布魯氏菌病疫苗S2株免疫成年綿羊的抗體消長規(guī)律試驗

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（1. 山西省大同市動物疫病預(yù)防控制中心，山西大同 037004；2. 山西省靈丘縣動物疫病預(yù)防控制中心，山西靈丘 034400）

布魯氏菌病疫苗S2株免疫成年綿羊的抗體消長規(guī)律試驗

樊生平1，齊守軍1，李連平1，韓小軍1，曹春紅2

（1. 山西省大同市動物疫病預(yù)防控制中心，山西大同 037004；2. 山西省靈丘縣動物疫病預(yù)防控制中心，山西靈丘 034400）

[目的]探索成年綿羊經(jīng)布魯氏菌病疫苗S2株免疫后血清抗體的消長規(guī)律。[方法]采用“灌服100億菌”“灌服200億菌”和“肌注50億菌”三種不同免疫方法，對試驗羊進行布魯氏菌病S2株疫苗的免疫接種。在接種前和接種后不同時間點分別采集試驗羊血清樣品，用虎紅凝集試驗（RBT）和試管凝集試驗（SAT）進行血清抗體檢測。[結(jié)果]肌注組抗體上升較快，于免疫后10天達到峰值，然后快速下降，90天后下降速度減緩，但在180天時RBT和SAT陽性率仍分別為63.2%和84.2%，SAT平均凝集效價為1:178.9。2個口服組均在免疫20天后抗體達到最高，以后下降，分別于90天和120天降到最低，然后有所回升并維持在低水平波動；至180天時，口服組的RBT陽性率均下降為0，SAT陽性率分別下降為40.9%和23.1%，SAT平均凝集效價分別降至1:40.9和1:18.2。[結(jié)論]對采用布魯氏菌病S2株活疫苗口服免疫6個月以后的羊群，可用虎紅凝集試驗進行布魯氏菌病檢疫的初篩。

成年綿羊；布魯氏菌??；S2株疫苗；免疫抗體；檢測；檢疫

布魯氏菌?。˙rucellosis，以下簡稱布病）是由布魯氏菌屬細菌引起的一種人獸共患傳染病。其中，羊種布魯氏菌侵入性最強[1]，主要侵害羊的生殖系統(tǒng)和關(guān)節(jié)等器官，使懷孕母羊流產(chǎn)，公羊發(fā)生睪丸炎等，是引起人感染的主要菌型，可使人發(fā)熱、出汗，且長期不愈，給畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康帶來嚴重危害。我國已將布病列為二類動物疫病，并且列入《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020）》重點防控疫病名錄。

羊布病控制的要點雖然是執(zhí)行以檢疫凈化為主的綜合防控措施，但對污染區(qū)的易感羊群也需采取疫苗接種措施，主要接種豬種布魯氏菌S2株弱毒疫苗。該疫苗雖具有良好的免疫效果，但目前尚無法準確區(qū)分疫苗接種抗體和自然感染抗體，主要以疫苗免疫抗體存續(xù)時間短，自然感染抗體存續(xù)時間長來鑒別[2]。目前，有關(guān)S2株疫苗免疫綿羊的抗體存續(xù)時間的報道不盡相同。

本試驗用S2株疫苗免疫成年健康母綿羊后，用虎紅凝集試驗（RBT）和試管凝集試驗（SAT）分別進行血清抗體分時段檢測，探索S2株疫苗免疫成年母綿羊后的抗體消長規(guī)律，為當?shù)爻赡昴妇d羊的布病免疫和檢疫，尋找切實可行的方法和途徑，為基層獸醫(yī)工作者開展布病防控提供參考。

1 材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1試驗動物。舍飼的本地二代寒羊母羊100只，均為2～3胎齡，無流產(chǎn)病史，且經(jīng)布病虎紅凝集試驗（RBT）、試管凝集試驗（SAT）檢測均為陰性；隨機分成4組，每組25只，分別為口服免疫1組（QF1組）、口服免疫2組（QF2組）、肌注免疫組（JZ組）、對照組（DZ組）。試驗羊均進行耳標標記，按正常生產(chǎn)進行飼養(yǎng)管理。

1.1.2試驗用疫苗。布病活疫苗（S2株），購自金宇保靈生物藥品有限公司，批號5393001。

1.1.3檢測試劑：布病虎紅凝集抗原（批號201507）、布病虎紅凝集陰性血清（批號201505）、布病虎紅凝集陽性血清（批號201502），均購自哈藥集團生物疫苗有限公司；布病試管凝集試驗抗原（批號20150702）、布病試管凝集試驗陽性血清（批號20140701）和陰性血清（批號20140801），購于青島易邦生物工程有限公司。各種檢查試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2試驗方法

