理筋手法對(duì)外周炎性痛大鼠局部鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

趙利敬+李沛+張仲博+陳艷偉+史鵬博+巴正

【摘 要】目的：探討理筋手法對(duì)炎癥性疼痛大鼠的局部鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制。方法：將24只SPF級(jí)健康雌性SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、手法組，每組8只。除空白組外，其他2組在大鼠足底皮下注射0.1 mL弗氏完全佐劑，建立佐劑性外周炎性痛模型，通過在疼痛局部施以理筋手法，觀察手法對(duì)大鼠炎癥反應(yīng)、疼痛閾值及局部腺苷含量的影響。結(jié)果：造模后，大鼠出現(xiàn)致炎側(cè)足跛行、舔爪、紅、腫及熱痛敏等反應(yīng)。造模局部組織可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肌纖維的萎縮等。手法能抑制弗氏佐劑導(dǎo)致的大鼠縮足、舔爪等自發(fā)痛行為，提高炎性痛大鼠的疼痛閾值（P < 0.05）；且能提高大鼠足底病灶局部腺苷含量，手法組局部腺苷含量與空白組、模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。結(jié)論：理筋手法局部鎮(zhèn)痛效果顯著，其局部鎮(zhèn)痛作用可能通過局部腺苷釋放而起作用。

【關(guān)鍵詞】 理筋手法；完全弗氏佐劑；炎性痛；鎮(zhèn)痛作用；腺苷；大鼠

Experimental Study on the Local Analgesic Effect of Tendon-Soothing Manipulation on Rats with Periphery Inflammatory Pain and Its Mechanism

ZHAO Li-jing，LI Pei，ZHANG Zhong-bo，CHEN Yan-wei，SHI Peng-bo，BA Zheng

【ABSTRACT】Objective：To investigate the local analgesic effect of tendon-soothing manipulation on rats with periphery inflammatory pain and its mechanism.Methods：Twenty four healthy female SD rats were randomly divided into a blank group，a model group and a manipulation group，with 8 rats in each group.Except the blank group，the other two groups were given subcutaneous injection of 0.1 mL Freund's adjuvant in the plantar to establish models with adjuvant peripheral inflammatory pain.Tendon-soothing manipulation was used to observe its effect on their inflammatory reaction，pain threshold and local content of adenosine.Results：After modeling，rats had the following reactions：claudication on the inflammatory side，licking claws，red，swollen and heat hyperalgesia.Inflammatory cell infiltration and atrophy of muscle fibers were seen in the local tissue for modeling.Manipulation could inhibit Freund's adjuvant caused spontaneous pain behaviors such as curling up legs and licking claws and lift their pain threshold（P < 0.05）.It also could improve the content of adenosine in rats plantar lesions.The difference of the content of adenosine between the manipulation group，the blank group and the model group was statistically significant（P < 0.05）.Conclusion：The tendon-soothing manipulation has an obvious local analgesia，whose function may be played by locally released adenosine.

【Keywords】 tendon-soothing manipulation；complete Freund's adjuvant；inflammatory pain；analgesic effect；adenosine；rats

理筋手法是中醫(yī)骨傷科治療筋傷的常用方法，具有活血止痛、消散瘀腫、理順筋脈、解除筋肉痙攣、使筋出槽、骨錯(cuò)縫得以糾正至正常的作用[1]。其在緩解疼痛方面療效突出，但是長(zhǎng)期以來關(guān)于理筋手法緩解疼痛的作用機(jī)制研究相對(duì)較少。本實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床的理筋手法治療，觀察手法對(duì)佐劑性炎癥大鼠的鎮(zhèn)痛作用，探討手法緩解慢性炎癥痛的作用機(jī)制，為臨床理筋手法局部鎮(zhèn)痛作用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取SPF級(jí)健康雌性SD大鼠

24只，體質(zhì)量（210±20）g，2～3月齡，由鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（豫）2010-0002。大鼠獨(dú)立通氣籠（IVC），12/12 h晝夜交替節(jié)律下進(jìn)行飼養(yǎng)。適應(yīng)性喂養(yǎng)，并進(jìn)行基礎(chǔ)痛閾篩選。檢測(cè)方法[2]：恒溫水浴鍋調(diào)節(jié)至51 ℃，熱板預(yù)熱10 min，使后足底接觸熱板，記錄大鼠從放上熱板到出現(xiàn)舔右后足痛反應(yīng)的時(shí)間。整個(gè)測(cè)試環(huán)節(jié)保持安靜，室溫20～25 ℃，每次檢測(cè)后休息5 min，進(jìn)行下次檢測(cè)。共測(cè)定3次，取測(cè)量平均值納入統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。測(cè)定值位于8～30 s之間的大鼠納入實(shí)驗(yàn)。

1.2 儀器及設(shè)備 弗氏完全佐劑（美國(guó)Sigma公司，F(xiàn)5881）；大鼠腺苷酶聯(lián)免疫試劑盒（上海朝瑞生物科技有限公司）；HWS-26電熱恒溫水浴鍋（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）；BX61型萬(wàn)能顯微鏡（Olympus）；酶標(biāo)儀（Thermo，Multisan FC）等。

2 方 法

2.1 動(dòng)物分組及處理 將24只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、手法組，每組8只?？瞻捉M不造模，也不治療，在安靜環(huán)境中，固定大鼠，使動(dòng)物處于清醒狀態(tài)，固定20 min；模型組參照Raghavendra[3]的造模方法，于實(shí)驗(yàn)第1天，在大鼠右后足墊部皮下注射0.1 mL弗氏完全佐劑致炎，建立大鼠佐劑性炎癥疼痛模型，不給予治療，其他處理與空白組相同。手法組造模方法同模型組，造模后第4天

