奶牛結(jié)核病PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測技術(shù)應(yīng)用中的問題討論

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（城固縣畜牧獸醫(yī)工作站，陜西城固 723200）

奶牛結(jié)核病PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測技術(shù)應(yīng)用中的問題討論

何明發(fā)，李紅偉，敖義鵬

（城固縣畜牧獸醫(yī)工作站，陜西城固 723200）

文章闡述了陜西省城固縣奶牛結(jié)核病PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測技術(shù)應(yīng)用情況，分析探討了應(yīng)用過程中存在的問題，如：檢測時間和頻次不合理；抽檢比率小，易漏檢；企業(yè)檢測技術(shù)應(yīng)用差；檢測試劑靈敏度不一致；檢測操作技術(shù)不規(guī)范；檢測凈化經(jīng)費(fèi)保障不到位，等等，并針對性地提出了具體改進(jìn)措施，以期為同行提供參考。

奶牛結(jié)核??；PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)；技術(shù)應(yīng)用；問題探討

牛結(jié)核病是由牛型結(jié)核分枝桿菌引起的一種人獸共患慢性傳染病，我國將其列為二類動物疫病。PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)是奶牛結(jié)核病檢疫檢測中最常用、實(shí)用的檢測技術(shù)，但目前在具體應(yīng)用中還存在許多操作技術(shù)方面的問題，需引起重視和改進(jìn)。

1 城固縣PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)狀

1.1監(jiān)測單位的技術(shù)能力

陜西省城固縣動物疫病預(yù)防控制中心是漢中市唯一的國家動物疫情測報站，具體負(fù)責(zé)實(shí)施全縣動物疫病檢測工作，截至目前已應(yīng)用PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行牛結(jié)核病檢疫檢測工作達(dá)15年。

1.2檢測所用方法和試劑

檢測所用方法按照《動物結(jié)核病診斷技術(shù)》（GB/T18645—2002）[1]操作，檢測所用的結(jié)核菌素（診斷試劑）為哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)。

1.3監(jiān)測時間和對象

按漢中市動物疫病監(jiān)測方案要求，所有乳用牛和種牛已全部納入結(jié)核病檢疫檢測范圍，對其他牛依據(jù)統(tǒng)計學(xué)原理進(jìn)行抽樣檢測，每年至少檢測1次。城固縣目前有奶牛養(yǎng)殖場7個，奶?？偞鏅?1頭，每年定期開展2次檢疫檢測。

1.4結(jié)果判定

依照標(biāo)準(zhǔn)《動物結(jié)核病診斷技術(shù)》（GB/ T18645—2002）進(jìn)行結(jié)果判定。

1.5檢測結(jié)果

城固縣自2014年首次檢出結(jié)核病牛以來，已連續(xù)3年檢測54場（次）、606頭（次）奶牛，累計檢出結(jié)核病牛24頭（次），其余均為陰性。

1.6 結(jié)果處置

依據(jù)《牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范》[2]對結(jié)核病牛進(jìn)行了撲殺，并按照《病害動物及其產(chǎn)品安全無害化處理規(guī)程》（GB16548—2006）[3]將病害動物尸體采取了焚燒、深埋、消毒等無害化處理措施；對病畜污染的場所、用具、物品進(jìn)行了嚴(yán)格消毒；對疑似反應(yīng)牛立即隔離，限制移動，依照《結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的間隔時間進(jìn)行復(fù)檢，并視結(jié)果再行處置。

2 PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)技術(shù)應(yīng)用中存在的問題

2.1檢測時間和頻次不合理

漢中市每年6—7月份安排實(shí)施動物結(jié)核病檢疫檢測。此時，正值各種蚊蟲活躍期，蚊蟲影響了動物保定和檢測，尤其是叮咬試驗(yàn)動物接種部位引起的炎性紅腫，無法與PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)相區(qū)別，從而影響了試驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)性。從歷年監(jiān)測實(shí)施經(jīng)驗(yàn)看，每次檢疫檢測實(shí)施從試驗(yàn)材料準(zhǔn)備，到實(shí)際接種，再到觀察、復(fù)檢，直到病畜處置，約需3～4個月，而年內(nèi)10—11月份再開展第2輪檢測，這樣間隔時間太短，易引起養(yǎng)殖場戶的抵阻情緒和拒檢，影響檢疫檢測工作開展。

