比格犬蠕形螨病的診療與病理組織學(xué)觀察

溫福利，徐洪齊，熊愛蘭，馬 雷，張詩蘭，鄭和平*

(1.南京軍區(qū)福州總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科，福州 350025；2.福州動物緣寵物醫(yī)院，福州 35001)

比格犬蠕形螨病的診療與病理組織學(xué)觀察

溫福利1，徐洪齊2，熊愛蘭2，馬 雷1，張詩蘭1，鄭和平1*

(1.南京軍區(qū)福州總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科，福州 350025；2.福州動物緣寵物醫(yī)院，福州 35001)

目的 對感染蠕形螨的比格犬進行診療及病理組織學(xué)觀察。方法 直接涂片法進行顯微鏡檢查，常規(guī)石蠟切片及HE染色后進行病理組織學(xué)觀察。結(jié)果 (1) 臨床觀察：患病犬四肢、眼周、下腹部等部位皮膚出現(xiàn)紅點，患部脫毛，四肢皮膚變厚起皺褶；(2) 血液常規(guī)檢查：基本正常；(3) 顯微鏡觀察：發(fā)現(xiàn)大量犬蠕形螨小型蟲體和蟲卵；(4) 病理組織學(xué)觀察：毛囊內(nèi)見大量犬蠕形螨蟲體和蟲卵，皮脂腺和汗腺結(jié)構(gòu)正常，均未見螨體寄生。毛囊周圍見大量嗜酸性粒細胞和嗜中性粒細胞浸潤，同時可見多灶性肉芽腫形成，肉芽腫呈橢圓形；(5) 治療方案：采用聯(lián)合用藥進行治療，加強環(huán)境控制，療效顯著。結(jié)論 犬蠕形螨引起的肉芽腫可劃分為免疫性肉芽腫；小型蟲體感染后可能不會破壞皮脂腺，皮脂腺是否感染蟲體可能與蟲體種類或感染病程相關(guān)。

犬蠕形螨；皮脂腺；肉芽腫

犬蠕形螨病(Demodicosis canis)是由犬蠕形螨(Demodexcanis)引起的一種常見寄生蟲病[1]。該病寄生位置的描述通常是毛囊或皮脂腺，關(guān)于蟲體種類與皮脂腺寄生位置的關(guān)系未有定論。目前，國外報道寄生于犬的蠕形螨有3種，在形態(tài)上和宿主的寄生位置上有所不同[2,3]。國內(nèi)調(diào)查發(fā)現(xiàn)犬蠕形螨有大型蟲體和小型蟲體兩種，大型蟲體的報道較多，鮮有關(guān)于小型蟲體的報道。本文對患病比格犬進行鏡檢后發(fā)現(xiàn)大量犬蠕形螨小型蟲體，通過血常規(guī)和病理檢查作進一步分析。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

比格犬10只，雄性，9～11月齡，平均體重為9.43 kg。外購于青島某有資質(zhì)的實驗動物生產(chǎn)單位[SCXK(魯)2012-0003]，出生后犬瘟和六聯(lián)疫苗免疫，有6次體內(nèi)驅(qū)蟲記錄，合格證編號為0016658。飼養(yǎng)于南京軍區(qū)福州總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科普通環(huán)境[SYXK(閩)2013-0005]，并按實驗動物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

辛硫磷澆潑溶液(商品名：除癩靈)，規(guī)格：10 mL:4 g，生產(chǎn)批號：20150801，天津市保靈動物保健品有限公司生產(chǎn)；阿苯達唑伊維菌素預(yù)混劑，規(guī)格：100 g:阿苯達唑6 g+伊維菌素0.25 g，生產(chǎn)批號：20150901，江西雙實藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；伊維菌素注射液(商品名：癬螨凈)，規(guī)格：2 mL:0.02 g，生產(chǎn)批號：20150501，吉林省五星動物保健藥廠生產(chǎn)；PE-6800vet全自動動物血液細胞分析儀，深圳市普康電子有限公司；EG1150H石蠟包埋機，德國徠卡公司；RM2245半自動輪轉(zhuǎn)式切片機，德國徠卡公司；GHP-9080隔水式恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；ST5020多功能染色機，德國徠卡公司；CV5030全自動化玻片蓋片機，德國徠卡公司；DM2000生物顯微鏡，德國徠卡公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 顯微鏡檢查

采用直接涂片法進行檢查。用小刀刮取患部皮膚結(jié)節(jié)或膿汁置于載玻片上，滴加5%甘油后蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察，拍照后測量蟲體長度。

