豬流行性腹瀉疫苗研究和開(kāi)發(fā)進(jìn)展

李春華,王榮談,何錫忠,丁衛(wèi)星,蔣鳳英,倪建平,3,趙本進(jìn),3?

(1上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所,上海201106;2上海瑞豐農(nóng)業(yè)科技有限公司,上海201106;3上海佳牧生物制品有限公司,上海201106)

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的高度接觸性腸道傳染病,PEDV可感染各種年齡的豬,引起水樣腹瀉、嘔吐和脫水等臨床癥狀,哺乳仔豬感染更為嚴(yán)重,病死率達(dá)80%—100%[1]。該病最早報(bào)道于1971年在英格蘭的豬場(chǎng)中暴發(fā),1978年在比利時(shí)首先報(bào)道分離到PEDV[2],此后,豬流性腹瀉疫情在世界各地養(yǎng)豬業(yè)中均有暴發(fā)流行。國(guó)內(nèi)最早報(bào)道于20世紀(jì)70年代,在1984年確定病原為PEDV。從1984年到2010年初,國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)中存在PEDV的感染,但并沒(méi)有呈現(xiàn)大規(guī)模的暴發(fā)。從2010年末開(kāi)始,哺乳仔豬流行性腹瀉在全國(guó)出現(xiàn)較大范圍的流行,尤其在華東和華南大部分地區(qū)的豬場(chǎng)集中暴發(fā),發(fā)病日齡小、涉及面廣,死亡率高,給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失[3-4]。2013年5月PED首次在美國(guó)暴發(fā),疫情蔓延迅速,短短數(shù)月已傳播至30多個(gè)州的4 000多個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng),引起700多萬(wàn)頭仔豬死亡;之后,PED傳播到北美洲的加拿大、墨西哥等國(guó),出現(xiàn)暴發(fā)流行[5-7],從而改變了PED長(zhǎng)期以來(lái)只出現(xiàn)在亞洲和歐洲國(guó)家的歷史,引起了國(guó)際社會(huì)和科學(xué)界的極大關(guān)注。

PEDV屬于尼多病毒目冠狀病毒科冠狀病毒屬,病毒粒子呈球形,有囊膜,直徑約95—190 nm。PEDV的基因組為單股正鏈RNA,不同毒株基因組大小不等,全長(zhǎng)約為28 kb,包含5’cap結(jié)構(gòu)和3’polyA尾。PEDV全基因組由5’端非編碼區(qū)、3’端非編碼區(qū)和至少7個(gè)開(kāi)放閱讀框(Open Reading Frame,ORF)組成,編碼3個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(復(fù)制酶1a、1b及非結(jié)構(gòu)蛋白ORF3)和4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(纖突蛋白S,囊膜蛋白E,膜蛋白M,核衣殼蛋白N),它們?cè)诨蚪M的順序?yàn)?’UTR-P1a∕1b-S-ORF3-E-M-N-3’UTR。PEDV S基因編碼纖突蛋白(S蛋白),是病毒重要的I型跨膜蛋白,也是PEDV主要的免疫原性蛋白,在病毒粒子與細(xì)胞表面受體結(jié)合后通過(guò)膜融合侵入宿主細(xì)胞,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體,因此很多研究將S蛋白被作為疫苗研究的目的蛋白。

與多數(shù)病毒病一樣,對(duì)PED的防制尚無(wú)特效的藥物,主要依賴(lài)疫苗預(yù)防接種。幾十年來(lái),國(guó)內(nèi)外豬病研究者研究出了PED滅活疫苗、活疫苗、基因工程疫苗等,有的已經(jīng)商品化生產(chǎn)應(yīng)用,有的尚處于研發(fā)階段,本文就此做一綜述。

1 滅活疫苗

PED滅活疫苗經(jīng)歷了組織滅活苗和細(xì)胞滅活苗兩個(gè)階段。在早期的歐洲,曾將發(fā)病豬場(chǎng)死亡仔豬的腸道內(nèi)容物處理后返飼懷孕母豬,誘導(dǎo)母豬產(chǎn)生免疫抗體,從而保護(hù)仔豬,控制PED的流行。但該方法不適用于非發(fā)病豬場(chǎng),而且難以控制病毒含量,并容易感染其他病毒,已被禁止使用。

