P57免疫組化結(jié)合CEP17倍體分析在葡萄胎鑒別診斷中的作用

陳永峰，薛 榮，劉 璇，陳云新，沈丹華

(1.烏魯木齊市婦幼保健院病理科，新疆 烏魯木齊 830001；2. 烏魯木齊市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，新疆 烏魯木齊 830001；3.北京大學(xué)人民醫(yī)院病理科，北京 100044)

P57免疫組化結(jié)合CEP17倍體分析在葡萄胎鑒別診斷中的作用

陳永峰1，薛 榮1，劉 璇2，陳云新3，沈丹華3

(1.烏魯木齊市婦幼保健院病理科，新疆 烏魯木齊 830001；2. 烏魯木齊市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，新疆 烏魯木齊 830001；3.北京大學(xué)人民醫(yī)院病理科，北京 100044)

目的 探討P57免疫組化結(jié)合CEP17倍體分析在葡萄胎鑒別診斷中的意義。方法 收集烏魯木齊市婦幼保健院病理科45例完全性葡萄胎，25例部分性葡萄胎及25例水腫性流產(chǎn)標(biāo)本，運(yùn)用免疫組化進(jìn)行P57檢測和FISH技術(shù)進(jìn)行CEP17的倍體檢測。進(jìn)一步分析P57免疫組化結(jié)合CEP17倍體分析在葡萄胎鑒別診斷中的意義。結(jié)果 P57蛋白在部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)組織中主要分布在絨毛的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中，陽性表達(dá)比例分別為100%(25/25)和100%(25/25)；但在絕大部分完全性葡萄胎中滋養(yǎng)細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中P57表達(dá)缺失。P57在完全性葡萄胎中的陽性表達(dá)率為4.4%(2/45)，與部分性葡萄胎(χ2=61.9，P<0.05)和水腫性流產(chǎn)比較(χ2=61.9，P<0.05)，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。FISH分析結(jié)果顯示：在水腫性流產(chǎn)中90.9%病例為CEP17二倍體(20/22)；部分葡萄胎中87.0%病例為CEP17三倍體(20/23)；在完全性葡萄胎中97.7%的病例為CEP17二倍體(42/43)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示：部分性葡萄胎三倍體的發(fā)生率明顯高于水腫性流產(chǎn)(χ2=27.3，P<0.05)及完全性葡萄胎(χ2=49.6，P<0.05)。結(jié)論 P57免疫組化結(jié)合CEP17倍體分析對完全性葡萄胎，部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)的鑒別診斷中具有重要的作用。

葡萄胎；流產(chǎn)；免疫組織化學(xué)；CEP17倍體分析

葡萄胎(hydatidiform mole, HM)按照病理學(xué)特征可以分為：完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole, CHM)和部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole, PHM)。由于完全性葡萄胎和部分性葡萄胎均有一定可能進(jìn)展為滋養(yǎng)葉細(xì)胞腫瘤，特別是完全性葡萄胎，因而在日常的病理診斷工作中有必要將CHM和PHM準(zhǔn)確的區(qū)分開。水腫性流產(chǎn)(hydropic abortuses, HA)組織病理學(xué)中表現(xiàn)為絨毛輕度水腫，但其滋養(yǎng)細(xì)胞增生不明顯。由于超聲技術(shù)的不斷發(fā)展，可以發(fā)現(xiàn)早期葡萄胎，但由于葡萄胎早期的形態(tài)學(xué)特征不典型，病理診斷區(qū)分困難，如何正確的診斷這三種妊娠性疾病類型尤為重要，同時迫切需要尋找一些特有的標(biāo)志物以輔助診斷[1]。

