腦膠質(zhì)瘤的基因治療研究進(jìn)展

鄭云貴，盧曉聞，許烈鵬，李欽喜，涂艷陽(yáng)，袁 軍

（1汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，廣東汕頭515041；2第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院實(shí)驗(yàn)外科，陜西西安710038）

腦膠質(zhì)瘤的基因治療研究進(jìn)展

鄭云貴1，盧曉聞1，許烈鵬1，李欽喜1，涂艷陽(yáng)2，袁 軍1

（1汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，廣東汕頭515041；2第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院實(shí)驗(yàn)外科，陜西西安710038）

腦膠質(zhì)瘤是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤，其呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，具有惡性程度高、浸潤(rùn)性強(qiáng)、預(yù)后差等特點(diǎn).雖然手術(shù)切除、化療和放療方法已經(jīng)取得迅猛發(fā)展，但目前腦膠質(zhì)瘤患者的臨床預(yù)后仍然較差.在過(guò)去的二十多年間，基因治療作為一種治療腦膠質(zhì)瘤的新型且有效的方式，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床前及臨床試驗(yàn).目前常用的基因治療方式包括：自殺基因治療、免疫基因治療、溶瘤病毒治療、抑癌基因治療、抗血管生成因子治療和microRNAs介導(dǎo)的基因治療.本文將介紹目前用于腦膠質(zhì)瘤治療的基因療法.

腦膠質(zhì)瘤；基因治療；臨床試驗(yàn)

0 引言

腦膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤［1］，約占所有原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤的40%～50%［2］.腦膠質(zhì)瘤大多呈膨脹性或浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，且常與正常腦組織無(wú)明顯界限，故其惡性程度高、預(yù)后差.據(jù)統(tǒng)計(jì)，腦膠質(zhì)瘤患者的五年總生存率低于30%［3］，病理級(jí)別為Ⅳ級(jí)的患者，中位生存期僅為1年左右［4］.目前，腦膠質(zhì)瘤的治療以手術(shù)切除腫瘤為主聯(lián)合術(shù)后放化療作為輔助療法.雖然手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后放化療使腦膠質(zhì)瘤患者的臨床預(yù)后得到改善［3］，但因存在放化療造成腫瘤細(xì)胞耐受及腫瘤內(nèi)難以達(dá)到有效化療藥物濃度等問(wèn)題，故手術(shù)切除腫瘤聯(lián)合術(shù)后放化療無(wú)法達(dá)到治愈腦膠質(zhì)瘤的目的.

為了解決手術(shù)切除腫瘤聯(lián)合術(shù)后放化療無(wú)法治愈腦膠質(zhì)瘤的問(wèn)題，近年來(lái)，基因治療腦膠質(zhì)瘤的新方法成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn).自1992年開展第一個(gè)基因治療腦腫瘤的臨床試驗(yàn)以來(lái)，通過(guò)對(duì)基因功能的深入探索及對(duì)基因把控能力的提高，基因療法已經(jīng)得到迅猛發(fā)展.腦膠質(zhì)瘤與其他癌癥的不同之處在于，由于存在血腦屏障，因此腦腫瘤細(xì)胞一般局限于腦內(nèi)而很少發(fā)生腦外轉(zhuǎn)移［5］，因此，它很適合采用基因的目的靶點(diǎn)治療方法進(jìn)行針對(duì)性治療.

1 基因治療的一般定義及常用基因載體

基因治療是指把外源性功能基因?qū)肽康陌屑?xì)胞中，以此來(lái)糾正因基因異常、缺失引起的細(xì)胞功能異?；蛱峁┮粋€(gè)新的基因功能，從而達(dá)到治療疾病的目的［6］.基因是否能在靶細(xì)胞中安全、有效、精準(zhǔn)轉(zhuǎn)染是基因治療的關(guān)鍵，因此，理想的基因載體應(yīng)具備以下特點(diǎn)［7］：①不與血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生作用；②保證目的基因在到達(dá)靶細(xì)胞前不會(huì)發(fā)生任何降解；③足夠小，能夠通過(guò)細(xì)胞膜；④將目的基因安全送達(dá)細(xì)胞核，并被表達(dá).目前基因治療的常用載體有兩種：病毒載體與非病毒載體.病毒載體因具有高效的基因轉(zhuǎn)染功能、持久的基因表達(dá)等特點(diǎn)得到廣泛運(yùn)用，但又因其具有天然的免疫原性及致癌性而存在安全隱患、靶細(xì)胞特異性差、制備費(fèi)用高、基因容量小等問(wèn)題，制約了其在基因治療中的運(yùn)用［8］.非病毒載體雖然制造價(jià)格低廉，高效、基因容量大，加之其不具備天然的免疫原性、毒性小而較病毒載體安全等優(yōu)點(diǎn)，但也因其基因轉(zhuǎn)染功能低效、短暫的基因表達(dá)等特點(diǎn)而制約了其在基因治療中的運(yùn)用［8］.

2 腦膠質(zhì)瘤基因治療的現(xiàn)狀

目前，腦膠質(zhì)瘤的基因治療方法主要有以下幾種：自殺基因治療、免疫基因治療、溶瘤病毒治療、抑癌基因治療、抗血管生成因子治療以及近年來(lái)興起的micro?RNAs基因療法.

2.1 自殺基因治療自殺基因治療是目前治療腦膠質(zhì)瘤最常用的基因療法［5］.其是通過(guò)把具有“前藥轉(zhuǎn)化酶”功能的病毒或細(xì)菌基因轉(zhuǎn)染進(jìn)腫瘤細(xì)胞中，然后利用基因表達(dá)出來(lái)的“前藥轉(zhuǎn)化酶”將細(xì)胞內(nèi)無(wú)毒或毒性較低的“前藥系統(tǒng)”分解成為具有特定活性的毒性代謝物，從而引起腫瘤細(xì)胞死亡［9］.另外，此種治療方式還具有“旁觀者效應(yīng)”，即不僅被轉(zhuǎn)染的腫瘤細(xì)胞會(huì)死亡，周圍未被轉(zhuǎn)染的腫瘤細(xì)胞也會(huì)因毒性代謝物的積累［9］或通過(guò)被轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞與未被轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞間接觸或縫隙連接功能促進(jìn)凋亡［5］.目前研究最多的自殺基因療法是單純皰疹病毒胸苷激酶／戊環(huán)鳥苷（herps simplex virus thymidine kinase／ganciclovir，HSV?tk／GCV）系統(tǒng)及胞嘧啶脫氨酶／5?氟胞嘧啶（cytosine deaminase／5?fluorocytosine，CD／5?FC）兩大系統(tǒng).