國(guó)內(nèi)最早的PED疫苗也是組織滅活苗,1993年,哈爾濱獸醫(yī)研究所王明等[8]將PEDV滬毒株接種仔豬,取發(fā)病仔豬的腸內(nèi)容物和小腸黏膜滅活后加佐劑制備成國(guó)內(nèi)首個(gè)PED組織滅活苗。1994—1995年,馬思奇等[9]采用添加胰酶的方法,將CV777適應(yīng)VERO細(xì)胞連續(xù)傳代,用第28代細(xì)胞毒制備出氫氧化鋁滅活疫苗;之后又用低代次PEDV CV777細(xì)胞毒與豬傳染性胃腸炎(TGEV)華毒株制備了TGE-PED二聯(lián)滅活疫苗,為國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)長(zhǎng)期使用的豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗(華毒株+CV777株)。1999年,上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院的錢(qián)永清等[10]從上海郊區(qū)的發(fā)病豬場(chǎng)分離到一株P(guān)EDV,命名為S毒株,并能在VERO細(xì)胞上傳代,出現(xiàn)病變;鄒勇等[11]采用該毒株制備了PED-TGEV-PoRV(豬輪狀病毒)三聯(lián)滅活疫苗,接種肉豬和妊娠母豬后15 d產(chǎn)生較高的抗體水平,免疫有效期6個(gè)月以上,臨床試驗(yàn)顯示仔豬通過(guò)被動(dòng)免疫獲得保護(hù),保護(hù)率達(dá)93%,母豬保護(hù)率為98%。美國(guó)爆發(fā)PED之后,Zoetis公司制備的PED全病毒滅活疫苗于2014年9月獲得美國(guó)農(nóng)業(yè)部的條件性許可,以2頭份劑量免疫分娩前的母豬,從而使仔豬獲得被動(dòng)免疫[12]。

滅活疫苗安全、穩(wěn)定,免疫效果不受母源抗體的影響,通過(guò)免疫妊娠母豬使其所產(chǎn)仔豬獲得被動(dòng)免疫保護(hù)。但是,滅活疫苗也存在缺點(diǎn),接種劑量大,一次免疫無(wú)法產(chǎn)生足夠高的抗體水平,通常需要加強(qiáng)免疫;而且經(jīng)后海穴注射接種PED滅活苗,需要2周時(shí)間才能產(chǎn)生完全免疫力,不適合緊急預(yù)防接種[13]。另外,滅活疫苗只能通過(guò)注射免疫,誘導(dǎo)產(chǎn)生的主要是循環(huán)抗體IgG,可抵御全身感染,而不能有效誘導(dǎo)黏膜免疫,仔豬無(wú)法獲得分泌性抗體SIgA,因而不能全面保護(hù)豬腸道黏膜感染。

2 活疫苗

1998—1999年,佟有恩等[14]成功培育了PEDV CV777克隆弱毒株,制備出PED弱毒活疫苗;并將TGE及PED克隆弱毒株以1∶1配比制成TGE-PED二聯(lián)弱毒疫苗,毒價(jià)為107.0—7.5TCID50∕0.3 mL,主動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫的保護(hù)率分別為97.7%和98%,豬場(chǎng)田間試驗(yàn)達(dá)到95%以上的保護(hù)率,可用于緊急預(yù)防接種。2000年,李樹(shù)根等[15]應(yīng)用制備的PED-TGE二聯(lián)弱毒疫苗(PEDV-G1P83株+TGEV-AG1株)進(jìn)行區(qū)域試驗(yàn),免疫后可使初生仔豬、斷奶仔豬和肥育豬抵抗TGEV和PEDV強(qiáng)毒的攻擊,明顯降低發(fā)病率和死亡率。2002年,周仲芳等[16]驗(yàn)證了該二聯(lián)弱毒疫苗在誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生方面無(wú)干擾,與兩個(gè)疫苗單獨(dú)免疫產(chǎn)生的抗體變化趨勢(shì)相似,在7日齡時(shí)仔豬獲得較高的被動(dòng)免疫抗體效價(jià)。