在大鼠右足底涌泉穴（取后肢腳掌心前正中）[4]給予中指點(diǎn)壓法手法[1]治療，時(shí)間20 min。通過測(cè)量大鼠右后腳掌周徑對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)[5]，分別在造模前、造模后、治療后測(cè)試各組大鼠的熱疼痛閾值。測(cè)量完畢后，立刻脫臼處死，取大鼠右側(cè)足底肌肉組織。

2.2 手法選擇 用手指在所選擇的合適穴位上進(jìn)行點(diǎn)穴按壓，又稱之為穴位按摩[1]。本實(shí)驗(yàn)采用中指點(diǎn)壓法，按照點(diǎn)壓法相應(yīng)的操作要領(lǐng)進(jìn)行，根據(jù)中醫(yī)“以痛為腧”的原則，對(duì)大鼠足底涌泉穴處進(jìn)行手法操作。

2.3 組織切片制作及指標(biāo)檢測(cè) 大鼠足底肌肉組織經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的甲醛固定，經(jīng)不同濃度梯度的乙醇逐級(jí)對(duì)組織進(jìn)行脫水，石蠟包埋，切片，進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色，用Olympus萬(wàn)能顯微鏡觀察組織病理變化；腺苷檢測(cè)采用Elisa法。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以表示，符合正態(tài)分布且方差齊，用單因素方差分析；組內(nèi)治療前后比較，采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；不符合正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)，則采用秩和檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 大鼠一般情況 空白組大鼠精神狀態(tài)好，喜動(dòng)，反應(yīng)靈敏，飲食正常；模型組和手法組造模后，大鼠精神萎靡，少活動(dòng)，致炎側(cè)足部不敢著地、跛行、舔足等；致炎側(cè)足部出現(xiàn)紅腫，且在24 h左右達(dá)到高峰。這些表現(xiàn)持續(xù)3 d后逐漸減輕。見圖1。

3.2 各組大鼠造模前后右足腳掌周徑比較 造模前，各組大鼠右足腳掌周徑比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。造模后，模型組和手法組大鼠右足腳掌周徑較造模前增加（P < 0.05），與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

3.3 組織病理學(xué) 模型組大鼠肌肉組織可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肌纖維的萎縮，肌纖維間隙增寬，小血管增生等病理改變。見圖2。

3.4 各組大鼠造模前后及治療后熱疼痛閾值比較 造模前，各組大鼠熱痛閾值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；造模后，模型組、手法組與空白組比較，疼痛閾值均有明顯降低（P < 0.05）；模型組與手法組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。治療后，手法組熱痛閾值與造模后相比明顯升高

（P < 0.05）；模型組、手法組與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；模型組與手法組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

3.5 各組大鼠治療后腺苷濃度比較 治療后，空白組與模型組腺苷濃度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

（P > 0.05）；手法組大鼠外周組織腺苷含量明顯升高，與空白組及模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表3。

4 討 論

關(guān)于理筋手法緩解疼痛的理論思想早在《黃帝內(nèi)經(jīng)·素問》[6]舉痛論中記載：“按之則熱氣至，熱氣至則痛止矣。”說明手法可以使機(jī)體產(chǎn)生熱效應(yīng)，而這種熱效應(yīng)可以鎮(zhèn)痛，這也是本課題的理論依據(jù)所在。

腺苷即腺嘌呤核苷，由腺嘌呤與戊糖相結(jié)合而形成，是一種廣泛存在于周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)[7]。有研究顯示，腺苷對(duì)神經(jīng)源性疼痛、炎性痛和術(shù)后痛均具有鎮(zhèn)痛作用[8-10]。Goldman等[11]通過研究發(fā)現(xiàn)，針刺的鎮(zhèn)痛作用可能是通過局部釋放腺苷作用于腺苷A1受體而實(shí)現(xiàn)。Takano等[12]則進(jìn)一步提出了針刺在人體受試者是否也會(huì)引起間質(zhì)性腺苷濃度的增加。他們通過測(cè)量受試者在針刺之前、針刺過程中及針刺30 min后足三里的腺苷濃度，發(fā)現(xiàn)針刺過程中腺苷濃度顯著升高，并持續(xù)到針刺后30 min，進(jìn)一步證實(shí)了腺苷在針刺鎮(zhèn)痛的關(guān)鍵作用。

筆者在大鼠足底局部皮下注射弗氏完全佐劑，成功建立了大鼠炎性痛模型，結(jié)果顯示：造模后大鼠精神萎靡，少活動(dòng)，致炎側(cè)足部不敢著地、跛行、舔足等，且熱縮爪潛伏期明顯縮短，表現(xiàn)為痛覺過敏，與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。病理結(jié)果顯示：模型大鼠造模部位肌肉組織可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肌纖維萎縮，肌纖維間隙增寬，小血管增生等，與空白組比較，這種差異十分明顯，這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[13]一致?！饵S帝內(nèi)經(jīng)·靈樞集注》中有“以痛為腧，隨其痛處而即為所取之俞穴也”之論述，對(duì)大鼠足部涌泉穴進(jìn)行手法治療，是基于中醫(yī)學(xué)“以痛為腧”理論的研究，證明了按壓涌泉穴能夠緩解炎癥痛大鼠的疼痛，與研究報(bào)道一

致[14]。 在給予大鼠手法治療后，其局部腺苷濃度，空白組與模型組之間進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；手法組大鼠外周組織腺苷含量明顯升高，與空白組、模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。以上說明理筋手法局部鎮(zhèn)痛效果顯著，其可能通過局部腺苷釋放而起作用。

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收稿日期：2016-07-13；修回日期：2016-11-03