高濃度TAM處理組有顯著下降。基因結(jié)果表明, 兩種濃度的TAM暴露同時(shí)導(dǎo)致脂肪酸合成酶(FAS)和脂肪分解基因(CPT-1, PPARa)出現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì), 表明脂肪合成和分解均有所下降。而低濃度的TAM引起了MTP下調(diào), 從而可能抑制肝臟將甘油三酯向肝外轉(zhuǎn)運(yùn), 這可能是該組肝臟脂肪較對(duì)照略有上升的原因。而高濃度TAM組則引起了MTP的上調(diào), 或許意味著促進(jìn)肝臟中甘油三酯向肝外轉(zhuǎn)運(yùn), 從而出現(xiàn)如表型所顯示的那樣高濃度TAM導(dǎo)致肝臟脂肪降低的結(jié)果。此前已有多篇文章報(bào)道了ER和脂肪代謝存在相關(guān)性, 如E2與ERα結(jié)合后會(huì)通過(guò)增加棕色脂肪合成來(lái)增強(qiáng)能量消耗[10], 而ERα的減少所導(dǎo)致的ERα與ERβ比率變化也可能會(huì)影響脂肪代謝[22]。已有證據(jù)表明, 當(dāng)ERα減少, 體內(nèi)E2會(huì)更多的與ERβ或者其他的ER結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)[23]。根據(jù)這些在哺乳動(dòng)物中的結(jié)果分析與假設(shè), 在低濃度TAM下, CYP19A與ERα均減少本可能削弱E2與ERα結(jié)合后促進(jìn)能量消耗的效應(yīng), 導(dǎo)致脂肪的積累。但是, 這一效應(yīng)在本實(shí)驗(yàn)中并不明顯, 這說(shuō)明魚(yú)類的ERα對(duì)脂肪代謝的影響或存在與哺乳動(dòng)物不同的機(jī)制, 值得進(jìn)一步探索。另外, 和LET處理一樣, 高低劑量的TAM暴露也造成了不同的脂肪沉積表型。這再次提示, 體內(nèi)雌激素紊亂對(duì)魚(yú)類脂代謝的影響可能與雌激素濃度與作用通路上的受阻位點(diǎn)有關(guān)。此外, 高濃度的TAM與高濃度LET所可能導(dǎo)致的毒性效應(yīng)也有可能干擾脂肪代謝, 出現(xiàn)與低濃度TAM和LET暴露所不同的代謝表現(xiàn)。

圖 1 LET與TAM對(duì)雌性斑馬魚(yú)暴露, 肝臟CYP19A與ERα基因相對(duì)表達(dá)量Fig. 1 Effect of LET and TAM on hepatic genes related to estrogen synthesis and estrogen receptor of female zebrafish圖中各組之間標(biāo)注不同字母表示差異顯著, P＜0.05; 下同Values in groups with different letters are significantly different, P＜0.05; the same applies below

圖 2 LET與TAM對(duì)雌性斑馬魚(yú)暴露, 肝臟相關(guān)脂肪代謝基因的相對(duì)表達(dá)量Fig. 2 Effect of LET and TAM on hepatic genes related to lipid metabolism of female zebrafish

此外, 需要指出的是, 脂肪作為魚(yú)類的主要能源物質(zhì), 在生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖過(guò)程中都起到重要作用。本實(shí)驗(yàn)中的雌性斑馬魚(yú)為3—4月齡, 處于性成熟的關(guān)鍵期, 此時(shí)在雌激素的作用下, 性腺功能增強(qiáng), 同時(shí)伴隨著卵黃增生和體積增長(zhǎng)[24]。由于卵黃合成需要脂類物質(zhì)作為合成前體, 因此在性腺成熟過(guò)程中, 機(jī)體可能會(huì)通過(guò)雌激素對(duì)脂代謝的調(diào)控作用, 增加脂類物質(zhì)的合成和轉(zhuǎn)化, 滿足性腺發(fā)育的需求。本文中, LET與TAM兩種藥物能分別阻斷雌激素合成及雌激素與受體結(jié)合的過(guò)程, 因而也很有可能通過(guò)影響雌激素的功能來(lái)來(lái)干擾魚(yú)類的性腺發(fā)育, 從而改變性腺對(duì)脂類物質(zhì)的需求, 影響魚(yú)類的脂肪代謝。

