胸腹水細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化用于病理診斷的價(jià)值

楊曉林

胸腹水細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化用于病理診斷的價(jià)值

楊曉林

目的 探討胸腹水細(xì)胞塊切片與免疫組化法結(jié)合應(yīng)用在病理診斷中的臨床價(jià)值。方法 將96例胸腹水標(biāo)本以常規(guī)細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片分別結(jié)合免疫組化法進(jìn)行檢測(cè)，HE染色后觀察細(xì)胞形態(tài)，并分別對(duì)多種蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)比兩種診斷方法陽性檢出率及上述種類蛋白表達(dá)陽性率。結(jié)果 常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法檢查陽性檢出率顯著低于細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法檢查（P＜0.05），且前者不確定構(gòu)成比遠(yuǎn)高于后者（P＜0.05）；兩種病理診斷方法在良性病變、惡性間皮瘤檢查中CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、BerEP4、CEA陽性表達(dá)率均普遍較低，而WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin陽性表達(dá)率均較高，但在轉(zhuǎn)移性癌檢查中各種蛋白陽性表達(dá)率規(guī)律與前者剛好相反。結(jié)論 胸腹水細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法在漿膜腔積液病理診斷中能夠明確原發(fā)病類型。

胸腹水標(biāo)本；細(xì)胞塊切片；免疫組化；病理診斷；漿膜腔積液

【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2017.01.043

漿膜腔積液的細(xì)胞病理學(xué)檢查結(jié)果對(duì)鑒別病變的良惡性質(zhì)、明確病變類型、評(píng)估疾病嚴(yán)重程度和臨床分期均具有重要的臨床意義。近年來研究發(fā)現(xiàn)[1]，對(duì)胸腹水標(biāo)本采用細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法行病理學(xué)診斷，能夠有效鑒別區(qū)分原發(fā)性間皮性腫瘤和轉(zhuǎn)移性癌癥。為探討此種診斷方法在胸腹水病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值，本研究特將其診斷陽性率及對(duì)特異性蛋白表達(dá)檢出情況與常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法檢查結(jié)果進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將醫(yī)院2014年5月至2016年1月接診的96例漿膜腔積液患者作為研究對(duì)象，采用穿刺法獲取胸腹水標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)影像學(xué)檢查證實(shí)存在腹腔積液；②可疑原發(fā)性間皮性腫瘤或胸腹腔轉(zhuǎn)移性癌癥者；③均擬定行常規(guī)細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法檢測(cè)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已明確漿膜腔積液病因者；②同時(shí)參與其他研究者；③依從性較差者；④預(yù)期生存時(shí)間≤3個(gè)月者。96例受檢對(duì)象中，男58例，女38例，年齡20～75歲，平均（49±12）歲，均符合醫(yī)院研究倫理?xiàng)l件，且簽署了同意書。

1.2 檢查方法 所有受檢對(duì)象均采用穿刺法獲取胸腹水100 ml作為標(biāo)本，送至病理科后，由3名具有豐富工作經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師對(duì)送檢標(biāo)本同時(shí)采用常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法及細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法行病理診斷。

1.2.1 常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法檢查 參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）[2]相關(guān)步驟和方法完成病理學(xué)診斷。①將新鮮胸腹腔積液標(biāo)本分裝于3～5個(gè)試管中，以每分鐘3000 r轉(zhuǎn)速離心10～15 min，離心半徑為50 cm，取細(xì)胞沉渣制作細(xì)胞涂片，然后行瑞氏染色，并在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和性狀，觀察是否出現(xiàn)細(xì)胞壞死等情況；②免疫組化法檢測(cè)，即對(duì)細(xì)胞角蛋白7（CK7）、上皮細(xì)胞表面糖蛋白（MOC-31）、整合素蛋白αv（CD5）1、甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTF-1）、腫瘤糖蛋白（BerEP4）、癌胚抗原（CEA）、Wilm’s腫瘤基因-1（WT-1）、鈣結(jié)合蛋白（Calretinin）、細(xì)胞角蛋白5/6（CK5/6）、足細(xì)胞結(jié)蛋白（Desmin）敏感蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，每例標(biāo)本均設(shè)置空白對(duì)照和陽性對(duì)照，采用免疫組化（S-P）法進(jìn)行染色，試劑盒與顯色劑均由深圳晶美生物工程有限公司提供，依次加入一抗、磷酸鹽（PBS）緩沖液、二抗、PBS緩沖液后孵育，封閉抗原后行蘇木精-伊紅（HE）染色，然后加入DAB顯色劑，在光學(xué)顯微鏡下觀察含陽性顆粒細(xì)胞構(gòu)成情況。

1.2.2 細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法檢查 ①標(biāo)本處理：參照上述方法離心分離后，取2.5 ml戊二醛加入細(xì)胞沉渣中進(jìn)行固定，并以相同轉(zhuǎn)速再次離心5 min，采用濾紙將濾渣包好并吸干后常規(guī)脫水、石蠟包埋處理，連續(xù)切片，層厚為3～5 μm，行HE染色；②免疫組化法檢測(cè)與結(jié)果判讀均參照常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法檢查方法。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察兩種檢查方法陽性、陰性、不確定檢出情況及構(gòu)成比，并對(duì)陽性檢出率進(jìn)行比較分析。結(jié)果判讀：每張切片隨機(jī)選取5個(gè)不重復(fù)視野觀察細(xì)胞陽性染色情況，將陽性細(xì)胞構(gòu)成比≥10％者記為蛋白表達(dá)陽性，其中CK7、CEA以細(xì)胞漿或細(xì)胞漿和細(xì)胞膜同時(shí)表現(xiàn)出棕黃色為陽性表達(dá)；Calretinin以細(xì)胞核、細(xì)胞膜及細(xì)胞漿同時(shí)表現(xiàn)出棕黃色為陽性表達(dá)；WT-1以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，其余蛋白均以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)。同時(shí)，觀察兩種檢查方法在陽性、陰性及不確定標(biāo)本中分別關(guān)于CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、BerEP4、CEA、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin敏感蛋白的陽性表達(dá)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件行數(shù)據(jù)處理，陽性檢出率以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理學(xué)診斷結(jié)果 常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法檢查陽性檢出率顯著低于細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法，且前者不確定構(gòu)成比遠(yuǎn)高于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩種檢查方法的病理學(xué)診斷結(jié)果[例(％)]