國(guó)外對(duì)PED活疫苗的研究早期集中在亞洲國(guó)家。1997年,應(yīng)用在Vero細(xì)胞上傳代適應(yīng)的100代毒PEDV 83P-5株制備的弱毒疫苗在日本獲得許可,應(yīng)用于母豬[17]。1999年,韓國(guó)Kweon等[18]將分離的KPEDV-9野毒株在適應(yīng)VERO細(xì)胞,用93代毒接種妊娠母豬,可使其免疫力增強(qiáng),新生仔豬可以抵抗PEDV野毒的感染;免疫母豬的安全性試驗(yàn)顯示分娩母豬產(chǎn)仔數(shù)達(dá)到平均水平,此弱毒株可以作為疫苗株用于保護(hù)哺乳仔豬免受PEDV的感染。2007年,韓國(guó)的Song等[19]將PEDV在VERO細(xì)胞上適應(yīng)傳代,獲得了DR13弱毒株,采取口服和肌肉注射途徑免疫妊娠后期的母豬,用PEDV強(qiáng)毒攻擊檢測(cè)疫苗保護(hù)性。結(jié)果顯示,口服免疫組的強(qiáng)毒攻擊致死率為13%,明顯低于肌肉注射組(60%),而且口服免疫組母豬所產(chǎn)仔豬的抗PEDV IgA濃度較高;此DR13弱毒株經(jīng)過(guò)3次動(dòng)物回歸試驗(yàn),仍然安全,可以作為口服疫苗株,誘導(dǎo)妊娠后期的母豬獲得高水平的免疫反應(yīng),抵抗PEDV的感染,該疫苗已經(jīng)在韓國(guó)、菲律賓獲得許可和應(yīng)用。針對(duì)2014—2015年韓國(guó)出現(xiàn)的PEDV疫情,應(yīng)用 G2a型新 PEDV毒株制備的疫苗即將獲得許可[20]。

弱毒疫苗無(wú)需佐劑,單次免疫即可獲得持久的免疫力,還可誘導(dǎo)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫反應(yīng),保護(hù)效果好。但其存在散毒和返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn),安全性有時(shí)難以確保,有的免疫功能低下者接種后可能導(dǎo)致發(fā)病。

3 基因工程疫苗

隨著生物技術(shù)的發(fā)展,利用基因工程方法研究的豬流行性腹瀉疫苗有以下幾種:轉(zhuǎn)基因植物疫苗、乳酸桿菌口服疫苗、核酸疫苗和亞單位疫苗等。

3.1 轉(zhuǎn)基因植物疫苗

2003年,韓國(guó)Bae等[21]將PEDV中和表位區(qū)域COE基因轉(zhuǎn)入煙草中,構(gòu)建了表達(dá)PEDV抗原的轉(zhuǎn)基因煙草,利用表達(dá)的抗原口服免疫小鼠,盡管PEDV抗原的表達(dá)水平不高,但仍能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生體液免疫和黏膜免疫應(yīng)答,保護(hù)宿主細(xì)胞免受PEDV感染。2005年,Kang等[22]將PEDV中和表位基因在無(wú)尼古丁的煙草中表達(dá),可將外源病毒抗原的表達(dá)量提高到占全部可溶性植物蛋白的2.1%。目前,用在無(wú)煙堿煙草中成功表達(dá)的含中和表位的PEDV S蛋白免疫接種仔豬,顯示出良好的保護(hù)作用[23]。但是,由于煙草中大量的生物堿對(duì)人畜有害,大規(guī)模的提取和純化方法,較低表達(dá)量的外源抗原在口服時(shí)會(huì)被消化,合適的飼喂量、抗原的穩(wěn)定性及有效劑量尚需深入研究,所以轉(zhuǎn)基因植物疫苗離臨床應(yīng)用還有很多需要解決的問(wèn)題。

3.2 乳酸桿菌口服疫苗

微生態(tài)制劑可以調(diào)節(jié)腸道菌群,維持機(jī)體健康,乳酸桿菌是制備微生態(tài)制劑常用的益生菌。近年來(lái),將病原微生物的抗原基因應(yīng)用乳酸桿菌系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá),制備口服微生態(tài)制劑疫苗也多有研究?？诜呙缈梢源碳ゐつっ庖?產(chǎn)生IgA抗體,抵抗病原入侵,有效預(yù)防病毒性腹瀉,所以PEDV的乳酸桿菌口服疫苗研究較多。