2.2抽檢比率小，易漏檢

陜西省各地區(qū)對該病的檢測、凈化、監(jiān)管力度和要求均不相同。城固縣奶牛存欄量相對較小，實(shí)行的是100% “全檢制”，一旦發(fā)現(xiàn)結(jié)核病牛，立即采取強(qiáng)制撲殺和凈化措施。而部分市縣區(qū)由于受經(jīng)費(fèi)、技術(shù)力量不足等因素限制，實(shí)行的是“樣本抽檢制”，只有部分牛受檢，結(jié)核病牛漏檢隱匿概率很大，也有因撲殺經(jīng)費(fèi)補(bǔ)償困難等原因，對檢出的結(jié)核病牛不作強(qiáng)制撲殺處置，導(dǎo)致疫情傳播。經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查，城固縣近3年檢測發(fā)現(xiàn)的5起奶牛結(jié)核病疫情均屬引入性疫情。只在引入地開展牛結(jié)核病防控，既被動，又很難消滅傳染源，凈化疫病。

2.3企業(yè)檢測技術(shù)應(yīng)用差

對城固縣2013年以來的5起奶牛結(jié)核病疫情開展流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，業(yè)主基本不了解牛結(jié)核病和PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測技術(shù)等知識，引進(jìn)奶牛時，既不要求檢疫或索取動物檢疫合格證、檢驗(yàn)報告等，也不向動物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)依法備案申報，奶牛調(diào)回后不進(jìn)行隔離觀察就混群飼養(yǎng)，又不規(guī)范履行落地報檢義務(wù)，這樣極易導(dǎo)致疫病的快速引入。

2.4檢測試劑靈敏度不一致，影響試驗(yàn)結(jié)果

不同生產(chǎn)廠家或供應(yīng)商提供的檢測試劑的原理、方法和靈敏度各不相同，導(dǎo)致檢測結(jié)果也往往不同，同時檢測試劑本身也存在不同的敏感性和特異性，所以檢測結(jié)果只能達(dá)到相對可靠。而不同的試劑在檢測的敏感性和特異性方面又存在差異，究竟哪種試劑檢測結(jié)果更加精準(zhǔn)，需要國家權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行篩查、監(jiān)管、驗(yàn)證和確認(rèn)。再者，檢測試劑的有效性問題，如試劑儲存、運(yùn)輸、銷售、保藏的條件是否符合要求，試劑是否在有效期內(nèi)等都直接影響檢測結(jié)果的可靠性。

2.5檢測操作技術(shù)不規(guī)范，影響試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性

牛結(jié)核病檢測主要采用PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。這項(xiàng)檢測技術(shù)雖然操作和實(shí)驗(yàn)條件簡便，但每個環(huán)節(jié)的細(xì)小操作誤差都會直接影響試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。如：是否規(guī)范保藏和儲運(yùn)，是否按要求稀釋試劑，接種部位是否在皮內(nèi)，注射劑量是否精準(zhǔn)，測量方法是否正確，試驗(yàn)觀察時限是否符合規(guī)定，蚊蟲叮咬干擾因素是否排除，等等。這些細(xì)微技術(shù)環(huán)節(jié)中任何一個節(jié)點(diǎn)出現(xiàn)差錯，都會使試驗(yàn)結(jié)果失真、失準(zhǔn)，導(dǎo)致得出錯誤性結(jié)論。

2.6檢測凈化經(jīng)費(fèi)保障不到位，影響檢測和防控

牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范要求奶牛結(jié)核病監(jiān)測比例為100%，因此檢測試劑、防護(hù)物資的消耗量很大，所需經(jīng)費(fèi)額度也很高。這就要求在檢疫檢測中操作人員必須熟練掌握操作技術(shù)和方法，以便最大程度地節(jié)省試驗(yàn)耗材。

3 改進(jìn)措施

3.1科學(xué)合理安排檢測時間和次數(shù)

