復(fù)方柴金解郁片抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究

韓遠(yuǎn)山,藺曉源,邵樂,楊蕙,王宇紅*,杜青，孟盼

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410007；2.湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南長(zhǎng)沙410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410208）

復(fù)方柴金解郁片抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究

韓遠(yuǎn)山1,藺曉源1,邵樂1,楊蕙1,王宇紅2，3*,杜青2,3，孟盼2

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410007；2.湖南省中藥粉體與創(chuàng)新藥物省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，湖南長(zhǎng)沙410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410208）

目的初步探討復(fù)方柴金解郁片的抗抑郁作用。方法建立兩種小鼠抑郁模型，即小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)復(fù)制應(yīng)激行為絕望抑郁模型，五羥色胺酸和利血平誘導(dǎo)藥物所致抑郁模型；檢測(cè)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間，五羥色胺酸誘導(dǎo)的抑郁小鼠甩頭次數(shù)，利血平誘導(dǎo)的抑郁小鼠體溫、眼瞼閉合、運(yùn)動(dòng)不能差異程度。結(jié)果小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，復(fù)方柴金解郁片2倍或（1倍）劑量組不動(dòng)時(shí)間明顯減少（P＜0.05）。在五羥色胺酸誘導(dǎo)的小鼠甩頭實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，復(fù)方柴金解郁片2倍劑量組甩頭次數(shù)明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）。在利血平誘導(dǎo)的小鼠抑郁實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠眼瞼不能睜開1/2和運(yùn)動(dòng)不能動(dòng)物數(shù)明顯增加，1 h后及4 h后其余各組小鼠體溫均有所下降(P＜0.01或P＜0.05)；與模型組比較，復(fù)方柴金解郁片2倍或1倍劑量組小鼠眼瞼不能睜開1/2和運(yùn)動(dòng)不能動(dòng)物數(shù)明顯減少，藥后1 h及4 h小鼠體溫明顯上升(P＜0.01或P＜0.05)。結(jié)論復(fù)方柴金解郁片對(duì)各種小鼠抑郁模型都有明顯的抗抑郁作用。

復(fù)方柴金解郁片；抗抑郁；強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)；懸尾實(shí)驗(yàn)；五羥色胺酸誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)；利血平誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)

本文引用：韓遠(yuǎn)山,藺曉源,邵樂,楊蕙,王宇紅,杜青，孟盼.復(fù)方柴金解郁片抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（1）：18-21.

抑郁癥是一種危害全人類身心健康的常見情感障礙疾病，具有高發(fā)病、高復(fù)發(fā)、高自殺、高醫(yī)療成本的特點(diǎn)[1]。藥物是治療抑郁癥的主要手段，但目前抗抑郁西藥存在抗抑郁譜窄、毒副作用大、易復(fù)發(fā)、依賴性高及價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)[2]。抑郁癥在中醫(yī)學(xué)屬于郁證的范疇。中醫(yī)治療郁癥立足整體，辨證論治，可對(duì)其進(jìn)行多環(huán)節(jié)、多途徑、多靶點(diǎn)的調(diào)節(jié)，具有毒副作用小[3]、療效持久的優(yōu)勢(shì)，抗抑郁中藥或天然藥物的研究已逐漸成為全球研究熱點(diǎn)。本課題根據(jù)郁證“瘀、郁”的中醫(yī)病機(jī)特點(diǎn)，以“疏肝理氣、活血解郁”為治則立方藥“復(fù)方柴金解郁片”（專利授權(quán)號(hào)為ZL201210126887.X）臨床治療抑郁癥療效獨(dú)特。為了進(jìn)一步明確其作用，本實(shí)驗(yàn)采用應(yīng)激絕望行為、藥物相互作用兩種抑郁動(dòng)物模型，觀察了復(fù)方柴金解郁片對(duì)實(shí)驗(yàn)性抑郁動(dòng)物模型的防治作用。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

ICR小鼠，SPF級(jí)，雄性，體質(zhì)量18～22g，320只。由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)為43004700003437，許可證號(hào)：SCXK (湘)2011-0003。

