• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HIF—1a、VEGF、MVD在大腸腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

    2017-02-06 17:26:28陳寶英王澤輝官成濃張英王玉洲
    中國(guó)醫(yī)藥科學(xué) 2016年15期
    關(guān)鍵詞:漿膜腸壁大腸

    陳寶英+王澤輝+官成濃+張英+王玉洲

    [摘要]目的探討HIF-1a、VEGF、MVD(用抗CD34抗體標(biāo)記)在大腸腺癌組織中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院經(jīng)病理檢查證實(shí)的手術(shù)切除標(biāo)本或活檢組織中HIF-1a、VEGF、MVD的表達(dá)情況,其中38例大腸腺癌組織、22例大腸腺瘤組織、29例正常大腸組織。結(jié)果HIF-1a、VEGF在大腸腺癌組的陽性表達(dá)率分別為73.7%、65.8%,明顯高于大腸腺瘤組、正常大腸組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。大腸腺癌、大腸腺瘤、正常大腸組織中MVD值分別是(52.36±9.66)、(30.23±5.22)、(21.37±4.755),MVD值在腺癌中明顯高于腺瘤及正常腸組織(P<0.05)。28例HIF-1a呈陽性表達(dá)的大腸腺癌組織MVD值為(53.22±10.15);呈陰性表達(dá)的10例中MVD值為(42.75±10.47),呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.392,P<0.05)。VEGF呈陽性表達(dá)的25例大腸腺癌組織MVD值為(54.54±9.60);呈陰性表達(dá)的10例中MVD值為(42.63±9.80),呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.491,P<0.05)。結(jié)論在大腸腺癌組織中HIF-1a和VEGF的表達(dá)明顯高于大腸腺瘤組織和正常大腸組織,提示HIF-1a和VEGF可能參與大腸腺癌的發(fā)展。MVD值在大腸腺癌中的表達(dá)明顯高于大腸腺瘤組織和正常大腸組織,提示大腸腺癌中血管生成較大腸腺瘤組織和正常大腸組織豐富;MVD值是衡量大腸腺癌發(fā)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。HIF-1a、VEGF的表達(dá)與MVD值在大腸腺癌組織中均呈正相關(guān),提示HIF-1a、VEGF可能與大癌發(fā)展過程中血管生成密切相關(guān)。

    [關(guān)鍵詞]大腸腺癌;HIF-1a;VEGF;MVD

    大腸癌包括結(jié)腸癌和直腸癌,是最常見的消化道惡性腫瘤之一。雖然目前對(duì)大腸癌采用了以手術(shù)切除為主的綜合治療,但其治療效果仍不夠理想,而術(shù)后的局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移則是影響術(shù)后生存率的重要因素。因此,深入研究大腸癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制,從分子水平找到可用于提示大腸癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷的分子標(biāo)志物,既可預(yù)警大腸癌的術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,及早對(duì)可能復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的大腸癌患者進(jìn)行放化療或靶向治療,亦可研究這些因子可否成為腫瘤治療中的新靶點(diǎn),對(duì)提高患者生存率、評(píng)估患者的預(yù)后及臨床治療有現(xiàn)實(shí)的意義。本課題運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)HIF-1a、VEGF、MVD在大腸腺癌的表達(dá)情況,并分析其相關(guān)性,探討它們與大腸腺癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系及在大腸腺癌中與血管生成的關(guān)系,旨在對(duì)大腸腺癌惡性程度的判定、預(yù)后分析及生物學(xué)治療提供有效的理論依據(jù)。

    1資料與方法

    1.1一般資料

    收集廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院經(jīng)病理檢查證實(shí)的手術(shù)切除標(biāo)本或活檢組織,其中大腸腺癌38例;正常大腸組織29例(距腫瘤邊緣>5cm處的正常黏膜);大腸腺瘤組織22例。所有標(biāo)本均經(jīng)40g/L緩沖中性福爾馬林液固定,常規(guī)石蠟包埋,每個(gè)標(biāo)本蠟塊行4μm厚度連續(xù)切片。所有患者手術(shù)前未接受放療、化療,每例有詳細(xì)的臨床資料、手術(shù)記錄。38例大腸腺癌中男21例,女17例;年齡在29~84歲(其中≤60歲20例,>60歲18例,平均年齡59.42歲);直腸癌16例,結(jié)腸癌22例;病理學(xué)分級(jí):高分化5例,中分化25例,低分化8例;大腸腺癌TMN分期根據(jù)2002美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)的分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期:Ⅰ期6例,Ⅱ16期例,Ⅲ期15例,Ⅳ期1例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例,沒有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例。