2.2 敏感蛋白表達(dá)情況 由表2可知，常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法在良性病變、惡性間皮瘤、不確定病變檢查中CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、BerEP4、CEA陽性表達(dá)率均普遍較低，而WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin陽性表達(dá)率均較高；而在轉(zhuǎn)移性癌檢查中各種敏感蛋白陽性表達(dá)率規(guī)律與前者剛好相反。細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法在良性病變、惡性間皮瘤檢查中CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、BerEP4、CEA陽性表達(dá)率均普遍較低，而WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin陽性表達(dá)率均較高；而在轉(zhuǎn)移性癌檢查中各種敏感蛋白陽性表達(dá)率規(guī)律也與前者剛好相反。

3 討論

表2 兩種檢查方法蛋白陽性表達(dá)情況[例(％)]

從傳統(tǒng)意義方面來說，細(xì)胞學(xué)涂片檢查是漿膜腔積液檢查的基礎(chǔ)手段，但是該方法靈敏度較低。既往研究報(bào)道[3]，采用胸腹水常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法進(jìn)行病理診斷，其靈敏度僅為50％～78％，使得臨床推廣應(yīng)用受到明顯限制。分析原因?yàn)?，在常?guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法檢測(cè)過程中，轉(zhuǎn)移性癌癥的細(xì)胞學(xué)形態(tài)與漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤相近，且免疫組化法中可能出現(xiàn)掉片現(xiàn)象，再加上染色定位不準(zhǔn)確，很難單純通過細(xì)胞涂片檢查結(jié)合免疫組化法來明確疾病類型[4-5]。

細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法在漿膜腔積液標(biāo)本診斷中應(yīng)用，主要通過二次離心分離處理獲得細(xì)胞沉渣，然后將其進(jìn)行脫水、石蠟包埋、切片后完成免疫組化法檢測(cè)，能夠提高病理診斷的精確度[6-8]。既往研究發(fā)現(xiàn)[9]，通過觀察漿膜腔積液細(xì)胞CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、BerEP4、CEA、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin蛋白表達(dá)情況，可以推測(cè)病變性質(zhì)和類型，在常規(guī)細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化法檢查和細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法病理診斷中均可應(yīng)用。在良惡性間皮性腫瘤中，CK7、MOC-31、CD51、TTF-1、BerEP4、CEA蛋白的陽性表達(dá)率均較低，而WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin蛋白的陽性表達(dá)率均較高，但是在轉(zhuǎn)移性癌中上述蛋白表達(dá)規(guī)律剛好相反，提示可將其作為細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法胸腹水病理診斷的重要參照，以評(píng)估原發(fā)疾病的類型[10]。由此可知，常規(guī)細(xì)胞涂片與細(xì)胞塊切片分別結(jié)合免疫組化法對(duì)于上述相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)規(guī)律基本一致，但是后者表達(dá)效果更為明顯，在漿膜腔積液診斷中應(yīng)用更具優(yōu)勢(shì)。

綜上，細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化法在胸腹水病理診斷中檢出結(jié)果細(xì)致、準(zhǔn)確，且依據(jù)敏感蛋白標(biāo)志物表達(dá)情況對(duì)原發(fā)疾病類型進(jìn)行合理推測(cè)，對(duì)指導(dǎo)臨床治療作用顯著。

[1] 李紅華,劉平,李丹.胸腹水細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化在病理診斷中的應(yīng)用體會(huì)[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2014,12(35):83-84.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(精)[M].3版.東南大學(xué)出版社,2006.

[3] 李中祥.細(xì)胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].河南醫(yī)學(xué)研究,2015,24(4):88-89.

[4] 宋新蘭,付娟娟.惡性胸腹水液基細(xì)胞學(xué)及免疫組化檢查的臨床病理分析[J].新疆醫(yī)學(xué),2015,45(9):1247-1250.

[5] Carleton C,Hoang L,Sah S,et al.A Detailed Immunohistochemical Analysis of a Large Series of Cervical and Vaginal Gastric-type Adenocarcinomas.[J].Am J Surg Pathol,2016,40(5):636-44.

[6] 余衛(wèi)東,蔡育波,劉瓊?cè)?等.細(xì)胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液病理診斷中的應(yīng)用[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生,2014,52(12):127-129.

[7] 唐應(yīng)成,梁利斌,楊瑞仙,等.胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化染色的病理診斷價(jià)值[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,34(15):1568-1571.

[8] 黃金長(zhǎng),張功亮,郭廣秀,等.細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在胸腹水細(xì)胞病理學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(5):489-490.

[9] 譚衛(wèi)峰,劉慶猛,石丹.胸腹水中提高腫瘤細(xì)胞檢出率方法的探討[J].浙江實(shí)用醫(yī)學(xué),2015,20(2):120-122,134.

[10] 魏霖,程焰紅,李顏,等.胸腹水沉渣包埋結(jié)合免疫組化染色在細(xì)胞病理診斷中的應(yīng)用[J].診斷病理學(xué)雜志,2015,22(12):825.

朝陽市中心醫(yī)院，遼寧朝陽 122000