1986年，Moolten等［10］首次報(bào)道了HSV?tk可用于基因治療，其能夠使被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞對(duì)如GCV、無(wú)環(huán)鳥苷（acyclovir，ACV）等核苷類似物更為敏感.在正常人體內(nèi)，GCV的代謝極慢且無(wú)毒性，但在HSV?tk的作用下，GCV通過(guò)內(nèi)源性激酶加速代謝成為磷酸化的GCV［5］.磷酸化的GCV作為DNA聚合酶的抑制劑，能阻礙DNA的復(fù)制及阻止細(xì)胞分裂［10－11］，并利用HSV?tk／GCV的細(xì)胞毒性作用來(lái)引起細(xì)胞凋亡或死亡.多項(xiàng)Ⅰ期及Ⅱ期的臨床試驗(yàn)結(jié)果［12－13］表明，運(yùn)用HSV?tk／GCV基因療法治療腦膠質(zhì)瘤是安全可靠的.但在一項(xiàng)大宗Ⅲ期惡性膠質(zhì)瘤的臨床試驗(yàn)研究中，將248例新診斷為惡性膠質(zhì)瘤并行手術(shù)和放射治療的患者分為基因組（n＝124）和對(duì)照組（n＝124），然后通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（retroviral vector，RV）將HSV?tk基因轉(zhuǎn)染進(jìn)基因組患者腫瘤細(xì)胞中作為手術(shù)聯(lián)合放療的輔助療法，隨后進(jìn)行4年的隨訪，雖然結(jié)果顯示此種療法是安全的，但兩組患者的腫瘤進(jìn)展和總體生存率無(wú)明顯差異［14］.研究認(rèn)為，這可能與RV的低轉(zhuǎn)染率有關(guān)［5］，因此，提高基因療法的轉(zhuǎn)染效率十分有必要.腺病毒載體具有更好的轉(zhuǎn)染效率及感染增殖及非增殖細(xì)胞的潛在功能，可能會(huì)提高轉(zhuǎn)染的效率［11］.在一項(xiàng)利用腺病毒載體進(jìn)行治療的11例腦膠質(zhì)瘤患者中，有10例患者在首次診斷為惡性腦膠質(zhì)瘤后，生存期＞52周，11例患者的平均總體生存期達(dá)112.3周［12］，是利用傳統(tǒng)治療方式時(shí)期望生存期的2倍.另外一項(xiàng)通過(guò)腺病毒作為載體的體內(nèi)研究試驗(yàn)中，把HSV?tk／GCV導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞中，結(jié)果顯示，腫瘤細(xì)胞發(fā)生了明顯的凋亡及壞死，這表明腺病毒作為載體介導(dǎo)的HSV?tk／GCV在殺傷腫瘤細(xì)胞方面具有強(qiáng)大的功能［15］.腺病毒作為自殺基因療法的載體，在腦膠質(zhì)瘤自殺基因治療方面發(fā)揮著重要的作用，期待后續(xù)有更為深入的研究成果.

CD／5?FC是研究較多的另外一種自殺基因療法.CD能夠?qū)⒖拐婢幬??FC轉(zhuǎn)化為具有高毒性、抗腫瘤的復(fù)合物5?氟尿嘧啶（5?fluorouracil，5?FU）.5?FU能夠不可逆地抑制胸苷酸合成酶和阻止 DNA合成［16］.類似于HSV?tk／GCV基因療法，5?FU也是利用CD／5?FC基因療法的細(xì)胞毒性作用機(jī)制引起細(xì)胞凋亡或死亡［17］.但相對(duì)于 HSV?tk／GCV基因療法，CD／5?FC基因療法在一個(gè)僅被轉(zhuǎn)染4%的結(jié)直腸移植瘤模型中即發(fā)揮出了強(qiáng)大的抗腫瘤作用［18］.因?yàn)??FU是一個(gè)小分子顆粒，它能夠在被轉(zhuǎn)染細(xì)胞及周邊細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)外自由擴(kuò)散，因此，無(wú)需細(xì)胞間接觸或縫隙連接的功能就能發(fā)揮出強(qiáng)大的“旁觀者效應(yīng)”.早期研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)制缺陷型腺病毒載體介導(dǎo)的CD／5?FC基因療法可以明顯提高大鼠腦膠質(zhì)瘤模型的生存期.Kurozumi等［17］通過(guò)腺病毒載體將CD／5?FC基因?qū)肴四X膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析得出，CD／5?FC基因療法能促進(jìn)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步肯定了CD／5?FC基因療法在治療腦膠質(zhì)瘤方面發(fā)揮著重要的作用.近期，一項(xiàng)利用第二代非裂解性逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制載體（Toca 511）介導(dǎo)CD／5?FC基因治療大鼠的腦膠質(zhì)瘤模型的研究［19］結(jié)果顯示，鼠的腦膠質(zhì)瘤模型生存期明顯延長(zhǎng)，同時(shí)沒(méi)有出現(xiàn)任何與治療相關(guān)的毒性副作用.另外，研究者在如何提高CD／5?FC基因療法治療腦膠質(zhì)瘤效率方面也做了許多嘗試.在惡性腦腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，不存在于人細(xì)胞中的尿嘧啶磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（uracil phosphoribo?sy transferase，UPRT）能夠直接將5?FU轉(zhuǎn)化為磷酸化的 5?氟尿苷（5?fluorouridine，5?FUR），從而加強(qiáng)CD／5?FC基因療法的細(xì)胞毒性作用.這表明，聯(lián)合運(yùn)用CD和UPRT在抗腫瘤治療中具有協(xié)同作用.Kam?bara等［20］在一項(xiàng)腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合運(yùn)用CD／5?FC和UPRT可以改善常規(guī)放療的效果，進(jìn)一步肯定了CD／5?FC和UPRT在抗腫瘤方面的協(xié)同作用.Kaliberov等［16］研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)制缺陷型腺病毒載體編碼的突變型細(xì)菌CD基因可以提高5?FC的親和力，這種重組的CD基因聯(lián)合電離放射在腦膠質(zhì)瘤異體種植模型中發(fā)揮著強(qiáng)大的腫瘤殺傷能力，并能夠抑制腫瘤的增殖.CD／5?FC基因療法在治療腦膠質(zhì)瘤中發(fā)揮著重要的作用，但仍需進(jìn)行更多的探索，以尋求更加安全、有效、特異的CD／5?FC基因療法策略.