城固縣已嘗試將奶畜的結(jié)核病、布魯氏菌病監(jiān)測與春秋防疫工作同步展開，即在每年的3月中旬進(jìn)行第1次監(jiān)測，9月中旬進(jìn)行第2次監(jiān)測。春秋時節(jié)氣溫適宜，蚊蟲處于休眠期，這樣就避開了炎熱和蚊蟲活動等因素對檢測操作的不利影響，兩次監(jiān)測的時間間隔跨度較為合理，實(shí)施效果較好，值得推廣。

3.2嚴(yán)格落實(shí)奶牛結(jié)核病“全檢制”

應(yīng)嚴(yán)格按照《牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范》要求，對奶牛實(shí)行100%監(jiān)測，每半年監(jiān)測1次，初生犢牛應(yīng)于20日齡時進(jìn)行第1次監(jiān)測，以后按照每6個月為1個周期，全面持續(xù)開展奶牛結(jié)核病的監(jiān)測凈化工作。

3.3加大防治知識和法律宣傳力度，嚴(yán)格依法規(guī)范檢疫

加強(qiáng)疫病防控知識宣傳、培訓(xùn)，引導(dǎo)養(yǎng)殖場戶牢固樹立科學(xué)養(yǎng)殖理念，積極配合做好疫病檢疫、檢測工作，嚴(yán)格落實(shí)檢疫報檢制度，及時剔除和防范疫源風(fēng)險。同時要有效防范人畜相互感染風(fēng)險，強(qiáng)化跨省調(diào)運(yùn)檢疫檢測，做好縣內(nèi)場間調(diào)運(yùn)檢疫；對生產(chǎn)、流通、銷售、消費(fèi)等各個環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)密管控，做到部門聯(lián)動，統(tǒng)籌各個環(huán)節(jié)，確保防控成效。

3.4科學(xué)檢測，精準(zhǔn)操作

3.4.1接種部位的選擇和處理。必須是正常的、無病灶的部位，牛一般在頸側(cè)中部上1/3處附近，接種部位必須除毛，并準(zhǔn)確標(biāo)記接種部位。

3.4.2皮厚度測量。接種前測量皮厚時，必須是在除毛后進(jìn)行，牛頸部皮膚一般較松弛，但縱向與橫向測量時，由于張力差異，測量值往往會出現(xiàn)差異，因此測量人員必須充分提起皮膚再測量，最好縱向和橫向各測量1次，將結(jié)果取均值；縱橫向測量值差不能大于1 mm，否則應(yīng)改進(jìn)測量方法。在接種部位操作時，動作要輕，防止造成接種部位的人為損傷（發(fā)炎、紅腫等），影響檢測結(jié)果。前后測量手法必須一致，最好是同一個人操作；避免測量時因游標(biāo)卡尺松緊不一，導(dǎo)致測量結(jié)果失真?？茖W(xué)檢測，特別是對疑似或陽性的，可把接種后72小時的測量結(jié)果與接種前測量值、接種部位附近無變化皮厚測量值或?qū)?cè)同部位皮膚測量值進(jìn)行比較，綜合權(quán)衡，防止接種前后因測量方法變化，出現(xiàn)測量結(jié)果失真現(xiàn)象。

3.4.3科學(xué)研判結(jié)果。游標(biāo)卡尺等測量儀器要經(jīng)常校核；檢測結(jié)果必須用游標(biāo)卡尺或其他精密設(shè)備進(jìn)行測量確認(rèn)，不能單憑肉眼觀察判定結(jié)果，肉眼觀察只能作為儀器測量的一個輔助確認(rèn)。在生產(chǎn)實(shí)際中，一些操作人員容易憑借“經(jīng)驗(yàn)”判定結(jié)果，認(rèn)為只要接種部位沒有“鼓包”就是正常的，其實(shí)不然，有些皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)會形成明顯的隆起，有些變態(tài)反應(yīng)則是擴(kuò)散性的，表面看不出異常反應(yīng)，但實(shí)際則出現(xiàn)增厚反應(yīng)，因此必須借助儀器判定。

