止癢酊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

吳 磊,陸 超

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，江蘇 南京 210029)

止癢酊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

吳 磊,陸 超*

(南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 藥學(xué)部，江蘇 南京 210029)

目的:建立止癢酊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:首先采用薄層色譜法(TLC)，對(duì)止癢酊組方中蛇床子和薄荷腦進(jìn)行定性鑒別，然后采用高效液相色譜法測(cè)止癢酊組方中蛇床子素的含量，采用Hedera ODS-3色譜柱(250×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水(70 ∶30)，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為322 nm。結(jié)果: 蛇床子素的檢測(cè)濃度在4.33 μg/mL～138.76 μg/mL范圍內(nèi)，與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系y=86684x+55517(r2=1.0000)，平均加樣回收率為99.00%，RSD=0.56%(n=6)。結(jié)論: 所建立的方法準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于止癢酊的質(zhì)量控制。

止癢酊；薄層色譜；高效液相色譜；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

止癢酊來(lái)自江蘇省中醫(yī)院的院內(nèi)制劑，處方中包含了蛇床子、百部、薄荷腦等成分。組方中蛇床子燥濕殺蟲(chóng)止癢，與辛涼的薄荷腦合用后，用于各種瘙癢性皮膚病，蟲(chóng)蚊叮咬。本文采用薄層色譜法[1]和高效液相色譜法[2]對(duì)止癢酊進(jìn)行了定性和定量分析，以提高了止癢酊制劑質(zhì)量的可控性。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蛇床子與薄荷腦對(duì)照藥材均購(gòu)自江蘇省藥材公司；蛇床子素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110822-200305)。止癢酊(江蘇省中醫(yī)院，批號(hào)160611、141125、150601)。高效液相色譜所用試劑為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。硅膠G(青島海洋化工)；939全自動(dòng)薄層制板器(重慶市南岸貝爾德儀器技術(shù)廠)；Waters 2695 高效液相色譜儀(由Waters 515泵，2487 紫外檢測(cè)器，20 μL定量進(jìn)樣環(huán)構(gòu)成)。1/10萬(wàn)電子分析天平(BP-211D型，德國(guó)Sartorius)；KQ-1000E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；101-1A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(南通滬通制藥機(jī)械設(shè)備廠)；HH-4數(shù)顯型恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蛇床子的薄層鑒別方法 取蛇床子對(duì)照藥材2 g，加60% 乙醇30 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2 mL溶解，作為對(duì)照藥材溶液。另取止癢酊40 mL，水浴蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2 mL溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性供試品溶液。照薄層色譜法(中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，分別吸取上述3種溶液10 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3 ∶1 ∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

1.2.2 薄荷腦的薄層鑒別方法 取薄荷腦對(duì)照藥材，加無(wú)水乙醇制成5 mg/mL的溶液，作為對(duì)照藥材溶液。另取止癢酊40 mL，水浴蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL溶解，作為供試品溶液。同法制備陰性供試品溶液。照薄層色譜法(中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)—乙酸乙酯—氯仿(11 ∶1 ∶3) 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5 %香草醛濃硫酸溶液，105 ℃加熱至顯色清晰。

1.2.3 蛇床子的定量鑒別方法 色譜條件 色譜柱：Hedera ODS-3柱(250×4.6 mm，5 μm) ；流動(dòng)相：甲醇-水(70 ∶1 ∶30)；檢測(cè)波長(zhǎng)：322 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min。精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥24 h的蛇床子素對(duì)照品適量，置25 mL量瓶中，加乙醇溶解制成426.4 g/ml的對(duì)照品溶液。精密吸取止癢酊樣品溶液(160611)2 mL，置25 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液。以去掉蛇床子的止癢酊處方，按其生產(chǎn)工藝制備陰性藥液，再按“1.2.1”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。按上述色譜條件，取蛇床子素對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀中進(jìn)行干擾試驗(yàn)[3-6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 定性分析與結(jié)果

2.1.1 蛇床子的薄層鑒別 照薄層色譜法(中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性供試品無(wú)干擾。具體結(jié)果詳見(jiàn)圖1。

圖1 蛇床子薄層鑒別圖

2.1.2 薄荷腦的薄層鑒別 照薄層色譜法(中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性供試品無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖2。

圖2 薄荷腦薄層鑒別圖

2.2 定量分析和結(jié)果

2.2.1 蛇床子定量鑒別 供試品色譜圖中，在與對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的位置上，有一相同的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液色譜圖在此處無(wú)干擾(見(jiàn)圖3)。