    1.2實(shí)驗(yàn)方法

    采用鏈菌素抗生物素蛋白一過氧化物酶法(S-P法)檢測(cè)μm、VEGF、CD34蛋白的表達(dá),一抗為兔抗人HIF-1a多克隆抗體(1:50),兔抗人VEGF多克隆抗體(1:50),兔抗人CD34多克隆抗體(1:50),試劑均購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。

    1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

    HIF-1a、VEGF表達(dá)水平采用Fromowitz陽性細(xì)胞半定量分級(jí)法。首先根據(jù)陽性細(xì)胞占整個(gè)腫瘤細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)記分:≤5%記為0分;6%~25%為1分;26%~50%為2分;51%~75%為3分;>75%為4分。再根據(jù)陽性細(xì)胞染色深淺記分,陰性為0分;淡黃色為1分;棕黃色為2分,棕褐色為3分。最后將二者分?jǐn)?shù)相加,0~1分記為(一),2~3分記為(+);4~5分記為(++);6~7分記為(+++),其中(-)~(+)視為陰性,(++)~(+++)視為陽性。

    微血管計(jì)數(shù)參照Weidner的方法:任何與鄰近的微血管、腫瘤細(xì)胞及其它相連組織有明顯分界的被CD34染成棕黃色的內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇均視為一個(gè)血管計(jì)數(shù),首先在低倍鏡(40和100倍)下選取癌視野中微血管最密集的3個(gè)區(qū)域,然后在高倍鏡(400倍)進(jìn)行血管計(jì)數(shù),取其平均值作為該例腫瘤的MVD值,結(jié)果以(x±s)表示。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理在SPSS17.0軟件包上進(jìn)行。計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)、計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)、方差分析,分析HIF-1a、VEGF、MVD在大腸腺癌、正常大腸組織、大腸腺瘤中的表達(dá)水平,以及它們與大腸腺癌的臨床病理因素的相關(guān)性,用spearman等級(jí)相關(guān)分析HIF-1a、VEGF、MVD的相互關(guān)系,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1HIF-1a、VEGF和MVD在各種腸組織中的表達(dá)情況

    2.1.1HIF-1a在各種腸組織中的表達(dá)情況HIF-1a陽性產(chǎn)物呈棕黃色或棕褐色顆粒,主要著色在細(xì)胞核和細(xì)胞漿,以細(xì)胞漿為主,在腫瘤壞死明顯的區(qū)域和腫瘤浸潤(rùn)邊緣的表達(dá)明顯增多。在大腸腺癌、大腸腺瘤和正常大腸組織中均有表達(dá),但表達(dá)程度不一。HIF-1a在大腸腺癌組織、大腸腺瘤組織、正常大腸組織中陽性表達(dá)率分別為:73.7%(28/38)、45.5%(10/22)、13.8%(4/29),在腺癌組織陽性表達(dá)率高于腺瘤組織和正常大腸組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在腺瘤組織與正常大腸組織間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.1.2 VEGF在各種腸組織中的表達(dá)情況VEGF主要表達(dá)在細(xì)胞漿和細(xì)胞膜,以胞漿為主,某些血管內(nèi)皮細(xì)胞也可見表達(dá),呈棕黃色顆粒,大腸腺癌組織、大腸腺瘤組織和正常大腸組織中都有表達(dá),但表達(dá)程度不一,高表達(dá)主要見于大腸腺癌組織。38例大腸腺癌組織中有25例VEGF表達(dá)陽性,占65.8%(25/38),VEGF在大腸腺瘤組織中陽性表達(dá)率為31.8%(7/22)及正常大腸組織中陽性率表達(dá)為10.3%(3/29)。VEGF在腺癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于腺瘤與正常大腸組織(P<0.05),在腺瘤組織與正常大腸組織間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

