青稞酒中糖精鈉含量的測(cè)定方法研究

蔡林森

(青海省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，青海西寧810001)

青稞酒中糖精鈉含量的測(cè)定方法研究

蔡林森

(青海省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，青海西寧810001)

建立了高效液相色譜法測(cè)定青稞酒中糖精鈉的檢測(cè)方法。將青稞酒樣品10.0 g在平行蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)至近干再用超純水定容至10 mL，待分析。采用Inertsustain C18（4.6×250 mm×5 μm）柱分離。以0.02 mol/L的乙酸銨緩沖液和甲醇（V∶V=85∶15）為流動(dòng)相，流速0.8 mL/min，柱溫40℃，進(jìn)樣量為10 μL，紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為220 nm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，糖精鈉在5～150 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，線性方程為：y=24893.5x，相關(guān)系數(shù)R2=0.9999。加標(biāo)回收率為97.74%～106.9%，檢出限為0.023 μg/mL。本方法簡(jiǎn)便、快速、精密、準(zhǔn)確，可用于青稞酒中糖精鈉的檢測(cè)。

糖精鈉；青稞酒；高效液相色譜

青稞酒是青藏高原特有的民族傳統(tǒng)產(chǎn)品，是以青稞和豌豆為主要原料，用大曲、小曲及酒母等作為糖化發(fā)酵劑，經(jīng)過一系列的化學(xué)反應(yīng)而制成的。由于在釀制過程中可能會(huì)產(chǎn)生苦澀的味道，為了改善其口感，生產(chǎn)企業(yè)通常會(huì)非法添加一些甜味劑，如甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉等。我國(guó)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中明確規(guī)定，蒸餾酒中不得添加人工合成甜味劑，在配制酒中可以添加少量，對(duì)添加量也作出了嚴(yán)格的規(guī)定[1-2]。因此，建立一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的方法來測(cè)定青稞酒中糖精鈉的含量是非常必要的。常用糖精鈉的檢測(cè)方法為液相色譜法[3-4]，超高效液相色譜-質(zhì)譜法[5-7]。但由于青稞酒中的基質(zhì)復(fù)雜，而且只需加入少量的甜味劑就能改變其口味，同時(shí)儀器檢出限等方面存在的問題，給青稞酒中糖精鈉的檢測(cè)工作帶來了較大的困難。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜對(duì)青稞酒中糖精鈉進(jìn)行檢測(cè)，該方法不需對(duì)樣品進(jìn)行復(fù)雜的前處理，而且定量準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好，靈敏度高，檢測(cè)成本低，為青稞酒中甜味劑的檢測(cè)提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：青稞酒（購于青海青稞酒生產(chǎn)企業(yè)）。

試劑及耗材：糖精鈉（LA16901010，純度99.9%，Dr Ehrenstorfer GmbH），甲醇（色譜純，F(xiàn)isher scientific），乙酸銨（分析純，煙臺(tái)市雙雙化工有限公司），0.22 μm濾膜（上海密柱膜分離技術(shù)有限公司）。

儀器設(shè)備：高效液相色譜儀（島津LC-20A，島津企業(yè)管理中國(guó)有限公司），超純水機(jī)（GWA-UN4-20，普析通用）；平行蒸發(fā)儀（BUCHI Synlore）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsustain C18（4.6×250 mm×5 μm）；流動(dòng)相：0.02 mol/L乙酸銨∶甲醇（V∶V=85∶15）；流速0.8 mL/min；柱溫40℃；進(jìn)樣量為10 μL；紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為220 nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的配制

準(zhǔn)確稱取糖精鈉固體標(biāo)準(zhǔn)品0.0500 g，用純水溶解后定容至50 mL的容量瓶中，即配得1000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，待用。

分別吸取50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、800 μL、1000 μL、1500 μL用純水定容至10 mL容量瓶中，即配得5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.2.3 樣品前處理

稱取青稞酒樣品10.0 g于平行蒸發(fā)管中，在減壓的條件下蒸發(fā)至近干以除去乙醇，再用超純水定容至10 mL混合均勻，過0.22 μm微孔濾膜，待上機(jī)測(cè)試。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的選擇

根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的最大使用限量150 mg/kg和樣品前處理的方法，本實(shí)驗(yàn)選擇了5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL為線性范圍，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)濃度點(diǎn)重復(fù)進(jìn)樣3次，取其平均值。同時(shí)考察了標(biāo)準(zhǔn)濃度點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)偏差的關(guān)系，其比值為一常數(shù)，選取了直線回歸方程。得到的線性方程為：y=24893.5x，相關(guān)系數(shù)R2= 0.9999。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的校準(zhǔn)驗(yàn)證

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求，需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性進(jìn)行驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)通過另取不同批次的糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品，分別配制成濃度為10 μg/mL、80 μg/mL、150 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下重復(fù)測(cè)定3次，取其平均值。偏差分別為2.0%、0.4%、0.3%。符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的要求。測(cè)定結(jié)果見表1。

2.3 流動(dòng)相的選擇

通過比較水-甲醇、水-乙腈、乙酸銨-甲醇和乙酸銨-乙腈對(duì)峰形和靈敏度的影響，其中乙酸銨-甲醇明顯優(yōu)于其他3種體系的流動(dòng)相，通過多次實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，本實(shí)驗(yàn)最終選取了0.02 mol/L的乙酸銨∶甲醇（V∶V=85∶15）作為流動(dòng)相。