綜上所述, 通過(guò)對(duì)雌激素合成步驟和受體結(jié)合步驟的抑制, 本實(shí)驗(yàn)證明雌激素紊亂將導(dǎo)致雌性斑馬魚(yú)脂肪代謝失調(diào)。然而, 不同濃度的雌激素抑制藥物在不同組織中出現(xiàn)了對(duì)脂肪代謝的不同作用效應(yīng), 這說(shuō)明雌激素紊亂所導(dǎo)致的魚(yú)體脂代謝失調(diào)可能與雌激素的濃度與雌激素作用通路上的受阻位點(diǎn)有關(guān), 并受到多因子內(nèi)分泌調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控。

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EFFECTS OF TWO ANTI-ESTROGEN DRUGS EXPOSURE ON LIPID METABOLISM OF FEMALE ZEBRAFISH (DANIO RERIO)

YAO Ya-Yun1,2,3,4, JIA Yong-Yi1,2,3,4, SUN Sheng-Xiang1, WU Si-Ping1, ZHANG Yun-Ni1, QIAO Fang1, ZHANG Mei-Ling1, ZHOU Zhong-Liang1and DU Zhen-Yu1
(1. School of Life Sciences, East China Normal University, Shanghai 200241, China; 2. Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Health Cultivation of the Ministry of Agriculture, Huzhou 313001, China; 3. Key Laboratory of Fish Health and Nutrition of Zhejiang Province, Huzhou 313001, China; 4. Institute of Freshwater Fisheries, Huzhou 313001, China)

In higher animals, estrogen can regulate lipid metabolism of females; however, whether estrogen regulates fish lipid metabolism is unclear. To explore effects of estrogen on lipid metabolism in zebrafish, letrozole (LET) and tamoxifen (TAM) were treated female zebrafish (0.14±0.01) g for 5 weeks to measure triglyceride (TG) concentrations in liver, visceral and muscle and the expressions of the hepatic genes related to estrogen and lipid metabolism. The results showed that low dose LET significantly increased TG in liver and viscera but not in muscle. Low dose TAM did not impact No TG content in all tested tissues but high dose TAM significantly decreased liver TAG. LET and TAM significantly induced CYP19A mRNA, and low dose TAM decreased ERα. LET increased FAS but decreased MTP expression. DGAT had an increase tendency, and CPT-1 and PPARα had a decreased tendency. It suggests a dyslipidemia symptom in the LET exposure groups. Low dose TAM reduced MTP and high dose TAM enhanced it (P＜0.05). These results showed important role of estrogen in lipid metabolism in female zebrafish with a complex dosage- and tissue-dependent pattern.

Estrogen; Lipid metabolism; Letrozole; Tamoxifen; Zebrafish

S963.7

A

1000-3207(2017)01-0095-06

10.7541/2017.12

2016-01-06;

2016-04-01

農(nóng)業(yè)部淡水漁業(yè)健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和浙江省魚(yú)類健康與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(ZJK2014004); 國(guó)家重大基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(2014CB138600); 國(guó)家自然科學(xué)基金(31472290); 華東師范大學(xué)研究生科研創(chuàng)新實(shí)踐項(xiàng)目(YJSKC201518)資助 [Supported by the Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Health Cultivation of the Ministry of Agriculture (ZJK2014004), the National Basic Research Program of China (2014CB138600), National Natural Science Foundation of China (31472290) and ECNU Research Innovation Foundation for Postgraduates(YJSKC201518)]

姚亞運(yùn)(1990—), 男, 安徽東至人; 碩士; 研究方向?yàn)樯鷳B(tài)毒理學(xué)。E-mail:lifeyyy@126.com 賈永義(1979—), 男, 山東濰坊人; 碩士; 研究方向?yàn)樗a(chǎn)種質(zhì)資源與遺傳育種。E-mail: yongyi_jia@163.com

杜震宇, 男, 教授; E-mail: zydu@bio.ecnu.edu.cn; 周忠良, 男, 副教授; E-mail: zlzhou@bio.ecnu.edu.cn