    2.1.3CD34在各種腸組織中的表達(dá)情況CD34定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上,呈棕黃色顆粒,主要分布于癌間質(zhì)區(qū),在腫瘤周邊區(qū)含量相對(duì)高。在大腸腺癌中CD34標(biāo)記的微血管形態(tài)多呈成熟狀態(tài),管腔大,管壁比較完整,在大腸正常組織中的微血管多為單細(xì)胞形成,管腔小,形狀多不完整。大腸腺癌、大腸腺瘤、正常大腸組織中MVD值分別是(52.36±9.66)、(30.23±5.22)、(21.37±4.755)。MVD值在腺癌中明顯高于腺瘤及正常腸組織(P<0.05),腺瘤組織與正常大腸組織間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

    2.2HIF-1a、VEGF和MVD的表達(dá)與大腸腺癌臨床病理特征的關(guān)系

    2.2.1HIF-1a的表達(dá)與大腸腺癌臨床病理特征的關(guān)系HIF-1a在大腸腺癌中的表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腸壁浸潤(rùn)深度相關(guān),Ⅲ期+Ⅳ期陽性表達(dá)率高于Ⅰ期+Ⅱ期(P<0.05),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組,腫瘤浸潤(rùn)達(dá)漿膜及漿膜外組陽性表達(dá)率高于腫瘤浸潤(rùn)未及漿膜組;HIF-1a表達(dá)與年齡、性別、腫瘤最大直徑、腫瘤部位、病理學(xué)分級(jí)無關(guān)(P>0.05)。見表4。

    2.2.2 VEGF的表達(dá)與大腸腺癌臨床病理特征的關(guān)系VEGF在大腸腺癌中的表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理學(xué)分級(jí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),分期晚VEGF陽性表達(dá)率高,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組,低分化VEGF陽性表達(dá)率高于中分化和高分化組;VEGF表達(dá)與年齡、性別、腫瘤最大直徑、腫瘤部位、腸壁浸潤(rùn)深度無關(guān)(P>0.05)。見表5。

    2.2.3MVD的表達(dá)與大腸腺癌臨床病理特征的關(guān)系MVD值與大腸腺腸癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腸壁浸潤(rùn)深度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),分期晚MVD值高,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組,腫瘤浸潤(rùn)達(dá)漿膜及漿膜外組高于腫瘤浸潤(rùn)未及漿膜組,低分化組高于中分化和高分化組;與年齡、性別、腫瘤最大直徑、腫瘤部位無關(guān)(P>0.05)。見表5。

    2.3大腸腺癌組織中HIF-1a、VEGF和MVD表達(dá)的相互關(guān)系

    28例HIF-1a呈陽性表達(dá)的大腸腺癌組織MVD值為(53.22±10.15);呈陰性表達(dá)的10例中MVD值為(42.75±10.47),呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.392,P<0.05)。VEGF呈陽性表達(dá)的25例大腸腺癌組織MVD值為(54.54±9.60);呈陰性表達(dá)的10例中MVD值為(42.63±9.80),呈正相關(guān)關(guān)系(rs=0.491,P<0.05)。見表6。