2007年,Hou等[24]報(bào)道用乳酸菌表達(dá)的PEDV N蛋白能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)PEDV N蛋白的黏膜抗體IgA和循環(huán)抗體IgG。2008年,董麗娜等[25]擴(kuò)增出501 bp的PEDV COE基因片段,成功構(gòu)建了PEDV部分S蛋白乳酸乳球菌表達(dá)載體系統(tǒng),經(jīng)乳鏈菌肽(Nisin)誘導(dǎo)后在菌體細(xì)胞表面成功表達(dá)了具有反應(yīng)原性的PEDV部分S蛋白。2009年,胡桂學(xué)等[26]將董麗娜構(gòu)建的含有PEDV S蛋白COE的重組菌大量培養(yǎng),誘導(dǎo)表達(dá)后進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),分別口服免疫妊娠母豬和斷奶仔豬,檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,免疫妊娠母豬乳汁中sIgA顯著升高;免疫仔豬血清中IgG和sIgA明顯增加,淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)刺激指數(shù)差異顯著。

2009—2010年,葛俊偉等[27-29]報(bào)道用干酪乳桿菌表達(dá)系統(tǒng)分別表達(dá)了PEDV N蛋白、S1蛋白和中和抗原位點(diǎn)(COE),用重組干酪乳桿菌分別口服免疫小鼠,測(cè)定了免疫后不同時(shí)間血清中特異性IgG、糞便中特異性的sIgA水平以及血清的中和活性,并測(cè)定免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖情況和細(xì)胞因子水平。結(jié)果顯示免疫組小鼠血清、糞便中檢測(cè)到較高水平的特異性IgG、sIgA(P＜0.01),脾淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)明顯高于對(duì)照組,IL-4和IFN-γ水平顯著提高(P＜0.01),含有pPG-1-COE的重組干酪乳桿菌誘導(dǎo)的血清具有中和活性(1∶12),該重組干酪乳桿菌表達(dá)系統(tǒng)可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生對(duì)豬流行性腹瀉病毒特異的黏膜免疫應(yīng)答和系統(tǒng)免疫應(yīng)答。2012年,Liu等[30]構(gòu)建了分別表達(dá)PEDV N蛋白和S1蛋白的重組乳酸菌,通過(guò)口服免疫,證明乳酸菌表達(dá)的PEDV S1蛋白和N蛋白的聯(lián)合應(yīng)用可以誘導(dǎo)高水平的黏膜免疫和全身免疫反應(yīng)。

3.3 核酸疫苗

核酸疫苗是將外源抗原基因直接導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞內(nèi),利用宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白,誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答,又稱(chēng)為基因疫苗或DNA疫苗,具有免疫保護(hù)力更強(qiáng)、更持久的優(yōu)點(diǎn),但多數(shù)疫苗仍處于試驗(yàn)研究階段。

2013年,Meng等[31]應(yīng)用真核表達(dá)載體構(gòu)建了表達(dá)PEDV S基因的DNA疫苗,該疫苗不僅能夠有效地激活細(xì)胞免疫,還能誘導(dǎo)高水平抗體的產(chǎn)生。向敏等[32]構(gòu)建了PEDV S蛋白的COE基因真核表達(dá)載體,在VERO細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá),用重組質(zhì)粒COE核酸疫苗免疫小鼠,在小鼠體內(nèi)可誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。2014年,梁恩濤等[33]應(yīng)用真核表達(dá)載體構(gòu)建了表達(dá)PEDV S1的重組減毒鼠傷寒沙門(mén)菌SL7207(pVAXDS1),并以每只1×109CFU口服免疫BALB/c小鼠具有良好的安全性,攜帶的S1基因能在小鼠回腸末端組織內(nèi)正常轉(zhuǎn)錄及表達(dá),為深入開(kāi)展減毒沙門(mén)菌疫苗菌株SL7207(pVAXD-S1)的免疫評(píng)價(jià)及構(gòu)建PEDV與其他抗原基因聯(lián)合免疫DNA疫苗奠定了基礎(chǔ)。2014年6月,美國(guó)Harrisvaccine公司應(yīng)用其擁有的獨(dú)一無(wú)二的SirraVax(SM)RNA顆粒技術(shù)研制的PED RNA疫苗成為美國(guó)農(nóng)業(yè)部的條件性許可的首個(gè)PED疫苗[12]。

