豬圓環(huán)病毒3型在韓國豬群中的流行狀況調(diào)查

咸 文 梁海英等譯

豬圓環(huán)病毒3型在韓國豬群中的流行狀況調(diào)查

咸 文 梁海英等譯

豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus， PCV）是環(huán)狀病毒科圓環(huán)病毒屬的無囊膜病毒，基因組為單股環(huán)狀DNA。眾所周知，豬圓環(huán)病毒1型（PCV1）和豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）均對豬具有感染性。但是，最早被鑒定為PK-15細胞污染物的PCV1已知對豬是無致病性的，而PCV2感染則可導致諸如斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS），豬皮炎與腎病綜合征（PDNS）及種豬繁殖障礙等多種與豬圓環(huán)病毒2型相關疾?。≒CVAD），使養(yǎng)豬業(yè)遭受巨大的經(jīng)濟損失。在韓國，PCV2于1999年從具有PMWS的樣品中被首次鑒定報道，現(xiàn)已成為韓國豬群中普遍存在的病原之一。

最近，利用宏基因組學方法，在具有PDNS和繁殖障礙的臨床病例中，鑒定出一種被稱為豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）的新型豬圓環(huán)病毒。此外，PCV3在患心臟和多系統(tǒng)炎癥的病豬中也可被檢測到。盡管對PCV3的關注越來越多，但目前在韓國對這種病毒的分布情況知之甚少。本研究擬對收集的口腔液樣品進行PCR檢測，以確定PCV3在韓國的流行現(xiàn)狀和遺傳特征。

2016年，實驗共隨機收集了源自6個地理省份的73個不同養(yǎng)殖規(guī)模（200～500頭母豬）的自繁自養(yǎng)豬場的共360管口腔液樣本（1管樣本約來自20頭豬），每個采樣豬場的臨床病史和疾病狀況未做調(diào)查。樣本被分為4組，即斷奶組（67/360），生長組（136/360），成年組（124/360）和病豬組（33/360）。所有樣品分別以3 000r/min離心10min處理后，取上清液分裝保存于-80℃?zhèn)溆?。使用DNA提取試劑盒，分別提取-80℃保存?zhèn)溆玫目谇灰簶悠分械牟《綝NA。

利用針對PCV3 ORF2的特異性引物，對提取的DNA進行PCR檢測，預擴增大小為330bp（Palinski et al.， 2017）。檢測結(jié)果顯示，在360管口腔液樣本中，159個樣本呈現(xiàn)PCV3病毒DNA陽性（44.2%），72.6%（53/73）的豬場中存在PCV3病毒DNA，廣泛分布于韓國各省。四組中患病率最高的為病豬組，比例為51.5%；生長組（42.6%）和成年組（41.1%）明顯低于斷奶組（49.3%）。

從9個不同豬場中選出PCV3強陽性樣本，分別使用兩對PCV3特異性引物進行擴增，共獲得了9個毒株（KU毒株）的全長基因組（GenBank登錄號KY996337～KY996345），大小與其他PCV3毒株相同均為2 000bp，推導的ORF2大小均為645bp。序列分析結(jié)果表明，PCV3韓國毒株與美國毒株全基因序列相似性為98.9%～99.8%，推導的ORF2的序列相似性為97.9%～99.8%；PCV3韓國毒株之間的全基因序列相似性為99.0%～99.9%，ORF2的序列相似性為98.1%～100%；PCV3韓國毒株與美國毒株的Cap蛋白氨基酸序列相似性均為97.6%～100%。

系統(tǒng)發(fā)育分析顯示，韓國PCV3病毒與美國和中國PCV3病毒株密切相關。在這兩個系統(tǒng)發(fā)育中，韓國PCV3毒株是分散的，沒有任何基于國家的地理關聯(lián)。

PCV3是最近在豬場中出現(xiàn)的一種豬的新型病毒，其感染的豬表現(xiàn)出PDNS和繁殖障礙等臨床癥狀；尤其是經(jīng)過宏基因組測序顯示，只有PCV3能從流產(chǎn)胎兒中被檢測出來（Phan et al.，2016；Palinski et al.，2017）。 在韓國也出現(xiàn)了類似情況，即從發(fā)生繁殖障礙的豬場中獲得的流產(chǎn)胎兒，經(jīng)檢測僅從樣本中發(fā)現(xiàn)有PCV3，卻未檢測到任何與流產(chǎn)相關的其他病原體。

據(jù)報道，在中國PCV3也是在繁殖障礙豬群及新生仔豬急性死亡中唯一能檢測到的病原體（Ku et al，2017）。這些報道表明，PCV3與繁殖障礙之間可能存在關系。雖然尚未在豬細胞系中分離獲得PCV3（Palinski et al，2017），但通過建立一個能在體外分離獲得病毒的體系來研究PCV3的發(fā)病機理，不失為一個新的研究方向。

本研究擴大了對PCV3分布和遺傳特征的認識，PCV3在韓國豬群中廣泛分布，病豬群樣本檢出率最高。在韓國，PCV3在豬群和豬場的陽性檢出率，明顯高于此前中國豬群（34.7%，77/222）和豬場（68.6%，24/35）的流行病學調(diào)查結(jié)果（Ku et al，2017），這可能與口腔液樣品采集方法更具廣泛性有關，其是評估豬群健康狀況的有效方法。

遺傳進化分析表明，PCV3毒株間的基因組成高度相似，然而也發(fā)現(xiàn)了較小的遺傳多樣性。由于PCV2疫苗效果在一定程度上體現(xiàn)了PCV2的臨床意義，雖然PCV3的臨床意義尚未明確，但還需通過各種方法進行臨床觀察及實驗研究，以確定PCV3與臨床表現(xiàn)之間的關聯(lián)。

摘自《豬業(yè)科學》2017年第10期