同位素稀釋-GC-MS/MS測定植物油中鄰苯二甲酸酯

曹 慧，鄭軍科，施元旭，王璐璐

(浙江省質(zhì)量檢測科學(xué)研究院，杭州 310018)

油脂安全

同位素稀釋-GC-MS/MS測定植物油中鄰苯二甲酸酯

曹 慧，鄭軍科，施元旭，王璐璐

(浙江省質(zhì)量檢測科學(xué)研究院，杭州 310018)

采用同位素稀釋-氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(GC-MS/MS)技術(shù)同時測定植物油中16種鄰苯二甲酸酯類塑化劑。樣品用正己烷飽和的乙腈提取，經(jīng)固相萃取小柱凈化，采用GC-MS/MS測定，內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明：該方法線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)在0.99以上，檢出限和定量限分別為3.0 μg/kg 和10.0 μg/kg；添加10、50、100 μg/kg 3個水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，植物油中16種鄰苯二甲酸酯的平均回收率在82.3%～104.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.3%～10.8%。該方法靈敏度高、干擾小、定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適合植物油中鄰苯二甲酸酯類塑化劑的檢測。

同位素稀釋；鄰苯二甲酸酯類；氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜；植物油

鄰苯二甲酸酯類(PAEs)塑化劑是一類有毒的有機(jī)污染物，會干擾神經(jīng)、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)的正常調(diào)節(jié)，具有致突變、致癌和致畸性。由于與激素類似并可以模擬雌激素效應(yīng)，又被稱作環(huán)境激素。

目前，鄰苯二甲酸酯類塑化劑的測定方法主要有氣相色譜[1-3]和氣相色譜-質(zhì)譜法[4-7]、液相色譜[8-10]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[11-13]。因液相系統(tǒng)的管路本底較高，很難準(zhǔn)確定量，所以氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)是主要的檢測方法[14-16]。由于GB/T 21911—2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測定》前處理采用GPC技術(shù)，不僅前處理時間長，而且GPC管路的本底高，定量困難。因此，本實驗采用固相萃取方式對植物油樣品進(jìn)行凈化處理，縮短了前處理時間，降低了背景，并配以串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)，大大提高了靈敏度，實現(xiàn)了16種鄰苯二甲酸酯類塑化劑二級質(zhì)譜的快速、準(zhǔn)確分析。由于串聯(lián)質(zhì)譜具有較強(qiáng)的選擇性，在提高靈敏度的同時避免了假陽性的出現(xiàn)，更保證了結(jié)果的可靠性。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

16種鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)品：鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)，鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)，鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)，鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)，鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)，鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)，鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)，鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)，鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)，鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)，鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)，鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)，鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)，鄰苯二甲酸二苯酯(DPhP)，鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)，鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)，質(zhì)量濃度均為1 000 μg/mL，迪馬科技有限公司。上述16種鄰苯二甲酸酯氘代同位素內(nèi)標(biāo)，德國Dr. Ehrenstorfer GmbH公司。正己烷、丙酮、乙腈：色譜純。

ProElut PSA GLASS固相萃取小柱(1 g，6 mL)，迪馬科技有限公司。TSQ Quantum GC 氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Thermo Fisher Scientific公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：吸取液體標(biāo)樣100 μL，用正己烷稀釋定容到10 mL，配制成10 μg/mL的儲備液，密封儲存于4℃冰箱中，備用。使用時再用正己烷稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

鄰苯二甲酸酯混合標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)標(biāo)溶液的配制：分別準(zhǔn)確稱取10 mg氘代同位素內(nèi)標(biāo)于10 mL容量瓶中，用丙酮定容，配制成1 mg/mL的儲備內(nèi)標(biāo)液，密封儲存于4℃冰箱中。分別吸取1 mg/mL的儲備內(nèi)標(biāo)液50 μL，用正己烷稀釋定容到10 mL，配制成5 μg/mL的儲備內(nèi)標(biāo)液，密封儲存于4℃冰箱中，備用。

1.2.2 樣品預(yù)處理

1.2.2.1 提取

取0.5 g試樣于玻璃離心管中，加入儲備內(nèi)標(biāo)液后，加入5 mL正己烷飽和的乙腈溶液，渦旋超聲，靜置后在4 000 r/min離心5 min，將上清液轉(zhuǎn)移至潔凈的試管中，40℃下氮氣吹至近干，加入2 mL正己烷，振蕩混勻，待凈化。

1.2.2.2 凈化

固相萃取小柱依次加入5 mL丙酮和5 mL正己烷，流出液棄去，加入待凈化液，依次加入5 mL正己烷、5 mL 4%丙酮-正己烷，收集流出液，在40℃下氮氣吹至近干，1 mL正己烷定容后進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析測定。

1.2.3 氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析

參照參考文獻(xiàn)[17]對凈化樣品進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 母離子和子離子的選擇

