云南省部分馬鈴薯產(chǎn)區(qū)晚疫病菌抗藥性測(cè)定

張利杰，劉霞，馮蕊，楊艷麗

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省植物病理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650201）

云南省部分馬鈴薯產(chǎn)區(qū)晚疫病菌抗藥性測(cè)定

張利杰，劉霞，馮蕊，楊艷麗*

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省植物病理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650201）

由致病疫霉菌（Phytophthora infestans）引起的馬鈴薯晚疫病是嚴(yán)重危害馬鈴薯生長(zhǎng)和產(chǎn)量的主要病害之一。在馬鈴薯晚疫病的化學(xué)防治過程中，幾乎所有馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)都有馬鈴薯晚疫病菌抗藥性的報(bào)道。對(duì)云南省馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)晚疫病菌抗藥性進(jìn)行檢測(cè)，明確云南省馬鈴薯產(chǎn)區(qū)晚疫病菌的抗藥性情況。通過抑菌試驗(yàn)檢測(cè)馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗性，測(cè)定來自云南省5個(gè)馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的53個(gè)菌株。結(jié)果表明，中甸、麗江、劍川、石林和小哨未發(fā)現(xiàn)對(duì)甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗性馬鈴薯晚疫病菌，上述藥劑仍可以有效防治馬鈴薯晚疫病。

馬鈴薯；晚疫病菌；抗藥性

馬鈴薯是世界第四大糧食作物，僅次于水稻、小麥和玉米。中國(guó)是一個(gè)馬鈴薯生產(chǎn)大國(guó)，其產(chǎn)量和種植面積均居世界第一位[1]。馬鈴薯晚疫病由致病疫霉菌[Phytophthora infestans（Mont.）de Bary]引起，造成的危害性、防治難度及對(duì)社會(huì)影響已超過了水稻稻瘟病和小麥銹病，被視為國(guó)際第一大作物病害[2]，中國(guó)馬鈴薯因感染晚疫病造成的經(jīng)濟(jì)損失約80億元人民幣[3]。馬鈴薯晚疫病已經(jīng)成為限制中國(guó)馬鈴薯生產(chǎn)和實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的第一大障礙。

目前，生產(chǎn)上防治馬鈴薯晚疫病主要是應(yīng)用化學(xué)防治[4-6]，主要有甲霜靈、銀法利和大生M-45等。但隨著治療性殺菌劑的廣泛使用，且其對(duì)病原菌的作用位點(diǎn)比較單一，病菌容易產(chǎn)生抗藥性[7,8]，且抗藥性逐漸增強(qiáng)，導(dǎo)致治療效果降低，甚至完全失效，因此需要更換防治馬鈴薯晚疫病的藥劑。許多國(guó)家和地區(qū)相繼報(bào)道了馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈、銀法利、大生M-45產(chǎn)生了抗藥性。在中國(guó)的河北、福建、重慶和云南等地也有類似報(bào)道[9-15]。為此，本試驗(yàn)通過測(cè)定云南省馬鈴薯部分主產(chǎn)區(qū)的晚疫病菌對(duì)甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗藥性，為馬鈴薯晚疫病化學(xué)防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試馬鈴薯晚疫病菌菌株共計(jì)53個(gè)，分別為2010年采集自中甸的10個(gè)菌株（ZD），2011年采集自劍川的16個(gè)菌株（JC）、麗江的2個(gè)菌株（LJ）、石林的6個(gè)菌株（SL）、小哨的19個(gè)菌株（XS）。

抗藥性標(biāo)準(zhǔn)菌株（PE84006）和敏感性標(biāo)準(zhǔn)菌株（Pox-67）由黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所提供。

1.2 供試藥劑

68%甲霜靈（瑞士先正達(dá)股份有限公司）、銀法利（德國(guó)拜耳作物科學(xué)公司）、大生M-45（美國(guó)羅門斯公司）。

供試培養(yǎng)基：黑麥-番茄汁培養(yǎng)基。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 黑麥-番茄汁培養(yǎng)基的制備

黑麥粒浸泡12 h后，煮沸10～15 min，冷卻后，紗布過濾并棄去殘?jiān)瑢V液與150 mL番茄汁混合，加入17 g瓊脂條，加水至1 000 mL，并混入1.2 g CaCO3，混勻后用NaOH調(diào)pH至6.5～7.0，將制備好的培養(yǎng)基裝于三角瓶中，高溫高壓滅菌30 min，倒平板培養(yǎng)基，冷卻后待用。

1.3.2 藥劑培養(yǎng)基的制備

將68%甲霜靈按使用濃度配制藥液質(zhì)量濃度為0.058 g/L。將配制好的甲霜靈供試藥按濃度和黑麥-番茄汁培養(yǎng)基混合，最終配成0.058 g/L的藥劑培養(yǎng)基。

