拔罐療法干預(yù)寒凝血瘀證家兔模型細(xì)胞因子的實驗研究*

朱成慧,孟向文,劉華朋,李丹丹,樸盛愛,林為棟,郭 義

(1.天津市濱海新區(qū)大沽街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，天津 300450;2.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 300193;3.煙臺華夏醫(yī)院，山東 煙臺 264003)

拔罐療法干預(yù)寒凝血瘀證家兔模型細(xì)胞因子的實驗研究*

朱成慧1,孟向文2△,劉華朋2,李丹丹2,樸盛愛3,林為棟2,郭 義2

(1.天津市濱海新區(qū)大沽街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，天津 300450;2.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 300193;3.煙臺華夏醫(yī)院，山東 煙臺 264003)

目的：從外周血細(xì)胞因子角度探索拔罐療法的作用機制。方法：采用冰冷刺激的方法復(fù)制寒凝血瘀家兔模型，將12只家兔按體重隨機分為空白組、模型組和治療組，治療組運用經(jīng)絡(luò)罐通儀進行拔罐干預(yù)，測定外周血細(xì)胞因子中的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、表皮生長因子(EGF)含量。結(jié)果：造模后，模型組和治療組家兔逐漸出現(xiàn)寒凝血瘀體征；拔罐治療后，治療組家兔寒凝血瘀體征逐漸消失，治療組家兔拔罐后外周血表皮細(xì)胞生長因子(EGF)含量與同時間段空白組、模型組相比明顯升高，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論：采用冰冷刺激的方法可以成功復(fù)制寒凝血瘀家兔模型,拔罐療法通過對局部皮膚良性物理刺激產(chǎn)生通絡(luò)效應(yīng)。

拔罐療法；寒凝血瘀證；動物模型；通絡(luò)效應(yīng)

拔罐療法作為中醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)治療自然療法，歷史悠久，臨床廣泛應(yīng)用于寒凝血瘀證。近年來寒凝血瘀證的臨床和實驗研究得到了廣泛關(guān)注，其中動物實驗研究是探索寒凝血瘀證機理的一個主要途徑。本研究擬采用冰冷刺激的方法復(fù)制寒凝血瘀家兔模型，并從外周血細(xì)胞因子角度探索拔罐療法的作用機制，為寒凝血瘀證的進一步研究提供思路和方法。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及儀器

1.1.1 實驗動物 中國實驗用家兔12只，體質(zhì)量(2±0.2)kg，清潔級，雌雄不拘。

1.1.2 實驗儀器 經(jīng)絡(luò)罐通儀JLG-2A(北京海奧思凱科技發(fā)展有限公司)，低溫高速離心機，家兔固定器，常規(guī)手術(shù)器械，寵物剪，真空注射器，采血管。

1.2 分組

家兔適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將12只家兔按體重隨機分為:①空白對照組(簡稱空白組);②寒凝血瘀模型組(簡稱模型組);③拔罐治療組(簡稱治療組)。每組4只。

1.3 動物模型制備

擬采用冰冷刺激的方法復(fù)制寒凝血瘀家兔模型。具體方法如下：對動物分組完畢，將清醒狀態(tài)下的家兔置于兔板上俯臥位固定，后背暴露在外，用寵物剪將12只家兔后背大椎與至陽之間約5 cm×7 cm范圍區(qū)間剃毛，將模型組、治療組家兔固定在兔板上，在大椎穴(《國家標(biāo)準(zhǔn)腧穴名稱與定位GB/T12346-2006》)上固定冰袋1 h，連續(xù)10日，3組進行平衡實驗，空白組同法固定，不進行任何干預(yù)。

1.4 拔罐選穴與方法

治療取穴為大椎穴：以常用實驗動物穴位定位圖譜為依據(jù)(郭義主編《實驗針灸學(xué)》2008年中國中醫(yī)藥出版社出版)，并參照《腧穴名稱與定位》(GB/T12346-2006)和中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會編寫的《中國獸醫(yī)針灸學(xué)》(農(nóng)業(yè)出版社，1984)，結(jié)合比較解剖學(xué)和骨度分寸法為依據(jù)進行動物穴位模擬定位。拔罐方法:造模成功后第2日起，每日同一時間將拔罐組家兔固定在兔板上，采用罐壓為-0.03Mpa分別在家兔后背督脈大椎穴、大椎下依次拔3個罐，時間為10 min，連續(xù)7日?？瞻捉M和模型組動物同法固定，不進行拔罐療法治療。

1.5 觀測指標(biāo)

體征觀察：觀察實驗中家兔精神活動狀況、飲食及飲水量、二便、皮毛、鼻的燥濕及死亡情況。取血分別在造模前、造模后和拔罐后7日對空白組、模型組、治療組家兔進行晨間空腹耳緣動脈采血。測定家兔外周血細(xì)胞因子血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、表皮生長因子(EGF)含量變化。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析

2 觀測結(jié)果

造模后，家兔出現(xiàn)精神萎靡不振、反應(yīng)遲鈍、被毛粗亂無光、攝食減少、飲水增多、大便稀爛有異味、小便量多等寒凝血瘀證體征；結(jié)合課題組前期實驗表明造模后家兔還會出現(xiàn)血液粘度和纖維蛋白原升高，寒凝血瘀模型復(fù)制成功。拔罐治療后寒凝血瘀證體征逐漸消失。

拔罐療法對寒凝血瘀模型家兔血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和表皮生長因子(EGF)含量的影響見表1、表2及圖1、圖2。

表1 家兔造模前后及治療后血清中VEGF含量的變化

圖1 家兔造模前后及治療后血清中VEGF含量的變化(ng/L)