目前國內(nèi)外的研究證實(shí)，細(xì)胞周期抑制因子和腫瘤抑制基因P57對于完全性葡萄胎和部分性葡萄胎起到了重要的鑒別作用[2]，但仍然有少數(shù)病例P57表達(dá)不典型，難以診斷，因而仍需要開發(fā)適用于病理科檢測的方法或技術(shù)。近年來，免疫組化和FISH(fluorescence in situ hybridization)檢測技術(shù)在國內(nèi)、外的應(yīng)用已相對廣泛，國外有研究運(yùn)用P57結(jié)合HER-2(human epidermalgrowth factor receptor-2)基因檢測輔助葡萄胎的鑒別診斷，具有一定臨床意義[3]，但由于HER-2基因在完全性葡萄胎中有一定擴(kuò)增，有時會影響結(jié)果的判斷。在本研究中采用P57免疫組化聯(lián)合17號染色體FISH檢測，觀察其在葡萄胎鑒別診斷中的價值，希望能為病理診斷及臨床治療提供一些指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1臨床資料

收集新疆烏魯木齊市婦幼保健院病理科2000年至2015年間臨床及病理形態(tài)學(xué)上明確診斷的完全性葡萄胎、部分性葡萄胎、水腫性流產(chǎn)各45、25、25例，所有病理切片及相應(yīng)免疫組化均經(jīng)兩位具有經(jīng)驗(yàn)的病理學(xué)醫(yī)師復(fù)診。年齡在20～45歲之間。

1.2方法

組織標(biāo)本經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)4μm切片。常規(guī)HE及使用免疫組織化學(xué)Envision法檢測P57的表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)操作完全按照試劑盒說明書進(jìn)行，鼠抗人P57單克隆抗體購自Invitrogen公司。運(yùn)用HER2/CEP17 FISH試劑盒進(jìn)行CEP17染色體倍體檢測。PathVysion Her2/CEP17 FISH雙色探針和試劑購自美國雅培Vysis公司，并按其提供的說明書進(jìn)行操作。

1.3免疫組化和FISH結(jié)果判定

免疫組化結(jié)果由兩位主治以上的病理醫(yī)師進(jìn)行交叉雙盲判定。P57免疫組化結(jié)果判斷參照Legallo等[3]之前文獻(xiàn)中報道的方法：細(xì)胞核呈現(xiàn)明顯棕黃色著色可判讀為陽性。在一張免疫組化切片中，如果絨毛間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞著色細(xì)胞數(shù)比例>10%，即可判定為陽性；如果若絨毛間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞沒有著色或者散在著色，其著色細(xì)胞數(shù)比例<10%，則可判定為陰性。FISH判讀同樣參照Legallo的判斷標(biāo)準(zhǔn)：在熒光顯微鏡下觀察50個細(xì)胞滋養(yǎng)葉細(xì)胞及絨毛間質(zhì)細(xì)胞，如果細(xì)胞核中CEP17綠色信號超過10%出現(xiàn)3個信號，可以判斷為三倍體；同理判斷二倍體和多倍體。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有的數(shù)據(jù)均采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)分析。組間比較使用卡方分割進(jìn)行檢驗(yàn)，以P<0.05設(shè)定為差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1完全性葡萄胎、部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)的組織病理學(xué)特點(diǎn)

從組織形態(tài)學(xué)HE切片中，可以看到水腫性流產(chǎn)僅見絨毛間質(zhì)輕度水腫；部分性葡萄胎絨毛間質(zhì)輕度水腫，可見有水池和滋養(yǎng)細(xì)胞包涵體形成，同時伴有絨毛周圍滋養(yǎng)細(xì)胞的局灶性增生；完全性葡萄胎絨毛間質(zhì)水腫明顯并有水池形成，同時伴有明顯的滋養(yǎng)葉細(xì)胞增生，見圖1～圖3。

