番瀉葉的研究概況

畢海林， 肖裕章， 胡 軍,2， 宋小紅， 袁啟峰， 潘 瑤,2， 唐建華,2

(1.重慶方通動物藥業(yè)有限公司， 重慶榮昌402460； 2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)， 重慶榮昌402460)

番瀉葉的研究概況

畢海林1， 肖裕章1， 胡 軍1,2， 宋小紅1， 袁啟峰1， 潘 瑤1,2， 唐建華1,2

(1.重慶方通動物藥業(yè)有限公司， 重慶榮昌402460； 2.西南大學(xué)榮昌校區(qū)， 重慶榮昌402460)

番瀉葉為豆科植物狹葉番瀉葉尖葉番瀉葉的干燥小葉的統(tǒng)稱。狹葉番瀉葉產(chǎn)于東非洲近海及島嶼上，阿拉伯南部及印度西北部、南部；尖葉番瀉葉產(chǎn)于熱非洲尼羅河流域，現(xiàn)國內(nèi)廣東、南海、云南均已引種栽培。番瀉葉甘、苦、寒，歸大腸經(jīng)，是一種常用的瀉下藥，具有瀉熱行滯、通便、利水之功能。主治熱結(jié)積滯、便秘腹痛、水腫脹滿，人醫(yī)臨床已廣泛作為導(dǎo)瀉劑。番瀉葉主要成分為番瀉葉苷A、B、C、D，大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素和多糖等?，F(xiàn)代藥理證明：番瀉葉除瀉下作用外，還具有抗菌、止血和肌肉松弛解痙等作用，臨床上主要用于便秘、急性胰腺炎、膽結(jié)石與膽囊炎、細(xì)菌性痢疾、急性胃出血及十二指腸出血等疾病[1-2]。本文對其有效成分、有效成分提取方法及其定量分析方法和藥理作用以及臨床應(yīng)用等進(jìn)行概述。

1 有效成分

1.1 蒽醌及其衍生物類 蒽醌類化合物是番瀉葉尖葉和狹葉番瀉葉主要有效成分，尖葉番瀉葉含番瀉苷A、B、C及蘆薈大黃素-8-葡萄糖苷、大黃酸-1-葡萄糖苷、大黃酸-8-葡萄糖苷、蘆薈大黃素、大黃酸[3]。尖葉番瀉葉的根中含游離蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷等18個蒽醌衍生物，二蒽酮類衍生物是番瀉葉瀉下、止血活性成分[4-5]；狹葉番瀉葉含番瀉苷A及B(兩者互為立體異構(gòu)體)、番瀉苷C及D(兩者互為立體異構(gòu)體)、蘆薈大黃素雙蒽醌苷、大黃酸葡萄糖苷、蘆薈大黃素-8-葡萄糖苷)、大黃酸、蘆薈大黃素[6]。狹葉番瀉葉果實中含番瀉苷A、B及大黃酸、大黃酚[7]。此外，番瀉葉中尚含有大黃酸-8-雙葡萄糖苷、初級苷、大黃酸蒽醌-8-葡萄糖苷[8]。但是番瀉苷A、B、C、D是目前被研究的番瀉葉瀉下作用的最主要成分，尤其是番瀉苷A、B的瀉下作用強(qiáng)于其他含蒽醌類的瀉下作用。

1.2 其他 番瀉葉中還含有多糖和揮發(fā)油，番瀉葉多糖有抑菌、抗病毒等多種生物活性。狹葉番瀉葉中酸性多糖含量為7%，主要是由L-鼠李唐-阿拉伯糖，半乳糖及半乳糖醛酸等連接而成；干燥葉含約0.048%揮發(fā)油，包括200多種成分，主要分為：單萜，倍半萜，有機(jī)酸及酯，苯丙素類等。此外，尖葉番瀉葉還含植物甾醇及其苷類。

