生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)油茶離體誘導(dǎo)及增殖的影響

吳茂力；敬袁兵；張愷凱；古 勇

(四川省原子能研究院，四川 成都 610066)

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生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)油茶離體誘導(dǎo)及增殖的影響

吳茂力；敬袁兵；張愷凱；古 勇

(四川省原子能研究院，四川 成都 610066)

以油茶“渝良油A1”為外植體試驗(yàn)材料，通過(guò)正交試驗(yàn)研究外源激素對(duì)油茶莖段誘導(dǎo)及增殖的影響。結(jié)果表明：玉米素可提高油茶誘導(dǎo)率，油茶外植體誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基是1/2MS+IBA 2.5mg/L+6-BA2.5mg/L+ZT7mg/L+CH 600 mg/L；ABT-6號(hào)生根粉可促進(jìn)油茶增殖培養(yǎng)，油茶增殖培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基是1/2MS+ ABT-6號(hào)4mg/L+IBA1mg/L+ KT1mg/L。

油茶；生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑；組織培養(yǎng)；增殖

油茶(Camellia oleifera)為山茶科常綠經(jīng)濟(jì)作物，果實(shí)用于產(chǎn)油，其油質(zhì)媲美橄欖油[1]，為世界四大木本油料作物之一[2]，同時(shí)也是我國(guó)主要木本食用油料作物，食用價(jià)值、藥用價(jià)值以及工業(yè)價(jià)值極高。此外，油茶林還用于防火、保持水土、調(diào)節(jié)氣候等[3]。 由于油茶極大的綜合利用潛力，對(duì)油茶苗木的需求量增加。但油茶屬于異花授粉，有性繁殖后代性狀分離比較明顯[4]，扦插繁育效率低，需時(shí)長(zhǎng)，操作不便，難以推廣，而組培育苗具有減小個(gè)體差異，保持優(yōu)良母本的性狀的優(yōu)勢(shì)[5]。顏慕勤等研究通過(guò)胚狀體誘導(dǎo)形成了再生植株[6]。張智俊等用子葉為試驗(yàn)材料進(jìn)行誘導(dǎo)， 結(jié)果表明湘林1號(hào)用2，4-D與KT誘導(dǎo)效果較好，而湘林4號(hào)則以6-BA與IAA誘導(dǎo)效果較好[7]。聞麗等研究表明2，4-D 與6-BA 組合是誘導(dǎo)油茶花藥形成愈傷組織較好激素, 愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)42.74%[8]。丁植磊等研究表明2，4-D與NAA是誘導(dǎo)油茶花藥愈傷組織較好的激素配比[9]。目前，利用油茶組培育苗存在的問(wèn)題是防止培養(yǎng)過(guò)程中褐化、基部愈傷組織膨大、提高生根率等問(wèn)題。目前，國(guó)內(nèi)外油茶組織培養(yǎng)主要通過(guò)子葉[10-12]、花藥[8-9]等外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，然后分化形成植株，而通過(guò)莖段腋芽出芽誘導(dǎo)還少見(jiàn)報(bào)道，為此，以油茶新生芽為外植體，經(jīng)過(guò)研究建立其誘導(dǎo)及增殖體系，為油茶離體繁育技術(shù)的建立提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為重慶油茶優(yōu)良家系“渝良油A1”，試驗(yàn)材料采集于2013年5月。

1.2 外植體誘導(dǎo)

設(shè)計(jì)L16 (44)正交試驗(yàn)，采用3-吲哚基丁酸(3-indolebutyric acid，IBA)、6芐基嘌呤(6-Benzylaminopurine，6-BA)、玉米素 (zeatin，ZT) 3種植物激素對(duì)油茶愈傷組織進(jìn)行誘導(dǎo)。油茶新生外植體用濃度為3%洗衣粉水中浸泡30min，然后用清水沖洗，在超凈工作臺(tái)上無(wú)菌條件下，放入0.1%氯化汞溶液中滅菌20min,再投入70%的酒精中浸泡8s，用無(wú)菌水沖洗4～5次后，立即接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上(蔗糖25 g/L、瓊脂4g/L，PH值為5.7)，每個(gè)處理32瓶，每瓶1株，置于溫度為25±2℃的培養(yǎng)室散光培養(yǎng)5d后轉(zhuǎn)入光照強(qiáng)度為1500～2000lx，光照時(shí)間為12h/d的條件下培養(yǎng)。

1.3 增殖培養(yǎng)

設(shè)計(jì)L9 (33)正交試驗(yàn)，采用ABT-6生根粉、3-吲哚基丁酸(3-indolebutyric acid，IBA)、激動(dòng)素(kinetin，KT) 3種植物激素對(duì)油茶誘導(dǎo)成形幼芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)。誘導(dǎo)成形幼芽接種于增殖培養(yǎng)基上(蔗糖25 g/L、瓊脂4g/L，PH值為5.7)，每個(gè)處理6瓶，每瓶2株，置于溫度為25±2℃的培養(yǎng)室散光培養(yǎng)5d后轉(zhuǎn)入光照強(qiáng)度為1500～2000lx，光照時(shí)間為12h/d的條件下培養(yǎng)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均采用Excel 2007和SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，其中包括各種數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、統(tǒng)計(jì)圖的制定、方差分析、LSD多重比較等。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物激素對(duì)油茶腋芽誘導(dǎo)影響