2.2 P57蛋白在完全性葡萄胎、部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)中的表達(dá)情況

從P57免疫組化結(jié)果中，可以看到部分性葡萄胎(圖1)和水腫性流產(chǎn)(圖2)的絨毛間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá)呈彌漫陽性，但在絕大部分完全性葡萄胎絨毛間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核中(圖3)表達(dá)陰性。其陽性表達(dá)情況：45例CHM中2例(4.4%)呈陽性表達(dá)；25例PHM及HA中均呈陽性表達(dá)(100%)。P57在完全性葡萄胎中的陽性表達(dá)率為4.4%(2/45)，與部分性葡萄胎(χ2=61.9，P<0.05)和水腫性流產(chǎn)比較(χ2=61.9，P<0.05)，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

Fig．1P57waspositiveforcytotrophoblastcells inHA(Envision，×200)Fig．2P57waspositiveforcytotrophoblastcellsinPHM(Envision，×200)Fig．3P57wasnegativeforcytotrophoblastcells(left)inCHM(Envision，×200)

2.3 CEP17在完全性葡萄胎、部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)中的倍體分析結(jié)果

在水腫型流產(chǎn)、部分性葡萄胎及完全性葡萄胎中分別有3例、2例及2例，由于FISH信號較弱或無信號，無法進(jìn)行評價，剔除出本研究。因而FISH分析結(jié)果顯示：在水腫性流產(chǎn)中90.9%病例為CEP17二倍體(20/22)(圖4)，9.1%的病例為CEP17三倍體，這2例CEP17三倍體的病例結(jié)合臨床將診斷結(jié)果修正為部分性葡萄胎；部分葡萄胎中87.0%病例為CEP17三倍體(20/23)(圖5)，13.0%的病例為CEP17二倍體，這3例為二倍體的病例結(jié)合臨床將診斷結(jié)果修正為水腫性流產(chǎn)；在完全性葡萄胎中97.7%的病例為CEP17二倍體(42/43)(圖6)、2.3%病例為CEP17 四倍體(1/43)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示：部分性葡萄胎三倍體的發(fā)生率明顯高于水腫性流產(chǎn)(χ2=27.3，P<0.05)及完全性葡萄胎(χ2=49.6，P<0.05)。

Fig．4CEP17(green)wasdiploidin HA(FISH，×1000) Fig．5CEP17(green)wasdiploidinPHM (FISH，×1000)Fig．6CEP17(green)wasdiploidinCHM (FISH，×1000)

3討論

目前臨床上對于完全性葡萄胎、部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)的診斷依然主要采用常規(guī)的HE染色，從各自的病理特征來鑒別，但是在妊娠前3個月病變未充分發(fā)展，形態(tài)學(xué)改變并未太明顯時，病理診斷很難區(qū)分，但三者的臨床處理及預(yù)后仍然具有一定差異，因此三者的準(zhǔn)確診斷對于臨床處理具有比較重要的影響。盡管有一些新的技術(shù)如STR的出現(xiàn)，但是由于設(shè)備和技術(shù)條件的限制，很難廣泛開展。本研究選擇病理科容易開展的P57結(jié)合CEP17倍體分析，探討其在葡萄胎鑒別診斷中的意義。

3.1 P57蛋白在HA、 PHM和CHM鑒別診斷中的作用

P57是細(xì)胞周期抑制因子和腫瘤抑制基因，是父系印跡母系表達(dá)的基因。完全性葡萄胎不含有母方的DNA，所以在大多數(shù)的完全性葡萄胎中P57不表達(dá)，然而部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)其DNA來自父母雙方，故P57呈現(xiàn)陽性表達(dá)[2]。近年來的一些研究結(jié)果都進(jìn)一步支持了P57免疫組化在鑒別完全性葡萄胎和部分性葡萄胎及水腫性流產(chǎn)中具有重要價值[4-5]。在本研究中，P57在PHM和HA中陽性表達(dá)均為100%和100%；而在CHM中表達(dá)較低，僅為4.4%，CHM中P57蛋白的陽性表達(dá)率明顯低于PHM及HA，存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，本研究結(jié)果也提示P57對于鑒別完全性葡萄胎和部分性葡萄胎及水腫性流產(chǎn)具有重要價值，但其對于部分性葡萄胎和水腫性流產(chǎn)的鑒別診斷無明顯的意義。在本研究中同時發(fā)現(xiàn)，有2例CHM仍然有大于10%的細(xì)胞P57表達(dá)陽性，Crisp 等(2003年)的研究說明，P57基因?qū)儆诓煌耆杂≯E基因，雖然主要表達(dá)在母系等位基因上，但在父系等位基因中也會有少量的表達(dá)。這在日常診斷工作中需要引起注意，不能將其診斷為PHM，如果有條件還是建議進(jìn)行倍體分析。本研究將這2例經(jīng)FISH檢測后均為二倍體，結(jié)合FISH結(jié)果支持CHM的診斷。

