Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌中的表達及臨床意義

張舸 薛雷 趙曉龍 杜海榮

(秦皇島市第一醫(yī)院胸外科，河北 秦皇島 066000)

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Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌中的表達及臨床意義

張舸 薛雷 趙曉龍 杜海榮

(秦皇島市第一醫(yī)院胸外科，河北 秦皇島 066000)

目的 通過免疫組化法實驗觀察Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌中的表達，探討其在表達的意義及其與臨床特點的相關(guān)性。方法 采用S-P免疫組化法檢測160例有完整資料的非小細(xì)胞肺癌術(shù)后腫瘤標(biāo)本和100例距離腫瘤5 cm以上的正常肺組織中Foxp3蛋白的表達情況。分析Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌組織中的表達差異；分析其與不同病理類型原發(fā)腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征相關(guān)性。并且通過Kaplan-Meier生存曲線法比較陽性組和陰性組患者的預(yù)后情況。結(jié)果 在非小細(xì)胞肺癌中Foxp3陽性表達率為51.8%顯著高于癌旁組織中的37.0%；Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌組織中的陽性表達與腫瘤的原發(fā)腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有顯著的相關(guān)性(P<0.05)。 Kaplan-Meier生存曲線分析顯示患者術(shù)后5年無瘤生存率隨Foxp3陽性表達呈現(xiàn)下降趨勢。結(jié)論 Foxp3在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達明顯增加，提示 Foxp3表達增加促使肺癌細(xì)胞發(fā)生腫瘤逃逸、對促進肺癌的形成發(fā)揮重要作用。Foxp3陽性表達5年無瘤生存率低。

Foxp3； 老年非小細(xì)胞肺癌； 早期肺癌； 預(yù)后

隨著老齡人口比例逐漸增加，呼吸系統(tǒng)疾病也相應(yīng)增多，約1/3的非小細(xì)胞癌發(fā)生于65歲以上的老年人群中。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)為免疫抑制中重要的T細(xì)胞亞群之一。叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子3(Foxp3)是Treg細(xì)胞中目前明確的標(biāo)志性轉(zhuǎn)錄因子，其功能包括促進Treg發(fā)育以及幫助Treg發(fā)揮免疫抑制作用[1]。Treg細(xì)胞在自身免疫反應(yīng)中具有抑制免疫性炎癥損害的中藥作用，而Treg在腫瘤免疫中被發(fā)現(xiàn)能對機體抗腫瘤免疫應(yīng)答機制起到阻礙作用，幫助腫瘤在機體發(fā)展。本文通過免疫組化法檢測并分析Foxp3在老年Ⅰ/Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌中的表達與病理特征及腫瘤預(yù)后的相關(guān)性，探討其在癌組織中的增殖活性，為評估老年非小細(xì)胞癌的生物學(xué)行為，預(yù)后以及直到術(shù)后治療方案的選擇提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 一般資料 患者標(biāo)本均來自2006年1月至2010年1月期間秦皇島市第一醫(yī)院病理科，實驗組均為非小細(xì)胞癌石蠟標(biāo)本，共收集160例，對照組為腫瘤5 cm以外的正常肺組織，共收集100例。實驗組標(biāo)本中，來自男性96例，女性64例，年齡65～78歲，中位年齡69歲，平均年齡(71.15±15.75)歲，患者資料顯示術(shù)前均未接受放、化療。按照WHO肺癌分型及UICC(2014年)肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)判斷，有腺癌標(biāo)本97例，鱗癌標(biāo)本63例；Ⅰ期標(biāo)本70例，Ⅱ期標(biāo)本90例。

1.2 材料 標(biāo)本均來源我院病理科，F(xiàn)oxp3兔抗人單克隆抗體(美國e Bioscience)，S-P超敏免疫組織化學(xué)試劑盒(福州邁新生物技術(shù)公司)和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒(福州邁新生物技術(shù)公司)，倒置顯微鏡(Olympus，日本)。

1.3 方法 對實驗組患者進行電話隨訪，均獲得較完整符合研究進行的資料。本研究中復(fù)發(fā)患者定義為手術(shù)日至出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移日，無復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者為手術(shù)日至隨訪當(dāng)日(具體記錄形式為2015年1月)；總生存期(OS)為：死亡患者為手術(shù)日至死亡日，未死亡患者為手術(shù)日至隨訪日(具體記錄形式為2015年1月)。所有隨訪結(jié)束后，160例中隨訪137例(85.6%)，失訪(14.3%)，存活89例，復(fù)發(fā)53例。FoxP3的表達采用免疫組化S-P法。

