萬(wàn)山區(qū)牛傳染性胸膜肺炎的流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告

張倩倩 田貴剛

（貴州省銅仁市萬(wàn)山區(qū)農(nóng)牧科技局，貴州萬(wàn)山554300）

萬(wàn)山區(qū)牛傳染性胸膜肺炎的流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告

張倩倩 田貴剛

（貴州省銅仁市萬(wàn)山區(qū)農(nóng)牧科技局，貴州萬(wàn)山554300）

為了掌握本地黃牛傳染性胸膜肺炎的流行狀況，提供有效防控措施。萬(wàn)山區(qū)歷時(shí)3個(gè)月對(duì)全區(qū)存欄黃牛按0.5%的比例采樣，并采用微量凝集試驗(yàn)篩選和病原分離培養(yǎng)的方式進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)檢測(cè)結(jié)果顯示，血清學(xué)檢出陽(yáng)性率為0.01%，病原檢測(cè)陽(yáng)性率為0%?？梢姳镜貐^(qū)黃牛暫無(wú)傳染性胸膜肺炎病的發(fā)生與流行。

黃牛 胸膜肺炎 調(diào)查

牛傳染性胸膜肺炎又也稱牛肺疫，是由絲狀支原體引起的一種高度接觸性傳染性肺炎。牛支原體是一種多系統(tǒng)炎癥的致病性病原體，各種牛均易感染，發(fā)病率60%以上，死亡率30%～50%。病牛和帶菌牛是本病的主要傳染來(lái)源；傳播途徑主要以呼吸道感染，也可經(jīng)消化道或生殖道感染。而牛傳染性胸膜肺炎是以肺間質(zhì)淋巴管、結(jié)締組織和肺泡組織的滲出性炎癥及漿液性纖維素性胸膜肺炎為主要特征[1]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將本病列為A類法定傳染病，我國(guó)將其列為一類傳染病。本病幾乎在所有養(yǎng)牛的國(guó)家都曾有發(fā)生，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成巨大威脅。

1 材料和方法

1.1 樣品來(lái)源

全區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧站對(duì)本轄區(qū)內(nèi)存欄牛按0.5%比例采集血清，共采集牛血清125份，并送區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，本地區(qū)未進(jìn)行牛傳染性胸膜肺炎的疫苗的注射。對(duì)凝集反應(yīng)陽(yáng)性的個(gè)體牛，從活體無(wú)菌采集鼻拭子和鼻分泌物，并在第7肋和第8肋之間下半部無(wú)菌穿刺采集胸水。待檢樣品-20℃保存。

1.2 主要儀器及試劑

主要儀器：純水儀、離心機(jī)、移液器、微量板、水浴鍋、智能生物培養(yǎng)箱等；主要試劑：抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和陰性血清，配制適宜支原體生長(zhǎng)的培養(yǎng)基所需的系列試劑。

2 檢測(cè)方法

采用血清學(xué)與病原學(xué)相結(jié)合的方式進(jìn)行檢測(cè)，即用微量凝集試驗(yàn)進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，對(duì)微量凝集試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性反應(yīng)的個(gè)體再采樣進(jìn)行病原培養(yǎng)[2]。具體操作嚴(yán)格按照檢測(cè)規(guī)范進(jìn)行。

2.1 血清學(xué)檢測(cè)

2.1.1 操作方法

被檢血清，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清用滅菌生理鹽水作1：4比例稀釋，經(jīng)56℃～58 ℃水浴鍋滅能30min。抗原用滅菌生理鹽水作1：8比例稀釋。用微量加樣器吸取被檢血清25μl，加入微量板的一個(gè)孔中。再加抗原25μl于同一孔內(nèi)，每份被檢血清用一個(gè)孔。每板設(shè)陰、陽(yáng)性血清和空白對(duì)照。輕輕搖動(dòng)反應(yīng)板混勻，放室溫暗處或4℃～8℃冰箱內(nèi)靜置5～20h。

2.1.2 判定標(biāo)準(zhǔn)