3.4 亞單位疫苗

亞單位疫苗是采用基因工程的方法將病毒的特定基因重組到合適的質(zhì)?；虿《据d體中,然后導(dǎo)入原核或真核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行高效表達(dá),提取所表達(dá)的特定多肽,加入佐劑制備而成的一種新型疫苗。表達(dá)系統(tǒng)主要有細(xì)菌、酵母或動(dòng)物細(xì)胞等,目前國(guó)內(nèi)已有少量商品化的亞單位疫苗,如豬圓環(huán)病毒2型基因工程亞單位疫苗,羊衣原體病基因工程亞單位疫苗。

2008年,韋顯凱等[34]成功構(gòu)建獲得了穩(wěn)定表達(dá)PEDV S蛋白基因片段的3個(gè)重組腺病毒rAd-S498—638,rAd-S1—638,rAd-S198—1384,免疫小鼠后可誘導(dǎo)產(chǎn)生較強(qiáng)的PEDV特異性免疫應(yīng)答。2009年,姜艷平等[35]將應(yīng)用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了S1、Ps420、S2、S3蛋白,并制備了相應(yīng)的抗血清,檢測(cè)結(jié)果表明這4種蛋白均有很好的抗原性,4種抗血清都能識(shí)別細(xì)胞培養(yǎng)的PEDV,其中S1、Ps420抗血清能識(shí)別天然的PEDV病毒粒子。2014年,譚博敏等[36]成功構(gòu)建獲得了共表達(dá)S1和M蛋白的重組桿狀病毒rBacmid-S1-M,試驗(yàn)結(jié)果顯示,共表達(dá)的重組S1和M蛋白產(chǎn)物能夠與PEDV多克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng),具有良好的反應(yīng)原性。同年,畢玉敏等[37]在pGEX-6P-1載體中表達(dá)了4個(gè)具有免疫原性的PEDV S蛋白基因片段(Sa,Sb,Sc和Sd),為后期亞單位疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。

2016年,加拿大的Makadiya等[38]應(yīng)用酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞三種真核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了分泌型的N端糖基化的PEDV USA∕Colorado∕2013株的 S1蛋白,與Triadj佐劑混合后一起免疫分娩前的懷孕母豬,能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生S1特異性的IgG和IgA,可以傳遞給新生仔豬。免疫母豬及其所產(chǎn)仔豬血清中存在較高的中和抗體滴度。給仔豬口服PEDV強(qiáng)毒攻擊,與對(duì)照組相比,免疫母豬所產(chǎn)的仔豬臨床癥狀輕微,死亡率顯著降低。但是,免疫組仔豬和對(duì)照組在腹瀉、體重和排毒量方面無(wú)顯著差異,因此S1的亞單位疫苗還不能給暴露于強(qiáng)毒的哺乳仔豬提供完全的保護(hù),尚需進(jìn)一步改進(jìn)亞單位疫苗以全面抵抗PEDV的感染。2016年,陳瑾等[39]為了提高PEDV亞單位疫苗的免疫原性,進(jìn)行了免疫增強(qiáng)劑的篩選研究。選取免疫增強(qiáng)劑 CVC1302、CVC1303與可溶性表達(dá) PEDV S蛋白核心表位 COE的重組蛋白(pQZCOE-LTB)混合乳化制成疫苗,免疫小鼠,檢測(cè)結(jié)果表明,重組蛋白與CVC1303配合使用免疫小鼠能產(chǎn)生顯著高于滅活苗(CV777)陽(yáng)性對(duì)照組的IgG和sIgA抗體水平,說(shuō)明CVC1303免疫增強(qiáng)劑能有效增強(qiáng)該重組蛋白的免疫原性,提高亞單位疫苗免疫效果。

亞單位疫苗無(wú)致病性,無(wú)需滅活,安全性高,是目前的研究熱點(diǎn),如何使PED亞單位疫苗能夠提供完全保護(hù)是目前亟待解決的難點(diǎn)。