1.4 結(jié)果判定 Foxp3的陽性染色標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核著色，鏡下可見細(xì)胞核表達棕黃色或棕褐色顆粒物。在顯微鏡高倍鏡下隨機10個視野，共100×10個腫瘤細(xì)胞。根據(jù)染色程度和染色細(xì)胞比例綜合評分：染色情況0分，基本不著色為：1分，淡棕色；2分，較明顯棕黃色或棕褐色；3分，深棕黃色或棕褐色；著色比例：0分，計數(shù)細(xì)胞中顯色細(xì)胞比例≤5%；1分，6%～25%；2分，26%～50%；3分，>50%。將每個視野著色程度和比例相乘，計算每個標(biāo)本情歌視野平均得分：1分，陰性(-)；2～3分，著色(+)；4～6分，著色(++)；>6分，著色(+++)。本研究中陰性表達為(-)和(+)，陽性表達為(++)和(+++)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理方法 應(yīng)用 SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用率表示，不同組間比較χ2檢驗，生存率的組間比較采用Kaplan-Meier生存曲線法及Log-rank檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果 Foxp3在癌旁正常肺組織中陽性表達為37.0%(37/100)；在非小細(xì)胞肺癌組織中其性表達率是51.8%(83/160)，陽性著色部位均為細(xì)胞核，F(xiàn)oxp3蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織和癌旁正常肺組織中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 組織表達與臨床病理特征關(guān)系 老年Ⅰ/Ⅱ期非小細(xì)胞肺癌組織中Foxp3表達與臨床分期，分化程度及家族史均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。與原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及無瘤生存時間均具有相關(guān)性(P<0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)(r=0.423，P=0.000) ，見表1。

表1 非小細(xì)胞肺癌中Foxp3的表達與病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 組織中表達與術(shù)后5年無瘤生存的關(guān)系 對160例患者進行Kaplan-Meier生存曲線分析，本組患者有23例失訪，2例術(shù)后出現(xiàn)意外死亡，結(jié)果顯示在非小細(xì)胞肺癌組織中Foxp3表達(-)組5年無瘤生存率為41.7%；Foxp3表達(+)組患者5年無瘤生存率為26.3%，陰性組中位無瘤生存時間為38個月，陽性組中位無瘤生存時間為28個月，提示患者術(shù)后無瘤生存期隨Foxp3的陽性表達顯著下降，Log-rank檢驗結(jié)果顯示兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.160，P=0.007)。結(jié)果顯示在非小細(xì)胞肺癌組織中Foxp3表達(-)組總生存率為71.4%；Foxp3表達(+)組患者總生存率為48.7%，陰性組中位總生存時間未達及，原因考慮為樣本量較小，及隨訪時間較短造成，陽性組中位總生存時間為35個月，提示患者術(shù)后總生存期隨Foxp3的陽性表達顯著下降，Log-rank檢驗結(jié)果顯示兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.594，P=0.006)。

3 討 論

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占肺癌的80%～85%。既使患者的臨床分期相同，術(shù)后生存率也不一樣，說明有影響NSCLC預(yù)后的其他因素，需要通過研究找到判斷、預(yù)示NSCLC發(fā)生、發(fā)展的新標(biāo)志物。Foxp3屬于脊椎動物叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子家族，人類Foxp3基因定位在Xp11.23，有11個外顯子和10個內(nèi)含子，cDNA長度1869 bp，可編碼2類mRNA亞型，包括全長和缺少第3外顯子(Δ3亞型)型[2]。同時，編碼中可產(chǎn)生Scurfin蛋白，其含有431個氨基酸，N端為一個鋅指結(jié)構(gòu)和亮氨酸拉鏈，為轉(zhuǎn)錄抑制區(qū)域，C端為叉頭螺旋樣結(jié)構(gòu)。Scurfin蛋白經(jīng)Rorkhead區(qū)域同DNA結(jié)合，發(fā)揮基因活化和表達作用[3]。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3在癌旁正常肺組織中陽性表達為17.5%(7/40)；在非小細(xì)胞肺癌組織中其性表達率是51.8%(83/160)，經(jīng)統(tǒng)計分析其在非小細(xì)胞肺癌組織中的陽性表達明顯高于癌旁正常肺組織。Foxp3不僅在肺癌中過表達，其在胃癌、宮頸癌、淋巴瘤等多種惡性腫瘤組織及轉(zhuǎn)移灶中過表達[4-5]。

Foxp3在乳腺癌新輔助化療有效率評估發(fā)面，是獨立影響因素，因化療在降低Treg細(xì)胞水平同時抑制Foxp3 mRNA表達，達到腫瘤治療的目的。F.Liu等[6]發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中對化療敏感性高的患者體內(nèi)可測得陽性Foxp3，可見Foxp3在乳腺癌患者中的表達可預(yù)測化療敏感性，幫助乳腺癌患者制定有效治療方案。以上研究證明，F(xiàn)oxp3對乳腺癌的治療方案選擇有指導(dǎo)意義，但它是否對其他腫瘤的治療方案的選擇同樣有指導(dǎo)意義。有學(xué)者[7]通過對肺癌患者外周血Foxp3的測定，研究其在化療前后的變化，發(fā)現(xiàn)，化療后CD4+Foxp3+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例較化療前顯著降低。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3陽性組的5年無瘤生存率及總生存率均較陰性組顯著降低，并且其陽性表達與原發(fā)腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及無瘤生存時間均具有相關(guān)性，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成正相關(guān)，表明Foxp3陽性率越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多，發(fā)生遠端轉(zhuǎn)移的幾率越大。

[1] Kryczek I, Liu R, Wang G, et al. Foxp3 defines regulatory T cells in human tumor and autoimmune disease [J]. Cancer Res, 2009, 69 (9):3995-4000.

[2] 陸威,李永翔,張尚鑫,等. 胃癌患者外周血及癌組織中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達及臨床意義 [J] 安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,48(7):790-793.

[3] Mahmoud SM, Paish EC, Powe DG, et al. An evaluation of the clinical significance of Foxp3+infiltrating cells in human breast cancer [J]. Breast Cancer Res Treat, 2012, 127(1):99-108.

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