綜上所述，尖葉番瀉葉與狹葉番瀉葉在瀉下成分蒽醌類部分基本相同，兩者僅在黃酮類有少部分區(qū)別。因此，作為瀉下使用的尖葉番瀉葉和狹葉番瀉葉應(yīng)無明顯差異。

2 有效成分的提取方法

番瀉苷是番瀉葉瀉下作用的有效成分，其中以番瀉苷A、B為主，因此番瀉葉的提取工藝優(yōu)劣多以番瀉苷A、番瀉苷B或是番瀉苷A、B總苷提取率進(jìn)行評價，番瀉苷主要以游離的有機(jī)酸和鹽兩種形式存在，正確選擇提取溶劑種類和量可顯著提高番瀉苷的提取率。

2.1 超聲波提取法 超聲波法提取中藥有效成分是通過增大所用提取溶劑的分子運(yùn)動速度、增強(qiáng)溶劑的穿透力以提取生物有效成分，該法提取率高，提取時間短，提取溫度低等優(yōu)點，是目前中藥有效成分提取的常用方法。王文莉等[9]利用正交試驗研究超聲法提取番瀉葉中總番瀉苷工藝發(fā)現(xiàn)：在 95 ℃ 下，40 kHz超聲15 min，總番瀉苷提取率高達(dá)99.1%。強(qiáng)茂[10]等采用甲醇超聲法提取30 min，番瀉苷A濃度為0.2012 mg/mL。同年，王文莉[11]等通過試驗比較超聲提取與常規(guī)水提法總番瀉苷提取率，結(jié)果得超聲提取率高。

2.2 乙醇提取法 乙醇可溶解多種有效提取成分，常配制成一定濃度通過加熱回流、浸漬、滲漉等方法對有效成分進(jìn)行分離提取。乙醇沸點低，較水提取法可顯著降低濃縮的溫度和縮短濃縮時間，減少番瀉苷的降解，故加入一定濃度的乙醇可提高總苷的提取率。張亞東等[12]通過正交試驗篩選以乙醇為溶媒對總番瀉苷的提取工藝，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，70%乙醇回流提取3次，每次提取1 h可提取得較高濃度的番瀉苷；鄧遠(yuǎn)輝[13]試驗：用15倍量的65%乙醇，提取2次，每次提取10 min，提得總番瀉苷含量為1.28%。曹蔚[14]等以每次10倍量的50%乙醇為溶劑，室溫下浸提24 h，提取2次，提取液中番瀉苷A的濃度為1.35 mg/mL，計算提取率為91.2%。雷燕[15]等通過試驗篩選得番瀉苷B提取最佳工藝為12倍45%乙醇浸提，每次10 min。該方法無特殊設(shè)備要求，常規(guī)設(shè)備即可滿足生產(chǎn)要求，加入乙醇后縮短了提取、濃縮的時間，降低了濃縮、干燥的溫度，提高番瀉苷在提取過程中的穩(wěn)定性。

2.3 水提法 水提法是以水為介質(zhì)通過加熱回流或沸水煎煮提取有效成分，是目前最廉價的傳統(tǒng)提取方式。林觀樣[16]等以番瀉苷A浸出率為指標(biāo)比較不同浸泡方法對番瀉葉中番瀉苷A浸出率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，溫度對番瀉苷A含量影響較大，最佳提取條件為100 ℃水浸泡4次，每次30 min，平均提取率為0.52%。強(qiáng)茂[10]等取番瀉葉50 g至1 000 mL沸水浸提3次，每次20 min，測得番瀉苷A濃度為0.4426 mg/mL。張現(xiàn)濤[17]等用10倍量0.5%NaHC03溶液，90 ℃，提取2次．每次30 min，番瀉苷A、番瀉苷B的浸出率為86.2%～87.2%。該法操作簡單，成本低，濃縮時間較長，番瀉苷損耗較大。