    3討論

    本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HIF-1a在大腸腺癌組織中表達(dá)水平為73.7%(28/38)明顯高于大腸腺瘤組織45.5%(10/22)、正常大腸組織13.8%(4/29),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),尤其是在腫瘤壞死明顯的區(qū)域和腫瘤浸潤(rùn)邊緣。這提示HIF-1a的高表達(dá)與大腸腺癌的發(fā)生有相關(guān)性,這與國(guó)內(nèi)外大多數(shù)相關(guān)報(bào)道基本一致。其表達(dá)水平增高可能是因?yàn)槟[瘤組織氧濃度降低,也可能是抑癌基因突變或癌基因激活,從而導(dǎo)致一系列基因的表達(dá)水平增高,使腫瘤細(xì)胞耐受缺氧,促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。另外HIF-1a表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸腺癌HIF-1a的陽性表達(dá)率為93.8%(15/16)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組59.1%(13/22);在腫瘤腸壁浸潤(rùn)達(dá)漿膜或漿膜外組HIF-1a的陽性表達(dá)率為86.2%(25/27)高于腸壁浸潤(rùn)未達(dá)漿膜層組的45.5%(5/11);在大腸腺癌Ⅰ~Ⅱ和Ⅲ~Ⅳ病例中,HIF-1a的陽性表達(dá)率分別是59.1%(13/22)、93.8%(15/16),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示HIF-1a表達(dá)異常與腺癌的淋巴結(jié)形成、腸壁浸潤(rùn)深度及臨床分期有關(guān),而且腫瘤腸壁浸潤(rùn)越深、TNM分期越晚陽性表達(dá)率越高;HIF-1a的表達(dá)與患者性別、年齡、病理學(xué)分級(jí)、腫瘤部位、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。Schindl等對(duì)206例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的乳腺癌標(biāo)本的HIF-1a表達(dá)進(jìn)行免疫組化分析,顯示HIF-1a陽性表達(dá)率為76.2%(157/206),也提示HIF-1a是高度侵襲性疾病的一個(gè)生物標(biāo)志。本研究提示腫瘤細(xì)胞通過增強(qiáng)HIF-1a表達(dá),促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。其可能的機(jī)制為HIF-1a調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá),VEGF進(jìn)而作用于存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的兩種受體VEGFR1和VEGFR2,從而激活了一系列的缺血轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,誘導(dǎo)新生血管的生成,增高毛細(xì)血管通透性,來促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。

    本研究發(fā)現(xiàn)在38例大腸腺癌組織中VEGF的陽性表達(dá)率為65.8%(25/38)明顯高于腺瘤組織31.8%(7/22)和正常大腸組織10.3%(3/29),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示VEGF高表達(dá)可能與大腸腺癌的發(fā)生有一定相關(guān)性。這與國(guó)內(nèi)外相關(guān)報(bào)道基本一致。本實(shí)驗(yàn)還分析了VEGF表達(dá)與大腸腺癌臨床病理學(xué)及其相關(guān)因素的關(guān)系,在大腸腺癌組織中VEGF的表達(dá)與患者性別、年齡、腸壁浸潤(rùn)深度、腫瘤部位、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)。與大腸腺癌的淋巴結(jié)形成、病理學(xué)分級(jí)及臨床分期有關(guān),在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中,VEGF的陽性表達(dá)率分別是50.0%(11/22)、87.5%(14/16);在病理分級(jí)高分化、中分化及低分化組中VEGF的陽性表達(dá)率分別是20.0%(1/5)、68.0%(17/25)、87.5%(7/8);在Ⅰ~Ⅱ組和Ⅲ~Ⅳ組病例中,VEGF的陽性表達(dá)率分別是50.0%(11/22)、87.5%(14/16),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示大腸腺癌組織中VEGF的表達(dá)明顯增高且與腫瘤的侵襲能力密切相關(guān)。VEGF是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性有絲分裂原,能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)溶解、內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增生和管腔形成,能直接刺激新生血管形成;VEGF還能增加血管尤其是微血管的通透性,為血管形成過程中多種細(xì)胞遷移提供一個(gè)纖維網(wǎng)絡(luò),部分腫瘤細(xì)胞也可以穿過血管壁進(jìn)入血管向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,加速了腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移;VEGF亦可上調(diào)或誘導(dǎo)各種血管源因子和抗凋亡因子,促進(jìn)腫瘤血管生成并提高腫瘤細(xì)胞的抗凋亡能力。