圖3(A) 蛇床子素對(duì)照品溶液

圖3(B) 止癢酊樣品溶液

圖3(C) 陰性對(duì)照溶液

2.2.2 線性關(guān)系考察 取上述對(duì)照品溶液，用乙醇依次稀釋至69.38、34.69、17.34、8.67、4.33 μg/mL濃度的對(duì)照品溶液，分別精密吸取各不同濃度的對(duì)照品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀中測(cè)定。經(jīng)線性回歸，得蛇床子素回歸方程y=86684x+55517(r2=1.0000)，蛇床子素在4.33～138.76 μg/mL范圍內(nèi)，與峰面積的積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積的積分值計(jì)算，RSD%為0.80%。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的止癢酊溶液各2 mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制備6份樣品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積的積分值計(jì)算，RSD為1.95%。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在制備后的0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算，RSD%為0.64%，說(shuō)明該供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 加樣回收試驗(yàn) 精密吸取已知含量[7]的止癢酊樣品1 mL，置25 mL量瓶中，共6份，并分別加入蛇床子素對(duì)照品溶液，依法制備供試品溶液，精密吸取20 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，平均回收率為99.00%，RSD為0.56%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表

3 結(jié)論與討論

用HPLC法測(cè)定蛇床子素的含量，文獻(xiàn)報(bào)道有多種流動(dòng)相，比較了多種比例的甲醇-水分離效果，以甲醇-水(70 ∶30)分離效果為優(yōu)[8]，分離度、保留時(shí)間適中。

用紫外分光光度計(jì)對(duì)文中試驗(yàn)條件下蛇床子素對(duì)照品溶液作了波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)其最大吸收波長(zhǎng)在321.5 nm，在參考文獻(xiàn)[9-10]后，選用322 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

結(jié)果:蛇床子素的檢測(cè)濃度在4.33 μg/mL～138.76 μg/mL范圍內(nèi)，與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系y=86684x+55517(r2=1.0000)，平均加樣回收率為99.00%，RSD=0.56%(n=6); 結(jié)論:所建立的方法準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可用于止癢酊的質(zhì)量控制。

[1]鄭立卿，張丹參，薛貴平，等.薄層掃描法測(cè)定蛇床子提取液中蛇床子素的含量[J]．河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2008，25(2)：8-10．

[2]吳承云．郭力.董曉萍.HPLC測(cè)定寄生追風(fēng)液中獨(dú)活的有效成分蛇床子素[J]．華西藥學(xué)雜質(zhì)，2000，15(2)：l29-l30．

[3]李爽，賈媛，范玲，等．芪葵顆粒定性定量方法研究[J]．藥物分析雜志，2012，32(9)：1564-1577．

[4]姜勇，金芳，鮑忠，等．不同來(lái)源黃芪藥材中黃芪甲苷的定量分析[J]．中國(guó)中藥雜志，2006，31(11)：930-933．

[5]吳怡，鄒桂欣，王光函，等．化胃舒顆粒供試品制備方法對(duì)其黃芪甲苷含量的影響[J]．中國(guó)藥師，2014，17(1)：29-32．

[6]劉和平，彭招華，張潤(rùn)容，等．黃芪藥材中黃芪甲苷UPLC-ELSD含量測(cè)定方法的優(yōu)化[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21(5)：37-40．

[7]馬靈珍．HPLC法同時(shí)測(cè)定化痔膠囊中柚皮苷、新橙皮苷的含量[J]．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，29(5)：20-23．

[8]康?。胁菟帉?duì)熱性雞蛋鵪鶉生產(chǎn)性能及部分血液生化指標(biāo)的影響[J]．安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，28(6)：1-4．

[9]劉燦群．黃香連.HPLC法測(cè)定青柏潔身洗液中蛇床子素的含量[J]．中藥材，2004，27(5)：380．

[10]黃美蘭．王希.黃榮林.高效液相色譜法測(cè)定癬濕藥水中蛇床子素的含量[J]．廣東藥學(xué)，2003，13(3)：4．

(責(zé)任編輯：馬世堂)

Research on Quality Standard of Zhiyang Tincture

WU Lei, LU Chao*

(Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China)

Objective: To establish the quality standard for Zhiyang Tincture. Methods: TLC was first used to identify Fruetus Cnidii and Menthol to establish the HPLC method for determining the osthole in Zhiyang Tincture. It was determined on Hedera ODS-3column(250×4.6 mm，5μm)，Mobile phase：methanol-water(70 ∶30). The flowr ate was at 1.0 mL/min, and the detive wavelength was at 322 nm. Results: The calibratine curve was linear with a range of 4.33～ 138.76 μg for osthole, y=86684x+55517(r2=1.0000), the average recovery was 99.00% with RSD%0.56%(n=6). Conclusion: The methods are accurate with a good reproductivity and can be used as a quantitative analysis for preparation of the osthole in the Zhiyang Tincture.

Zhiyang Tincture; TLC ; HPLC; Quality standard

2016-06-23

江蘇省中醫(yī)藥管理局項(xiàng)目(JD201512)。

吳磊 (1983-)，男，江蘇省南京市人，碩士，主要從事中藥臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究；*通訊作者：陸超，主管中藥師，E-mail:sinkly228@126.com。

R917

A

1673-8772(2016)06-0054-04