1.3.2 血液常規(guī)檢查和病理組織學(xué)觀察

將1只具犬蠕形螨病典型臨床癥狀的患病犬麻醉后置于手術(shù)臺上，前肢靜脈血管采集血液后接于標(biāo)記的EDTA抗凝管中，對患病犬進行血液常規(guī)檢查。用滅菌手術(shù)刀在患部切取一小塊皮膚(1 cm×1 cm×0.5 cm)，置于10%福爾馬林溶液固定24 h。梯度脫水后二甲苯透明，常規(guī)石臘包埋，切片后進行HE染色，中性樹膠封片后，顯微鏡下觀察。

2 結(jié)果

2.1 臨床觀察

對7只患病犬進行觀察發(fā)現(xiàn)，犬蠕形螨感染早期在四肢及下腹部皮膚出現(xiàn)紅點，隨后蔓延到頸部、眼周、鼻部、嘴唇等部位?；疾烤霈F(xiàn)脫毛、脫屑癥狀，四肢皮膚變厚起皺褶，耳緣可見黑褐色結(jié)痂。雄性犬陰莖口可見黃綠色膿液，奶頭發(fā)白。感染后期病犬的大腿根部、眼周及腹部兩側(cè)皮膚變成灰藍色，患部見較厚結(jié)痂，出現(xiàn)精神沉郁、食欲廢絕、嘔吐清水癥狀。根據(jù)患病犬的臨床癥狀，初步診斷為犬蠕形螨病。

2.2 血液常規(guī)檢查

檢查結(jié)果提示患病犬基本正常，RBC、HCT、RDW-SD三項指標(biāo)偏低，MCH、MCHC、 PLT三項指標(biāo)偏高，WBC、GRAN%、GRAN# 三項指標(biāo)處于參考臨界值內(nèi)的高位，其余檢測指標(biāo)均在參考值范圍內(nèi)(見表1)。

2.3 實驗室鏡檢結(jié)果

犬蠕形螨的蟲體較小，借助于顯微鏡及其計算機輔助系統(tǒng)對蟲體和蟲卵形態(tài)特征進行觀察鑒定(Leica DM2000, LAS V4.0)。鏡下見大量的犬蠕形螨蟲體和蟲卵，成蟲平均大小為162.43 μm×27.21 μm，鑒定為小型蟲體。蟲體和蟲卵呈乳白色半透明，幼蟲有3對足，若蟲可見4對足，外形與成蟲相似，體形較小。成蟲外型上分為顎體、足體、末體3各部分，咽呈向后開口的馬蹄鐵狀(見圖1)。

2.4 病理組織學(xué)觀察

HE染色切片中，毛囊內(nèi)可見大量被切成縱、橫等不同斷面的犬蠕形螨蟲體和蟲卵。皮脂腺和汗腺結(jié)構(gòu)正常，均未見螨體寄生。毛囊周圍見大量嗜酸性粒細胞和嗜中性粒細胞浸潤。聚集的中性細胞核呈桿狀或2～5分葉狀，胞質(zhì)粉紅色，有顆粒。嗜酸性粒細胞核的形狀與嗜中性粒細胞相似，有2～3葉，呈眼鏡狀，深紫色。切片鏡下見多灶性肉芽腫，呈橢圓形，中央呈凝固性壞死，巨噬細胞及上皮樣細胞聚集，大多在活蟲入侵的毛囊周圍形成(見圖2)。

表1 患病犬血常規(guī)檢測結(jié)果

3 討論

3.1 犬蠕形螨種類與皮脂腺寄生蟲體之間的關(guān)系

目前，國內(nèi)調(diào)查發(fā)現(xiàn)犬蠕形螨有大型蟲體和小型蟲體兩種，大型蟲體的報道較多，鮮有關(guān)于小型蟲體的報道。大型蟲體平均大小為222.75 μm×44.55 μm，小型蟲體平均大小為168.17 μm×39.60 μm[4]。李鼎等[5]對犬蠕形螨感染后的皮膚病理結(jié)構(gòu)觀察后發(fā)現(xiàn)，在毛囊中檢查到蟲體時，在皮脂腺中幾乎都發(fā)現(xiàn)了蟲體或蟲卵，但未對蟲體大小進行測量。李嘉榮等[6]用犬蠕形螨蟲體接種于比格犬，90 d后毛囊可見犬蠕形螨明顯增多，皮脂腺未見到被破壞偶見有輕度增生，蟲體大小也未說明。孫維平等[7]，犬蠕形螨主要寄生在發(fā)病皮膚毛囊的上部，不久后能夠轉(zhuǎn)入底部，很少寄生于皮脂腺內(nèi)。本研究對患病犬鏡檢后發(fā)現(xiàn)，毛囊里的犬蠕形螨均為小型蟲體，皮脂腺未見任何蟲體和蟲卵。國外報道寄生于犬的蠕形螨有3種(De.cani，D.cornei，D.injai)，除了形態(tài)上的不同外，De.cani，D.cornei和D.injai分別寄生于宿主的毛囊、表皮和皮脂腺[2]。綜上所述，小型蟲體感染后可能不會破壞皮脂腺，皮脂腺是否感染蟲體可能與蟲體種類或感染病程相關(guān)，有待進一步研究。