3.2 CEP17倍體分析在HA、PHM及CHM鑒別診斷中的作用

從葡萄胎的遺傳學(xué)特征來看，完全性葡萄胎的染色體基因組是父系來源，染色體核型為二倍體，其中90%為46,XX，其少數(shù)核型為46,XY。部分性葡萄胎核型常是三倍體80%為69,XXY，其余是69,XXX或69,XYY。根據(jù)這一原理，可以考慮運(yùn)用染色體中心粒探針進(jìn)行染色體倍體分析，從而協(xié)助部分性葡萄胎的診斷。Legallo等[3]研究提示，通過FISH技術(shù)檢測HER-2的拷貝數(shù)，間接反映染色體的倍體信息。其利用FISH和細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)，對44例CHM、PHM和HA病例進(jìn)行回顧性分析，發(fā)現(xiàn)HER-2 FISH和細(xì)胞遺傳學(xué)檢測倍體結(jié)果的符合率達(dá)到85%，并首次提出利用免疫組化P57結(jié)合HER2 FISH檢測對CHM和PHM具有鑒別診斷的作用。由于HER-2基因位于17號染色體，這一研究初步提示運(yùn)用17號染色體著絲粒探針有可能對葡萄胎的倍體分析具有重要作用。由于葡萄胎可能有HER-2基因的擴(kuò)增，相比而言，運(yùn)用CEP17進(jìn)行倍體分析結(jié)果更穩(wěn)定。本研究通過FISH方法檢測CHM、PHM和HA中細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞的倍體信息，結(jié)果顯示在水腫性流產(chǎn)中90.9%病例為CEP17二倍體(20/22)，9.1%的病例為CEP17三倍體，這2例CEP17三倍體的病例結(jié)合臨床將診斷結(jié)果修正為部分性葡萄胎；部分葡萄胎中87.0%病例為CEP17三倍體(20/23)，13.0%的病例為CEP17二倍體，這3例為二倍體的病例結(jié)合臨床將診斷結(jié)果修正為水腫性流產(chǎn)；在完全性葡萄胎中97.7%的病例為CEP17二倍體(42/43)、2.3%病例為CEP17 四倍體(1/43)，這1例四倍體可能與精子染色體的復(fù)制有關(guān)。從這一結(jié)果可以初步看出，CEP17的倍體分析對部分性葡萄胎的診斷具有很好的敏感性，一般均為三倍體；完全性葡萄胎一般均為二倍體，個別可見四倍體；對于水腫性流產(chǎn)一般均為二倍體。當(dāng)然，需要注意的是必須以組織學(xué)為前提及結(jié)合臨床，因?yàn)閷τ谝恍┤w綜合征也會出現(xiàn)CEP17三倍體，但不是葡萄胎[6]。

綜上所述，P57結(jié)合CEP17倍體分析在葡萄胎的診斷中具有重要價值。P57陰性、CEP17二倍體支持完全性葡萄胎診斷；P57陽性及CEP17三倍體支持部分性葡萄胎診斷；P57陽性及CEP17二倍體支持水腫性流產(chǎn)的診斷。對于一些形態(tài)學(xué)較難鑒別的葡萄胎，結(jié)合P57免疫組化染色及CEP17倍體分析可進(jìn)一步輔助葡萄胎的診斷，但是本研究病例數(shù)尚少，需要進(jìn)一步積累數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證。

[1]任力,侯朝暉,郭曉東,等.P57,P53,bcl-2,ki-67聯(lián)合應(yīng)用在葡萄胎診斷中的意義[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2013,13(7):1319-1322.

