藥物腎毒性生物標(biāo)志物研究進(jìn)展Δ

杜海燕，戴 路，謝海琴，林 陽

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院藥事部/藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，北京100029； 2.首都醫(yī)科大學(xué)2011級(jí)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)本科生，北京 100069)

·本期特稿·

藥物腎毒性生物標(biāo)志物研究進(jìn)展Δ

杜海燕1*，戴 路2，謝海琴2，林 陽1#

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院藥事部/藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，北京100029； 2.首都醫(yī)科大學(xué)2011級(jí)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)本科生，北京 100069)

DOI 10.14009/j.issn.1672-2124.2017.06.001

腎臟是藥物毒性作用的重要靶器官，約20%的腎毒性由藥物引起。臨床上，早期腎損傷難于發(fā)現(xiàn)，采用傳統(tǒng)腎功能檢測方法發(fā)現(xiàn)血肌酐、尿素氮水平升高時(shí)，細(xì)胞損傷已超過70%～80%[1]，腎臟往往已發(fā)生嚴(yán)重?fù)p害，甚至功能衰竭。近年來，屢有上市新藥因毒性問題被撤市或限制使用。因此，盡可能早地發(fā)現(xiàn)藥物的腎毒性，不僅能為臨床用藥安全提供保障，還能大大降低藥物開發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。但是，目前對(duì)藥物腎毒性尤其是慢性毒性的預(yù)測嚴(yán)重不足，藥物腎毒性經(jīng)常被漏估或低估，其主要原因之一是缺乏靈敏、可靠、專屬性強(qiáng)的評(píng)價(jià)指標(biāo)。近年來，在探索腎毒性生物學(xué)標(biāo)志物方面有了一些研究進(jìn)展，部分項(xiàng)目已用于臨床早期發(fā)現(xiàn)和診斷腎損傷，受到了廣泛關(guān)注和重視?，F(xiàn)對(duì)近年來新發(fā)現(xiàn)的腎毒性早期診斷及預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物進(jìn)行綜述，為新藥研發(fā)及指導(dǎo)臨床安全用藥提供依據(jù)。

1 蛋白多肽類標(biāo)志物

2008和2010年，美國食品藥品監(jiān)督管理局和歐洲藥物管理局分別接受藥物安全性預(yù)測聯(lián)盟(predictive safety testing consortium，PSTC)和國際生命科學(xué)學(xué)會(huì)健康和環(huán)境科學(xué)研究所的申請(qǐng)，認(rèn)可了8種腎毒性生物標(biāo)志物用于藥物臨床前安全性評(píng)價(jià)[2]，同時(shí)也為現(xiàn)有的檢測指標(biāo)提供了補(bǔ)充信息[3]。其中，叢生蛋白、腎損傷分子-1(Kim-1)、三葉因子-3、白蛋白和腎乳頭抗原-1作為藥物腎小管損傷生物標(biāo)志物，而尿總蛋白(uTP)、β2-微球蛋白(β2-MG)、血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C(CysC)作為藥物腎小球損傷(或腎小管重吸收障礙)生物標(biāo)志物。PSTC指出，在藥物臨床前試驗(yàn)出現(xiàn)腎毒性時(shí)，可以考慮運(yùn)用尿液Kim-1、白蛋白、uTP、CysC和β2-MG監(jiān)測早期臨床試驗(yàn)的腎臟毒性[2]。但迄今為止，以上8個(gè)腎損傷生物標(biāo)志物依然沒有取代血清尿素氮和血清肌酐，而是作為傳統(tǒng)指標(biāo)與腎臟病理的補(bǔ)充。