綜上所述，提取方法的選擇應(yīng)根據(jù)所要提取的目標(biāo)物質(zhì)的理化性質(zhì)決定，番瀉苷對溫度不穩(wěn)定，提取溫度、時間過長均會顯著影響番瀉苷的含量，加入如乙醇類低沸點的介質(zhì)可顯著提高番瀉苷最后得率。目前乙醇提取法、水提取法是番瀉葉提取的常用的已投入大規(guī)模生產(chǎn)的方法，其他如超聲、微波、超臨界萃取技術(shù)等研究對于番瀉葉而言還處于實驗室階段。

3 有效成分定量分析法

番瀉葉中有效成分的方法有分光光度法、高效液相色譜法、薄層掃描法、高效毛細(xì)管電泳法等，2005版《中國藥典》采用紫外-可見分光光度法測定番瀉葉中的有效成分，但操作復(fù)雜且結(jié)果誤差大，因此2010、2015版《中國藥典》及2010版《中國獸藥典》均采用高效液相色譜法進(jìn)行測定。薄層色譜法和毛細(xì)管電泳法操作時間長，過程繁瑣，且需特定條件。目前高效液相色譜測定法廣泛應(yīng)用于番瀉葉有效成分、提取物及相關(guān)制劑的含量測定，該法操作簡單、快速、準(zhǔn)確度高。

3.1 分光光度法 分光光度法是根據(jù)被檢測物質(zhì)在特定波長的吸光度，通過對照品、吸收系數(shù)等計算被檢物質(zhì)的含量，該法所用儀器較普及，操作簡單，結(jié)果重現(xiàn)性好，但專屬性不強(qiáng)，對同一類物質(zhì)均可顯相同的正反應(yīng)。王曉林[18]等采用紫外-可見分光光度法以蘆丁為對照品在490 nm波長處來測定番瀉葉提取物總黃酮含量。鄧遠(yuǎn)輝[13]等采用紫外-可見分光光度法來測定番瀉葉中總番瀉苷含量，但發(fā)現(xiàn)番瀉苷含量易受溫度的影響。

3.2 高效液相色譜法 高效液相色譜法是一種非常成熟的檢測技術(shù)，因其操作簡單、準(zhǔn)確度和精密度高、專屬性強(qiáng)，常被寫入國家或地方質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作為質(zhì)量控制方法?！吨袊幍洹?、《中國獸藥典》《日本藥局方》中均采用高效液相色譜法測定番瀉葉中番瀉苷A、B的含量。鄔秋萍[19]等采用HPLC法測定番瀉葉中5種主要化學(xué)成分的含量，結(jié)果顯示，5種化學(xué)成分分離好，各成分線性關(guān)系良好；何偉[20]等以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液為流動相梯度洗脫直接測定番瀉葉中番瀉苷A和番瀉苷B的含量，結(jié)果可靠；王童[21]等以流動相為乙腈-5 mmol/L四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液測定番瀉葉中番瀉苷A、番瀉苷B的含量，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

綜上所述，高效液相色譜法和紫外分光光度法是目前用于番瀉葉有效成分檢測的常用方法。番瀉葉中瀉下的有效成分番瀉苷A、B為二蒽酮類，紫外-可見分光光度法只能檢測黃酮一類物質(zhì)，無法準(zhǔn)確測定番瀉苷A、B含量；高效液相色譜法可將番瀉苷A、B完好分離，故可準(zhǔn)確測定其含量。

4 藥理與臨床

番瀉葉性寒、味甘苦，歸大腸經(jīng)?，F(xiàn)代研究證明，番瀉葉除具瀉下作用外，還有抗菌、止血、松弛肌肉、抗胃黏膜損傷等藥理作用，在人醫(yī)臨床廣泛用于消化系統(tǒng)疾病的治療，但獸醫(yī)臨床使用鮮有報道。與其他導(dǎo)瀉劑相比, 番瀉葉瀉下作用較強(qiáng)、對腸黏膜無損傷作用、使用方便、價廉等特點, 已廣泛用于消化系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、外科手術(shù)腸道準(zhǔn)備和手術(shù)后腸功能恢復(fù)、產(chǎn)褥期便秘、流行性出血熱等。

