銀川市動(dòng)物免疫抗體監(jiān)測(cè)工作幾點(diǎn)思考

馬偉林

（銀川市金鳳區(qū)良田畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏銀川 750019）

銀川市動(dòng)物免疫抗體監(jiān)測(cè)工作幾點(diǎn)思考

馬偉林

（銀川市金鳳區(qū)良田畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏銀川 750019）

動(dòng)物免疫抗體水平檢測(cè)是對(duì)某一區(qū)域內(nèi)動(dòng)物免疫效果進(jìn)行檢驗(yàn)的一項(xiàng)重要的技術(shù)手段，可以及時(shí)、準(zhǔn)確地掌握該區(qū)域內(nèi)動(dòng)物免疫抗體的整體水平，是動(dòng)物疫病防控工作的重要基礎(chǔ)，也是動(dòng)物疫情流行病學(xué)調(diào)查和疫情分析評(píng)判的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，可為制定科學(xué)的免疫程序、考核免疫質(zhì)量、綜合分析動(dòng)物疫情發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)及應(yīng)采取的防控措施提供理論依據(jù)。自2006年以來(lái)，全國(guó)所有省、市、自治區(qū)均采用此項(xiàng)技術(shù)考核動(dòng)物免疫質(zhì)量，寧夏回族自治區(qū)也不例外，但由于抗體水平檢測(cè)工作程序多、過(guò)程長(zhǎng)，其檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到很多因素的影響，往往與真實(shí)水平還存在著一定的差異。筆者作為鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站的負(fù)責(zé)人在工作中對(duì)各種影響因素進(jìn)行了分析，并提出了相應(yīng)的措施，供相關(guān)人員參考。

1 免疫因素

1.1 動(dòng)物自身因素

動(dòng)物的遺傳因素、營(yíng)養(yǎng)狀況、母源抗體的干擾和免疫抑制疾病等因素將直接影響到動(dòng)物免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱。機(jī)體對(duì)接種的免疫應(yīng)答在一定程度上是受遺傳控制的，因此不同品種甚至同一品種不同個(gè)體的動(dòng)物，對(duì)同一種抗原的免疫反應(yīng)強(qiáng)弱也有差別。有的動(dòng)物個(gè)體甚至有先天免疫缺陷，從而導(dǎo)致免疫失敗。動(dòng)物維生素及氨基酸的缺乏都會(huì)使機(jī)體的免疫功能下降；種畜禽個(gè)體免疫應(yīng)答的差異以及不同批次動(dòng)物來(lái)自不同的種畜禽等原因，造成新生幼畜和雛禽母源抗體水平參差不齊，若母體抗原水平過(guò)高，反而干擾了后天免疫，不能產(chǎn)生應(yīng)有的免疫應(yīng)答；有些疾病嚴(yán)重影響疫苗的免疫效果，引起免疫抑制，從而影響疫苗的免疫效果。環(huán)境衛(wèi)生狀況不良，圈舍及周圍環(huán)境中存在大量的病原微生物，在使用疫苗期間動(dòng)物已受到病原的感染，這些都會(huì)影響疫苗免疫的效果，從而影響到了動(dòng)物免疫抗體的檢測(cè)結(jié)果。銀川市金鳳區(qū)南部主要是原郊區(qū)農(nóng)民和涇源縣移民，其飼養(yǎng)技術(shù)水平、圈舍環(huán)境衛(wèi)生都大不相同，這些因素都會(huì)影響監(jiān)測(cè)結(jié)果。