[2]陳云新,沈丹華,顧依群,等.P57和P53蛋白在水腫性流產(chǎn)及葡萄胎鑒別診斷中的作用[J].中華病理學(xué)雜志,2011,40(10):694-697.

[3]Legallo R D,Stelow E B,Ramirez N C,etal.Diagnosis of hydatidiform moles using p57 immunohistochemistry and HER2 fluorescent in situ hybridization[J].Am J Clin Pathol,2008,129(5):749-755.

[4]趙可,錢建忠,徐洪明.P57和P53在葡萄胎和水腫性流產(chǎn)中的表達(dá)及意義[J].中國婦幼健康研究,2013,24(6):822-823,826.

[5]Zheng X Z, Hui P, Chang B,etal.STR DNA genotyping of hydatidiform moles in South China[J].Int J Clin Exp Pathol,2014,7(8):4704-4719.

[6]鄭興征,吳秉銓,Buza N,等.輔助技術(shù)有助于葡萄胎的精確診斷及分型[J].中華病理學(xué)雜志,2015,44(1):15-20.

[專業(yè)責(zé)任編輯：張冠軍]

Application of P57 immunohistochemistry and CEP17 ploidy analysis in differential diagnosis of hydatidiform mole

CHEN Yong-feng1, XUE Rong1, LIU Xuan2, CHEN Yun-xin3, SHEN Dan-hua3

(1.Department of Pathology; 2.Center of Prenatal Diagnosis, Urumqi Maternal and Child Health Hospital,XinjiangUrumqi830001,China; 3.DepartmentofPathology,PekingUniversityPeople’sHospital,Beijing100044,China)

Objective To investigate the significance of P57 immunohistochemistry and CEP17 ploidy analysis in differential diagnosis of hydatidiform mole (HM). Methods The tissues amples, including 45 cases of complete hydatidiform mole (CHM), 25 cases of partial hydatidiform mole (PHM) and 25 cases of hydropic abortuses (HA), were collected from Urumqi Maternal and Child Health Hospital. The P57 expression and CEP17 ploidy analysis were analyzed using immunohistochemistry and fluorescence in situ hybridization FISH techniques, respectively. The significance of combining P57 immunohistochemistry and CEP17 ploidy analysis in the differential diagnosis of HM was further explored. Results P57 protein expression in PHM and HA was mainly in villous cytotrophoblast cells and stromal cells, and their rates of positive expression were 100% (25/25). But P57 expression was absent in cytotrophoblast cells and stromal cells in most CHM, and the positive expression rate was 4.4% (2/45), which was statistically different from that in PHM and HA (χ2=61.9, bothP<0.05). FISH analysis showed that CEP17 was diploid of CEP17 in 90.9% HA cases. In PHM cases, 87.0% (20/23) showed triploid of CEP17, and in CHM cases, 97.7% (42/43) showed diploid of CEP17. Statistical analysis showed that the incidence of triploid in PHM cases was significantly higher than in HA cases (χ2=27.3,P<0.05) and CHM cases (χ2=49.6,P<0.05). Conclusion The combined analysis of P57 immunohistochemistry and CEP17 ploidy plays an important role in the differential diagnosis of CHM, PHM and HA.

hydatidiform mole (HM); abortion; immunohistochemistry;CEP17 ploidy analysis

2016-09-06

烏魯木齊市科學(xué)技術(shù)局基金資助項(xiàng)目(Y141310055)

陳永峰(1973-)，男，主任醫(yī)師，主要從事婦科病理臨床研究。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.11.019

R737.33

A

1673-5293(2016)11-1353-04