    本實(shí)驗(yàn)中,在38例大腸腺癌中,MVD值為52.36±9.66,在22例大腸腺瘤中MVD值為30.23±5.22,而29例大腸正常組織中MVD值為21.37±4.75,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這與其他研究者對(duì)乳腺癌、肺癌、前列腺癌、子宮鱗癌等腫瘤組織MVD檢測(cè)的結(jié)果一致,這說明大腸腺癌組織的血管生成能力明顯增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)還分析了MVD值與大腸腺癌臨床病理學(xué)及其相關(guān)因素的關(guān)系,在大腸腺癌組織中MVD值與患者性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05);而在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中,MVD值分別是(44.97±10.00)、(58.02±7.75);在腫瘤腸壁浸潤(rùn)達(dá)漿膜或漿膜外組MVD值為55.09±9.24高于腸壁浸潤(rùn)未達(dá)漿膜層組的(39.13±6.06);在病理分級(jí)高分化、中分化及低分化組中MVD值分別是(43.12±13.19)、(49.20±8.90)、(59.00±12.47);在Ⅰ~Ⅱ組和Ⅲ~Ⅳ組病例中,MVD值分別是(44.97±10.00)、(58.02±7.75),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MVD值與大腸腺癌的淋巴結(jié)形成、腸壁浸潤(rùn)深度、病理學(xué)分級(jí)及臨床分期有關(guān),可能因?yàn)槟[瘤的快速生長(zhǎng),使其處于相對(duì)缺氧的狀態(tài),促使了大腸腺癌血管新生,維持了腫瘤生長(zhǎng),同時(shí)新生的腫瘤血管又加速了腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。因此說明血管生成在大腸腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用。

    研究已證實(shí)VEGF是刺激腫瘤血管形成最關(guān)鍵的生長(zhǎng)因子,其表達(dá)受許多外部因子調(diào)控,HIF-1a為其中之一,有研究表明HIF-1a可上調(diào)多種血管生成因子的表達(dá)來介導(dǎo)缺氧狀態(tài)下的血管形成反應(yīng),可介導(dǎo)VEGF和其他缺氧反應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄活性。大量的研究證明HIF-1與VEGF存在正相關(guān)關(guān)系,Bos等研究表明在乳腺癌的形成中,HIF-1a的表達(dá)與血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子VEGF的表達(dá)、腫瘤細(xì)胞的高增殖狀態(tài)呈正相關(guān),認(rèn)為HIF-1a可作為乳腺癌患者新的預(yù)后指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)與國(guó)內(nèi)外的研究相一致。

    本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)HIF-1a、VEGF均與MVD值存在正相關(guān)關(guān)系。提示兩種因子均可通過各種的信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)大腸腺癌血管的生成,并與大腸腺癌的發(fā)生、發(fā)展與侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此深入研究HIF-1a可能將為大腸腺癌的放化療及基因治療提供新的靶點(diǎn)。