另外，一些尿酶能夠聯(lián)合運(yùn)用有效預(yù)測早期腎毒性[4]。尿酶的檢測可以在全自動(dòng)生化分析儀上完成，簡單快速，如來自溶酶體的N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶、β-D-半乳糖苷酶是特異、靈敏的腎小管損傷標(biāo)志物，且較穩(wěn)定；來自腎小管上皮細(xì)胞的α-谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基肽酶(AAP)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GGT)、乳酸脫氫酶等尿酶可預(yù)測腎小管損傷，但是部分尿酶如γ-GGT、AAP、ALP等在尿液中不穩(wěn)定且個(gè)體差異大，從而限制了其廣泛應(yīng)用。此外，也有新的腎毒性生物標(biāo)志物如血管非炎性蛋白、細(xì)胞色素C等被發(fā)現(xiàn)具有預(yù)測早期腎損傷的潛力。為了加快這些生物標(biāo)志物的驗(yàn)證和應(yīng)用，需要更深入了解生物標(biāo)志物在藥物造成腎毒性過程中的產(chǎn)生機(jī)制和動(dòng)態(tài)變化[5]。

2 核酸類標(biāo)志物

利用毒理基因組學(xué)發(fā)現(xiàn)腎毒性相關(guān)的核酸類生物標(biāo)志物，是近年來研究的熱點(diǎn)之一。該技術(shù)通過對(duì)藥物作用后基因表達(dá)的改變與藥物毒性之間的關(guān)系進(jìn)行分析，比較大量同類藥物作用下的基因表達(dá)模式，確立特定毒性的基因表達(dá)譜，從而確定反應(yīng)該類藥物毒性的核酸類生物標(biāo)志物，具有高通量、微型化和標(biāo)準(zhǔn)化的特點(diǎn)。Thukral等[6]選擇氯化汞、2-溴乙胺氫溴酸鹽、六氯丁二烯、絲裂霉素、兩性霉素及嘌呤霉素研究了腎小管毒性作用基因表達(dá)的時(shí)效和量效關(guān)系，并根據(jù)差異表達(dá)的基因來預(yù)測其病理類型，結(jié)果顯示，這種方法預(yù)測病理類型有100%的選擇性和82%的靈敏度。Amin等[7]研究了順鉑、慶大霉素和嘌呤霉素等3種腎臟毒物對(duì)大鼠的腎毒性效應(yīng)與基因表達(dá)譜的關(guān)系。以往認(rèn)為嘌呤霉素特異性地?fù)p傷腎小球的足細(xì)胞，但該研究發(fā)現(xiàn)，嘌呤霉素卻表現(xiàn)出與順鉑和慶大霉素誘導(dǎo)的腎小管毒性相似的基因表達(dá)模式，并得到了病理學(xué)方面的確認(rèn)。因此，毒理基因組學(xué)技術(shù)有可能發(fā)現(xiàn)腎臟早期(給藥后數(shù)小時(shí))損傷的mRNA標(biāo)志物，同時(shí)，這些來自典型腎毒性藥物的候選生物標(biāo)志物與傳統(tǒng)毒性標(biāo)志物的敏感性相當(dāng)?；虮磉_(dá)分析再加上經(jīng)典的終點(diǎn)分析，為揭示藥物潛在的腎臟毒性機(jī)制提供了契機(jī)。Lǜhe等[8]發(fā)現(xiàn)，百草枯連續(xù)給藥7 d后，大鼠的腎臟皮質(zhì)有157個(gè)基因出現(xiàn)差異表達(dá)。這些基因的功能主要與氧化應(yīng)激、脂質(zhì)降解等有關(guān)，與已知的百草枯誘導(dǎo)的早期腎毒性反應(yīng)是一致的[9]。并進(jìn)一步表明毒理基因組學(xué)研究對(duì)中毒早期，甚至還沒有出現(xiàn)形態(tài)學(xué)改變時(shí)毒性反應(yīng)的預(yù)測能力。檢測標(biāo)志基因的表達(dá)情況以及突變亦可用于反映個(gè)體患腎臟疾病和腫瘤的易感性。Guay-Woodford[10]總結(jié)了已知的或可能有遺傳因素的腎臟疾病以及20多種單基因腎臟疾病的易感基因。對(duì)易感基因的單核苷酸多態(tài)性分析有助于對(duì)有遺傳因素的腎臟疾病作出更可靠的危險(xiǎn)度評(píng)價(jià)，對(duì)鑒別那些接受特定化合物后可能發(fā)生腎毒性癥狀的高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體有重要意義。因此，毒理基因組學(xué)可從基因表達(dá)譜角度測定機(jī)體與藥物相互作用后的整體變化，發(fā)現(xiàn)毒性生物標(biāo)志物、進(jìn)而開展毒性機(jī)制或毒性預(yù)測等研究，已在藥物篩選、新藥研發(fā)和臨床合理用藥等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