1.2 疫苗方面

疫苗質(zhì)量、疫苗的保存和運(yùn)送、疫苗的使用是免疫成敗的關(guān)鍵因素。應(yīng)從正規(guī)生產(chǎn)單位購(gòu)買疫苗，保證疫苗效價(jià)和抗原含量以及疫苗的正常形狀等，正確保存和運(yùn)輸疫苗，確保疫苗質(zhì)量和免疫效果。要嚴(yán)格按照疫苗的使用說(shuō)明使用疫苗，嚴(yán)格遵守免疫操作規(guī)程，確保免疫效果，盡量避免疫苗聯(lián)合使用，以防止兩種疫苗間的互相干擾，影響抗體的產(chǎn)生，二者要間隔1周以上接種。同時(shí)根據(jù)當(dāng)?shù)匾卟×餍星闆r和本場(chǎng)實(shí)際而制定合理免疫程序，以保證免疫效果。動(dòng)物防疫員在工作中對(duì)疫苗的冷鏈保存也有差別，負(fù)責(zé)任的冷藏包里加些冰塊，不負(fù)責(zé)的則什么措施都沒(méi)有，轉(zhuǎn)一天下來(lái)，疫苗早已失去效價(jià)，那還有什么抗體水平。近幾年口蹄疫、禽流感疫苗都制成三價(jià)疫苗，即O型口蹄疫 、A型口蹄疫、亞洲1型口蹄疫疫苗制成三價(jià)聯(lián)苗，禽流感-6毒株、-7毒株、-8毒株制成三價(jià)聯(lián)苗。在免疫注射時(shí)一次注射，但監(jiān)測(cè)結(jié)果卻是三種結(jié)果，總有不合格的類型。去年11月自治區(qū)動(dòng)物疫病控制中心監(jiān)測(cè)金鳳區(qū)的結(jié)果是O型口蹄疫和禽流感—8毒株抗體水平不合格，我們分析原因就是疫苗的因素，今年春季動(dòng)物防疫我們建議規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)禽流感和口蹄疫三價(jià)聯(lián)苗采取間隔15d兩次免疫注射的方式，今年監(jiān)測(cè)的結(jié)果就是禽流感三種類型、牛羊O型口蹄疫全部合格，牛羊A型口蹄疫合格率是85%。

2 樣品因素

2.1 樣品的采集時(shí)機(jī)

動(dòng)物在進(jìn)行免疫接種后，要經(jīng)過(guò)一定的時(shí)間才能在體內(nèi)產(chǎn)生免疫抗體，并逐漸到達(dá)峰值，體內(nèi)產(chǎn)生抗體時(shí)間因所使用疫苗的種類不同而異，一般活疫苗產(chǎn)生抗體的時(shí)間早，而滅活疫苗產(chǎn)生抗體的時(shí)間較晚。所以一定要選擇好檢測(cè)樣品的采集時(shí)間，通常進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)的采樣時(shí)間為疫苗接種后28d至90d最合適，所檢測(cè)出的結(jié)果能夠判定動(dòng)物的免疫效果。 今年銀川市金鳳區(qū)進(jìn)行春季重大動(dòng)物疫病抗體集中監(jiān)測(cè)行動(dòng)，我站對(duì)轄區(qū)兩個(gè)奶牛場(chǎng)各采集20份血樣，當(dāng)時(shí)一個(gè)奶牛場(chǎng)注射三價(jià)口蹄疫才19d，另一個(gè)才8d，監(jiān)測(cè)結(jié)果O型口蹄疫免疫抗體合格率分別是95%和90%，A型口蹄疫合格率分別是85%和60%。過(guò)了10d，自治區(qū)動(dòng)物疫病控制中心在其中的一個(gè)奶牛場(chǎng)（免疫時(shí)間較長(zhǎng)的）采集20份血樣，監(jiān)測(cè)結(jié)果O型、A型、亞洲1型合格率全部100%。另一種情況就是免疫時(shí)間較長(zhǎng)，監(jiān)測(cè)結(jié)果合格率也較低，轄區(qū)有一個(gè)養(yǎng)殖6000只羊的規(guī)模場(chǎng)，去年自治區(qū)監(jiān)測(cè)時(shí)小反芻獸疫免疫抗體合格率是45%，羊三價(jià)口蹄疫中的O型合格率才是60%，A型和亞洲1型合格率是85%，反饋的結(jié)果是七月份注射的疫苗，采樣監(jiān)測(cè)時(shí)已經(jīng)11月份，今年春季金鳳區(qū)監(jiān)測(cè)該場(chǎng)時(shí)是4月28日采樣20份，監(jiān)測(cè)結(jié)果是小反芻免疫抗體合格率是100%，口蹄疫O型是55%、A型是60%，反饋結(jié)果是該場(chǎng)1月份間隔15天注射兩次口蹄疫三價(jià)疫苗，3月份間隔15d注射小反芻獸疫疫苗。所有我建議規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫時(shí)間和我們集中免疫的時(shí)間要一致，最多不超過(guò)1個(gè)月，監(jiān)測(cè)時(shí)間應(yīng)和免疫時(shí)間相互協(xié)調(diào)，最好在免疫抗體水平最高時(shí)。