    猜你喜歡
    漿膜腸壁大腸
    腸壁增厚分層并定量分析對(duì)小腸壞死的診斷價(jià)值
    鵝傳染性漿膜炎的流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)、診斷與防控
    鴨傳染性漿膜炎的臨床特征、實(shí)驗(yàn)室診斷及防治措施
    高頻超聲診斷小兒原發(fā)性小腸淋巴管擴(kuò)張癥
    腹性紫癜所致腸壁改變與腸系膜上動(dòng)脈血流參數(shù)變化超聲觀察
    大腸鏡檢陰性慢性腹瀉與末端回腸病變的關(guān)系分析與探討
    腹部計(jì)算機(jī)斷層掃描提示大腸腸壁增厚的臨床意義
    改良抗酸染色法在結(jié)核性漿膜炎臨床診斷中的價(jià)值
    大口喝水促排便
    大腸俞穴調(diào)理腸胃大腸俞 通絡(luò)調(diào)水止病痛
    中老年健康(2014年7期)2014-05-30 09:01:27
    高清av免费在线| 男女啪啪激烈高潮av片| 最近最新中文字幕大全电影3| 日韩免费高清中文字幕av| 精品一区二区免费观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 丝袜脚勾引网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品国产av在线观看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久久久久久精品精品| 最新中文字幕久久久久| 九九在线视频观看精品| 国产高清三级在线| 国产美女午夜福利| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 中文在线观看免费www的网站| 成人无遮挡网站| 大码成人一级视频| 日韩av不卡免费在线播放| 欧美人与善性xxx| 欧美日韩亚洲高清精品| 国模一区二区三区四区视频| 看非洲黑人一级黄片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 高清毛片免费看| 一级毛片我不卡| 搡女人真爽免费视频火全软件| 欧美日韩综合久久久久久| 精品视频人人做人人爽| 欧美精品亚洲一区二区| 视频中文字幕在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 两个人的视频大全免费| 91狼人影院| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产人妻一区二区三区在| 丰满迷人的少妇在线观看| 日日啪夜夜撸| 网址你懂的国产日韩在线| 成人美女网站在线观看视频| 韩国av在线不卡| 91精品国产国语对白视频| 777米奇影视久久| 黄片无遮挡物在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| av视频免费观看在线观看| 香蕉精品网在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 高清不卡的av网站| 大码成人一级视频| 国产 一区精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美精品亚洲一区二区| 久久 成人 亚洲| 少妇的逼好多水| 美女主播在线视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 熟女av电影| 亚洲国产精品国产精品| 简卡轻食公司| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 97超视频在线观看视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 看十八女毛片水多多多| 青春草视频在线免费观看| 99热6这里只有精品| 性色avwww在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲精品视频女| 网址你懂的国产日韩在线| av视频免费观看在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 精品一区二区三区视频在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品人妻久久久影院| 深夜a级毛片| 1000部很黄的大片| 国产在线免费精品| 精品一品国产午夜福利视频| 国产爽快片一区二区三区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品久久国产蜜桃| 视频区图区小说| 亚洲av中文av极速乱| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 麻豆成人av视频| 国产色婷婷99| 99久久人妻综合| 久久精品久久久久久久性| 高清欧美精品videossex| 久久久久久久精品精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 在线观看av片永久免费下载| 欧美区成人在线视频| 在线精品无人区一区二区三 | 中文字幕av成人在线电影| 成人亚洲欧美一区二区av| 高清视频免费观看一区二区| 精品一品国产午夜福利视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产视频内射| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 最后的刺客免费高清国语| 免费观看性生交大片5| 亚洲内射少妇av| 美女国产视频在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 国产有黄有色有爽视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 另类亚洲欧美激情| 国产成人精品一,二区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 韩国av在线不卡| 黄色视频在线播放观看不卡| 插阴视频在线观看视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 舔av片在线| 亚洲内射少妇av| 久久久久久久久大av| av免费观看日本| 蜜臀久久99精品久久宅男| av在线蜜桃| av黄色大香蕉| 午夜精品国产一区二区电影| 国产69精品久久久久777片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 色婷婷久久久亚洲欧美| 精品久久久精品久久久| 美女福利国产在线 | 51国产日韩欧美| 久久久色成人| 一本久久精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 深爱激情五月婷婷| 伦理电影免费视频| 九色成人免费人妻av| 亚洲精品乱久久久久久| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久精品国产自在天天线| 国产真实伦视频高清在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | av在线蜜桃| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 成人亚洲欧美一区二区av| h日本视频在线播放| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲,欧美,日韩| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 久久久久网色| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 一区二区三区乱码不卡18| videossex国产| 国产精品久久久久久av不卡| 国产高清有码在线观看视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲精品国产成人久久av| 夫妻午夜视频| 高清av免费在线| 国产男女内射视频| 麻豆国产97在线/欧美| 成人国产av品久久久| 欧美 日韩 精品 国产| 嘟嘟电影网在线观看| 香蕉精品网在线| 久久久久久久大尺度免费视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品久久久久久久久免| 极品教师在线视频| 特大巨黑吊av在线直播| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 欧美日韩在线观看h| 免费高清在线观看视频在线观看| 男人舔奶头视频| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久99精品国语久久久| 