1.2 藥品及試劑

復(fù)方柴金解郁片浸膏粉，相當(dāng)生藥量為6.6 g生藥/g（文中均按生藥量計(jì)算），由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科提供，批號(hào)為20121025，該藥物臨床擬用成人每日生藥量為20.5 g。百憂解（鹽酸氟西汀分散片，規(guī)格20 mg/片，Patheon France生產(chǎn)，批號(hào)2860A、2087A），臨床用量20～60 mg/d。利血平注射液(規(guī)格1 mg/mL，廣東邦民制藥廠有限公司，批號(hào)120304)。五羥色胺酸、帕吉林均由sigma公司進(jìn)口分裝。

1.3 主要儀器

AY-120電子分析天平，日本島津；DJ-10002電子天平，福州華志科學(xué)儀器有限公司；ZZ-6小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀，成都泰盟科技技術(shù)有限公司；動(dòng)物行為活動(dòng)記錄系統(tǒng)，成都泰盟科技技術(shù)有限公司；小鼠懸尾儀（西班牙Panlab）。

2 方法

2.1 分組及給藥

SPF級(jí)ICR小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組：強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)組（n=50）、懸尾實(shí)驗(yàn)組（n=50）、五羥色胺酸誘導(dǎo)組（n=100）、利血平誘導(dǎo)組（n=120），其中，前三組每組再隨機(jī)分為5組（n= 10或20）：空白對(duì)照組、陽性藥（百憂解14 mg/kg）組，復(fù)方柴金解郁片2、1、0.5倍劑量（4.0、2.0、1.0 g/ kg)組。利血平誘導(dǎo)組再隨機(jī)分為6組（n=10）：空白對(duì)照組、模型組、陽性藥（百憂解14 mg/kg）組、復(fù)方柴金解郁片2、1、0.5倍劑量組（4.0、2.0、1.0 g/kg)，灌胃給藥體積20 mL/kg，每日1次，連續(xù)給藥21 d?？瞻讓?duì)照組給予純凈水。

2.2 小鼠應(yīng)激行為絕望模型的建立[4]

2.2.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)組于末次給藥1 h后，將小鼠放入動(dòng)物行為活動(dòng)記錄系統(tǒng)的高25 cm、直徑10 cm、水深10 cm、水溫24℃的水缸中，共觀察6 min，適應(yīng)2 min，記錄后4 min內(nèi)累計(jì)不動(dòng)時(shí)間（s）（不動(dòng)即小鼠停止掙扎或小鼠呈漂浮狀態(tài)，小鼠四肢有輕微動(dòng)作以保持頭部在水面）。

2.2.2 懸尾實(shí)驗(yàn)[5]懸尾實(shí)驗(yàn)組于末次給藥1 h后，放入小鼠懸尾儀中，通過計(jì)算機(jī)顯示小鼠的活動(dòng)曲線，適應(yīng)2 min后，開始觀察并記錄4 min之內(nèi)小鼠的不動(dòng)時(shí)間。

2.3 小鼠藥物誘導(dǎo)抑郁模型的建立[6]

2.3.1 五羥色胺酸誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)五羥色胺酸誘導(dǎo)組小鼠在第21天皮下注射100 mg/kg帕吉林，1 h后灌胃給予藥物或純凈水，45 min后腹腔注射五羥色胺酸，15 min后觀察其甩頭行為，記錄5 min內(nèi)小鼠甩頭次。

2.3.2 利血平誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)利血平誘導(dǎo)組小鼠末次給藥的同時(shí)給予利血平2.0 mg/kg腹腔注射，空白對(duì)照組注射生理鹽水。比較各組小鼠體溫、眼瞼閉合和運(yùn)動(dòng)不能的差異程度。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“±s”表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)比較組間差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 復(fù)方柴金解郁片對(duì)小鼠應(yīng)激行為絕望模型的影響

3.1.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，陽性藥組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯減少（P＜0.01）；復(fù)方柴金解郁片2倍劑量組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間明顯減少（P＜0.05）。結(jié)果見表1。