將銀法利按使用濃度配制藥液質(zhì)量濃度為0.77 g/L。將配制好的銀法利供試藥按濃度和黑麥-番茄汁培養(yǎng)基混合，最終配成0.77 g/L的藥劑培養(yǎng)基。

將大生M-45按使用濃度配制藥液質(zhì)量濃度為1.70 g/L。將配制好的大生M-45供試藥按濃度和黑麥-番茄汁培養(yǎng)基混合，最終配成1.70 g/L的藥劑培養(yǎng)基。

1.3.3 馬鈴薯晚疫病菌的培養(yǎng)

將采集自中甸、麗江、劍川、石林、小哨的菌株，分離純化后共得到的53個(gè)菌株，抗藥性標(biāo)準(zhǔn)菌株（PE84006）和敏感性標(biāo)準(zhǔn)菌株（Pox-67），轉(zhuǎn)到固體培養(yǎng)基中，置于恒溫培養(yǎng)箱中17℃黑暗條件下培養(yǎng)10 d。

1.3.4 馬鈴薯晚疫病菌的接種

在無菌條件下，將預(yù)培養(yǎng)10 d的馬鈴薯晚疫病菌用1.2 cm的打孔器沿菌落邊緣打取菌餅，然后把菌餅接種到含有0.058 g/L甲霜靈、0.77 g/L銀法利、1.70 g/L大生M-45的藥劑培養(yǎng)基上和加入滅菌蒸餾水的培養(yǎng)基上，菌面向下置于不同藥劑培養(yǎng)基和加入滅菌蒸餾水的培養(yǎng)基的中心，每皿一塊，每個(gè)處理重復(fù)3次。將接種后的培養(yǎng)基平板放入17℃恒溫培養(yǎng)箱中，黑暗培養(yǎng)10 d左右。

1.3.5 馬鈴薯晚疫病菌的菌落直徑測(cè)量

將接種培養(yǎng)10 d的培養(yǎng)基平板在無菌條件下，采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定，用十字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 馬鈴薯晚疫病菌在含不同殺菌劑培養(yǎng)基中生長(zhǎng)狀況

供試的53個(gè)菌株在含甲霜靈的培養(yǎng)基中均不生長(zhǎng)，而在不加入藥劑的對(duì)照培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)（圖1）。供試的53個(gè)菌株在含銀法利的培養(yǎng)基中均不生長(zhǎng)，而在不加入藥劑的對(duì)照培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)（圖2）。供試的53個(gè)菌株在含大生M-45的培養(yǎng)基中均不生長(zhǎng)，而在不加入藥劑的對(duì)照培養(yǎng)基中正常生長(zhǎng)（圖3）。

2.2 馬鈴薯晚疫病菌對(duì)不同農(nóng)藥的抗性

圖1 馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈的抗性測(cè)定Figure1 Determination ofP.infestansresistance to Metalaxyl

圖2 馬鈴薯晚疫病菌對(duì)銀法利的抗性測(cè)定Figure2 Determination ofP.infestansresistance to Fluopicolide

圖3 馬鈴薯晚疫病菌對(duì)大生M-45的抗性測(cè)定Figure3 Determination ofP.infestansresistance to Ditane M-45

測(cè)定53個(gè)菌株對(duì)甲霜靈、銀法利和大生M-45的抗性，并與抗藥性標(biāo)準(zhǔn)菌株（PE84006）和敏感性標(biāo)準(zhǔn)菌株（Pox-67）進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果表明，被測(cè)53個(gè)菌株對(duì)3個(gè)藥劑均表現(xiàn)敏感，未發(fā)現(xiàn)抗性菌株。其中，采自中甸的10個(gè)菌株（ZD）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在6.63～8.43 cm，平均值為7.66 cm；劍川的16個(gè)菌株（JC）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在3.13～5.80 cm，平均值為4.70 cm；麗江的2個(gè)菌株（LJ）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在8.23 cm和8.47 cm，平均值為8.35 cm；石林的6個(gè)菌株（SL）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在7.00～8.50 cm，平均值為7.96 cm；小哨的19個(gè)菌株（XS）在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑在5.70～8.23 cm，平均值為7.10 cm；而53個(gè)菌株在含甲霜靈、銀法利和大生M-45的培養(yǎng)基中菌落直徑均為1.20 cm。PE84006在空白培養(yǎng)基的平均菌落直徑為4.47 cm，在含甲霜靈、銀法利和大生M-45的培養(yǎng)基中平均菌落直徑分別為3.50，3.60和3.30 cm；Pox-67在空白培養(yǎng)基中的菌落直徑為4.40 cm，在含甲霜靈、銀法利和大生M-45的培養(yǎng)基中平均菌落直徑均為1.20 cm（圖4）。