2.2 免疫基因治療腫瘤組織學(xué)分析顯示，部分免疫反應(yīng)是針對(duì)腫瘤細(xì)胞而發(fā)生的［21］.通過(guò)這種方式，免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)揮免疫監(jiān)視作用，并在控制疾病的進(jìn)展過(guò)程中扮演著重要的角色［21］.但是，大多數(shù)腫瘤細(xì)胞（如腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞）卻具有“免疫赦免”的特殊能力［11］，使得免疫系統(tǒng)無(wú)法對(duì)其做出有效的免疫應(yīng)答，從而阻礙免疫系統(tǒng)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用.而免疫基因療法是依靠轉(zhuǎn)染進(jìn)腫瘤細(xì)胞中的細(xì)胞因子或共刺激分子基因的大量表達(dá)來(lái)提高腫瘤細(xì)胞的免疫原性，誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤細(xì)胞.目前常用的免疫基因療法主要有細(xì)胞因子療法、腫瘤疫苗療法以及近年興起的嵌合抗原受體 T細(xì)胞免疫療法（chimeric antigen receptor T?Cell immunotherapy，CAR?T）.

細(xì)胞因子療法的原理是使用表達(dá)白細(xì)胞介素?2（interleukin?2，IL?2）、IL?4、IL?12、γ?干擾素（interfer?on?γ，IFN?γ）、β?干擾素（interferon?β，IFN?β）等免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子來(lái)轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，從而利用腫瘤細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子發(fā)揮抗腫瘤作用.研究發(fā)現(xiàn)，原位IL?4的表達(dá)可以引起炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡.動(dòng)物模型腦腫瘤細(xì)胞分泌的具有嚴(yán)重中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，如IL?2、IL?12、IFN?γ等，也在腦腫瘤的衰退中起著重要的作用［22］.IFN?β是具有多種抗癌功效的潛在細(xì)胞因子，具有直接抗細(xì)胞增殖和通過(guò)免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮間接抗癌的作用.在2000年，日本名古屋大學(xué)的研究小組就開始使用細(xì)胞因子進(jìn)行基因治療.根據(jù)實(shí)驗(yàn)和臨床前研究的方法，通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo) IFN?β基因.體外試驗(yàn)表明，陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的人 IFN?β不是通過(guò)抑制細(xì)胞反應(yīng)，而是通過(guò)誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因的，即使是在干擾素抵抗的人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，也可能是通過(guò)誘導(dǎo)凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的［23］.把人的膠質(zhì)瘤細(xì)胞種植進(jìn)入裸鼠的腦內(nèi)或皮下的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，局部使用含有人IFN?β基因的陽(yáng)離子脂質(zhì)體后可明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)、使自然殺傷（NK）細(xì)胞活化及延長(zhǎng)患者生存期.基于以上研究成果，IFN?β的Ⅰ期臨床試驗(yàn)在5例復(fù)發(fā)性腦膠質(zhì)瘤的患者中開展［24］.這項(xiàng)臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)比同期運(yùn)用傳統(tǒng)治療方法治療的患者，納入研究的5例患者的中位生存期明顯延長(zhǎng)，同時(shí)，這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的臨床毒性也很小.在進(jìn)行基因治療后，患者體內(nèi)與免疫反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和新生血管有關(guān)的組織和基因表達(dá)都發(fā)生了顯著改變［25］，該發(fā)現(xiàn)為IFN?β基因治療的Ⅱ期臨床試驗(yàn)提供了重要的基礎(chǔ).近期報(bào)道了一項(xiàng)利用腺病毒載體介導(dǎo)人IFN?β治療腦膠質(zhì)瘤的Ⅰ期臨床試驗(yàn)［26］，即在11例腦膠質(zhì)瘤患者行手術(shù)切除后給腫瘤內(nèi)及瘤周正常腦組織注射載體，結(jié)果顯示載體的劑量與腫瘤細(xì)胞的凋亡及壞死明顯相關(guān)，但高劑量注射則會(huì)引起與治療相關(guān)的意識(shí)變化（如意識(shí)模糊），這提示在行Ⅱ期臨床試驗(yàn)時(shí)，需注意與治療有關(guān)的副作用.