3.1.2 懸尾實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，陽性藥組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少（P＜0.01）；復(fù)方柴金解郁片2倍和1倍劑量組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間明顯減少（P＜0.05）；復(fù)方柴金解郁片0.5倍劑量組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間未見顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 各組小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，n=10)

表1 各組小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，n=10)

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對(duì)照組陽性藥組復(fù)方柴金解郁片組劑量（g/kg）-0.014 4.0 2.0 1.0 F值P值游泳不動(dòng)時(shí)間（s）104.2±26.1 67.6±26.2** 82.7±21.6* 90.2±28.8 103.6±32.8 10.984 0.004懸尾不動(dòng)時(shí)間（s）118.6±24.7 81.6±27.9** 88.6±24.5* 93.1±29.4* 101.5±33.8 8.930 0.008

3.2 復(fù)方柴金解郁片對(duì)藥物所致的抑郁模型的影響

3.2.1 五羥色胺酸誘導(dǎo)小鼠甩頭實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，陽性藥組、復(fù)方柴金解郁片2倍劑量組小鼠甩頭次數(shù)明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 五羥色胺酸誘導(dǎo)的小鼠甩頭實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，n=20)

表2 五羥色胺酸誘導(dǎo)的小鼠甩頭實(shí)驗(yàn)結(jié)果(±s，n=20)

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別空白對(duì)照組陽性藥組復(fù)方柴金解郁片組劑量（g/kg）-0.014 4.0 2.0 1.0增加率（%）-184 36 20 18 F值P值甩頭次數(shù)（次）7.5±2.6 20.4±6.9** 9.5±3.3* 8.9±2.5 8.6±2.3 64.071 0.000

3.2.2 利血平誘導(dǎo)小鼠抑郁實(shí)驗(yàn)（1）小鼠眼瞼閉合程度檢測(cè)結(jié)果與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠眼瞼不能睜開1/2的動(dòng)物數(shù)量明顯增加(P＜0.01)。與模型組比較，陽性藥組、復(fù)方柴金解郁片2倍和1倍劑量組小鼠眼瞼不能睜開1/2的動(dòng)物數(shù)量明顯減少(P＜0.01或P＜0.05)。結(jié)果見表3。

表3 利血平誘導(dǎo)的抑郁小鼠眼瞼閉合程度檢測(cè)結(jié)果(n=20)

（2）小鼠運(yùn)動(dòng)不能差異程度檢測(cè)結(jié)果，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠運(yùn)動(dòng)不能動(dòng)物數(shù)量增加(P＜0.01)。與模型組比較，陽性藥組小鼠運(yùn)動(dòng)不能動(dòng)物數(shù)量明顯下降(P＜0.01)；復(fù)方柴金解郁片2倍劑量組小鼠運(yùn)動(dòng)不能動(dòng)物數(shù)量下降(P＜0.05)。結(jié)果見表4。

表4 利血平誘導(dǎo)的抑郁小鼠運(yùn)動(dòng)不能差異程度檢測(cè)結(jié)果(n=20)

（3）小鼠體溫變化檢測(cè)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)前各組動(dòng)物的基礎(chǔ)體溫沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。給予利血平后，與空白對(duì)照組比較，1 h后及4 h后其余各組小鼠體溫均有所下降(P＜0.05或P＜0.01)。與模型組比較，藥后1 h及4 h陽性藥組與復(fù)方柴金解郁片2倍和1倍劑量組小鼠體溫明顯上升(P＜0.01或P＜0.05)。結(jié)果見表5。

表5 利血平誘導(dǎo)的抑郁小鼠體溫變化結(jié)果(±s，n=20)

表5 利血平誘導(dǎo)的抑郁小鼠體溫變化結(jié)果(±s，n=20)

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組別劑量（g/kg）體溫（℃）藥前藥后1 h藥后4 h空白對(duì)照組模型組陽性藥組復(fù)方柴金解郁片組--0.014 4.0 2.0 1.0 F值P值38.11±0.64 38.86±0.65 39.01±0.55 38.88±0.44 38.97±0.37 38.90±0.45 0.098 0.756 38.56±0.74 36.97±0.85** 37.45±0.43**##38.01±0.35**##37.78±0.61**#37.74±0.75** 30.281 0.000 36.99±1.45 33.40±2.92** 36.11±1.45*##35.34±2.34**#35.12±2.45**#35.08±2.61** 28.225 0.000