1.2.1免疫方法。將布病活疫苗（S2株）按說明書所標注的含菌數(shù)量，用生理鹽水稀釋。對口服組羊只（QF1、QF2組），用改裝的連續(xù)注射器（初步霧化），按2 mL/只灌服；對注射組羊只（JZ組），用連續(xù)注射器按 1mL/只肌肉注射；對空白對照組羊只（DZ組），不免疫。

1.2.2血清學(xué)檢測。在免疫前，以及免疫后的10、20、30、60、90、120、150和180天，分別對試驗羊進行頸靜脈采血，離心分離血清，分裝后-20 ℃保存。在實驗室，采用布病虎紅凝集試驗（RBT）、試管凝集試驗（SAT）分別檢測實驗羊的血清抗體水平，具體操作與判定按照國家標準GB/T18646—2002進行。

2 結(jié)果

2.1對照組檢測結(jié)果

對照組各時間點的布病虎紅凝集試驗結(jié)果和試管凝集試驗結(jié)果均為陰性，試管凝集試驗的平均凝集效價低于1:25。

2.2試驗組檢測結(jié)果

通過試驗對比，JZ組抗體比QF組升得快，且JZ組血清抗體均高于QF組；另外，QF2組的血清抗體均高于QF1組。經(jīng)過數(shù)據(jù)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，試驗羊血清抗體虎紅凝集陽性率與試管凝集陽性率的變化趨勢一致。

2.2.1試驗組抗體陽性率檢測結(jié)果。各試驗組抗體陽性率均在免疫后20天到達高峰，具體統(tǒng)計結(jié)果見表1。

2.2.2試驗組試管凝集效價檢測結(jié)果。各試驗組試管凝集平均凝集效價多數(shù)在免疫后20天到達高峰（JZ組除外），具體統(tǒng)計結(jié)果見表2。

表1 各試驗組抗體陽性率統(tǒng)計 （單位：%）

表2 各試驗組試管凝集試驗平均凝集效價統(tǒng)計

3 討論

從表1、表2可以看出，JZ組抗體上升較快，于10天時效價達最高，為1:2 358；QF1組和QF2組的抗體效價在免疫后20天時升至最高，分別為1:150和1:170，之后各組抗體凝集效價呈下降趨勢，到90天后，JZ組下降緩慢，但QF2組和QF1組抗體略有回升，并維持在低位波動；至180天時，各試驗組羊血清仍有凝集效價存在。蔡一非等[3]的研究表明，采用皮下注射布?。⊿2株）活疫苗50億的綿羊，免疫7天后血清試管凝集試驗的平均凝集效價達最高。高紅霞[4]的研究發(fā)現(xiàn)，綿羊經(jīng)布病S2株活疫苗免疫1個月后，其凝集抗體達到最高。田素梅等[5]的檢測結(jié)果顯示，綿羊免疫布?。⊿2株）活疫苗后15天，其平均凝集抗體效價達到峰值，到9個月時仍可測到凝集抗體。

QF1組試驗羊布病虎紅凝集陽性率最高，為26.1%，并于免疫后90天下降到5%以下，在150天以后轉(zhuǎn)為陰性。QF2組試驗羊虎紅凝集陽性率最高，為42.9%，于免疫后150天降到5%以下，免疫180天后的虎紅平板凝集轉(zhuǎn)為陰性。這進一步驗證了毛開榮[6]的觀點：用布病S2株活疫苗口服免疫羊，6個月后，其抗體水平已降到診斷陽性標準以下。以上結(jié)果說明對采用布病S2株活疫苗口服免疫6個月以后的羊群，可用布病虎紅凝集試驗進行布病檢疫的初篩。

JZ組試驗羊血清抗體遠高于QF1組和QF2組，其試管凝集試驗最高血清凝集效價達1:3 200（本試驗設(shè)置的最高值），到免疫180天后，其試管凝集平均凝集效價仍為1:178.9，虎紅平板凝集和試管凝集陽性率仍分別達63.2%和84.2%。但在肌注免疫后，該試驗組羊只有3只發(fā)生流產(chǎn)（該試驗組共有多少只懷孕羊，未作統(tǒng)計），與疫苗說明書相符，即注射免疫只能在非懷孕羊只上進行。同時，為了布病檢疫、凈化的方便易行，對區(qū)域性的布病免疫，建議采用口服免疫。

從QF1組和QF2組血清抗體檢測結(jié)果看，在試驗觀察期（180天）的大多數(shù)時點中，QF2組的血清抗體均高于QF1組。申捷等[2]研究表明，綿羊口服100億和200億兩種免疫劑量的抗體陽性差異不大。本試驗檢測結(jié)果與之稍有差異，但從近年來實踐經(jīng)驗看，QF1組的免疫方法完全可以預(yù)防羊只布病的發(fā)生和流行，并從節(jié)約成本來說，大規(guī)模的綿羊布病免疫采用口服100億菌/只的方法切實可行。