腫瘤疫苗療法也是目前用于治療腦膠質(zhì)瘤常用的免疫基因療法.樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）疫苗就是腫瘤疫苗的一種［27］，它是目前免疫系統(tǒng)中最有效的抗原遞呈細(xì)胞，并已經(jīng)被當(dāng)做疫苗載體投入運(yùn)用.通過(guò)將從患者的血清或腫瘤細(xì)胞中提取的樹突狀細(xì)胞暴露于目的腫瘤所表達(dá)的抗原中后，回注入患者體內(nèi)，利用樹突狀細(xì)胞的抗原遞呈作用來(lái)激活CD8＋T細(xì)胞來(lái)攻擊腫瘤細(xì)胞［27］.早期，Yu等［28］納入7例腦膠質(zhì)瘤患者進(jìn)行了DC疫苗治療腦膠質(zhì)瘤的Ⅰ期臨床研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有4例患者體中的DC疫苗能激發(fā)全身毒性反應(yīng)，在隨后的二次手術(shù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)4例患者中有2例患者的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞能檢測(cè)到強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性及記憶T細(xì)胞浸潤(rùn)，這項(xiàng)研究表明，DC疫苗治療腦膠質(zhì)瘤是安全、有效、可行的.近年多項(xiàng)關(guān)于DC疫苗治療腦膠質(zhì)瘤的臨床Ⅰ期與Ⅱ期研究也證明了DC疫苗治療腦膠質(zhì)瘤是安全有效的［29－31］.

CAR?T：T細(xì)胞是免疫系統(tǒng)里發(fā)揮腫瘤殺傷作用的主要細(xì)胞，其主要依靠T細(xì)胞受體（T cell recep?tors，TCRs）聯(lián)合存在于抗原遞呈細(xì)胞（antigen?pres?enting cell，APC）表面的能識(shí)別細(xì)胞表面抗原的MHC分子來(lái)發(fā)揮作用［32］.由于人體細(xì)胞中內(nèi)源性的腫瘤特異T細(xì)胞很少或活性較低，因此，應(yīng)用激活細(xì)胞內(nèi)的T細(xì)胞免疫應(yīng)答來(lái)發(fā)揮抗腫瘤作用的策略出現(xiàn)了自身局限性［33］.此外，有效的腫瘤抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞活化有時(shí)會(huì)受T細(xì)胞受體對(duì)肽／MHC復(fù)合物親和力低或腫瘤細(xì)胞自身具有下調(diào)表達(dá)MHC習(xí)慣的影響.而CAR?T的T細(xì)胞活化與MHC無(wú)關(guān)［34］，它是通過(guò)從患者身上提取T細(xì)胞，然后通過(guò)慢病毒等載體對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)染，使其能高效表達(dá)對(duì)腫瘤表面抗原具有特異性親和力的修飾性T細(xì)胞受體并以此來(lái)發(fā)揮特異性抗腫瘤的作用［34－35］.雖然目前有關(guān)CAR?T細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究仍處于初級(jí)階段，且主要集中在白血病等血液腫瘤上，但隨著腫瘤免疫學(xué)的進(jìn)步，近年，有關(guān)CAR?T細(xì)胞治療實(shí)體腫瘤如腦膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究也相繼開展.目前有關(guān)CAR?T細(xì)胞治療腦膠質(zhì)瘤的臨床前試驗(yàn)已經(jīng)取得了可喜的效果.Shen等［36］研究結(jié)果顯示，針對(duì)靶向EGFRvⅢ的CAR?T細(xì)胞能有效殺死腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞.同樣，Miao等［37］也利用針對(duì)靶向EGFRvⅢ的CAR?T細(xì)胞來(lái)治療大鼠腦膠質(zhì)瘤模型，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靶向EGFRvⅢ的CAR?T細(xì)胞能夠明顯抑制腫瘤的生長(zhǎng)，并提高大鼠腦膠質(zhì)瘤模型的生存期.Krebs等［38］報(bào)道了將IL13Rα2作為靶向的CAR?T細(xì)胞治療腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的研究，結(jié)果顯示腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的生存期獲益.目前，有關(guān)CAR?T細(xì)胞治療腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的研究較多，但有關(guān)其的臨床試驗(yàn)研究仍然較少.2015年，Brown等［39］報(bào)道了第一個(gè)針對(duì)靶向 IL13Rα2的 CAR?T細(xì)胞治療復(fù)發(fā)性GBM的臨床研究，研究結(jié)果肯定了CAR?T細(xì)胞在復(fù)發(fā)GBM的臨床治療過(guò)程中發(fā)揮的重要作用.隨后，在2016年，Brown等［40］又報(bào)道了一例利用針對(duì)靶向IL13Rα2的CAR?T細(xì)胞治療復(fù)發(fā)性GBM的患者.在進(jìn)行了7.5個(gè)月的靶向IL13Rα2的CAR?T細(xì)胞治療后，該患者行檢查后發(fā)現(xiàn)，頭顱MRI及PET檢查未發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)及脊柱內(nèi)殘存腫瘤.但該患者在治療后的第228天時(shí)，腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā).在腦內(nèi)4個(gè)新的位置發(fā)現(xiàn)了腫瘤細(xì)胞.引起腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)的原因尚在研究中，但初步研究結(jié)果認(rèn)為，復(fù)發(fā)與腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞下調(diào)IL13Rα2表達(dá)有關(guān)［40］.后續(xù)隨訪發(fā)現(xiàn)，在治療后的第284天檢查時(shí)，轉(zhuǎn)移至脊柱的腫瘤細(xì)胞也未見復(fù)發(fā).雖然CAR?T細(xì)胞療法在治療腦膠質(zhì)瘤中具有可期的前景，但其在治療中存在的一些如脫靶效應(yīng)、“細(xì)胞因子風(fēng)暴”、過(guò)敏等不良反應(yīng)仍然在一定程度上制約了該療法廣泛應(yīng)用于臨床治療.我們期待有更多對(duì)CAR?T細(xì)胞治療腦膠質(zhì)瘤及其不良反應(yīng)的相關(guān)研究，為腦膠質(zhì)瘤的免疫基因治療提供更多策略.

2.3 溶瘤病毒基因治療目前研究發(fā)現(xiàn)，天然病毒的致病力較低，因此有了利用基因工程技術(shù)對(duì)其進(jìn)行基因改造成特殊的溶瘤病毒，這種溶瘤病毒能特異性識(shí)別并感染腫瘤細(xì)胞，并在腫瘤細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制，進(jìn)而摧毀腫瘤細(xì)胞.自1991年Martuza首次報(bào)道了利用轉(zhuǎn)基因HSV治療惡性腦膠質(zhì)瘤有一定的療效以來(lái)，有關(guān)溶瘤病毒治療腦腫瘤的研究受到廣泛的關(guān)注.HSV與腺病毒是目前研究最多的溶瘤病毒.