4 討論

21世紀(jì)人類面對(duì)的最大疾患是精神疾病，而抑郁癥是其中的重點(diǎn)，且抑郁癥大規(guī)模爆發(fā)的危險(xiǎn)率為15%～20%[7]。因此，進(jìn)行抑郁癥藥物研究具有重要的應(yīng)用價(jià)值與科學(xué)意義，而抑郁動(dòng)物模型對(duì)抗抑郁藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)又具有至關(guān)重要的作用。小鼠懸尾模型與小鼠強(qiáng)迫游泳模型系經(jīng)典的行為絕望模型，與人類的抑郁癥發(fā)病有相似的病理學(xué)基礎(chǔ)，并具有簡(jiǎn)單、快捷、敏感的特點(diǎn)，對(duì)多種類型的抗抑郁藥敏感，因而常用于抗抑郁藥物篩選[7]。復(fù)方柴金解郁片4.0 g/kg劑量可有效減少小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間；4.0、2.0 g/kg可以有效減少小鼠懸尾不動(dòng)的時(shí)間，說明復(fù)方柴金解郁片對(duì)絕望行為模型小鼠具有明顯的抗抑郁活性，最小起效劑量為2.0g/kg。

藥物相互作用模型包括利血平拮抗模型和5-羥色胺酸增強(qiáng)模型等，利血平是一種囊泡再攝取抑制劑，使遞質(zhì)留在囊泡之外易被單胺氧化酶降解，從而使去甲腎上腺素（NE）、腎上腺素（E）、多巴胺（DA）和5-羥色胺（5-HT）耗竭，使動(dòng)物處理后出現(xiàn)上眼瞼下垂、體溫下降及運(yùn)動(dòng)抑制[9]；5-羥色胺酸（5-HTP)是5-HT的前體物質(zhì)，脫羧后轉(zhuǎn)變?yōu)?-HT對(duì)機(jī)體起作用，使用單胺氧化酶抑制劑帕吉林可抑制5-HT的代謝，再給予抗抑郁藥可使5-HT蓄積，增強(qiáng)其特征性的癥狀——甩頭行為，該類模型常用在作用于5-HT和NE系統(tǒng)的抗抑郁藥物的篩選[10]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，復(fù)方柴金解郁片4.0、2.0 g/kg劑量具有對(duì)抗利血平所致小鼠眼瞼下垂、體溫下降的作用；4.0 g/kg劑量有對(duì)抗利血平所致的小鼠運(yùn)動(dòng)不能的作用；4.0 g/kg劑量能增加五羥色胺酸誘導(dǎo)的小鼠甩頭次數(shù)，說明復(fù)方柴金解郁片對(duì)5-HT和NE系統(tǒng)有一定的改善作用。綜上，復(fù)方柴金解郁片對(duì)藥理相互作用模型動(dòng)物具有明顯的抗抑郁作用，最小起效劑量為2.0g/kg，其作用可能是通過提高5-HT、NE和DA來實(shí)現(xiàn)的。

抑郁癥屬中醫(yī)學(xué)“郁證”的范疇，病始在肝，及于心神，與腦相關(guān)[11]。因情而郁，氣血失調(diào)是其病機(jī)關(guān)鍵。若情志不舒，肝失疏泄，氣機(jī)失調(diào)，氣血運(yùn)行受阻，氣滯血瘀，或肝郁化火，煉津灼血，均致瘀血停積，神明不能內(nèi)守，則情緒焦慮，精神抑郁。心主血脈和神明，為精神之所舍。若肝郁氣滯或肝郁化火，血脈瘀阻，血不養(yǎng)心則心神浮越，精神異常。而腦為元神之府，若氣血失調(diào)，元神失養(yǎng)，神機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)不利，也會(huì)導(dǎo)致抑郁癥狀的產(chǎn)生。因此，郁證之初以肝郁氣滯為主，繼發(fā)血瘀，瘀血停積，則心神不寧；瘀結(jié)于內(nèi)，不得宣泄，上犯清竅，則神明失用。其具有“瘀、郁”的中醫(yī)病機(jī)特點(diǎn)，治宜“疏肝理氣、活血解郁”。