亚洲美女黄色视频免费看| 在线观看免费日韩欧美大片 | 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 黄色欧美视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 人妻一区二区av| 亚洲最大成人中文| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 夫妻性生交免费视频一级片| 在线天堂最新版资源| 永久网站在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 2022亚洲国产成人精品| 日本av免费视频播放| 少妇丰满av| 我的女老师完整版在线观看| 中国三级夫妇交换| 午夜激情久久久久久久| 精品久久国产蜜桃| 在线观看国产h片| 久久久久久久精品精品| 午夜福利视频精品| 最后的刺客免费高清国语| 国产精品嫩草影院av在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 国产精品一二三区在线看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 欧美成人午夜免费资源| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美3d第一页| 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品人妻久久久久久| 国产成人freesex在线| 色网站视频免费| 边亲边吃奶的免费视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 黄片wwwwww| 中国三级夫妇交换| 国产精品欧美亚洲77777| 色视频在线一区二区三区| 在线观看免费高清a一片| 午夜福利影视在线免费观看| 国产淫片久久久久久久久| 免费在线观看成人毛片| 中文字幕制服av| 国产大屁股一区二区在线视频| 午夜免费观看性视频| 18+在线观看网站| 亚洲国产日韩一区二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲内射少妇av| 天美传媒精品一区二区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美精品亚洲一区二区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日韩国内少妇激情av| 一个人看的www免费观看视频| 国产免费一级a男人的天堂| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品av视频在线免费观看| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 精品一区在线观看国产| 国产av国产精品国产| 亚洲四区av| 色视频www国产| 亚洲国产精品国产精品| 在线观看免费视频网站a站| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产成人精品久久久久久| 国产精品成人在线| www.色视频.com| a级毛片免费高清观看在线播放| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品熟女久久久久浪| 秋霞在线观看毛片| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 色婷婷av一区二区三区视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产成人a∨麻豆精品| 熟女人妻精品中文字幕| 内地一区二区视频在线| 午夜免费观看性视频| 亚洲经典国产精华液单| 中文天堂在线官网| 亚洲美女视频黄频| 成人特级av手机在线观看| 久久6这里有精品| 国产精品一区www在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 亚洲第一av免费看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩中文字幕视频在线看片 | 赤兔流量卡办理| 三级经典国产精品| 国产黄色免费在线视频| 十分钟在线观看高清视频www | 亚洲av中文av极速乱| 日日撸夜夜添| 久久久久久久精品精品| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 久久人人爽人人爽人人片va| 久久 成人 亚洲| 日韩一区二区三区影片| 亚洲人成网站高清观看| 九草在线视频观看| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲av.av天堂| 国产高清有码在线观看视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久久久人妻| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品一区二区性色av| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品国产成人久久av| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 少妇人妻精品综合一区二区| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久久国产网址| 婷婷色麻豆天堂久久| 黑人高潮一二区| 国产精品久久久久久av不卡| 国产乱来视频区| 免费人成在线观看视频色| 欧美高清性xxxxhd video| 另类亚洲欧美激情| 高清黄色对白视频在线免费看 | 黄片无遮挡物在线观看| 激情 狠狠 欧美| 丰满少妇做爰视频| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 麻豆成人av视频| 高清黄色对白视频在线免费看 | 亚洲天堂av无毛| 亚洲欧洲日产国产| 国产黄片视频在线免费观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久鲁丝午夜福利片| 国产黄色免费在线视频| 亚洲国产欧美在线一区| 美女福利国产在线 | 免费少妇av软件| av天堂中文字幕网| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲国产精品一区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 美女视频免费永久观看网站| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲中文av在线| 精品人妻视频免费看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日本欧美国产在线视频| 国产爽快片一区二区三区| 在线精品无人区一区二区三 | 男人和女人高潮做爰伦理| 久热久热在线精品观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久久视频综合| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 免费黄网站久久成人精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲国产欧美人成| 简卡轻食公司| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲国产精品专区欧美| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲av中文字字幕乱码综合| av网站免费在线观看视频| 欧美精品国产亚洲| 老司机影院成人| 欧美一级a爱片免费观看看| av.