高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方珍珠口瘡顆粒中蒼術(shù)素含量

張立新，李 娟，周曉英

（四川省成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，四川 成都 610045）

高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方珍珠口瘡顆粒中蒼術(shù)素含量

張立新，李 娟，周曉英

（四川省成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，四川 成都 610045）

目的建立測(cè)定復(fù)方珍珠口瘡顆粒中蒼術(shù)素含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇－水（79∶21），流速為1.0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm。結(jié)果蒼術(shù)素進(jìn)樣量在18.4～277.2 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為 Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7），平均回收率為97.97%，RSD＝1.60%(n＝6)。結(jié)論該方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，可用于復(fù)方珍珠口瘡顆粒的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；復(fù)方珍珠口瘡顆粒；蒼術(shù)素；含量測(cè)定

復(fù)方珍珠口瘡顆粒是由珍珠、蒼術(shù)、五倍子、甘草4味中藥材經(jīng)粉碎提取等工藝加工制成的中藥顆粒，具有燥濕、生津、止痛的功效，常用于心脾燥熱所致口瘡，癥見(jiàn)口瘡周圍紅腫、中間凹陷、表面黃白，灼熱疼痛，口干口臭，舌紅等。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[1]，現(xiàn)收載于2015年版《中國(guó)藥典（一部）》[2]。蒼術(shù)素為蒼術(shù)的有效成分和特有成分[3]，具有抗菌、抗炎、抗病毒等多種功效[4－5]，原標(biāo)準(zhǔn)及現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)均未對(duì)蒼術(shù)素含量進(jìn)行測(cè)定。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定其中蒼術(shù)素的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200 series液相色譜儀，Agilent 1200 series DAD檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫科技公司)；Waters 2695－2487型高效液相色譜儀(Waters公司)；AE240型電子天平。

1.2 試藥

蒼術(shù)素對(duì)照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號(hào)為MUST－10090807，含量＜98%）；復(fù)方珍珠口瘡顆粒（德陽(yáng)華康藥業(yè)有限責(zé)任公司）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Diamonsil C18柱（200 mm×4.6 mm， 5 μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（79∶21）；檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；流速：1.0 mL／min；柱溫：30℃。在該色譜條件下，蒼術(shù)素與雜質(zhì)峰分離效果良好，通過(guò)二級(jí)管陣列檢測(cè)器對(duì)峰純度進(jìn)行檢測(cè)，峰純度因子在計(jì)算出的閾值限值內(nèi)，蒼術(shù)素為符合要求的純峰，保留時(shí)間適中。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備

取蒼術(shù)素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成質(zhì)量濃度為80 μg／mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品適量，研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方制成不含蒼術(shù)藥材的樣品，并按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液對(duì)蒼術(shù)素的含量測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察：精密吸取不同體積的蒼術(shù)素對(duì)照品溶液（0.009 24 mg／mL），注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7）。結(jié)果表明，蒼術(shù)素進(jìn)樣量在18.4～277.2 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液和同一供試品溶液，置陰暗處保存，分別于1，2，4，6，8，16 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD為1.5%和1.7%(n＝6)，表明對(duì)照品溶液和供試品溶液置暗處保存，在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。結(jié)果詳見(jiàn)表2。取同一對(duì)照品溶液，置日光下放置1 h后測(cè)定，分解為2個(gè)峰；放置20 h后測(cè)定，分解為6個(gè)峰。結(jié)果表明，蒼術(shù)素在光照下容易分解。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液。按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，方法重復(fù)性良好，詳見(jiàn)表3。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的樣品（批號(hào)為100715，蒼術(shù)素含量為0.196 mg／g）6份，精密加入對(duì)照品溶液（0.008 36 g／L）1＃、2＃30 mL，3＃、4＃20 mL，5＃、6＃15 mL，再精密加入甲醇至50 mL，依法制備供試品溶液。按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4 樣品含量測(cè)定

取本品3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂方法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表5。

3 討論

表1 蒼術(shù)素線性關(guān)系考察結(jié)果

表2 蒼術(shù)素穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表3 蒼術(shù)素重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

表4 蒼術(shù)素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

蒼術(shù)為復(fù)方珍珠口瘡顆粒制劑中的重要成分，蒼術(shù)中所含蒼術(shù)素為揮發(fā)性成分，主要存在于揮發(fā)油中，光照下較易分解，但在避光條件下較穩(wěn)定。參照文獻(xiàn)[6－9]，對(duì)供試品溶液的制備方法和高效液相色譜條件進(jìn)行了比較研究。