4.1 瀉下作用 瀉下導(dǎo)滯是番瀉葉主要作用，已被廣泛用于便秘、腸梗阻、腸麻痹、外科手術(shù)前腸道準(zhǔn)備和手術(shù)后腸功能恢復(fù)等。番瀉葉中有效成分為蒽苷，其中番瀉苷A、B的瀉下作用強(qiáng)。番瀉苷A、B由胃和小腸吸收，在肝中分解，分解產(chǎn)物經(jīng)血行興奮骨盆神經(jīng)節(jié)以收縮大腸、刺激結(jié)腸，增強(qiáng)大腸蠕動而致瀉[22]。劉氏[23]等對38例開顱手術(shù)便秘患者研究發(fā)現(xiàn)，患者服用番瀉葉后多感到腹中胃腸蠕動增強(qiáng)、輕松有力，且藥效持續(xù)時間較長，通便的同時，還利于預(yù)防開顱后感染和上消化道出血等并發(fā)癥的發(fā)生；番瀉葉沖泡茶對治療習(xí)慣性便秘效果明顯[24]。乳酸菌素片與番瀉葉聯(lián)合治療小兒慢性便秘，優(yōu)于其他方法[25]。治療單純性腸梗阻時，在常規(guī)的禁食，胃腸減壓，糾正電解質(zhì)平衡和抗炎的同事，用番瀉葉泡服，全部梗阻解除，癥狀體征消失[26]。此外，據(jù)李俐等報道[27]，用單味番瀉葉治療因炎癥繼發(fā)的腸梗阻或腸梗阻合并腹膜炎，起效時間3～5 h。據(jù)滿維新等[28]報道，單味番瀉葉用于治療細(xì)菌性痢疾并發(fā)頑固中毒性腸麻痹，可收到滿意效果，且比新斯的明安全，并有抗菌作用；番瀉葉在外科的應(yīng)用日益廣泛，如番瀉葉浸泡劑調(diào)整腹部手術(shù)后胃腸道功能紊亂、手術(shù)前腸道準(zhǔn)備、骨折便秘、肛門疾病手術(shù)前后，放射檢查前，腸麻痹等。

4.2 抗菌作用 番瀉葉中部分羥基蒽醌類成分對多種細(xì)菌有抑制作用。金亞城[29]等經(jīng)試驗發(fā)現(xiàn)，10%番瀉葉溶出液對大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、甲型鏈球菌和白色念球菌均有明顯抑制作用。林阿素等[30]試驗研究發(fā)現(xiàn)，番瀉葉的醇提取物對葡萄珠菌、白喉桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸桿菌等多種細(xì)菌有抑制作用，但水提物僅對傷寒桿菌有效。此外，還有文獻(xiàn)報道，番瀉葉浸劑(1 ∶4)在試管內(nèi)對奧杜盎氏小芽孢癬菌和星形奴卡菌等皮膚真菌有抑制作用[31]。

4.3 止血作用 番瀉葉口服后可增加血小板和纖維蛋白原含量有助于止血，番瀉葉中的晶纖維和草酸鈣簇晶有局部止血作用。番瀉葉中分離出番瀉苷A、B、C、D經(jīng)動物試驗證明有明顯止血作用。據(jù)文獻(xiàn)報道[32]，30%番瀉葉水浸液噴于出血病灶，有立即止血作用(胃鏡觀察)。以番瀉葉苷與等體積生理鹽水分別給動物腹腔注射，行斷尾毛細(xì)血管法測定，表明番瀉葉苷具有止血作用，且高劑量組與低劑量組的止血效果幾無差別，表明小劑量即可達(dá)到止血的效果。黃漢升等[33]用番瀉葉泡服對消化道出血病人進(jìn)行治療，有效率100%(胃、十二指腸潰瘍27例，糜爛性出血性胃炎18例)，止血時間比其他止血劑快2～3倍。