在线天堂| 久久久久视频综合| 大香蕉97超碰在线| 国产高清三级在线| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 一区二区三区乱码不卡18| 精品亚洲成a人片在线观看 | 久久影院123| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩成人伦理影院| 免费人妻精品一区二区三区视频| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品一二三区在线看| 91狼人影院| 日本色播在线视频| 久久青草综合色| 欧美高清性xxxxhd video| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久99热这里只有精品18| 成人无遮挡网站| 一个人免费看片子| 大话2 男鬼变身卡| 在线观看三级黄色| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲国产精品国产精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 少妇人妻 视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 精品亚洲成a人片在线观看 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚州av有码| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲精品一二三| 国产精品无大码| 久久久久人妻精品一区果冻| 成年免费大片在线观看| 亚洲精品一二三| av免费观看日本| 亚洲高清免费不卡视频| 国产高清三级在线| 国产高潮美女av| 亚洲精品国产成人久久av| 国产亚洲一区二区精品| 国产在线免费精品| 99热网站在线观看| 久久久久网色| 在线播放无遮挡| 最黄视频免费看| 国产在视频线精品| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲精品,欧美精品| 欧美zozozo另类| 老女人水多毛片| 亚洲精品aⅴ在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 大陆偷拍与自拍| 少妇的逼好多水| 欧美3d第一页| .国产精品久久| 高清av免费在线| 色视频www国产| 一个人看的www免费观看视频| 久久久成人免费电影| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲成人一二三区av| 国产又色又爽无遮挡免| 观看av在线不卡| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲成人一二三区av| 色综合色国产| 亚洲国产欧美在线一区| 日韩一区二区三区影片| 亚洲色图av天堂| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产视频内射| 亚洲成色77777| 精品久久久久久久久av| 免费在线观看成人毛片| 天堂中文最新版在线下载| 国精品久久久久久国模美| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产色爽女视频免费观看| 男的添女的下面高潮视频| 国产精品一区二区在线不卡| 国产在线一区二区三区精| 在线天堂最新版资源| 亚洲精品国产成人久久av| 国产91av在线免费观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 少妇的逼好多水| 老熟女久久久| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 午夜免费鲁丝| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品成人在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲中文av在线| 欧美一区二区亚洲| 成人一区二区视频在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 2021少妇久久久久久久久久久| 看十八女毛片水多多多| 色视频在线一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| 97超视频在线观看视频| 国产69精品久久久久777片| 久久久久久九九精品二区国产| av国产久精品久网站免费入址| av视频免费观看在线观看| 精品一区二区免费观看| 热re99久久精品国产66热6| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 大片免费播放器 马上看| 亚洲无线观看免费| 麻豆国产97在线/欧美| 成年av动漫网址| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 在现免费观看毛片| 少妇高潮的动态图| 丰满乱子伦码专区| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 乱系列少妇在线播放| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美成人a在线观看| 秋霞伦理黄片| 草草在线视频免费看| 亚洲精品第二区| 三级国产精品欧美在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产欧美亚洲国产| 伦理电影免费视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 成年人午夜在线观看视频| 亚洲经典国产精华液单| 美女福利国产在线 | 日本wwww免费看| 久热久热在线精品观看| 街头女战士在线观看网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | a级毛片免费高清观看在线播放| 精品一区二区三卡| 久久久久视频综合| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久99热这里只有精品18| 精品视频人人做人人爽| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩视频在线欧美| 免费av中文字幕在线| 九草在线视频观看| 国产男人的电影天堂91| 亚洲人与动物交配视频| 五月开心婷婷网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 午夜福利在线在线| 亚洲国产色片| 欧美区成人在线视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 少妇精品久久久久久久| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲精品,欧美精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| h日本视频在线播放| 超碰av人人做人人爽久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 成人影院久久| 免费黄网站久久成人精品| av在线观看视频网站免费| 国产美女午夜福利| 欧美最新免费一区二区三区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产精品免费大片| 亚洲成人一二三区av| 久久精品人妻少妇| 丝袜脚勾引网站| 永久免费av网站大全| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 2021少妇久久久久久久久久久| 日本免费在线观看一区| 久久久久久久精品精品| 免费人成在线观看视频色| 欧美国产精品一级二级三级 | 午夜福利在线在线| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 成人漫画全彩无遮挡| 高清午夜精品一区二区三区| 久久99热6这里只有精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产在视频线精品| 欧美日韩在线观看h| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 九九在线视频观看精品| 久久精品久久久久久久性| 国产亚洲91精品色在线| 岛国毛片在线播放| 在线免费观看不下载黄p国产| 一级毛片 在线播放| 国产伦在线观看视频一区| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产黄色免费在线视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 午夜免费鲁丝| 久久热精品热| 国产乱人偷精品视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产一区二区三区综合在线观看 | 精品人妻视频免费看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 女性生殖器流出的白浆| 欧美成人a在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 婷婷色av中文字幕| 亚洲自偷自拍三级| 黄色配什么色好看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久久久久久久久大av| 久久久久久久久久成人| 国产片特级美女逼逼视频| 成人国产麻豆网| 91狼人影院| 女性被躁到高潮视频| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久|