本課題組研發(fā)的復(fù)方柴金解郁片，由柴胡、貫葉金絲桃、姜黃、紫蘇、芍藥、知母組成，方中柴胡疏肝解郁為君；貫葉金絲桃疏肝解郁，取散諸結(jié)之意，姜黃活血化瘀行氣，主血瘀氣滯諸證,二者均為臣藥；佐以紫蘇理氣解郁，芍藥養(yǎng)血柔肝，知母滋陰除煩。全方共奏疏肝理氣、活血解郁的作用?！锻鯄?mèng)英醫(yī)案》中有述：“肝主一身之氣，七情之病必由肝起”[12]；林佩琴在《類證治裁》中概括：“七情內(nèi)起之郁，始而傷氣，繼必及血，終乃成勞”[13]；王清任的《醫(yī)林改錯(cuò)》補(bǔ)充了瘀血可導(dǎo)致郁證的發(fā)生[14]。本次研究恰恰通過郁證“瘀、郁”病機(jī)指導(dǎo)下“以法統(tǒng)方”的復(fù)方柴金解郁片實(shí)驗(yàn)研究反證了“疏肝理氣、活血解郁”治法的合理性，同時(shí)也驗(yàn)證了郁證病機(jī)理論“始而傷氣，繼必及血”的科學(xué)內(nèi)涵，具有重要的理論意義，為中醫(yī)藥防治抑郁癥研究提供了新的思路。

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（本文編輯 楊瑛）

Study on Anti-depressant Effect of Compound Chaijin Jieyu Tablet

HAN Yuanshan1,LIN Xiaoyuan1,SHAO Le1,Yang Hui1,WANG Yuhong2,3*,DU Qing2,3,MENG Pan2
(1.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China;2.Training Bases, Hunan Key Laboratory of Chinese Materia Medica Powder and Innovative Drugs Established by Provincial and Ministry, Changsha,Hunan410208,China;3.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China）

ObjectivePreliminary study on the anti-depressant effect of compound Chaijin Jieyu tablet(CJJY).Methods Two kinds of mice models of depression were established,the mice forced swimming test and hanging tail test replication stress behavioral despair models of depression,serotonin acid and reserpine induced drug-induced depression model;detection of mouse forced swimming test and the tail suspension test in the time of immobility,serotonin acid induced depression inmicethenumberofheadtwitches,reserpineinduceddepressionofbodytemperature,eyelidclosure,akinesia difference degree of mice.ResultsCompared with the control group,the immobility time of 4 times and 2 times or(1 times)dose CJJY groups by the forced swimming test and tail suspension test in mice was significantly reduced(P＜0.05). Compared with the control group,the head-twitching number of 4 times and 2 times dose CJJY group,in 5-HT acid induced head twitches test,was significantly increased(P＜0.05 or P＜0.01).In the experiment of depression induced by reserpine,compared with the control group,the number of mice in the model group,which the eyelids were unable to open 1/2 and akinesia,was significantly increased.After 1h and 4 h,the body temperature of the rest mice was decreased(P＜0.01 or P＜0.05).Compared with model group,the number of mice in the CJJY 4 times and 2 times dose groups,which the eyelids were unable to open 1/2 and akinesia.was significantly decreased.After 1h and 4h,the body temperature of the rest mice in each group was increased(P＜0.01 or P＜0.05).ConclusionCJJY shows obvious anti-depression effect on all kinds of depression mouse models.

compound Chaijin Jieyu tablet;anti-depression;forced swimming test;hanging tail test;5-HT acid inducing test;reserpine inducing test

R285.5；R749

A

2016-08-22

國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（81403387）;湖南省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目（2015DK3003）。

韓遠(yuǎn)山，男，在讀碩士研究生，研究方向：中藥神經(jīng)藥理學(xué)。

*王宇紅，女，研究員，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：wyh107@126.com。