外植體于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，每間隔35d傳代培養(yǎng)，傳3次后萌發(fā)新芽，繼代時(shí)統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率，表1結(jié)果表明油茶誘導(dǎo)率在27%～81.3%之間。ZT對(duì)油茶離體繁育影響較大，隨著玉米素濃度增高，油茶誘導(dǎo)率升高，ZT濃度為7mg/L，IBA濃度為2.5 mg/L，6BA濃度為1.5mg/L時(shí)，油茶最高誘導(dǎo)率為81.3%。誘導(dǎo)新芽經(jīng)傳代后生長(zhǎng)出2至3片新葉，再經(jīng)兩次傳代后可產(chǎn)生對(duì)生芽(圖1)。

表1 不同植物激素水平對(duì)油茶誘導(dǎo)的影響

Table 1 Effect of different plant hormone levels on induction of Camellia Oleifera

圖1 油茶誘導(dǎo)培養(yǎng)Fig1 Camellia Oleifera induce culture

注：1.油茶腋芽誘導(dǎo)出芽；2.油茶對(duì)生芽。數(shù)學(xué)數(shù)字代表不同處理。

Note：1. Lateral buds germnated from shoots of Camellia Oleifera.2. Right buds of Camellia Oleifera；Mathematical figures represented difference treatments.

2.2 外源激素對(duì)油茶莖段增殖的影響

表2表明ABT-6號(hào)生根粉及植物生長(zhǎng)素IBA能促進(jìn)油茶增殖培養(yǎng)，處理3、處理6、處理9油茶平均高度均較高，特別是與處理1、處理4、處理7相比植株明顯拔高、分節(jié)。ABT-6號(hào)生根粉對(duì)油茶增殖培養(yǎng)中產(chǎn)生的基部愈傷組織有抑制作用。

圖2結(jié)果表明，1，4，7號(hào)處理未添加ABT-6號(hào)生根粉，基部均分化愈傷組織，愈傷組織形態(tài)大、不規(guī)則、褐色，植株矮小，分節(jié)不明顯，葉片下垂，植株無(wú)活力。

表2 不同激素水平對(duì)油茶繼代苗增殖培養(yǎng)的影響

Table 2 Effect of different plant hormone levels on proliferation of Camellia Oleifera

圖2 植物激素對(duì)油茶莖段增殖的影響Fig2 Plant hormone influence shoots buds proliferation

注：數(shù)學(xué)數(shù)字代表不同處理

Note：Mathematical figures represented difference treatments.

3 討論

研究以油茶春季新出幼芽為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)，ZT濃度為7mg/L，IBA濃度為2.5mg/L，6-BA濃度為2.5 mg/L時(shí)(處理4)，誘導(dǎo)率達(dá)81.3%，高于吳正凱等研究莖段誘導(dǎo)53%[13]油茶花藥42.74%愈傷組織誘導(dǎo)率[8]，隨著ZT濃度的升高，外植體誘導(dǎo)率增加，表明ZT具有促進(jìn)油茶誘導(dǎo)作用。

油茶增殖培養(yǎng)過(guò)程中，莖段基部易產(chǎn)生較多愈傷組織是油茶組織培養(yǎng)瓶頸[14]，研究利用ABT-6生根粉作為外源調(diào)節(jié)劑，增加油茶增殖繁育高度，減小基部愈傷組織，促進(jìn)了油茶離體增殖繁育。根據(jù)結(jié)果，油茶增殖培養(yǎng)基以ABT-6濃度為4mg/L，IBA濃度為4mg/L，KT濃度為1 mg/L為最佳(處理3)。

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Effect of Plant Growth Regulator on Induction and Proliferation ofCamelliaOleiferain vitro

WU Mao-li;JING Yuan-bing;ZHANG Kai-kai; GU Yong

(SichuanInstituteofAtomicEnergy,Chengdu,Sichuan610066)

To investigate the effect of different growth regulator on Camellia Oleifera induction and shoots proliferation. “Yuliang YouA1”new buds were used as materials. The optimum combination of plant growth regulators in 1/2MS culture medium for plant regeneration was established by orthogonal test. The results revealed zeatin promoted buds induction ratio, the most effective medium was 1/2MS+2.5mg/L-1 IBA+2.5mg/L-16-BA+7 mg/L-1ZT+600 mg/L-1 CH. ABT-6 rooting powder had effective on shoots proliferation, the most effective medium was 1/2MS+4mg/L-1 ABT-6+1mg/L-1IBA+1 mg/L-1KT.

Camellia Oleifera; growth regulator; tissue culture; proliferation

2016-09-02

四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014SZ0132)

吳茂力(1977-)，男，副研究員，主要從事水稻育種與耕作研究。