HSV是一種具有天然神經(jīng)細(xì)胞親和力的雙鏈DNA病毒，它在分裂及不分裂的細(xì)胞中均具備復(fù)制能力［11］.2000年，Martuza等［41］發(fā)現(xiàn)了一種可復(fù)制性HSV病毒——G207.它在神經(jīng)毒性基因γ134.5的復(fù)制過(guò)程中發(fā)生突變，并破壞編碼基因的核糖核苷酸還原酶.臨床前研究發(fā)現(xiàn)，G207可以抑制腦膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)，并在非人類靈長(zhǎng)動(dòng)物中具有良好的耐受性.2000年，一項(xiàng)納入21例復(fù)發(fā)腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者進(jìn)行有關(guān)G207劑量安全性及有效性的Ⅰ期臨床研究［42］表明，在21例患者中，無(wú)患者出現(xiàn)劑量毒副作用，有8例患者出現(xiàn)腫瘤體積縮小，2例患者的生存期明顯延長(zhǎng).有關(guān)另外一種僅在γ134.5基因中突變的HSV?1716的安全性及有效性的Ⅰ期臨床研究［43］表明，在納入的9例復(fù)發(fā)性腦膠質(zhì)瘤患者中，不僅無(wú)患者出現(xiàn)毒副作用，而且HSV?1716被證實(shí)在腫瘤細(xì)胞中大量復(fù)制.在隨后進(jìn)行的HSV?1716Ⅱ期臨床試驗(yàn)［44］中發(fā)現(xiàn)，在納入的12例腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中，有2例患者的腫瘤組織中能檢測(cè)到HSV特異性抗原.近年來(lái)，F(xiàn)riedman等［45］采用嵌合HCMV／HSV1溶瘤病毒來(lái)探討其在常氧和缺氧狀態(tài)下治療腦膠質(zhì)瘤的效果，結(jié)果顯示，該溶瘤病毒在殺傷腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞方面具備一定的功效，進(jìn)一步證實(shí)了溶瘤病毒HSV在治療腦膠質(zhì)瘤中具有一定效果.

腺病毒是一種無(wú)包膜的DNA病毒，能夠感染分裂和不分裂的細(xì)胞［11］.ONYX?015是一種可復(fù)制性腺病毒，它可以結(jié)合并抑制宿主細(xì)胞表達(dá)p53蛋白.研究認(rèn)為，具有表達(dá)p53蛋白的腫瘤細(xì)胞不支持ON?YX?015病毒在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，而不表達(dá)p53蛋白的腫瘤細(xì)胞則支持ONYX?015在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制.臨床前研究發(fā)現(xiàn)，ONYX?015能引起異體移植人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的溶解，并抑制腫瘤的生長(zhǎng).在隨后進(jìn)行的ONYX?015Ⅰ期臨床研究［46］中，利用ONYX?015感染腦膠質(zhì)瘤患者的腫瘤細(xì)胞，結(jié)果顯示，在納入的24例患者中，無(wú)患者腫瘤中出現(xiàn)明顯的細(xì)胞溶解，同時(shí)，23例患者病情惡化.但這項(xiàng)研究結(jié)果顯示，在12例進(jìn)行最大劑量感染的患者中，有3例患者的生存期達(dá)到了19個(gè)月，這表明ONYX?015在腦膠質(zhì)瘤的治療中仍具有一定的效果.

2.4 抑癌基因治療抑癌基因是人體正常細(xì)胞存在的基因，它們被激活后能產(chǎn)生抑制細(xì)胞增殖及遷移，促進(jìn)細(xì)胞分化的作用，并能夠?qū)?xì)胞的生長(zhǎng)周期進(jìn)行負(fù)調(diào)控［21］.一旦抑癌基因發(fā)生突變或者丟失，則會(huì)失去調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)的功能，從而引發(fā)腫瘤［21］.研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)腦膠質(zhì)瘤患者細(xì)胞中表達(dá)p53基因、p16基因、PTEN基因、Rb基因、p12ARF等的抑癌基因發(fā)生突變或丟失，因此，抑癌基因療法成為治療腦膠質(zhì)瘤研究的熱點(diǎn)之一.

P53基因是目前研究最多的抑癌基因，其具有調(diào)控細(xì)胞周期、損傷后的DNA修復(fù)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的強(qiáng)大功能［11］.作為腦膠質(zhì)瘤最常見的突變基因之一，p53基因的失活在腦膠質(zhì)瘤的進(jìn)展中起著重要的作用.據(jù)報(bào)道［47］，p53基因在惡性腦膠質(zhì)瘤中的突變率達(dá)35%～60%.早期，K?ck等［48］研究發(fā)現(xiàn)，利用免疫缺陷型重組腺病毒編碼的外源性野生型p53替代突變的p53基因后，蛋白印跡分析法顯示，腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株高表達(dá)p53蛋白.隨后進(jìn)行裸鼠試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用體外轉(zhuǎn)染野生型p53基因可能會(huì)抑制腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生［48］.2003年，安德森醫(yī)療中心的研究團(tuán)隊(duì)利用腺病毒介導(dǎo)的p53基因治療方法對(duì)15例復(fù)發(fā)腦膠質(zhì)瘤患者進(jìn)行治療.在行腫瘤切除術(shù)后，給腫瘤內(nèi)注射表達(dá)p53基因的腺病毒載體［12］，結(jié)果顯示，外源性的p53可以激活下游效應(yīng)，并誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，臨床毒性也較小.但其臨床效果不佳，因?yàn)檫@種方法能轉(zhuǎn)染的細(xì)胞范圍較窄（注射部位周圍5 mm）.相關(guān)研究認(rèn)為，這可能與對(duì)腺病毒載體以下問(wèn)題認(rèn)識(shí)不足有關(guān)：①載體本身的免疫原性限制了其在治療方面的作用；②腺病毒進(jìn)入細(xì)胞所依賴的柯薩奇腺病毒受體（Coxsackie and adenovirus receptor，CAR）在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中較少表達(dá)；③腺病毒載體的低轉(zhuǎn)染率.因此，后續(xù)進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)尋找具有更高轉(zhuǎn)染效率的載體，以優(yōu)化試驗(yàn).另外，也有不少研究探索了p53基因在基因治療過(guò)程中的輔助作用.Mitlianga等［49］研究在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中同時(shí)轉(zhuǎn)染外源性p53和腺病毒AD5Delta24，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中p53基因含量與細(xì)胞凋亡無(wú)關(guān)，但p53基因與腺病毒AD5Delta24的協(xié)同作用卻促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的死亡.Ito等［50］研究結(jié)果顯示，p53基因誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡調(diào)控因子（p53 upregu?lated modulator of apoptosis，PUMA）在轉(zhuǎn)染攜帶p53的腺病毒載體后，能促進(jìn)突變p53基因?qū)盒阅X膠質(zhì)瘤細(xì)胞的吞噬作用及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡.