另外，微小RNA(miRNA)是一類進(jìn)化上保守、長度為21～23 nt的內(nèi)源性非編碼單鏈小RNA，主要通過與其靶基因mRNA的3’非編碼區(qū)結(jié)合來調(diào)節(jié)mRNA的穩(wěn)定性或抑制其翻譯，從而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。miRNA參與幾乎所有類型的生物學(xué)途徑，涉及多種疾病的發(fā)病機(jī)制，包括惡性腫瘤、心血管疾病、糖尿?。煌瑫r(shí)，也參與機(jī)體對(duì)藥物的反應(yīng)，包括藥物治療效果、藥物毒性及預(yù)后診斷[11]。由于調(diào)控基因表達(dá)的miRNA在種屬間高度保守，且在組織和體液中長時(shí)間貯存和反復(fù)凍融后不容易降解，穩(wěn)定性較好，因此成為了核酸類腎毒性標(biāo)志物研究的熱點(diǎn)[12]。最早，Bhatt等[13]發(fā)現(xiàn)由p53誘導(dǎo)的miR-34a參與了順鉑引起的大鼠腎損傷。Szeto等[14]在慢性腎病患者尿液中發(fā)現(xiàn)miR-21和miR-216a的表達(dá)量與腎功能減退及腎衰竭病程發(fā)展有相關(guān)性，并認(rèn)為尿液miRNA圖譜具有成為生物標(biāo)志物預(yù)測慢性腎病的潛力。Kanki等[15]發(fā)現(xiàn)，4個(gè)大鼠尿miRNA(let-7g-5p、miR-93-5P、miR-191a-5p和miR-192-5P)似乎與血清尿素氮和肌酐具有相似的敏感性，可能作為對(duì)順鉑引起的腎毒性檢測的非侵入性生物標(biāo)志物。Nassirpour等[16]利用二代測序miRNA表達(dá)譜平臺(tái)檢測尿液標(biāo)本，確定miRNA let-7d、miR-203和miR-320可能作為藥物誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞損傷的新型尿液標(biāo)志物。Saikumar等[17]研究探討了miR-21、miR-155和miR-18a與心肌缺血/再灌注和慶大霉素治療腎損傷的相關(guān)性，結(jié)果顯示，上述3個(gè)miRNA在腎臟的表達(dá)上調(diào)，同時(shí)，miR-21和miR-155在血液和尿液樣本的表達(dá)下調(diào)。miR-21和miR-155的增加與組織學(xué)損傷程度相對(duì)應(yīng)，提示miR-21和miR-155可能在腎損傷的發(fā)生機(jī)制中起著重要作用，可作為腎毒性的潛在生物標(biāo)志物。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，miR-155缺失小鼠比野生型小鼠更容易產(chǎn)生順鉑導(dǎo)致的腎損傷[18]。Ramachandran等[19]檢測了急性腎損傷患者尿液中整個(gè)miRNA組，以非急性腎損傷者為對(duì)照，確定4個(gè)miRNA，即miR-21(P=0.000 5)、miR-200c(P<0.000 1)、miR-423(P=0.001)、miR-4640(P=0.035 5)可能作為腎毒性的生物標(biāo)志物。