3.4.4確保接種試劑有效。在規(guī)范選擇、保藏、儲運(yùn)診斷試劑，確保試劑有效性的前提下，接種劑量必須符合要求，嚴(yán)防隨意增減注射劑量。

3.4.5接種方法科學(xué)。必須接種在皮內(nèi)而非皮下。PPD反應(yīng)是皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)，接種時，針頭呈15～30°角刺入皮內(nèi)2～4 mm后推注藥液，接種后能明顯看到皮膚表面出現(xiàn)“小泡”，否則接種藥液可能注入皮下，造成檢測失?。唤臃N時要緩慢推注，嚴(yán)防藥劑從接口端溢出。

3.4.6接種器械選擇要合理。必須選用1毫升型、5～7號針頭的注射器，同時要檢查注射器的氣密性，既要保證注射劑量準(zhǔn)確，又要避免注射時因針頭過大導(dǎo)致藥劑從注射部位溢出。

3.4.7嚴(yán)格接種和檢測時限，重視遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的跟蹤觀察。接種后72小時測量皮厚差，96～120小時持續(xù)跟蹤觀察遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，應(yīng)盡量做到“準(zhǔn)時”。

3.4.8可疑結(jié)果的復(fù)檢時間間隔必須到位。在生產(chǎn)實(shí)際中，通過調(diào)整不同的復(fù)檢時間間隔，對結(jié)核病首次檢測為陽性或可疑的牛，在牛頸部首次接種部位的対側(cè)接種結(jié)核菌素進(jìn)行復(fù)核，發(fā)現(xiàn)間隔3天、14天、28天出現(xiàn)陰性的可能性較大。若檢測時間間隔大于42天，檢出的結(jié)果與首次檢測結(jié)果高度一致。因此42天是復(fù)檢的最小時間閾值，只能延長不能縮短。

3.4.9檢測期間嚴(yán)防外界干擾?？咕姿幬?、蚊蟲叮咬、人為損傷等，易造成檢測部位皮膚出現(xiàn)增厚反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性可能。因此，應(yīng)科學(xué)合理確定檢疫檢測時間，檢疫監(jiān)測時間一般為每年2次，上半年在3—4月份，下半年在9—10月份比較適宜；在結(jié)果觀察期內(nèi)，應(yīng)該做好維護(hù)，嚴(yán)防外源因素干擾檢測結(jié)果。

3.5建立動物疫病檢測凈化經(jīng)費(fèi)保障機(jī)制

動物場（區(qū)）的疫病凈化是一個持續(xù)過程，往往需要數(shù)年的堅(jiān)持不懈努力，加之開展疫病凈化需要采購、儲備診斷試劑、防護(hù)物資等，疫情處置、病害動物撲殺補(bǔ)貼等都需要經(jīng)費(fèi)，建議在現(xiàn)行的動物尸體無害化處理補(bǔ)貼政策基礎(chǔ)上，建立更加有效持久的疫病凈化政策保障機(jī)制，確保工作的正常有序開展。

[1]農(nóng)業(yè)部. 動物結(jié)核病診斷技術(shù)：GB/T 18645—2002[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002-02-19.

[2]農(nóng)業(yè)部. 牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范：農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2007〕12號[A]. 北京：農(nóng)業(yè)部，2007-04-09.

[3]農(nóng)業(yè)部. 病害動物及其產(chǎn)品安全無害化處理規(guī)程：GB16548—2006[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

（責(zé)任編輯：朱迪國）

Discussion on Application of PPD Intradermal Allergy Technigue in Cow Tuberculosis Detection

He Mingfa，Li Hongwei，Ao Yipeng
（Chenggu County Animal Husbandry and Veterinary Station，Chenggu，Shaanxi 723200）

In this article，the application of Puri fi cation protein of tuberculin（PPD）intradermal allergy in detecting cow tuberculosis in Chenggu county was reviewed. At the same time，the problems encountered in the process were discussed and analyzed，such as the unreasonable detection time and frequency，the easily missed inspection as a result of low sampling rate，inadequate application of the detection techniques，inconsistent sensitivity of detection reagents，non-standard detection and operation and the insuf fi cient fund for ensuing its detection and cleanup，etc. In the end，several concrete improvements were given to provide reference for the peers.

cow tuberculosis；PPD intradermal allergy；technology application；discussion

S851.3

：B

：1005-944X（2017）02-0081-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.02.024