3.2 嗜酸性粒細胞在抗犬蠕形螨感染中的作用

血常規(guī)結(jié)果可見，白細胞總數(shù)、粒細胞和粒細胞比率均在正常值范圍內(nèi)的偏高位，與病理組織切片中嗜酸性粒細胞、嗜中性粒細胞增多相符合。嗜酸性粒細胞是寄生蟲臨床診斷的重要指標(biāo)。寄生蟲感染后常伴有嗜酸性粒細胞的增多，犬蠕形螨也不例外?；疾∪畽C體內(nèi)產(chǎn)生的各種趨化因子讓嗜酸性粒細胞在感染部位聚集，并釋放過氧酶等物質(zhì)，從而對犬蠕形螨具有殺傷活性[8]。毛囊內(nèi)大量的蠕形螨蟲體和蟲體碎片以及毛囊破壞后繼發(fā)的細菌感染是導(dǎo)致嗜中性粒細胞增多的主要原因。嗜中性粒細胞在吞噬蟲體碎片及殺死細菌過程中引起化膿反應(yīng)，對犬蠕形螨蟲體的破壞和宿主的保護具有重要作用。

注：(A)蟲卵 54.60 μm×19.30 μm;(B)幼蟲 70.08 μm×19.37 μm;(C)若蟲118.13 μm×26.42 μm;(D)成蟲 160.19 μm×25.11 μm。圖1 顯微鏡檢查結(jié)果(×400)Note.(A)Egg 54.60 μm×19.30 μm.(B)Larva 70.08 μm×19.37 μm.(C)Nymph 118.13μm×26.42μm.(D)Adult 160.19μm×25.11μm.Fig.1 The result of microscope observation

注：(A)正常毛囊結(jié)構(gòu)(HE×100)；(B)犬蠕形螨侵入毛囊(HE×40)；(C)毛囊周圍見多灶性肉芽腫形成(HE×200)；(D)毛囊內(nèi)見大量犬蠕形螨蟲體和蟲卵，皮脂腺和汗腺未見螨體(HE×200)。.(E)毛囊內(nèi)見大量犬蠕形螨蟲體和蟲卵(HE×200)；(F)毛囊周圍見大量嗜酸性粒細胞和嗜中性粒細胞(HE×40)；▲1為犬蠕形螨;▲2為皮脂腺;▲3為汗腺;E圖和F圖右上角為圖中方框放大圖(HE×400)。圖2 顯微病理組織學(xué)檢查結(jié)果Note.(A)The structure of normal hair follicle(HE×100).(B)The Demodex mites invades the hair follicle(HE×40).(C)Multifocal granuloma formation was observed around the hair follicles(HE×200).(D)A large number of Demodex mites and eggs was showed in Hair follicles,the sebaceous glands and sweat glands no mites was found(HE×200).(E)Hair follicles showed a large number of dog Demodex mites and eggs(HE×200).(F)A large number of eosinophils and neutrophils were seen around the hair follicles(HE×40).(▲1) demodex canis.(▲2) the sebaceous glands.(▲3) the sweat gland.The diagram of the upper right corner of E and F figure are the enlargement in the box(HE×400).Fig.2 The result of histopathological observation

3.3 犬蠕形螨引起肉芽腫種類的劃分

病理組織切片可見犬蠕形螨引起的多灶性肉芽腫。按照warren(1976)對寄生蟲性肉芽腫的分類，可分為免疫性肉芽腫、非特異炎癥性肉芽腫及原因不明(包括未研究)的肉芽腫三類。嗜酸性粒細胞在螨蟲感染的早期可形成嗜酸性膿腫[8]，嗜酸性粒細胞趨化因子(ECF)在蠕蟲的免疫反應(yīng)中具有重要作用[9]，犬蠕形螨引起的肉芽腫可劃分為免疫性肉芽腫。鏡下觀察病理切片可見毛囊周圍的肉芽腫呈橢圓形，可能是患病犬抵抗蠕形螨或細菌而形成的慢性炎癥。