3 代謝物類標(biāo)志物

近年來，代謝組學(xué)作為一種新的系統(tǒng)生物學(xué)研究方法得到了飛速發(fā)展。其定義為對(duì)體液、組織、細(xì)胞等生物樣本中相對(duì)分子量為1 000以下的所有小分子代謝物進(jìn)行定性和定量分析，從而得到生物體受外界刺激后代謝水平的整體變化的結(jié)果。代謝組學(xué)揭示了在基因與環(huán)境共同作用下，個(gè)體生物體系功能狀態(tài)的整體特征，關(guān)注各種代謝路徑底物和產(chǎn)物的小分子代謝物，包括糖、脂質(zhì)、氨基酸、維生素等，且信息量大，樣本易得。代謝組學(xué)研究了多采用核磁共振、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gas chromatograph/mass spectrometer，GC/MS)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(liquid chromatography/mass spectrometry，LC/MS)等三種數(shù)據(jù)采集技術(shù)，結(jié)果顯示，各有優(yōu)缺點(diǎn)，可互為補(bǔ)充。代謝組學(xué)的發(fā)展和進(jìn)步為食品、藥品的安全性評(píng)價(jià)提供了新途徑，為毒性標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)提供了新的技術(shù)平臺(tái)。

Hanna等[20]利用LC-MS分別測定注射0.9%氯化鈉溶液、慶大霉素10 mg/kg、慶大霉素20 mg/kg后大鼠尿液，結(jié)合偏最小二乘法-判別分析(partial least squares-discrimination analysis，PLS-DA)發(fā)現(xiàn)，慶大霉素使大鼠尿液中色氨酸含量顯著增加。Zhao等[21]通過超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用和PLS-DA分析發(fā)現(xiàn)，馬尿酸、硫酸吲哚酚、吡哆酸、山梨醇和N-乙酰葡萄糖是腎毒性的生物標(biāo)示物。Li等[22]通過快速液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)以及PLS-DA法，利用大鼠腹膜內(nèi)或靜脈注射順鉑誘導(dǎo)的腎損傷模型，發(fā)現(xiàn)影響腎毒性的生物標(biāo)示物，溶血磷脂酰膽堿LPC(20 ∶3)、LPC(14 ∶0)、LPC(18 ∶3)、LPC(22 ∶5)、肌酸酐、花生四烯酸、脯氨酸和色氨酸可以作為其生物標(biāo)示物。該小組還運(yùn)用代謝組學(xué)評(píng)價(jià)了阿霉素的腎毒性，發(fā)現(xiàn)阿霉素可導(dǎo)致花生四烯酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、鞘脂類、甘油磷脂和膽汁酸的合成或代謝異常[23]。

Boudonck等[24]建立了慶大霉素、順鉑、妥布霉素誘導(dǎo)的大鼠腎損傷模型，以0.9%氯化鈉注射液組為對(duì)照，針對(duì)給藥1、5、28 d后的尿液標(biāo)本和腎臟組織，利用LC-MS和GC/MS進(jìn)行代謝組學(xué)分析，尿中的38種代謝產(chǎn)物和腎臟組織中的37種代謝產(chǎn)物被認(rèn)為是早期腎損傷的候選標(biāo)志代謝產(chǎn)物。尿中最早期標(biāo)志物包括多胺、多種氨基酸、甘氨酰脯氨酸、葡萄糖胺、1,5-脫水葡萄糖醇、乙醇胺、和磷酸鹽。腎臟組織中最早期標(biāo)志物包括山梨醇、葡萄糖和5-甲基四氫葉酸鹽。大部分標(biāo)志代謝產(chǎn)物的變化趨勢(shì)與損傷進(jìn)程呈正相關(guān)，此種進(jìn)展性標(biāo)志代謝產(chǎn)物包括腎臟組織中的核苷，如2’-脫氧次黃嘌呤核苷、鳥嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷，大部分氨基酸和二肽，以及尿液中的3’-羥基乙酸苯酯、N-乙酰神經(jīng)氨酸鹽、甘露糖、葡萄糖、肌醇、3-羥基丁酸、3-羥基-3-甲基戊二酸鹽和馬尿酸鹽。當(dāng)出現(xiàn)腎損傷時(shí)，大部分腎損傷的標(biāo)志代謝產(chǎn)物均表現(xiàn)出含量升高，3-羥基苯乙酸和馬尿酸表現(xiàn)出含量顯著下降，另一個(gè)馬尿酸相關(guān)代謝產(chǎn)物2-羥基馬尿酸鹽含量也表現(xiàn)出明顯降低。