P16基因是另外一種抑癌基因，它可以讓Rb蛋白處于低磷酸化狀態(tài)，從而使得細(xì)胞周期停滯在G1?S周期，阻止細(xì)胞生長(zhǎng)［51］.p16基因的失活在許多腦腫瘤的發(fā)生及發(fā)展中起著重要的作用，而在腦膠質(zhì)瘤中，超過(guò)50%的腫瘤細(xì)胞中的p16基因處于失活狀態(tài).研究發(fā)現(xiàn)，用外源性野生型p16基因替代失活的p16基因可以有效抑制惡性腦膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng).Nal?abothula等［52］等利用PCR技術(shù)將p16基因植入腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，并使其重新表達(dá)，結(jié)果顯示，重新表達(dá)的p16基因能夠誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞死亡.

研究發(fā)現(xiàn)，PI3K信號(hào)通路的激活會(huì)調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)展，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生.而PTEN基因作為抑癌基因，它能對(duì)PI3K進(jìn)行負(fù)調(diào)控［51］.在腦膠質(zhì)瘤中，有40%～50%的腫瘤細(xì)胞中會(huì)出現(xiàn)PTEN基因的失活，從而導(dǎo)致PI3K異常活化并激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，引起腫瘤的發(fā)生.Lu等［53］的研究結(jié)果顯示，GBM細(xì)胞中PTEN基因的表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，削弱腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力.Shim等［54］將外源性野生型PTEN轉(zhuǎn)染進(jìn)PTEN突變的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，結(jié)果顯示腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受抑制，進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞儀分析，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞停滯在G1期.另外，也有相關(guān)報(bào)道稱，有PTEN基因表達(dá)的兒童腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后明顯較無(wú)表達(dá)PTEN基因的患者好，這進(jìn)一步肯定了PTEN基因在腦膠質(zhì)瘤中扮演著重要的角色.

2.5 micro?RNAs介導(dǎo)的基因治療Micro?RNAs是一種具有約22個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的小的非編碼RNA分子［55］，它能在細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄后階段通過(guò)結(jié)合mRNA和抑制翻譯的方式調(diào)控細(xì)胞行為及基因表達(dá).自1993年發(fā)現(xiàn)第一個(gè)micro?RNA以來(lái)，至今，通過(guò)各種方式發(fā)現(xiàn)的 micro?RNAs已有數(shù)百種.研究認(rèn)為，micro?RNAs是真核細(xì)胞生物維持正常細(xì)胞功能的基礎(chǔ)［56］，它們?cè)诨虮磉_(dá)的調(diào)控及許多腫瘤的病理生理過(guò)程中均起著重要的作用［56］.自2005年Chan等［57］發(fā)表了第一個(gè)有關(guān)micro?RNA（microRNA?21）表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究后，有關(guān)microRNA表達(dá)異常與腦膠質(zhì)瘤發(fā)生和發(fā)展關(guān)系的相關(guān)研究拉開了序幕［58］.至今已發(fā)現(xiàn)了與腦膠質(zhì)瘤相關(guān)表達(dá)上調(diào)的mi?cro?RNAs有33種、表達(dá)下調(diào)的micro?RNAs有40種.另外，近期又發(fā)現(xiàn)了18種新的micro?RNAs及16種新型micro?RNA?3p.

2005年，Chan等［57］發(fā)表了第一個(gè)表達(dá)上調(diào)的microRNA（microRNA?21）與腦膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究，結(jié)果顯示，①相對(duì)于正常嬰兒及成年腦組織、培養(yǎng)的正常腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，microRNA?21在人的腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織、培養(yǎng)的早期腦膠質(zhì)瘤及建立的六種腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系（A172，U87，U373，LN229，LN428和LN308）中的表達(dá)水平明顯上升；②抑制體外培養(yǎng)的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中microRNA?21的表達(dá)水平可以激活caspases，并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡加速.隨后，有關(guān)表達(dá)上調(diào)的microRNA促進(jìn)腦膠質(zhì)瘤進(jìn)展的研究引起了國(guó)內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注.Gabriely等［59］發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)的microRNA?10b可以通過(guò)拮抗促凋亡基因的表達(dá)來(lái)促進(jìn)腫瘤進(jìn)展.Chen等［60］的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，microRNA?27b在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，通過(guò)下調(diào)microRNA?27b的表達(dá)可以減緩腫瘤的生長(zhǎng)速度，削弱腫瘤的浸潤(rùn)能力，同時(shí)還可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡.在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)的microRNA?92a及microRNA?92b分別用BCL2L11［61］和NLK［62］途徑促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，而抑制它們的表達(dá)可通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)阻止腫瘤進(jìn)一步惡化.Fang等［63］報(bào)道，在腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中表達(dá)上調(diào)的microRNA?93可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的生存能力，從而促進(jìn)腫瘤進(jìn)一步惡化.Qian等［64］研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)的 microRNA?1224?5p具有很強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及擴(kuò)散的作用.另外，在腦膠質(zhì)瘤表達(dá)上調(diào)的microRNA?125b、microRNA?155、microRNA?221／222、microRNA?330、microRNA?335等中也發(fā)現(xiàn)與腦膠質(zhì)瘤的進(jìn)展有關(guān).