圖4 采自云南省5個(gè)地區(qū)的53個(gè)馬鈴薯晚疫病菌株在含甲霜靈、銀法利和大生M-45培養(yǎng)基上的菌落直徑Figure4 Colony diameter of 53 isolates ofP.infestanscollected from five areas in Yunnan Province in medium containing Metalaxyl,Fluopicolide and Ditane M-45

3 討論

該研究表明2010～2011年采集自中甸（ZD）、劍川（JC）、麗江（LJ）、石林（SL）和小哨（XS）的53個(gè)馬鈴薯晚疫病菌株對(duì)甲霜靈、銀法利、大生M-45均表現(xiàn)為敏感，這與楊志輝等[16]測(cè)定的1998～2003年采自河北、云南、四川和黑龍江馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈的敏感性是一致的，而與曹繼芬等[17]測(cè)定的2003～2005年采自云南的馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈的產(chǎn)生抗性有差異，其測(cè)定了11個(gè)地區(qū)共167個(gè)馬鈴薯晚疫病菌，甲霜靈高抗、中抗、敏感菌株分別為20.4%、7.2%和72.4%，其中采自香格里拉、麗江的菌株抗性與本試驗(yàn)一致。本試驗(yàn)測(cè)定的采自云南省5個(gè)地區(qū)的馬鈴薯晚疫病菌均未發(fā)現(xiàn)抗藥性菌株。這可能與病菌采集時(shí)間、采集地點(diǎn)有關(guān)，具體原因有待進(jìn)一步研究。

中國(guó)馬鈴薯晚疫病防治方面藥劑使用歷史較長(zhǎng)，且長(zhǎng)期大量連續(xù)使用會(huì)產(chǎn)生抗性，但本研究對(duì)采自云南省5個(gè)馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的晚疫病菌的抗藥性進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)的53個(gè)菌株均不能在含有藥劑使用濃度范圍的藥劑培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，對(duì)3種藥劑都表示敏感，沒有產(chǎn)生抗性，其頻率為100%。因此，甲霜靈、銀法利、大生M-45仍可以繼續(xù)使用。但為了不使云南省馬鈴薯晚疫病菌產(chǎn)生抗性，還是應(yīng)當(dāng)交換使用一些其他藥劑，避免抗藥性的產(chǎn)生。

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辰翔礦業(yè)有限公司

專業(yè)生產(chǎn)馬鈴薯育種-膨脹蛭石

河北靈壽縣辰翔礦業(yè)有限公司位于河北省石家莊市靈壽縣，是一家專業(yè)生產(chǎn)蛭石片、膨脹蛭石、珍珠巖的企業(yè)，已有30多年的發(fā)展歷史。辰翔公司根據(jù)馬鈴薯育種特點(diǎn)，研發(fā)了育種專用膨脹蛭石。本公司生產(chǎn)的馬鈴薯專用膨脹蛭石性價(jià)比高，已在國(guó)內(nèi)十幾家馬鈴薯育種公司應(yīng)用，并得到一致好評(píng)。本公司蛭石產(chǎn)品型號(hào)齊全，也可根據(jù)客戶需求訂制生產(chǎn)。

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Determination of Fungicide Resistance of Phytophthora infestans Collected from a Part of Potato Producing Areas in Yunnan Province

ZHANG Lijie,LIU Xia,FENG Rui,YANG Yanli*
(Key Laboratory for Plant Pathology of Yunnan Province,Yunnan Agricultural University,Kunming,Yunnan 650201,China)

Potato late blight,caused byP.infestans,is one of the main diseases which is seriously harmful to potato growth and production.Chemical is an effective means to control potato late blight,and there are reports aboutP.infestansresistant to fungicides in almost all of the main potato production areas.The purpose of this study was to detectP.infestans, which might have resistance to fungicides,in major production areas of Yunnan Province.The antibacterial test was used to test the resistance ofP.infestansto Metalaxyl,Fluopicolide and Ditane M-45.Fifty-three isolates collected from the five production areas of Zhongdian,Lijiang,Jianchuan,Shilin and Xiaoshao were tested and no isolates were found resistant to Metalaxyl, Fluopicolide and Ditane M-45.These data suggest that the fungicides tested are still effective to control potato late blight in Yunnan Province.

potato;Phytophthora infestans;fungicide resistance

S532

B

1672－3635（2016）06-0362-05

2015-03-23

云南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項(xiàng)目（2016KJTX003）；云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013ZA006）。

張利杰（1989-），男，碩士，從事馬鈴薯病害研究。

楊艷麗，教授，主要從事真菌與馬鈴薯病害研究，E-mail:843151872@qq.com。