近年來，國內(nèi)代謝組學(xué)技術(shù)在中藥腎毒性作用機(jī)制及毒性標(biāo)志物研究方面取得了較好的進(jìn)展。Ma等[25]利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用及主成分分析(principal component analysis，PCA)模型評(píng)價(jià)了牽牛子的乙醇提取物對(duì)大鼠的腎毒性，結(jié)果表明，血清中溶血磷脂酰膽堿的形成和神經(jīng)鞘脂6的循環(huán)在一定程度上升高，但是苯丙氨酸的生物合成降低；尿液的分析結(jié)果顯示，牽牛子乙醇提取物改變了氨基酸、檸檬酸、肌酐、膽酸、5-甲基四氫葉酸在尿液中的濃度[26]。Gu等[27]利用LC-MS代謝組學(xué)研究大鼠血清和尿液，發(fā)現(xiàn)馬錢子使大鼠血清肌酐、尿酸水平明顯升高，同時(shí)，尿中胍基丁二酸、胍乙酸、3-羥基吲哚硫酸鹽和吲哚乙酸的水平也明顯升高，表明氨基酸的代謝異常。Tan等[28]運(yùn)用LC-MS技術(shù)分析附子的腎毒性，發(fā)現(xiàn)甜菜堿和磷脂酰膽堿可以作為其腎損傷的生物標(biāo)示物。Lin等[29]通過超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用和PCA分析馬兜鈴酸的腎毒性，發(fā)現(xiàn)血漿中卵磷脂、脂肪酸、膽汁酸是馬兜鈴酸導(dǎo)致腎毒性的生物標(biāo)示物。Chen等[30]在對(duì)馬兜鈴酸腎毒性進(jìn)行的研究中，采用LC/MS技術(shù)及多變量統(tǒng)計(jì)分析(PCA和線性判別分析)，發(fā)現(xiàn)馬兜鈴酸導(dǎo)致大鼠在出現(xiàn)進(jìn)行性腎損傷的同時(shí)，尿液代謝組也發(fā)生了顯著的變化，內(nèi)源性代謝物如亮氨酸、肌酸、肌酐、D-絲氨酸、同型半胱氨酸、5-CH3-四氫葉酸等的含量升高，而戊酸、辛酸、花生四烯酸、甲硫氨酸和氨甲酰磷酸等的含量則顯著降低，提示同型半胱氨酸形成和葉酸循環(huán)加速，而同型半胱氨酸的再甲基化和花生四烯酸的生物合成減少。

以上研究結(jié)果顯示，代謝組學(xué)分析涉及到的腎毒性生物標(biāo)示物，包括三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物、脂肪酸代謝產(chǎn)物以及氨基酸代謝產(chǎn)物，可更全面地評(píng)價(jià)藥物的毒副作用，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)藥物腎毒性的早期預(yù)測。但是，大部分研究集中于動(dòng)物模型基礎(chǔ)上的腎毒性生物標(biāo)示物及相關(guān)藥物腎毒性評(píng)價(jià)，而關(guān)于腎毒性標(biāo)志物的臨床應(yīng)用以及毒性機(jī)制方面的報(bào)道較少，尚需對(duì)這些候選標(biāo)志物進(jìn)行臨床驗(yàn)證，探討藥物毒性相關(guān)的代謝通路及與蛋白多肽類、核酸類標(biāo)志物之間的相關(guān)性。