2.4 樣品前處理

青稞酒中含有大量的乙醇，對(duì)糖精鈉的檢測(cè)有嚴(yán)重的干擾。由于糖精鈉屬于鹽類化合物，其熔點(diǎn)高且難揮發(fā)，通過蒸發(fā)除去乙醇。本實(shí)驗(yàn)通過比較了水浴加熱蒸發(fā)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和平行蒸發(fā)的效率，平行蒸發(fā)能同時(shí)處理12個(gè)樣品，且蒸干的時(shí)間短，因此選取了平行蒸發(fā)。本實(shí)驗(yàn)采用平行蒸發(fā)儀將10.0 g的青稞酒蒸至近干，然后用純水定容至10 mL，上機(jī)測(cè)試。該方法既能避免青稞酒中其他成分對(duì)檢測(cè)的干擾，又能保證較高的回收率。

2.5 方法的準(zhǔn)確度及精密度

在空白青稞酒樣品中分別加入10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 3個(gè)水平濃度的糖精鈉標(biāo)品，按實(shí)驗(yàn)相同的樣品前處理方法，在相同的儀器條件下重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算回收率和精密度。其結(jié)果見表2。

由表2可知，糖精鈉在10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL 3個(gè)濃度水平的精密度實(shí)驗(yàn)中相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.058%～0.23%之間，表明精密度良好；回收率在97.74%～106.9%，表明準(zhǔn)確度高。

2.6 方法的檢出限

方法檢出限是指給定的方法在特定的條件下能夠檢出被測(cè)物質(zhì)的最小濃度值，它是表示分析方法的重要的參數(shù)之一。分析方法的檢出限與儀器噪音，樣品的性質(zhì)，前處理方法，試劑等都有直接的關(guān)系。為了能夠準(zhǔn)確的反映整個(gè)分析方法在分析過程中的誤差，可采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按方法的分析步驟進(jìn)行檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)通過分析12份已知的標(biāo)品計(jì)算方法的檢出限。計(jì)算公式如下：CL=KSC/X，其中：CL為方法的檢出限，μg/mL；K為置信因子，一般取3；S為樣品測(cè)量值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；C為樣品含量值，μg/mL；X為樣品測(cè)量值的平均數(shù)。本實(shí)驗(yàn)取12份0.5 μg/mL的糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)品，按照測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表3。按公式計(jì)算檢出限為：0.023 μg/mL。

2.7 不確定度分析

根據(jù)《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》的規(guī)定，

當(dāng)檢測(cè)的結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)要求的臨界值上下時(shí)，有可能導(dǎo)致誤判產(chǎn)品不合格時(shí)，應(yīng)該計(jì)算該方法的不確定度，以確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的有效性和準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)不確定度的主要來源有電子天平、容量瓶、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的不確定度等因素。由于本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的樣品中均不含糖精鈉，不存在誤判的可能，就未采用不確定度來校正結(jié)果。在以后的檢測(cè)中，當(dāng)出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果在臨界值上下時(shí)，必須用不確定度來校正結(jié)果。

2.8 樣品分析

抽取了青海省20家青稞酒廠的40個(gè)青稞酒樣品，用該方法進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出糖精鈉。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化色譜條件和前處理方法，建立了一種高效液相色譜法檢測(cè)青稞酒中糖精鈉的方法，對(duì)不同青稞酒廠家的生產(chǎn)的青稞酒進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出糖精鈉。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該方法穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，用于青稞酒中糖精鈉的檢測(cè)，前處理簡(jiǎn)單，是一種實(shí)用性較強(qiáng)的檢測(cè)方法。

[1]魯琳,杭義萍,高燕紅,等.食品甜味劑分類及其檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)狀[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2009,36(11)：2033-2035.

[2]中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)：GB 2760—2014[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2014.

[3]程春梅,趙燕,師邱毅,等.液相色譜法測(cè)定白酒中安賽蜜和糖精鈉含量[J].釀酒科技,2012(6)：99-101.

[4]陳仁遠(yuǎn),馮永渝,梁桂娟,等.白酒中甜味劑含量的本底值及來源研究[J].釀酒科技,2014(9)：37-41.

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[6]柯潤(rùn)輝,王麗娟,安紅梅,等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法直接測(cè)定白酒中8種甜味劑[J].釀酒科技,2016(5)：107-110.

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Determination of Saccharin Sodium Content in Highland Barley Liquor

CAI Linsen
(Qinghai Product Quality Supervision and Inspection Institute,Xining,Qinghai 810001,China)

The determination method of saccharin sodium content in highland barley liquor by HPLC had been developed.10.0 g liquor sample was placed on multivapor for decompression-evaporation until almost dry,then ultra-pure water was injected to 10 mL for subsequent analysis. Inertsustain C18(4.6×250 mm×5 μm)column was used for separation.0.02 mol/L ammonium acetate buffer and methanol(V/V=85∶15) was used as mobile phase,the flowing rate was 0.8 mL/min,the column temperature was at 40℃,the injection volume was 10 μL,and the wavelength of ultraviolet detector was at 220 nm.The experimental results showed that sodium saccharin showed a good linear relationship within 5 to 150 μg/mL and the linear equation was y=24893.5x,the correlation coefficient R2=0.9999,the recovery was between 97.74%to 106.9%,and the detection limit was 0.023 μg/mL.This method was simple,rapid,precise,accurate and it could be used in the analysis of saccharin sodium in highland barley liquor.

saccharin sodium;highland barley liquor;liquid chromatography

TS262.3；TS261.7

A

1001-9286（2017）03-0107-02

10.13746/j.njkj.2016358

2016-12-02

蔡林森（1986-），男，重慶開縣人，碩士研究生，助理研究員，研究方向?yàn)椴牧匣瘜W(xué)和食品分析。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2017-01-25；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170125.0744.002.html。