4 國(guó)內(nèi)近年來(lái)審批的PED新疫苗及中試產(chǎn)品

三十多年來(lái),TGE-PED二聯(lián)滅活疫苗和弱毒疫苗在防制TGEV和PEDV引起的病毒性腹瀉中發(fā)揮了重要作用。自2010年以來(lái),國(guó)內(nèi)豬病毒性腹瀉的大暴發(fā)導(dǎo)致了新的疫苗需求,應(yīng)用新毒株研發(fā)的PED聯(lián)苗應(yīng)運(yùn)而生。據(jù)農(nóng)業(yè)部獸藥注冊(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)[40],馮力等研制了豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉、豬輪狀病毒(G5型)(弱毒華毒株+弱毒CV777株+NX株)三價(jià)活疫苗,于2014年12月獲得新獸藥證書(shū)。經(jīng)過(guò)八年的潛心研究,北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司等6家單位聯(lián)合研發(fā)申報(bào)的豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗(HB08株+ZJ08株)于2015年11月獲得新獸藥證書(shū)。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)等5家單位應(yīng)用新毒株研發(fā)申報(bào)的豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗(WH-1株+AJ1102株)于2016年10月獲得新獸藥證書(shū)。

目前尚處于臨床試驗(yàn)階段的中試疫苗產(chǎn)品有:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)等研發(fā)的豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)活疫苗(WH-1R株+AJ1102-R株)、四川省華派生物制藥有限公司等研發(fā)的豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗(HY株+HZ株)、天康生物股份有限公司研發(fā)的豬流行性腹瀉滅活疫苗(XJ-DB2株)和廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院有限公司等研發(fā)的豬流行性腹瀉活疫苗(CHYJ株)。

5 國(guó)外的PED新疫苗及研發(fā)新技術(shù)

在日本和韓國(guó),隨著PEDV變異毒株的出現(xiàn),各研究單位和疫苗生產(chǎn)企業(yè)正在實(shí)施應(yīng)用新的疫苗株替代之前的毒株制備新型PED疫苗的計(jì)劃。在美國(guó)爆發(fā)PED之后,有兩種疫苗獲得農(nóng)業(yè)部的條件性許可,分別是美國(guó)Harrisvaccine公司的PED RNA疫苗和Zoetis公司的PED全病毒滅活疫苗。

目前,在動(dòng)物疫苗研發(fā)領(lǐng)域有兩種新技術(shù)逐漸被應(yīng)用[41]。一種是病毒樣顆粒(Virus-like particle,VLP)疫苗技術(shù),VLP疫苗的抗原結(jié)構(gòu)類(lèi)似于天然抗原的構(gòu)象,模擬野生病毒的結(jié)構(gòu)但不含核酸,不具備感染性,能夠誘導(dǎo)長(zhǎng)期的免疫和細(xì)胞免疫,已被應(yīng)用于豬圓環(huán)病毒2型疫苗和O型口蹄疫疫苗的生產(chǎn)[42-43];另一種是RNA顆粒疫苗,是應(yīng)用致弱的委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒(Venezuela equine encephalitis,VEE)作為載體,插入靶基因片段,生產(chǎn)出重組疫苗[44]。美國(guó)的PED RNA疫苗就是應(yīng)用PEDV的S蛋白基因替換VEE病毒的部分基因,使得在短期內(nèi)應(yīng)對(duì)突發(fā)疫情進(jìn)行緊急接種成為可能。綜上所述,國(guó)內(nèi)外PED疫苗的研究已取得了較大進(jìn)步,從最早的滅活疫苗免疫,僅監(jiān)測(cè)IgG抗體,到重視黏膜免疫中sIgA抗體的作用,提供更加全面的保護(hù)。尤其是近三年來(lái),應(yīng)用新毒株制備的商品化疫苗逐步投放市場(chǎng),為我國(guó)防制PED和病毒性腹瀉提供了多種選擇。目前,雖然大多數(shù)PED口服疫苗、DNA疫苗和亞單位疫苗仍處于研究階段,但美國(guó)PEDV RNA疫苗獲得條件性許可應(yīng)用,為PED的疫苗研發(fā)提供了廣闊的前景,對(duì)未來(lái)研制高效、安全的PED新疫苗奠定了基礎(chǔ)。

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