4 外泌體標(biāo)志物

外泌體是由細(xì)胞內(nèi)涵體分泌的小囊泡，廣泛存在于任何體液中(包括唾液、血液、尿液、腦脊液等)，在細(xì)胞間信息傳遞中扮演著重要角色。外泌體主要由蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸(mRNA和miRNA)等組成，外泌體的組成與其細(xì)胞來源有關(guān)，并且與其來源細(xì)胞的生理功能或病理改變密切相關(guān)[31]。

Dear等[32]發(fā)現(xiàn)尿液中存在一種外泌體，其在腎臟上皮細(xì)胞內(nèi)形成，最終釋放到尿液中。尿液外泌體從腎單元各個(gè)部分分泌進(jìn)入尿液，因此攜帶了預(yù)測腎臟結(jié)構(gòu)和功能損傷的蛋白質(zhì)和核酸類生物標(biāo)志物，比如適合腎小球和腎小管損害的外泌體生物標(biāo)志物，包括胎球蛋白A、Wilms瘤基因(WT1)、ATF3和NGAL蛋白等[33-34]。Lv等[35]研究結(jié)果表明，miR-29c、miR-200b和miR-200c的水平隨慢性腎臟病(chronic kidney disease，CKD)/腎纖維化程度加重而下調(diào)，是中、重度CKD/腎纖維化的候選標(biāo)志物，其中miR-29c最佳。Lv等[36]的另一項(xiàng)研究結(jié)果表明，在CKD患者中，CD2相關(guān)蛋白的胞外體(CD2AP)mRNA水平下調(diào)，下調(diào)程度與疾病進(jìn)展呈正相關(guān)。這些報(bào)道表明，尿外泌體miRNA/mRNA水平不僅可作為確定腎損傷的標(biāo)志物，也可為CKD的進(jìn)展提供標(biāo)志。尿液外泌體分泌的miRNA因結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、不易受尿液因素影響、變化出現(xiàn)早、可無創(chuàng)性獲得等優(yōu)點(diǎn)，可作為腎損傷的特異性生物標(biāo)志物。隨著分離外泌體方法的逐漸優(yōu)化和蛋白質(zhì)組學(xué)及毒理基因組學(xué)的發(fā)展，外泌體中更多的蛋白質(zhì)和核酸將被發(fā)現(xiàn)和研究用于預(yù)測腎毒性。同時(shí)，由于外泌體膜與來源細(xì)胞的細(xì)胞膜具有同源性，故利用細(xì)胞膜上大量富集的蛋白進(jìn)行免疫分選能提高診斷率。

盡管利用外泌體作為生物標(biāo)志物具有諸多優(yōu)勢(shì)，但仍需要注意：(1)由于外泌體內(nèi)容物含量較少，因此，有效內(nèi)容物的富集度決定了外泌體作為生物標(biāo)志物的可行性；(2)由于體液樣本自身存在蛋白和RNA，因此，外泌體的分離和純化尤為重要；(3)體液中各種類型細(xì)胞來源外泌體也會(huì)成為混雜因素，如正常體內(nèi)提取的血漿外泌體可能來源于紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞或血小板，而與血液循環(huán)直接或間接接觸的組織細(xì)胞包括血管內(nèi)皮細(xì)胞或有窗孔的組織包括胎盤、肝也可能將外泌體釋放進(jìn)入血液，因此，對(duì)外泌體來源細(xì)胞的篩選也非常關(guān)鍵[37]。

5 總結(jié)與展望

總之，隨著高通量組學(xué)技術(shù)的不斷成熟，反應(yīng)基因組、蛋白組、脂質(zhì)組和代謝組等不同層次的腎毒性生物標(biāo)志物群涌現(xiàn)。同時(shí)，隨著相應(yīng)分析軟件及系統(tǒng)生物信息學(xué)分析方法的不斷成熟，網(wǎng)絡(luò)信息資源的日益豐富和共享，早期腎毒性標(biāo)志物及毒性機(jī)制將逐漸被揭示。