圖2 家兔造模前后及治療后血清中EGF含量的變化(ng/L)

組別n造模前造模后拔罐7日空白組417．34±4．9715．64±2．4114．82±1．07#模型組421．89±8．0315．43±2．7215．48±2．30#治療組415．59±4．3719．35±4．3422．87±6．74

注：與治療組比較，#P<0.05

由表1、2及圖1、2可見，造模前，空白組、模型組及治療組家兔的血清VEGF和EGF含量無統(tǒng)計學(xué)差異，各組間具有可比性(P>0.05)，造模后，模型組血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量降低，7日后，模型組血管內(nèi)皮生長因子含量稍回升，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，治療組在造模后和治療后有逐漸上升趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；治療組治療后家兔拔罐后血清中EGF含量與同時間段空白組、模型組相比明顯升高，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，表明拔罐療法干預(yù)治療后，顯著提高血清中EGF的含量，其它各組造模前后、拔罐療法治療后血清中EGF含量變化均無顯著意義。

3 討論

拔罐療法操作簡單方便、效果顯著，楊金生等[1]把拔罐的功能總結(jié)為以下方面：抵抗外邪，保衛(wèi)機體；活血化瘀，疏通經(jīng)絡(luò)；調(diào)整氣血，平衡陰陽；反映病候，協(xié)助診斷。王富春[2]提出拔罐療法在機體自我調(diào)整中產(chǎn)生行氣活血、舒筋通絡(luò)、消腫止痛、祛風(fēng)除濕等功效，起到一種良性刺激，有促使機體恢復(fù)正常功能的作用。孟祥燕[3]檢索整理了古今文獻的適宜病癥和優(yōu)勢病癥，發(fā)現(xiàn)內(nèi)外婦兒都有其適應(yīng)病證，其中寒凝血瘀證為拔罐療法主要適應(yīng)證之一。本實驗參考谷萬里等[4]在寒凝血瘀證動物模型的研究述評中綜述的近10年關(guān)于寒凝血瘀動物模型的報道，結(jié)合張棟等[5]提出的中醫(yī)證的動物模型復(fù)制應(yīng)以中醫(yī)理論為核心、以辨證論治為基礎(chǔ)、臟腑理論為依據(jù)、病因病機為準(zhǔn)則和王永炎院士提出的“證候表征模型”概念，田金洲等[6]提出證候模型研究設(shè)計應(yīng)該遵循“因，脈，證，治”的思路。故本研究采用的局部冷刺激法更加注重中醫(yī)證候特點，對造模方法和實驗指標(biāo)進行了優(yōu)化，認(rèn)為中醫(yī)證候研究不應(yīng)局限于指標(biāo)的改變，更應(yīng)注重的是指標(biāo)的生物學(xué)意義。

據(jù)Lantieri等[7]利用免疫學(xué)方法首次證明，人的擴張皮膚中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)的表達明顯增強。表皮生長因子(EGF)是一種強力的有絲分裂原，能刺激表皮細(xì)胞的增殖、分化和遷移，可以調(diào)節(jié)人體皮膚的新陳代謝[8]。本實驗研究結(jié)果表明拔罐療法對局部皮膚產(chǎn)生良性物理刺激，通過影響細(xì)胞因子等表達產(chǎn)生持續(xù)弱刺激，擴張和改善微血管，形成級聯(lián)反應(yīng)，進而影響整體微循環(huán)，推斷這可能是拔罐療法產(chǎn)生“通絡(luò)”效應(yīng)的機理之一。拔罐療法的機理研究處于初步探索階段，應(yīng)進一步擴大樣本量進行寒凝血瘀證模型相關(guān)指標(biāo)的檢測，并對拔罐療法干預(yù)局部組織運用免疫組化的方法進行分子生物學(xué)機制研究，從拔罐療法局部的生物學(xué)基礎(chǔ)研究到整體的通絡(luò)機制實驗研究，實現(xiàn)從小網(wǎng)絡(luò)帶動大網(wǎng)絡(luò)的擴展。

[1] 楊金生,王敬.拔罐療法的治病機理探討[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,1996,2(6):39-40

[2] 王富春.刺法灸法學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2009:87

[3] 孟祥燕.拔罐療法治療優(yōu)勢病癥的文獻研究[D].濟南：山東中醫(yī)藥大學(xué),2011:30-31

[4] 谷萬里,張俏,史載祥,等.寒凝血瘀證動物模型的研究述評[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2007,14(6):89-91

[5] 張棟,孫靜.中醫(yī)證候動物模型復(fù)制方法的研究[J].吉林中醫(yī)藥,2009,29(8):655-657

[6] 田金洲,王永炎,時晶,等．證候模型研究的思路[J]．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2005，28(6):18-21

[7] Lantieri LA,Garcia NM,Wechsler J,et al.Vascular endothelial growth factor expression in expanded tissue：a possible mechanism of angiogenesis in tissue expansion[J].Plast Reconstr Surg,1998,101：392-298

[8] 趙宏,劉昱輝.人表皮細(xì)胞生長因子及其研究進展[J].生物技術(shù)進展,2011(2)：122-129

國家自然科學(xué)基金資助項目,編號：81273673。

朱成慧(1986-)，女，住院醫(yī)師，主要從事針灸推拿研究工作。

△通訊作者：孟向文(1968-)，女，副教授，碩士研究生導(dǎo)師,研究方向：經(jīng)絡(luò)腧穴學(xué)、刺絡(luò)拔罐療法。

R244.3

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1005-0779(2017)02-0058-03

2016-07-15