2.2 樣品的采集方法

用于免疫抗體水平檢測(cè)的是樣品血清，因此血清的質(zhì)量直接影響到抗體水平的檢測(cè)結(jié)果，血液的采集方法、時(shí)間、血清的析出、血清的分離過(guò)程都是關(guān)系血清質(zhì)量的因素。因此，在采集血樣時(shí)，要注意時(shí)間特別是羊和雞，要空腹采樣，否則血清就成膠凍狀，導(dǎo)致采樣失敗，另外，一定要遵守操作規(guī)程，采血部位要嚴(yán)格消毒，防止污染，采血量要適當(dāng)（一般為2～3 ml），要一次性采夠量，采血完成后，將采血器拉桿拉到底，留出血清析出空間，否則，影響血清的析出和質(zhì)量。

2.3 樣品的處置和保管

血液采集后處置不當(dāng)會(huì)影響血清的析出和質(zhì)量，血清的處置和保管直接影響到抗體檢測(cè)的結(jié)果，所以必須做好樣品的保管和處置。一般用于抗體檢測(cè)的血液不加任何抗凝劑，用于保存血液和血清的塑料離心管一定要清潔、干燥、無(wú)污染，血清析出后要及時(shí)進(jìn)行分裝，用吸管或注射器緩緩吸出，裝入準(zhǔn)備好的離心管中保存。一般情況下，在5 d內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)的血清可放置于4 ℃的冰箱內(nèi)保存，待檢超過(guò)5 d的，要置-20 ℃下冷凍保存，并盡量避免反復(fù)凍融。

2.4 樣品的分裝

樣品的分裝過(guò)程中，器械的污染、交叉使用均可影響到抗體檢測(cè)結(jié)果，所以，在樣品分裝過(guò)程中，所使用的吸管、注射器、離心管等器械一定要干燥、清潔，不能交叉重復(fù)使用，特別不能將不同的樣品混合成一份，也不能一式多樣。

3 實(shí)驗(yàn)室因素

3.1 檢測(cè)器械

在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行抗體檢測(cè)的過(guò)程中，所使用檢測(cè)器械的質(zhì)量，器械的清洗、保管方法，儀器的準(zhǔn)確性、靈敏性等都將影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，特別是不按照有關(guān)規(guī)定對(duì)各種儀器設(shè)備進(jìn)行維護(hù)和校準(zhǔn)，認(rèn)為只要所用儀器不出故障就可正常使用，忽略了由于儀器出現(xiàn)偏差嚴(yán)重影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。所以，一定要保證檢測(cè)器械的質(zhì)量，每次試驗(yàn)后要對(duì)所使用過(guò)的器械進(jìn)行徹底清洗、消毒，嚴(yán)格按照規(guī)定的方法保管器械，定期對(duì)試驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和測(cè)試，確保其準(zhǔn)確性和靈敏度，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.2 檢測(cè)試劑