除了表達(dá)上調(diào)的 microRNAs，表達(dá)下調(diào)的microRNAs也與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān).研究［65］發(fā)現(xiàn)，microRNA?34a能通過(guò)抑制靶向目標(biāo) c?Met及Notch，進(jìn)而抑制腦膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)，但在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，microRNA?34a呈低表達(dá)狀態(tài)，進(jìn)而失去抑制腦腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，從而引起腫瘤進(jìn)一步進(jìn)展.microRNA?135a具有通過(guò)調(diào)控 STAT6，SMAS5和BMPR2等基因來(lái)誘導(dǎo)線粒體介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力，但它在腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中表達(dá)過(guò)低，從而導(dǎo)致腫瘤進(jìn)一步惡化.在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)下調(diào)的microRNA?181家族如microRNA?181a、microRNA?181b等均具有抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、降低腫瘤浸潤(rùn)性及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力［66］.上調(diào)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中microRNA?181a及microRNA?181b的表達(dá)可以明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)及浸潤(rùn)，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡［66］.在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中明顯表達(dá)下調(diào)的microRNA?218能抑制腦膠質(zhì)瘤惡化，通過(guò)上調(diào)microRNA?218的表達(dá)可以顯著抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的活力、增殖及轉(zhuǎn)移，同時(shí)還能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［67］.此外，microRNA?128、microRNA?7、microRNA?326等眾多microRNAs均被發(fā)現(xiàn)在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，并參與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生與發(fā)展.

目前，手術(shù)切除腫瘤聯(lián)合術(shù)后替莫唑胺化療及放療能夠改善腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后.但在行替莫唑胺化療時(shí)，僅有一小部分患者受益.因?yàn)镺6?甲基鳥嘌呤?DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（O6?methylguanine?DNA methyl?transferase，MGMT）能迅速修復(fù)由烷化劑藥物（如替莫唑胺）引起DNA烷基化損傷的蛋白，導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤的化療耐藥性，從而限制了替莫唑胺的廣泛應(yīng)用［55］.隨著對(duì)microRNAs的深入探索，研究發(fā)現(xiàn)mi?croRNAs與腦膠質(zhì)瘤的進(jìn)展與放化療的療效密切相關(guān).研究發(fā)現(xiàn)，microRNA?181b可作為一種生物標(biāo)記物來(lái)辨別哪個(gè)患者對(duì)替莫唑胺最敏感［55］.而MGMT是microRNA?181b的一個(gè)靶目標(biāo)，因?yàn)楸磉_(dá)上調(diào)的microRNA?181b可以降低MGMT的表達(dá)水平，從而提高替莫唑胺的治療效果［68］.雖然表達(dá)上調(diào)的microR?NA?181b可以提高患者對(duì)替莫唑胺的化療敏感性，但表達(dá)上調(diào)的microRNA?21卻能夠降低患者對(duì)替莫唑胺的敏感性.作為腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中最常見且表達(dá)上調(diào)的microRNA，microRNA?21具有使U87MG腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的細(xì)胞逃避替莫唑胺介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的功能，而抑制 D54MG腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中microRNA?21的表達(dá)可以提高替莫唑胺的化療敏感性［69］.另外，Qian等［70］采用microRNA?21拮抗劑聯(lián)合替莫唑胺療法治療U87?MG和U251腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，結(jié)果顯示此種療法具有明顯的抗腫瘤細(xì)胞增生及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用.這些研究表明，microR?NA?21可以作為預(yù)測(cè)或監(jiān)測(cè)腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者對(duì)替莫唑胺抵抗的生物標(biāo)記物，從而制定出最佳的治療策略來(lái)改善患者預(yù)后.Tang等［71］研究結(jié)果顯示，由3個(gè)microRNA基因組成的microRNA?183／96／182簇能通過(guò)ROS?介導(dǎo)的凋亡途徑來(lái)調(diào)控替莫唑胺在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的抗腫瘤效果.此外，Yang等［72］在探討microRNA?136在腦膠質(zhì)瘤治療中的應(yīng)用時(shí)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)microRNA?136的表達(dá)可以提高化療藥物介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡.研究［73］還發(fā)現(xiàn)，相較于替莫唑胺化療敏感的U251腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，對(duì)替莫唑胺化療抵抗的U251R腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中 microRNA?195、microRNA?455?3p、microRNA?10a的表達(dá)明顯升高，替莫唑胺化療聯(lián)合拮抗 microRNA?455?3p、microRNA?10a或下調(diào)microRNA?195表達(dá)的療法具有強(qiáng)大的細(xì)胞殺傷能力.

microRNA?21作為第一個(gè)發(fā)現(xiàn)與腦膠質(zhì)瘤有關(guān)的microRNAs，其表達(dá)水平在放療敏感性中也起著重要作用.在一些腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系包括U87MG和U373的分析中發(fā)現(xiàn)，放療敏感性與microRNA?21的表達(dá)水平有關(guān)［74］.在放療抵抗的腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中進(jìn)行拮抗microRNA?21方式，可以提高此類細(xì)胞對(duì)放療的敏感性［74］.Li等［75］利用U251腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系研究microRNA?21聯(lián)合放療治療腦膠質(zhì)瘤的效果，結(jié)果顯示，microRNA?21拮抗劑可以通過(guò)上調(diào)Cdc25A蛋白的表達(dá)來(lái)提高U251腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的放療敏感性，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡.Ng等［76］研究發(fā)現(xiàn)，促凋亡的microRNA?100在放療抵抗的人腦膠質(zhì)瘤M059K細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)可以抑制ATM基因的表達(dá)，從而提高腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)放療的敏感性.Lee等［77］發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中過(guò)表達(dá) microRNA?7可以提高放療殺傷腫瘤細(xì)胞的能力.