在EI離子化模式下，通過全掃描方式找出各種目標(biāo)化合物的碎片離子，根據(jù)豐度比確定母離子。選擇子離子掃描方式，調(diào)節(jié)碰撞能量，選取碰撞后豐度較高的兩個子離子分別作為定量和定性離子，并確定其最佳碰撞能量的電壓值。表1為最終確定的母離子、子離子和碰撞能量等參數(shù)。

表1 16種鄰苯二甲酸酯的保留時間、母離子、子離子和碰撞能量

2.2 本底值的控制

由于鄰苯二甲酸酯類化合物容易產(chǎn)生污染，實驗前，將玻璃器皿用超純水淋洗多次，清洗后再將玻璃器皿放入馬弗爐中烘烤2 h，冷卻至室溫后備用。同時，實驗過程中避免使用塑料滴管、塑料試管及移液槍頭，試劑盡量使用進(jìn)口色譜純試劑。每次實驗過程中均進(jìn)行空白實驗，保證空白的本底值小于定量限。

2.3 提取溶劑的優(yōu)化

分別選擇乙腈、甲醇、正己烷、乙酸乙酯作為提取溶劑。由于正己烷和乙酸乙酯為非極性溶劑，與植物油互溶，大量溶解的油脂很難凈化處理。甲醇和乙腈為極性溶劑，與植物油不互溶，且乙腈的提取效率明顯高于甲醇，故采用乙腈作為最佳提取溶劑。由于乙腈能溶解極小部分油脂，為了減少油脂等雜質(zhì)被乙腈提取出來，本實驗采用正己烷飽和的乙腈溶液作為提取溶劑。

2.4 方法學(xué)驗證

2.4.1 線性范圍、檢出限和定量限

取質(zhì)量濃度分別為5、10、50、100、250、500、1 000 μg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測試，采用內(nèi)標(biāo)法定量，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線、相應(yīng)的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表2。

表2 16種鄰苯二甲酸酯的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

由表2可知，16種鄰苯二甲酸酯在5～1 000 μg/L的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2為0.991 4～0.999 8。分別按3倍信噪比和10倍信噪比計算得到16種鄰苯二甲酸酯化合物的檢出限和定量限，檢出限為3.0 μg/kg，定量限為10.0 μg/kg。

2.4.2 方法的回收率和精密度

在空白的植物油基質(zhì)中添加10、50、100 μg/kg 3個水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.2實驗方法進(jìn)行預(yù)處理，進(jìn)行回收率和精密度實驗，結(jié)果見表3。

表3 16種鄰苯二甲酸酯的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)

續(xù)表3

PAEs添加量/(μg/kg)回收率/%相對標(biāo)準(zhǔn)偏差/%PAEs添加量/(μg/kg)回收率/%相對標(biāo)準(zhǔn)偏差/%DBP1095．66．95093．47．810090．05．3DHXP1099．69．65095．89．210097．39．3DMEP1089．67．95095．68．210092．35．6DEHP1099．25．95099．65．810099．35．2BMPP10102．39．650104．59．5100100．98．7DPhP1089．110．35088．510．810087．410．2DEEP1082．36．35085．66．810087．67．9DNOP1090．28．45093．67．610098．58．0DPP1088．98．55089．96．910090．25．8DNP1090．28．95090．38．610095．68．1

由表3可知，植物油中16種鄰苯二甲酸酯的回收率為82.3%～104.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%～10.8%，16種鄰苯二甲酸酯的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于15%，說明該方法穩(wěn)定、可靠。

2.5 實際樣品的測試

采用本實驗方法，對實際植物油樣品進(jìn)行測試，結(jié)果顯示在3批大豆油、5批芝麻油樣品和3批花生油中均檢出鄰苯二甲酸二丁酯化合物，結(jié)果見表4。

表4 實際樣品鄰苯二甲酸酯的測試結(jié)果

3 結(jié) 論

本研究利用同位素稀釋-氣相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜技術(shù)，對植物油中的16種鄰苯二甲酸酯同時進(jìn)行分析。本方法采用的串聯(lián)質(zhì)譜選擇性強(qiáng)，有效地避免了假陽性的可能，保證了定性和定量結(jié)果的可靠性。同時，串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性反應(yīng)監(jiān)測的特點，靈敏度高，定量結(jié)果能滿足現(xiàn)有檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求。與現(xiàn)有的檢測技術(shù)相比，該方法預(yù)處理簡單，凈化效果好，回收率穩(wěn)定，一次能實現(xiàn)16種鄰苯二甲酸的快速分析，適合植物油中鄰苯二甲酸酯的分析測試。

[1] 周宜斌，周慶. 氣相色譜法快速測定白酒中鄰苯二甲酸酯殘留量[J]. 中國藥師，2013，16(9)：1362-1363.