表5 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果（mg／g，n＝2）

樣品提取時(shí)間：比較了不同超聲處理時(shí)間（20，30，60 min）的影響，結(jié)果含量分別為0.193，0.198，0.197mg／g，說(shuō)明3個(gè)提取時(shí)間測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異，故選擇了提取率最高的超聲處理30 min。

提取溶劑選擇：比較了乙醇和甲醇2種溶劑的影響，甲醇提取測(cè)定結(jié)果高于乙醇提取（提取結(jié)果甲醇為0.198 mg／g，80%乙醇為0.135 mg／g）。

流動(dòng)相選擇：比較了流動(dòng)相組成比例和pH變化的影響，以甲醇－水（79∶21）、甲醇－水（84∶21）、甲醇－水（72∶28）、甲醇－0.3%磷酸（79∶21）為流動(dòng)相，均能達(dá)到理想的分離效果，故選擇甲醇－水（79∶21）。

儀器選擇：比較了不同儀器的測(cè)定結(jié)果，采用Agilent 1200 series高效液相色譜儀與 Waters 2695－2487高效液相色譜儀，蒼術(shù)素峰形均良好，測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異。

色譜柱選擇：比較了不同品牌和不同長(zhǎng)度的C18柱，采用了3根色譜柱進(jìn)行比較[Diamonsil C18柱（200 mm× 4.6 mm，5 μm），Ultimate PAH柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm），Akasil柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），結(jié)果均能達(dá)到較好的分離效果。

綜上所述，該提取方法簡(jiǎn)便，提取完全，色譜條件適應(yīng)性強(qiáng)，方法重復(fù)性好，可作為復(fù)方珍珠口瘡顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定方法。

[1]WS－091（Z－015）－2011－2011Z，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：1 235－1 236.

[3]黃瑞平，孫敏寧，潘紅玲.茅蒼術(shù)與北蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量的比較[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2015，22（4）：398－399.

[4]殷俊方，黃寶康，吳錦忠.蒼術(shù)屬藥用植物的藥理作用研究進(jìn)展[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2008，26（4）：252－254.

[5]趙子劍，肖勝男，趙永新，等.蒼術(shù)藥理作用的文獻(xiàn)再評(píng)價(jià)[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31（7）：607－609.

[6]周 軍，趙 晨，王 杰.藿香正氣不同制劑中蒼術(shù)素的含量測(cè)定[J].藥物分析雜志，2012，32（8）：1 476－1 478.

[7]翟衛(wèi)峰，尉小慧，張淑霞，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定越鞠丸提取物YJ－XCC1Z3中藁本內(nèi)酯、 －香附酮、蒼術(shù)素的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（5）：693－695.

[8]張 磊，歐陽(yáng)臻，趙 明，等.茅蒼術(shù)中蒼術(shù)酮、茅術(shù)醇、 －桉葉醇和蒼術(shù)素的同時(shí)含量測(cè)定及其聚類分析[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（6）：725－727.

[9]閔春艷，游本剛.香附、蒼術(shù)揮發(fā)油中 －香附酮和蒼術(shù)含量的同時(shí)測(cè)定[J].中國(guó)藥業(yè)，2013，22（12）：89－91.

Content Determination of Atractylodin in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules

Zhang Lixin，Li Juan，Zhou Xiaoying
(Chengdu Institute for Food＆ Drug Control，Chengdu，Sichuan，China 610045）

Objective To establish a method to determine the contentsofatractylodin in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules.Methods An HPLC method was adopted.Diamonsil C18column（200 mm×4.6 mm，5 μm）was used.The mobile phase consisted of mthanol－water（79∶21）；the flow rate was 1.0 mL／min；the wavelength of detector was 340 nm.Results The calibration curves of atractylodin showed good linearity in the range of 18.4－277.2 g.The Regression Equation was Y＝7 897.2 X－31 006（r＝0.999 7）.The average recoveries was 97.97%，RSD＝1.60%（n＝6）.Conclusion This method is accurate，simply and reproducible，and is suitable for the determination of atractylodin content in Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules.

HPLC；Fufang Zhenzhu Kouchuang Granules；atractylodin；content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2016)24－0070－03

2016－08－11)