4.4 肌肉松弛與解痙 番瀉葉的部分羥基蒽醌類成分有箭毒樣作用，能阻斷運(yùn)動神經(jīng)末梢和骨骼接頭處乙酰膽堿與M受體結(jié)合，從而使肌肉松弛[34]。研究發(fā)現(xiàn)，番瀉葉有利膽、松弛奧狄氏括約肌的作用，在臨床上可用于治療急性胰腺炎。據(jù)滿維新等[28]研究報道，以單味番瀉葉治療急性胰腺炎，輕者用每天開水沖服10～15 g；重者除口服外，再配合灌腸，結(jié)果全部痊愈出院，腹痛緩解平均2.1 d。

4.5 毒理作用 中藥因安全性、綠色無殘留等特點被廣泛運(yùn)用，研究發(fā)現(xiàn)，番瀉苷的小鼠LD50為1.414 g/kg，折合原生藥為36.3 g/kg，大于臨床口服治療量的300倍；據(jù)劉順良等報道，實驗動物長期服用番瀉葉及有效成分，未有致癌、致突變等顯現(xiàn)，說明有效劑量的番瀉葉是安全、有效的，且不良反應(yīng)少。大劑量不正確的使用可引起低鉀血癥，腸黏膜損傷等癥狀。有學(xué)者用番瀉葉治療102例患者，對治療前后的尿常規(guī)、肌酐、尿素氮、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、黃疸指數(shù)及心電圖等檢查，未發(fā)現(xiàn)明顯異常。

綜上所述，番瀉葉在人醫(yī)臨床已被廣泛使用和研究，但在獸醫(yī)臨床報道較少。番瀉葉除上述作用外，還可用于泌尿疾病、膽石癥和膽囊炎等疾病的治療，但目前瀉下作用被廣泛研究。番瀉葉合理劑量范圍使用是安全有效的，價格低廉適宜于動物臨床使用與推廣。

5 展望

番瀉葉有效成分提取方法很多，傳統(tǒng)常用水煎法、沸水浸泡法、醇回流等，但均存在浸出率低、浸提液體積大濃縮困難等問題。超聲技術(shù)應(yīng)用可有效解決以上問題，但實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)還是存在一些問題，故應(yīng)結(jié)合自身實際情況選擇合適的提取方法最宜；目前高效液相色譜法是番瀉葉有效成分的定量分析使用最廣泛的，伴隨高效液相技術(shù)的日趨成熟，該方法簡單、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好；番瀉葉是全世界應(yīng)用最廣泛的導(dǎo)瀉劑之一，除公認(rèn)的瀉下作用外，還具抗菌、止血、肌肉松弛與解痙以及抗胃黏膜損傷等作用。瀉下作用的機(jī)理明確，但其他作用還需進(jìn)一步研究。服用有效劑量番瀉葉及其制劑具有安全、有效和不良反應(yīng)小的特性，但其毒副作用也不可忽視，需持續(xù)研究。

番瀉葉多為進(jìn)口，國內(nèi)產(chǎn)量少，擴(kuò)大藥材來源是一個重要任務(wù)。番瀉葉在人醫(yī)臨床已被廣泛運(yùn)用研究，但是在獸醫(yī)臨床上的使用和研究鮮有報道，然而現(xiàn)代化養(yǎng)殖模式下獸醫(yī)臨床的便秘問題非常嚴(yán)重，然而番瀉葉用量小，且效果優(yōu)于鹽類、油類等常用瀉藥，因此深入研究番瀉葉及相關(guān)制劑的在動物臨床上的使用具有重要臨床意義。

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2016-08-30

2016年重慶市科技計劃項目：社會事業(yè)與民生保障科技創(chuàng)新專項(cstc2016shmszx80094)

畢海林(1989-)，男，碩士生，從事新產(chǎn)品及新獸藥研發(fā)工作，E-mail：bi0416@163.com

唐建華，E-mail：tjh1818918@163.com

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0529-6005(2017)04-0108-04