做抗體檢測(cè)時(shí)所用的試劑雖然都是經(jīng)有關(guān)部門審核批準(zhǔn)的生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)，但不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的試劑，其特異性和靈敏性存在差異，同一廠家不同批次的產(chǎn)品也有差別，試劑在運(yùn)輸和保管中出現(xiàn)包裝損壞、泄漏、污染等均會(huì)影響到檢測(cè)結(jié)果。因此，應(yīng)選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，并嚴(yán)格按照試劑的說(shuō)明書進(jìn)行保管和使用，堅(jiān)決不能使用過(guò)期試劑。

3.3 檢測(cè)人員

實(shí)驗(yàn)室所有檢測(cè)試驗(yàn)都是通過(guò)檢驗(yàn)人員的具體操作而完成的，檢驗(yàn)人員的理論和技術(shù)操作水平是關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的最關(guān)鍵因素，個(gè)別檢驗(yàn)員對(duì)試驗(yàn)原理理解不透，在試驗(yàn)過(guò)程中不能嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，不能熟練掌握試驗(yàn)器械和儀器的使用，出現(xiàn)加樣誤差、加樣器與吸頭不配套、重復(fù)使用吸頭等，導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確，造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差、檢驗(yàn)員對(duì)試驗(yàn)結(jié)果判定不準(zhǔn)確等現(xiàn)象，均可導(dǎo)致抗體水平的檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。所以，實(shí)驗(yàn)室配備的人員要有相當(dāng)?shù)膹氖卵鍖W(xué)檢測(cè)的工作資歷并經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的培訓(xùn)，每個(gè)工作人員都要認(rèn)識(shí)到此項(xiàng)工作的特殊性、嚴(yán)肅性，樹立高度的責(zé)任感和高度負(fù)責(zé)的精神，要熟練掌握相關(guān)的技術(shù)原理和操作方法，特別是檢測(cè)的程序和規(guī)范，熟練掌握與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的儀器設(shè)備，要讓實(shí)驗(yàn)人員認(rèn)識(shí)到儀器的維護(hù)和校正的重要性，對(duì)所用儀器設(shè)備定期檢定校準(zhǔn)和維護(hù)以保證每次試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

3.4 實(shí)驗(yàn)室溫度

抗體檢測(cè)試驗(yàn)的原理就是抗原抗體反應(yīng)，而抗原抗體反應(yīng)需要一定的時(shí)間和特定的反應(yīng)溫度，在一些試驗(yàn)中，由于抗原被包被在固相表面，抗原抗體反應(yīng)只能在固相表面進(jìn)行，遠(yuǎn)離固相表面的物質(zhì)要依靠濃度差的改變緩慢地加入反應(yīng)，而且這個(gè)反應(yīng)要在特定的溫度下進(jìn)行。一些實(shí)驗(yàn)人員為求快出結(jié)果而使反應(yīng)時(shí)間不夠和溫度不合適導(dǎo)致試驗(yàn)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。因此，在進(jìn)行抗體檢測(cè)試驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室溫度一般要保持在20℃～25 ℃，在操作時(shí)一定要使各步反應(yīng)達(dá)到足夠的時(shí)間并保證其溫度條件，確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4 小結(jié)

經(jīng)分析，影響動(dòng)物免疫抗體水平檢測(cè)結(jié)果的因素主要有樣品的采集、處理、保存，檢測(cè)試劑的質(zhì)量，試驗(yàn)儀器和器械的維護(hù)和保養(yǎng)，檢驗(yàn)人員的素質(zhì)等因素。所以，在做動(dòng)物免疫抗體水平檢測(cè)時(shí)，一定要做好樣品的采集處理和保存工作，保證樣品質(zhì)量；選擇優(yōu)良的試劑，并嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作；加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和儀器的維護(hù)和保養(yǎng)；嚴(yán)格遵守試驗(yàn)操作規(guī)程和要求，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。