3.4 聯(lián)合用藥對防治蠕形螨的意義

患病犬感染較為嚴(yán)重，個別犬出現(xiàn)細菌性繼發(fā)感染，故采用聯(lián)合用藥進行治療。辛硫磷澆潑溶液用于體表驅(qū)蟲，對蟲體具有強觸殺和胃毒作用。伊維菌素可通過抑制神經(jīng)遞質(zhì)γ氨基丁酸的釋放來阻斷神經(jīng)信號傳導(dǎo)，從而使蟲體麻痹、死亡。阿苯達唑為高效低毒的廣譜驅(qū)蟲藥，其與蠕蟲體內(nèi)的微管蛋白結(jié)合，從而影響蠕蟲體內(nèi)的有絲分裂、蛋白裝配及能量代謝，導(dǎo)致蟲體無法存活和繁殖[10]。伊維菌素和辛硫磷澆潑溶液對蠕形螨蟲體雖然有良好的驅(qū)殺作用，但卻不能殺滅蟲卵，配合阿苯達唑和抗生素輔助治療不僅對蟲體和蟲卵可以抑制細菌繁殖和控制局部炎癥的發(fā)展[11]。

患病犬體表用溫肥皂水擦洗，去除結(jié)痂和脫落的皮屑，然后用辛硫磷澆潑溶液(規(guī)格用量：每支10 mL:4 g，加溫水3 Kg)進行體表驅(qū)蟲和外環(huán)境蟲體的殺滅，間隔3～5 d用一次，直到患病犬康復(fù)。飼料中添加阿苯達唑伊維菌素預(yù)混劑(規(guī)格用量：每包100 g:阿苯達唑6 g+伊維菌素0.25 g，100 kg犬糧添加100 g)，連用7 d，間隔一星期后酌情重復(fù)給藥；氨芐西林7 mg/kg，地塞米松10 mg/kg，vitC 20 mg/kg，肌肉注射，每天1次，連用7 d。對個別患病嚴(yán)重的比格犬肌注伊維菌素注射液(規(guī)格用量：每支2 mL:0.02 g，每1 kg體重0.02 mL)。圈舍定期打開通風(fēng)，保持地板干燥，空調(diào)設(shè)置除濕模式進行干燥除濕。通過采取上述治療方法與防治策略，犬蠕形螨病的臨床癥狀逐漸消失，再次鏡檢未發(fā)現(xiàn)蟲體和蟲卵，驅(qū)蟲效果非常明顯。

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Treatment and pathological observation ofdemodexcanisin beagle dogs

WEN Fu-li1, XU Hong-qi2, Xiong Ai-lan2, MA Lei1, ZHANG Shi-lan1, ZHENG He-ping1*

(1. Department of Comparative Medicine, Fuzhou General Hospital of Nanjing Command, PLA, Fuzhou 350025, China; 2.Fuzhou Animal Fate Pet Hospital, Fuzhou 350025, China)

Objective Treatment and histopathological observation ofdemodexcanisin beagle dogs. Methods Using the method of direct smear for microscopic examination ofdemodexcanis. Histopathological observation on the skin of the parasitic parts after routine paraffin section and HE staining. Results (1) Clinical observation: The red spots and hair removal was appeared on limbs, eyes, lower abdomen and other parts of the skin of canine patients.The skin of the limbs becomes thicker and wrinkles. (2) Blood routine examination: Basically normal. (3) Microscope observation: The results showed that a large number of worms and eggs of smalldemodexcaniscould be found. (4) Histopathological observation: Hair follicles showed a large number ofdemodexmitesandeggs. The sebaceous glands and sweat glands have normal morphology and no mites was found. A large number of eosinophils and neutrophil infiltration were seen around the hair follicles. It was also found that the formation of multifocal granuloma: the granuloma was oval shaped. (5) Treatment programme: The combination of medication and the strengthening of environmental control has been shown to be effective. Conclusions Granuloma caused bydemodexcaniscan be divided into immune granuloma.It may not be possible to destroy the sebaceous glands after infection with smalldemodexcanis.Whether the sebaceous gland is infected with thedemodexcanismay be associated with the worm species or course of disease.

Demodexcanis; Sebaceous glands; Granuloma

福建省科技計劃引導(dǎo)性項目(2015Y0075)；南京軍區(qū)福州總醫(yī)院臨床應(yīng)用研究專項(2015L01)。

溫福利(1987-)，男，技師，專業(yè)：實驗動物寄生蟲研究。E-mail：wen_fuli@163.com

鄭和平(1962-)，男，教授，主任醫(yī)師，研究方向：實驗動物與比較醫(yī)學(xué)。E-mail：zhpfz@163.com

研究報告

R-332

A

1671-7856(2017) 01-0027-05

10.3969.j.issn.1671-7856.2017.01.006

2016-06-15