凝集程度：“++++”為100%凝集；“+++”為75%凝集；“++”為50%凝集；“+”為25%凝集；“-”為不凝集。

2.1.3 判定方法

判定前輕輕振動(dòng)反應(yīng)板，再靜置3-5min 即行判定。判定時(shí)用8 w日光燈照明，手持反應(yīng)板，借助側(cè)光在黑色背景上判定。受檢血清出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的需重復(fù)試驗(yàn)1次，如2次結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)再?gòu)?fù)試1次，以2次以上試驗(yàn)結(jié)果一致時(shí)為準(zhǔn)。在陰、陽(yáng)性血清和生理鹽水對(duì)照正確情況下，被檢血清出現(xiàn)“ ++” 以上凝集的判為陽(yáng)性；“+”和“-”為陰性反應(yīng)。

2.2 病原學(xué)檢測(cè)

2.2.1 樣品準(zhǔn)備

根據(jù)上述血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果，對(duì)5頭凝集反應(yīng)陽(yáng)性的牛從活體無(wú)菌采集鼻拭子、鼻分泌物和胸水。樣品采集送實(shí)驗(yàn)室時(shí)用運(yùn)輸培養(yǎng)基：其成分包括：不含蛋白胨和葡萄糖的心浸液，10%的酵母浸膏，20%馬血清，0.3%瓊脂，500IU/m1青霉素和醋酸鉈（濃度1：7000）。樣品低溫保存。

2.2.2 病原培養(yǎng)

培養(yǎng)MmmSC需要適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基。該微生物不穩(wěn)定，含量少且生長(zhǎng)又有特殊需要。該培養(yǎng)基須含有一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基（例如心浸液或蛋白胨），新鮮的優(yōu)質(zhì)酵母浸膏以及10%的馬血清，另外還須加入葡萄糖、甘油、DNA、脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)成分，為防止其他雜菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)基加青霉素抑制劑，同時(shí)在培養(yǎng)基中加入1.0%～2.0%瓊脂制成固體培養(yǎng)基。把樣品編號(hào)后直接接種。37℃恒溫培養(yǎng)，連續(xù)觀察10d。在瓊脂平板上未見小的中心致密的“煎蛋”樣典型菌落。

3 檢測(cè)結(jié)果

采用凝集反應(yīng)方法對(duì)125份血清樣品進(jìn)行牛傳染性胸膜肺炎抗體檢測(cè)，其檢測(cè)陽(yáng)性數(shù)5份、陽(yáng)性率0.01%，但這5頭牛并無(wú)相關(guān)的臨床癥狀；再對(duì)抗體檢測(cè)陽(yáng)性的5頭牛從活體無(wú)菌采集鼻拭子、鼻分泌物和胸水進(jìn)行病原培養(yǎng)，未發(fā)現(xiàn)病原的典型菌落?？梢姳緟^(qū)暫無(wú)牛傳染性胸膜肺炎的發(fā)生與流行。

4 小結(jié)

（1）用于凝集反應(yīng)檢測(cè)的血清樣品沒(méi)有注射過(guò)相應(yīng)疫苗，且血清要新鮮、無(wú)污染、無(wú)溶血，否則容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。被檢樣品應(yīng)該高速離心后取上清液進(jìn)行檢測(cè)，可減少假陽(yáng)性的發(fā)生。

（2）本地未進(jìn)行牛傳染性胸膜肺炎的疫苗免疫，經(jīng)過(guò)對(duì)全區(qū)的存欄牛按照一定比例采集樣品并進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，檢出5頭牛發(fā)生陽(yáng)性反應(yīng)，但這些牛并沒(méi)有相應(yīng)的臨床癥狀，也沒(méi)有分離到絲狀的支原體，從而證實(shí)本區(qū)沒(méi)有牛傳染性胸膜肺炎的存在。

（3）我國(guó)對(duì)于牛傳染性胸膜肺炎方面的研究并不普遍，問(wèn)題依舊存在，防控形勢(shì)仍然嚴(yán)峻，因此，對(duì)于牛傳染性胸膜肺炎的防控仍需警惕，盡量避免此類疫病的發(fā)生和流行，確保養(yǎng)牛業(yè)的穩(wěn)步健康發(fā)展和食品衛(wèi)生安全。

[1]鐘銀祥.引調(diào)牛發(fā)生傳染性胸膜肺炎的診治[J].畜牧市場(chǎng)，2010，（12）：23.

[2]辛九慶，高玉龍，李媛，等應(yīng)用重組抗原建立檢測(cè)牛傳染性胸膜肺炎的間接ELISA方法[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，39（1）：181-186.

張倩倩，女，土家族，工作單位：萬(wàn)山區(qū)農(nóng)牧科技局；職務(wù)：助理獸醫(yī)師。