[2] 廖艷，余煜棉，賴子尼，等. 氣相色譜法測定6種鄰苯二甲酸酯痕量組分的固相萃取條件研究[J]. 化學(xué)試劑，2010，32(3)：239-242.

[3] 戚文煒，朱培瑜，吳薇. 液液萃取/氣相色譜法測定環(huán)境水樣中鄰苯二甲酸酯類化合物[J]. 干旱環(huán)境檢測，2006，20(4)：196-198.

[4] 鄧?yán)?，郝學(xué)財. 分散固相萃取技術(shù)分析油脂類食品中塑化劑含量[J]. 分析化學(xué)，2013，41(7)：1037-1043.

[5] 苗宏健，梁棟，魯杰，等. 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定白酒中18種鄰苯二甲酸酯[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志，2014，26(3)：249-254.

[6] 石鳳瓊，柯常亮，林欽，等. 氣相色譜-質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中15種鄰苯二甲酸酯類塑化劑的殘留量[J]. 分析測試學(xué)報，2013，32(8)：915-922.

[7] 薛亮，梅雯芳. 氣相質(zhì)譜法測定食品中塑化劑DPRP和HEP[J]. 食品工業(yè)，2014，35(6)：266-269.

[8] 佟曉波，李瑩，嬌筱曼，等. HPLC法測定化妝品中十六種鄰苯二甲酸酯類化合物[J]. 香料香精化妝品，2012，6(3)：33-35.

[9] 馬燕玲，陳令新. 超聲輔助分散液液微萃取-高效液相色譜測定水樣中的4種鄰苯二甲酸酯類增塑劑[J]. 色譜，2013，31(2)：155-161.

[10] 張會軍，張敬軒，李輝，等. 凝膠滲透色譜-高效液相色譜法對辣椒醬中14種鄰苯二甲酸酯的同時檢測[J]. 食品科學(xué)，2011，32(4)：152-154.

[11] 劉紅河，黃曉群，王暉，等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食品中鄰苯二甲酸酯[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，35(1)：119-121.

[12] 李擁軍，熊文明，陳堅文，等. 固相萃取/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定羅非魚中9種鄰苯二甲酸酯[J]. 分析測試學(xué)報，2012，31(3)：278-283.

[13] 徐敦明，鄭向華，楊黎忠，等. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定飲料中鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯和鄰苯二甲酸二異壬酯[J]. 分析化學(xué)，2012，40(2)：304-308.

[14] 王力清，黃翠莉，陳洪濤，等. 食用油中鄰苯二甲酸酯類高通量檢測方法的研究[J]. 中國油脂，2012，37(6)：43-46.

[15] 陳達(dá)煒，趙曉雪，趙云峰，等. 分散固相萃取-同位素稀釋高分辨質(zhì)譜法測定植物油中16種鄰苯二甲酸酯[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2014，5(9)：2640-2648.

[16] 杜鵬程，姜童祥，鞏飚. GC-MS/MS法測定食用植物油中17種鄰苯二甲酸酯類化合物[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志，2014，24(5)：620-623.

[17] 曹慧，陳小珍，張東雷，等. QuEChERS-GC-MS/MS測定飲料中鄰苯二甲酸酯[J]. 食品研究與開發(fā)，2016，37(5)：120-123.

Determination of PAEs in vegetable oil by GC-MS/MS with isotope dilution

CAO Hui，ZHENG Junke，SHI Yuanxu，WANG Lulu

(Zhejiang Institute of Quality Inspection Science，Hangzhou 310018，China)

Sixteen phthalate esters(PAEs) were simultaneously determined in vegetable oil using gas chromatography-tandem mass spectrometry (GC-MS/MS) with isotope dilution. The samples were extracted with acetonitrile saturated byn-hexane and cleaned up with solid phase extraction column，then determined by GC-MS/MS using internal standard method for quantitative analysis. The results showed that the method had a good linear relationship with correlation coefficient above 0.99，and the detection limit and quantitation limit were 3.0 μg/kg and 10.0 μg/kg，respectively；adding PAEs mixed standard solution with three levels 10，50，100 μg/kg to vegetable oil，the mean recoveries of sixteen PAEs in vegetable oil were 82.3%-104.5%，and the relative standard deviations were 1.3%-10.8%. The method had high sensitivity，little interference and good precision，which was suitable for the determination of PAEs in vegetable oil.

isotope dilution；phthalate esters；gas chromatography-tandem mass spectrometry；vegetable oil

2016-02-26；

2016-10-27

浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督系統(tǒng)科研計劃資助(20150204)

曹 慧(1980)，女，高級工程師，博士，主要從事食品檢測和科研工作(E-mail)ch_zj_cn@163.com。

TS201.6;O657

A

1003-7969(2017)01-0080-05