目前雖然有關(guān)micro?RNAs與腦膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究取得了一定的成果，但有關(guān) micro?RNAs治療腦膠質(zhì)瘤的研究大多尚處于臨床前研究階段，有關(guān)microRNAs治療腦膠質(zhì)瘤的臨床研究結(jié)果尚未見報(bào)道.我們期待microRNAs治療腦膠質(zhì)瘤的相關(guān)臨床試驗(yàn)研究報(bào)道，從而為改善腦膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后或徹底治愈腦膠質(zhì)瘤帶來(lái)曙光.

2.6 抗血管生成的基因治療同其它類型的腫瘤一樣，腦膠質(zhì)瘤的快速生長(zhǎng)常常引起腫瘤內(nèi)呈低氧狀態(tài)［78］，而腫瘤細(xì)胞在低氧狀態(tài)下能夠釋放如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（fibroblast growth factor，F(xiàn)GF）、基質(zhì)金屬蛋白（matrix metalloproteinases，MMMPs）、血小板源生長(zhǎng)因子 （platelet?derived growth factor，PDGF）等血管活性因子，誘導(dǎo)血管生成，從而為腫瘤提供足夠的血運(yùn)，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展.基于這個(gè)發(fā)現(xiàn)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者提出，可以通過(guò)干擾血管活性因子的釋放抑制腫瘤內(nèi)血管的生成發(fā)揮抗腫瘤作用.

研究［79］發(fā)現(xiàn)，VEGF是促進(jìn)腫瘤內(nèi)血管生成最主要、最強(qiáng)的活性因子.Vredenburgh等［80］研究結(jié)果提示，VEGF拮抗劑貝伐單抗聯(lián)合化療藥物可增強(qiáng)腦膠質(zhì)瘤患者的放射治療效果.另一項(xiàng)利用VEGF拮抗劑貝伐單抗治療31例復(fù)發(fā)腦膠質(zhì)瘤患者的Ⅱ期試驗(yàn)結(jié)果顯示，43%的腦膠質(zhì)瘤患者可部分緩解，中位總體生存期為1年［81］.除VEGF拮抗劑在腦膠質(zhì)瘤的治療方面發(fā)揮著重要的作用外，MMPs作為腫瘤血管生成的重要因子，有關(guān)其抑制腦膠質(zhì)瘤血管生成的研究也在同步進(jìn)行.雖然目前大多數(shù)作用于MMPs的藥物（如普林司他、巴馬司他等）均因?yàn)榕R床試驗(yàn)失敗或存在嚴(yán)重的不良反應(yīng)而停止研發(fā)，但對(duì)于MMPs藥物的研究仍然在進(jìn)行.Nakabayashi等［82］采用第3代MMPs抑制劑MMI?166開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果顯示MMI?166通過(guò)抑制MMP?2、MMP?9的表達(dá)抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞釋放的血管活性因子介導(dǎo)的血管生成.MMI?166在抑制腦膠質(zhì)瘤侵襲及血管生成方面發(fā)揮著極大的作用，為臨床使用MMPs拮抗劑治療腦膠質(zhì)瘤提供了一個(gè)新的選擇.另外，MMPs的非特異性抑制劑多西環(huán)素、作用于PDGF的藥物伊馬替尼及索拉菲尼等抗血管活性因子制劑也起著抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的血管生成、侵襲、進(jìn)展的作用.抗血管生成因子的一系列研究可以為腦膠質(zhì)瘤的治療提供全新的手段，但目前大多數(shù)研究尚處于實(shí)驗(yàn)階段，我們期待對(duì)此方法進(jìn)行更深入的研究，為腦膠質(zhì)瘤患者帶來(lái)新的曙光.

3 結(jié)語(yǔ)與展望

雖然目前有關(guān)基因治療腦膠質(zhì)瘤的方法已有了初步成果，但目前所進(jìn)行的研究試驗(yàn)大多仍屬探索性研究，且大部分用于臨床試驗(yàn)后并未達(dá)到預(yù)期的效果，因此，如何提高基因治療的臨床應(yīng)用效果及開發(fā)更高效的基因治療方法是今后研究的重點(diǎn).我們期待基因治療的不斷創(chuàng)新，從而為腦膠質(zhì)瘤臨床治療提供更加科學(xué)和實(shí)用的策略.

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Advances in gene therapy of glioma

ZHENG Yun?Gui1，LU Xiao?Wen1，XU Lie?Peng1，LI Qin?Xi1，TU Yan?Yang2，YUAN Jun1
1Department of Neurosurgery，F(xiàn)irst Affiliated Hospital of Medical College， Shantou University， Shantou 515041， China；2Department of Experimental Surgery，Tangdu Hospital，F(xiàn)ourth Military Medical University，Xi'an 710038，China

Glioma is the most common central nervous system neoplasm.It is characterized by infiltrating growth，high degree of malignancy，strong infiltration and poor prognosis.Despite of recent advances in surgery，chemotherapy and radiotherapy，prog?noses of glioma are rather poor.As a novel and promising therapy，gene therapy has been applied pre?clinically for the treatment of glioma in the last two decades.The strategies of gene therapy include suicide gene therapy，immune gene therapy，oncolytic viral therapy，tumor suppressor gene therapy，anti?angiogenic gene therapy and microRNAs mediated gene therapy.Here，these gene therapy approaches for the treatment of glioma are reviewed.

glioma；gene therapy；clinical trial

R739.41

A

2095?6894（2017）07?68?09

2017－04－17；接受日期：2017－05－03

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2016ZC0167）

鄭云貴.碩士生.研究方向：腦血管病、腦腫瘤.E?mail：346812427＠qq.com

袁 軍.博士，副主任醫(yī)師，副教授.研究方向：腦血管病、腦腫瘤.E?mail：yjun116＠163.com