各試驗組羊血清試管凝集抗體陽性率均高于同時點的虎紅凝集陽性率（表1），QF1組和QF2組試管凝集陽性率高時分別可達60.9%和77.6%，即使到免疫后180天，還分別為23.1%和40.9%，而JZ組到免疫后180天時，其陽性率仍高達84.2%。本研究的虎紅凝集和試管凝集陽性率結(jié)果與陳嘉章等[7]的“對羊陽性檢出率以平板法最高，試管凝集法次之，虎紅凝集法最低”和羅建軍等[8]的“試管凝集反應(yīng)陽性率均高于虎紅平板試驗”研究結(jié)果相一致，所以針對免疫羊群的布病檢疫，不建議采用試管凝集試驗的方法。

從各試驗組羊血清抗體陽性率結(jié)果（表1）可以看出，試驗羊血清抗體虎紅凝集陽性率與試管凝集陽性率的變化趨勢基本一致，說明兩者皆以檢測大分子的IgM類抗體為主[3]。

據(jù)此，區(qū)域性的綿羊布病防控推薦：布疫病苗（S2株）100億菌/只灌服免疫；羊群布病檢疫于在免疫5～6個月后進行，先用虎紅凝集試驗初篩，再用競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（cELISA）復(fù)檢。

[1]克勞斯·尼爾森，于偉玲.布魯氏菌病診療過程中被忽視的要點[J]. 獸醫(yī)導(dǎo)刊，2011（11）：38-39.

[2]申捷，寶音達來，馬立峰，等. 布魯氏菌病疫苗（S2株）免疫羊抗體消長規(guī)律的研究[J].中國動物檢疫，2015，32（1）：68-73.

[3]蔡一非，趙智香，鐘旗，等. 不同的血清學(xué)方法對布病疫苗免疫綿羊抗體檢測結(jié)果的比較研究[J]. 中國動物檢疫，2008，25（12）：31-33.

[4]高紅霞. 不同血清學(xué)方法檢測牛、羊布魯氏菌疫苗免疫綿羊抗體消長規(guī)律的比較研究[D]. 哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[5]田素梅，周紅菊，溫都蘇，等. 綿羊抗布魯氏菌特異性IgG、IgA和IgM抗體的觀察[J].中國人獸共患病雜志，1993，9（3）：53.

[6]毛開榮. 動物布氏菌病的診斷[J]. 獸醫(yī)導(dǎo)刊，2011（9）：50-52.

[7]陳嘉章，倪富美. 平板凝集反應(yīng)、試管凝集反應(yīng)活虎紅平板試驗對牛羊布氏桿菌病陽性檢出率的對比試驗[J]. 中國獸醫(yī)雜志，1981（10）：31.

[8]羅建軍，肖峰，蘇貴軍，等. 青海都蘭野生反芻獸和嚙齒動物布魯菌病血清學(xué)檢查[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2016（3）：97-98.

（責任編輯：朱迪國）

Dynamical Changes of Antibodies after Immunization with Brucellosis Vaccine of S2 Strain in Adult Sheep

Fan Shengping1，Qi Shoujun1，Li Lianping1，Han Xiaojun1，Cao Chunhong2
（1. Datong Animal Disease Prevention and Control Center of Shanxi Province，Datong，Shanxi 037004；2. Lingqiu Animal Disease Prevention and Control Center of Shanxi Province，Lingqiu， Shanxi 034400）

[Objective]In order to explore the dynamical changes of antibodies after being immunized with brucellosis vaccine of S2 strain in adult sheep.[Methods]Vaccination experiments were conducted by three different methods：perfusion of 10 billion bacteria，perfusion of 20 billion bacteria，and intramuscular injection of 5 billion bacteria. Serum samples were collected in different time-points before and after vaccination，the antibodies were detected by Rose Bengal plate agglutination test（RBT）and tube agglutination test（SAT）. [Results]The antibody level after intramuscular injection rose faster than the rest，it rose up to the highest level on 10th day after immunization，then declined rapidly and descent speed became slow after 90 days. The positive rates of RBT and SAT were 63.2% and 84.2% on 180thday after immunization，and the average agglutination titer was 1:178.9. On the other side，the antibodies of oral groups reached peak on 20th day after immunization，then decreased，the minimum level appeared on the 90th and 180th day，respectively. Then they increased slightly and waved at the low level. On the 180th day，the positive rates of both two oral groups detected by RBT fell to 0%，while that by SAT dropped to 40.9% and 23.1%，respectively. [Conclusion]The 6 months after oral immunization with brucellosis live vaccine of S2 strain in sheep fl ock，RBT could be used in preliminary screening of brucellosis inspection and quarantine.

adult sheep；brucellosis；vaccine of S2 strain；immune antibodies；detection；inspection

S851.3

B

1005-944X（2017）02-0088-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.02.026