目前，腎毒性生物標(biāo)志物的臨床應(yīng)用尚存在局限性：(1)不同藥物的腎毒性針對(duì)不同的靶細(xì)胞(如腎小管上皮細(xì)胞、足細(xì)胞等)，并且均有輕-中-重度不斷進(jìn)展的過程。因此，腎毒性的分類、分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)化需先期完成，在此基礎(chǔ)上新的腎毒性生物標(biāo)志物才能得到精準(zhǔn)的確認(rèn)和驗(yàn)證。(2)同類組學(xué)研究采用的技術(shù)手段及檢測對(duì)象也亟需標(biāo)準(zhǔn)化，否則，所得數(shù)據(jù)存在的不一致性會(huì)給后期數(shù)據(jù)的整合分析帶來一定困難。(3)絕大多數(shù)腎毒性標(biāo)志物來源于動(dòng)物模型和細(xì)胞水平的研究，動(dòng)物模型的種屬差異備受質(zhì)疑，人原代細(xì)胞在體外不宜長期培養(yǎng)、來源不統(tǒng)一、個(gè)體差異大、不易實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，因此，這些非臨床研究來源的標(biāo)志物是否能真實(shí)反映藥物在人體內(nèi)的腎臟毒性，尚需要大量的臨床研究進(jìn)行驗(yàn)證。

日本毒理基因組學(xué)項(xiàng)目致力于建立一個(gè)開放毒理基因組學(xué)項(xiàng)目基因組輔助毒性評(píng)價(jià)系統(tǒng)，免費(fèi)提供170種化合物對(duì)應(yīng)的基因表達(dá)數(shù)據(jù)和腎臟病理學(xué)數(shù)據(jù)，并提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件和操作程序(http：//toxico.nibio.go.jp/english/index.html)[38]。隨著現(xiàn)代分子細(xì)胞生物學(xué)及形態(tài)學(xué)的發(fā)展，各類電鏡、共聚焦技術(shù)突飛猛進(jìn)，人們對(duì)細(xì)胞毒性機(jī)制的認(rèn)識(shí)更加準(zhǔn)確、全面，人源腎臟多細(xì)胞系體外共培養(yǎng)體系作為腎毒性標(biāo)志物篩選的模型將跨越種屬間差異障礙，生理藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)等新型預(yù)測模擬工具的應(yīng)用將有效縮短臨床驗(yàn)證的周期，并大大降低工作量，提高驗(yàn)證準(zhǔn)確性。本課題組正致力于建立藥物腎毒性早期預(yù)測的細(xì)胞模型及方法，通過生理藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)預(yù)測模型軟件預(yù)測藥物靶器官濃度，通過檢測靶器官濃度下藥物處理細(xì)胞后所致的細(xì)胞毒性、生物標(biāo)志物水平的變化，從而預(yù)測藥物的腎毒性，并驗(yàn)證毒性標(biāo)志物早期預(yù)測藥物腎毒性的可行性及特異性，為藥物臨床安全性評(píng)價(jià)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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國家科技重大專項(xiàng)資助(No.2012ZX09303016、No.2017ZX09304017)；北京市科技成果轉(zhuǎn)化和產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目統(tǒng)籌資金資助(No.Z121100006112062)；首都醫(yī)科大學(xué)本科生科研創(chuàng)新項(xiàng)目“藥物腎細(xì)胞毒性高內(nèi)涵分析方法的建立”(No.xsky2014107)；首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)-臨床科研合作基金(No.15JL57)

R99

A

1672-2124(2017)06-0721-04

2017-03-07)

*副主任藥師，醫(yī)學(xué)博士。研究方向：臨床藥理學(xué)、臨床毒理學(xué)。E-mail：haiyandu_az@126.com

#通信作者：主任藥師，教授，醫(yī)學(xué)博士。研究方向：臨床藥理學(xué)及心血管疾病等新藥評(píng)價(jià)相關(guān)標(biāo)志物驗(yàn)證。E-mail：linyang3623@163.com